溶液各种配制
附录：常用试剂配制及应用
一、常用缓冲液、试剂的配制
碳酸盐缓冲液(Carbonate-Bicarbonate Buffer)
由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH>9的缓冲液配制（附表1）。
附表1. 0.2 mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7）
磷酸缓冲液(Phosphate Buffers，PB)
磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，
PO4：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21；所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽。NaH
2
HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32。
Na
2
另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用pH缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较小，如0.1mol/L缓冲液稀释10倍其pH变化小于0.1。
磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（Ca2+）、镁离子（Mg2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些生物化学反应过程，如对某些酶
的催化活性具有一定程度的抑制作用。
NaH
2PO
4
的pH值偏酸性，可用作pH<4的缓冲液。
Na
2HPO
4
的pH值偏碱性，可用作pH>10的缓冲液。
而pH＝6～8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaH
2PO
4
与Na
2
HPO
4
两种磷
酸盐混合配制（附表2）。
附表2. 0.2 mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.2）
磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-buffered saline, PBS)
磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。
NaCl 8g
KCl 0.2g
Na
2HPO
4
1.44g
KH
2PO
4
0.24g
在800ml蒸馏水中溶解，用HCl调节溶液的pH值至7.2～7.4加水定容至
1L，15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存备用。
Tris缓冲液（Tris-HCl Buffer, TB）
Tris的pH值偏于碱性，因此，通过添加HCl调节pH至所需值，Tris-HCl 缓冲液的离子强度（mol/L）是专指Tris的浓度，如某一特定pH的0.05 mol/L Tris缓冲液的配制是将50ml 0.1 mol/L Tris碱溶液与附表3所示相应体积（ml）的0.1 mol/L HCl混合，加水至将体积100ml，即为0.05 mol/L Tris缓冲液。
另外，按附表3制备的缓冲液，由于试剂来源的不同，缓冲液pH可能与所需略有差异，此时可通过稍许减少或增加HCl用量，精细调节pH至所需值。
附表4. 0.05 mol/L Tris缓冲液
Tris盐缓冲液（TBS）：
Tris盐缓冲液是在Tris缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，TBS也适用于做细胞缓冲液，常用TBS配制如下。
8g NaCl、0.2g KCl以及3g Tris溶解于800ml蒸馏水中，加入0.015g酚红并用HCl调pH至7.4用蒸馏水定容至1L，分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存。
现在常用Tris盐缓冲液通常不加pH指示剂，而且该溶液如果不用于细胞培养，通常不加KCl及酚红。
Hank’s液 (Hank’s Balanced Salt Solution)
Hank’s液是一种平衡盐溶液，主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗等。
贮存液A液：
(I)NaCl 80g
KCl 4g
MgSO
4·7H
2
O 1g
MgCl
2·6H
2
O 1g
用双蒸馏水定容至450ml。
(II)CaCl
2 1.4g (或CaCl
2
·2H
2
O 1.85g)
用双蒸馏水定容至50ml。
将I和II液混合，即成A液。贮存液B液：
Na
2HPO
4
·12H
2
O 1.52g，
KH
2PO
4
0.6g,
酚红 0.2g,
葡萄糖 10.0g,
酚红应先置研钵内磨细，然后按配方顺序一一溶解，用双蒸馏水定容至
500ml。
(3)应用液：A、B储存液分别经112.6℃湿热灭菌20min，取A和B液各25ml，加无菌双蒸馏水至450ml，使用前用无菌的3.5%或5.6% NaHCO
3
调至所需pH。
注意：药品必须全部用A.R试剂，并按配方顺序加入，用适量双蒸水溶解，待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品，最后补足水到总量。
无Ca2+、Mg2+ Hank’s液（Hank’s Solution without calcium, magnesium sulfate）
NaCl 80g,
KCl 4g,
Na
2HPO
4
·12H
2
O 1.52g，
KH
2PO
4
0.6g,
葡萄糖 10g,
用双蒸馏水溶解后，加入0.4％酚红溶液50ml，再加入双蒸水至1000ml，112.6℃湿热灭菌20min，4℃ 冰箱保存。临用前将原液用无菌双蒸水作1：10倍稀释，用无菌的3.5%或5.6% NaHCO
3
调至所需pH。
pH7.2柠檬酸盐缓冲液(Citrate Buffer)
柠檬酸 0.327g
柠檬酸钠 2.63g
磷酸氢钠 0.222
葡萄糖 0.00255mg
蒸馏水加至100ml。
pH3.3枸橼酸-磷酸盐缓冲液（Citric acid- Phosphate Buffer)
0.131mol/L citrate acid，0.066mol/L Na
2HPO
4
，等量混合，调节pH至3.3。
0.5 mol/L EDTA, pH 8.0
EDTA·2H
2
O 186.1 g
NaOH ～20 g
将EDTA·2H
2
O加入800ml水中，在磁力搅拌器上剧烈搅拌。用NaOH调节pH 至8.0，EDTA直到接近pH 8.0才完全溶解，定容至1L。分装后高压蒸汽灭菌。
0.4%酚红溶液
取酚红0.4g置于研钵中逐滴加入1mol/L NaOH溶液11.28ml，边研磨边使酚红转变为钠盐溶于水中，加双蒸水至100ml，过滤后，4℃ 冰箱保存。
醋酸钾（Potassium Acetate）
在60ml 5mol/L醋酸钾溶液中，加入11.5ml冰醋酸和28.5ml水。该溶液用于碱性裂解。
3mol/L 醋酸钠（Sodium Acetate），pH5.2和pH7.0
在800ml水中溶解408.1g三水醋酸钠，用冰乙酸调pH至5.2或用稀释乙酸调pH至7.0，加双蒸水至1L。分装后高压灭菌。
柠檬酸钠缓冲液(Sodium Citrate Buffer)
柠檬酸钠 1.8g
HCl(1mol) 4ml
无水乙醇 95ml
先用100ml去离子水溶解柠檬酸钠，然后加入HCl和无水乙醇，再补充去离子水至总量200ml。
饱合硫酸铵溶液(Saturated Ammonium Sulfate Solution)
取500ml双蒸馏水，加入约400克硫酸铵，水浴加热至70℃，磁力搅拌器充分搅拌，直到加入的硫酸铵不再溶解，以氨水（也可用NaOH）调pH7.2，室温保存。
二、酶免疫检测常用试剂配制
包被液(Coating Buffer)（pH9.5碳酸盐缓冲液）
Na
2CO
3
·10H
2
O 8.58g
NaHCO
3
5.8g
溶于双蒸水至1000ml。
封闭液(Confining liquid)（5%脱脂乳-PBS溶液，pH7.4）脱脂乳 50g
加0.02mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）至1000ml溶解。洗液(washing liquid)
氯化钠 8.0g
磷酸二氢钾 0.2g
磷酸氢二钠（12H
2
O） 2.9g
吐温-20 0.5ml
加去离子水至1000ml溶解即可。
终止液(stop buffer)（2mol/L H
2SO
4
）：
21.7ml H
2SO
4
加去离子水至200ml。
缓冲甘油(glycerine buffer)
甘油 9份
PB（pH8.0） 1份
将9份甘油与1份PB合并，充分混匀。
0.5%H
2O
2
-甲醇液(Hydrogen Peroxide-Methanol Solution)（总体积120ml）
3%H
2O
2
20ml
甲醇 100ml
DAB-H
2O
2
底物缓冲液(DAB- H
2
O
2
Substrate Buffer)
取6mg二氨基联苯胺(3,3’-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride DAB)
溶解于10ml 0.05mol Tris-HCl pH7.6。使用前取0.3%H
2O
2
0.1ml加入到DAB溶
液中(H
2O
2
的终浓度为0.003%)。如有沉淀生成，则用滤纸过滤。
5-溴-4-氯-3吲哚磷酸/四唑氮蓝底物显色液（BCIP/NBT Substrate Solution）贮存液配制：
NBT：在10ml 70%的乙醇中溶解0.5g NBT。
BCIP：在10ml 100%二甲基甲酰胺中溶解0.5g BCIP。
贮存液4℃保存，可稳定一年。
底物显色液：
取66μl NBT贮液与33μl BCIP加入到10ml碱性磷酸酶缓冲液中，充分混匀，底物显色液应在用前1小时内配制。
三、细胞相关试剂配制
L-谷氨酰胺（L-G）溶液（L-glutamin Solution）（0.2 mol/L）称2.9 g L-谷氨酰胺（分子量为146.15）用去离子水溶解至100 ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5 ml/瓶，-20℃冻存。
100x青-链霉素（双抗）溶液（P/S Penicillin/Streptomycin Solution）取青霉素G（钠盐）100万单位和链霉素（硫酸盐）1 g，溶于100 ml去离子水中，分装小瓶，4～5 ml/瓶，-20℃冻存。
7.5% NaHCO
3溶液（NaHCO
3
Solution）
称分析纯NaHCO
3
7.5 g，用去离子水溶解至l00ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5 m1/瓶，盖紧瓶塞，4℃保存。
HEPES溶液（HEPES Solution）（1mol/L）
称23.83 g HEPES（N-2-Hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid，N-2-羟乙基呱嗪-N'-2-乙基磺酸，分子量为238.3），用去离子水溶解至100 ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5 m1/瓶，4℃保存。
氨基喋呤（A）贮存液（Aminopterin Stocking Solution）（100×, 4×10-5mol/L）称1.76 mg氨基喋呤（Aminopterin, 分子量440.4），溶于90 m1去离子水
中，滴加l mol/L NaOH 0.5 m1，并不断搅动，待氨基喋呤完全溶解后，加1 mol/L 的HCl 0.5m1中和，再补加去离子水至100 m1。过滤除菌，分装小瓶，2 ml/瓶，-20℃冻存。
次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷贮存液（HT Stocking Solution）（100×,H: 10-2mol/L; T: 1.6×10-3 mol/L）
称取136.l mg次黄嘌呤（Hypoxanthine，分子量136.1）和38.8 mg胸腺嘧啶核苷（Thymidine，分子量242.2），加去离子水至l00 ml，置45～50℃水浴中使完全溶解，过滤除菌，分装小瓶，2 m1/瓶，-20℃冻存。用前可置37℃加温助溶。
HAT培养液
培养液98 ml，A贮存液1 m1，HT贮存液l ml。
秋水仙素溶液（colchicine Solution）
称取10 mg秋水仙素，溶于100 m1生理盐水中（即为100 μg/ml），过滤除菌后，分装小瓶，－20℃冻存备用。
Alsever’s血细胞保存液（Alsever’s Solution）
葡萄糖 2.05g,
柠橡酸钠 0.8g,
NaCl 0.42g，
蒸馏水 l00ml。
以上成分混匀后，微加温使其溶解后，用柠檬酸调节pH 6.1，分装于三角瓶中(30～50ml/瓶), 113℃湿热灭菌15min，4℃保存备用。
细胞冻存液(Freezing Medium)
50%小牛血清；40%不完全培养液；10%DMSO（二甲基亚砜）。
0.025%胰蛋白酶－0.2%EDTA细胞消化液(Trypsin-EDTA Solution)
A: 2.5%胰蛋白酶:
胰蛋白酶 2.5g
磷酸缓冲盐溶液 100ml
过滤除菌保存。
B: 0.2%二乙胺四乙酸二钠（EDTA）
EDTA 0.2g
双蒸馏水 100ml
高压灭菌保存。
取A液1份，加B液99份，混匀，分装-20℃保存。
0.83% NH
CI溶液(Ammonium Chloride Solution)
4
CI 0.83g
NH
4
0.1g
KHCO
3
EDTA·2Na 0.0037g
蒸馏水加至100ml。
Tris-NH
Cl溶液(Tris-Ammonium Chloride Solution)
4
Cl 3.735g/450ml双蒸水+Tris 1.3g/50ml双蒸水（pH 7.65）。 NH
4
细胞裂解液（Cell Lysis Solution）
20mmol/L HEPES(pH 7.5)
150mmol/L NaCl
1 mmol/L EDTA
10μg/ml leupeptin
1mmol/L PMSF
1% Triton X-100
0.5% deoxicholate (sodium salt)
0.1% SDS
组织匀浆缓冲液（Histolysis Buffer）
50mmol/L Tris-HCl (pH7.5)
150mmol/L NaCl
1% NP40
1mmol/L phenylmethylsulfonyl fluoride
4μg/ml leupeptin
1μg/ml aprotinin
细胞核裂解液(Nuclear Lysis Buffer)
10mmol/L Tris-HCl (pH8.0)
150mmol/L NaCl
10mmol/L EDTA
蛋白酶K 100μg/ml
0.4%SDS（最后加）
10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）
在异丙醇中溶解PMSF至1.74mg/ml，即10mmol/L，分装后保存于-20℃，如果需要的话，可将储存液制备至17.4mg/ml，即100mmol/L的高浓度。
闪烁液(Scintillation Solution)
PPO (2,5-二苯基) 5.0g、POPOP（1,4-双－5－苯基）0.5g溶于1000ml二甲苯中。也可将POPOP加入二甲苯，在37℃水浴上溶解后，再加PPO，然后补足二甲苯。
3H-TdR 工作液（woking Solution）
按1:20的比例将浓度为1mCi/ml的3H－TdR用无血清的RPMI培养液稀释，终浓度为50μCi/ml。
肝素溶液的配制：
含有肝素的培养液可以使内皮细胞纯度提高，肝素加入全培养液中最终浓度为50ug/ml。因为现在市售的多为肝素钠，包装为约为0.56克/瓶，配制时，可将其溶于100ml三蒸水中，定容，过夜，然后过滤除菌，分装小瓶，保存温度为4 ℃。使用时，向100ml培养液中加入1ml（精确可加入0.9ml）即可。
Ⅰ型胶原酶：
0.1％Ⅰ型胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制和消毒灭菌。注意：因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。分装入10ml小瓶-20℃保存。用时提前一小时37℃复温即可.0.1%的I型胶原酶的配置，100mg 的粉末状的I型胶原酶可以溶于100ml的DMEM/F12，0.22微米滤器过滤0.1%的I型胶原酶的配置，100mg的粉末状的I型胶原酶可以溶于100ml的DMEM/F12，0.22微米滤器过滤.
四、染色液配制（Prepration of Staining Solution）
苏木素液(Hematoxylin Solution)：
苏木素2.5g，乙醇25.0ml，钾明矾2.5g，氧化汞1.25g，冰乙酸20.0ml，蒸馏水500.0ml。配制方法是先将苏木素溶于乙醇中（稍加热）。将预先已溶解
明矾的蒸馏水加入苏木素乙醇液中，使溶液尽快沸腾后，将火焰熄灭，慢慢加入氧化汞，防止溶液油溅出，再煮沸2min。将烧瓶立即浸入冷水中，当染液冷却后，加入醋酸，室温保存，用前过滤。
伊红Y染色液(Eosin Y Solution)
伊红Y 0.5～1.0g，蒸馏水75ml，95%乙醇25ml，冰乙酸1～2滴。先取少许蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红研碎，再加入全部蒸馏水，溶解后加入乙醇。甲基绿染色液(Methyl Greeen Solution)
新购买的甲基绿需用氯仿处理去除甲基紫。方法是将2%甲基绿水溶液20ml 倾入洁净分液漏斗，移去慢慢下沉带紫红色的氯仿，再加入新的氯仿10ml，如此反复更换氯仿，到无紫红色为止。该液作为贮存液，4℃保存。染色液：甲基绿贮存液5ml，5%派诺宁水溶液1ml，蒸馏水12ml，0.2mol/L乙酸钠(pH4.8)18ml （临用前配制，滤纸过滤）。
吖啶橙贮存液(Acridine Orange Stocking Solution)
10mg吖啶橙溶解于100ml PBS中，pH4.8～6.0滤过，4℃避光保存。
吉姆萨贮存液(Giemsa Solution)
吉姆萨染色粉1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66ml)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。然后再加入甲醇(66ml)，搅匀后保存于棕色瓶中。母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。
临用时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍，随配随用。
瑞氏染色液(Wright’s Solution)
瑞氏染色粉 0.3g
甘油 3ml
甲醇 97ml
将瑞氏染色粉放干燥研钵内磨细，加入甘油继续研磨，不断滴加甲醇并继续研磨，将上层溶解的染料倒入棕色瓶中，直至染料全溶后加甲醇至所需量。混匀后置棕色瓶中保存，用前过滤。一般配制后置室温一周便可使用，保存时间愈入，则染色效果愈佳。
吉姆萨-瑞氏染色液(Giemsa- Wright’s Staining Solution)
瑞氏染色粉0.3g
吉姆萨染色粉 0.03g
甲醇 100ml
将二种粉末置于研钵中磨细，再逐滴加入甲醇混匀后倒入棕色瓶中，塞紧瓶口并充分振荡。置室温溶解后使用。
噻唑兰（MTT）
称取250mgMTT，加50ml PBS（0.01mol/L，pH 7.4）在磁力搅拌器上搅拌30min，用0.22 m的微孔滤膜过滤除菌，分装，4℃保存。两周内有效。
台酚蓝染色液(Trypan Blue Solution)
A：台酚蓝染料 1g
蒸馏水 100ml
将染料置于研钵中边研磨边加入蒸馏水溶解。
B：NaCl 1.7g
蒸馏水 100ml
临用前A、B液1：1混合，离心沉淀，取上清供染色用。混合后的染液存放过久，易形成沉淀，故应新鲜配制。
染色时，取细胞悬液0.1ml加入新鲜配制的染色液一滴，室温下染5～10分钟，取一滴悬液于载波片上，加盖玻片，高倍镜下检查。死亡细胞膨大并染成浅蓝色，活细胞不着色，大小正常。
五、固定剂(Fixatives)
大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。
4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液, pH7.3（formaldehyde-Phasphate Buffer）多聚甲醛 40g
0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml
配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）至完全溶解，通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠（formaldehyde-Sodium Phosphate/Sodium Hydroxide Buffer）
A液：多聚甲醛 40g
蒸馏水400ml
B液：Na
2HPO
4
·2H
2
O 16.88g
蒸馏水 300ml
C液：NaOH 3.86g
蒸馏水 200ml
配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1N NaOH 或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充双蒸水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。
六、蛋白电泳相关试剂
30％丙烯酰胺（Acrylmide）
丙烯酰胺 29g
N, N’-亚甲双丙烯酰胺 1g
溶于60ml水中，加热至37℃溶解，补加水至终体积100ml。0.45μM滤器过滤除杂质，置深色瓶中室温保存。
考马斯亮蓝R-250染色液（Coomassie Staining Solution）
1. 称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。
2. 量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。
3. 加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。
4. 加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。
5. 用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。
考马斯亮蓝脱色液（Destaining Solution）
量取下列溶液，置于1 L烧杯中，充分混合后使用。
醋酸 100ml
乙醇 50ml
O 850ml
dH
2
1mol/L二硫苏糖醇贮存液（DTT Stocking Solution）
用20ml 0.01mol/L 乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于－20℃保存。DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
0.1mol/L pH 2.4甘氨酸-HCl缓冲液(Glycine-HCl Buffer)
称取固体甘氨酸 (MW 75.07)15.01克，用蒸馏水溶解后，加入0.2mol/L HCl 648ml，然后定容成2000ml。
2×SDS凝胶加样缓冲液(2×Loading Buffer)
100 mmol/L Tris.Cl（pH6.8）
200 mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2% 溴酚蓝
20% 甘油
不含二硫苏糖醇的2×SDS凝胶加样缓冲液可以保存于室温，临用前须从
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）贮存液现用现加于上述缓冲液。
10%十二烷基硫酸钠（SDS）
在900ml蒸馏水中溶解100g电泳级SDS,加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
SDS的微细晶粒易于扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS溶液无需灭菌。
电转印缓冲液为(Semi-Dry Transfer Buffer)
Tris 3g
Glycine 14.4g
SDS 0.185g
加入甲醇200ml，用去离子水调至1000ml。
Tris-乙酸50×（TAE）
Tris 碱 242g
冰乙酸 57.1ml
0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ml
蒸馏水定容至1L。
Tris-硼酸5×（TBE）
Tris 碱 54g
硼酸 27.5g
0.5mol/L EDTA(pH8.0) 20ml
蒸馏水定容至1L。
TE缓冲液 10×(pH7.4, 7.6, 8.0)
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
1mol/L Tris-HCl(pH7.4, 7.6, 8.0) 100ml
500mmol/L EDTA(pH8.0) 20ml
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
Tris－甘氨酸缓冲液（Tris-Glycine Buffer 5×）
Tris 15.1g
甘氨酸（电泳级） 94g
10％SDS（电泳级） 50ml
蒸馏水定容至1L。
七、淋巴细胞分离液
聚蔗糖－泛影葡胺分层液(Ficoll-paque Gradient Mixer)
90g/L聚蔗糖15ml，加500g/L泛影葡胺10ml（比重1.14)。
90g/L聚蔗糖17.5ml，加500g/L泛影葡胺10ml（比重1.13)。
90g/L聚蔗糖20ml，加500g/L泛影葡胺10ml（比重1.12)。
90g/L聚蔗糖24ml，加500g/L泛影葡胺10ml(比重1.08)。
Percoll配制 (Prepration of Percoll)
将一份10×PBS与9份Percoll贮存液混合，制成等渗Percoll悬液，此悬液被认为是100%Percoll，其密度为1.1294/ml。利用1×PBS或细胞培养液稀释100% Percoll，可获得适宜密度的细胞分层液，用于各种细胞的分离，其浓度与密度的关系如下：
70% Percoll 比重1.090g/ml
60% Percoll 比重1.077g/ml
50% Percoll 比重1.067g/ml
40% Percoll 比重1.056g/ml
30% Percoll 比重1.043g/ml
20% Percoll 比重1.037g/ml
人外周血单个核细胞（PBMC）分离Ficoll分层液配制
9％聚蔗糖（Ficoll）24份
34％泛影葡胺（Urografin） 10％
混合，测比重为1.077～1.078，G5玻璃滤器过滤除菌。4℃冰箱保存备用。
八、其它试剂
佐剂(Adjuvant)
动物实验常用弗氏佐剂（Freund adjuvant），其成分通常是羊毛脂1份、液
体石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），充分混合后即是不完全福氏佐剂，如果在每毫升不完全佐剂加入1～20mg卡介苗就成为完全弗氏佐剂。
配制方法：将羊毛脂与石蜡油按比例置于容器内，超声波混匀，高压灭菌，4℃保存备用。免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。为避免损失抗原，亦可用一注射器装抗原液，另一注射器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管连接，然后二者来回反复抽吸，约数十分钟后即能完全乳化。检查合格后即以其中一注射器作注射用。
清洁液(Cleaning Solution)
配方1：重铬酸钾 100g
蒸馏水 200ml
浓硫酸 800ml
将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。
配方2：重铬酸钾 60g
蒸馏水 300ml
浓硫酸 460ml
此为中等强度洗液。
配方3：重铬酸钾 100g
蒸馏水 750ml
浓硫酸 250ml
此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。
（崔雪玲）氨苄青霉素（Ampicillin）
在9ml蒸馏水中溶解1g Ampicillin粉末并定容至10ml，然后用0.22 um微孔滤膜过滤除菌，分装成小份存于-20℃。
青、链霉素溶液：
所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。具体操作均在超净台内完成。青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双蒸水。链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。分装于－20℃保存。使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100单位/ml。
3%酸性酒精溶液
浓盐酸 3ml 95%酒精97ml
中性红指示剂
中性红 0．04g
95%乙醇 28ml
蒸馏水 72ml
中性红pH6.8—8，颜色由红变黄，常用浓度为0．04%
淀粉水解试验用碘液(卢戈氏碘液)
碘片1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。
溴甲酚紫指示剂
溴甲酚紫 0．04g 0．01mol/L NaOH 7．4ml
蒸馏水92．6ml
溴甲酚紫pH5．2—6．8，颜色由黄变紫，常用浓度为0．04%。
溴麝香草酚蓝指示剂
溴麝香草酚蓝0．04g
0．01mol/L NaOH 6．4ml
蒸馏水 93．6ml
溴麝香草酚蓝pH6．0—7．6，颜色由黄变蓝，常用浓度为0．04%。
甲基红试剂
甲基红(Methyl red) 0．04g
95%酒精 60ml
蒸馏水 40ml
先将甲基红溶于95%酒精中，然后加入蒸馏水即可。
V．P．试剂
1．5%α-萘酚无水酒精溶液
α-萘酚5g
无水乙醇 100ml
2．40%KOH溶液
KOH 40g
蒸馏水 100ml
吲哚试剂
对二甲基氨基苯甲醛 2g
95%乙醇 190ml
浓盐酸40ml
格里斯氏(Griess)
试剂
A液：对氨基苯磺酸0．5g
10%稀醋酸 150ml
B液：α-萘胺0．1g
蒸馏水 20ml
10%稀醋酸 150ml
二苯胺试剂
二苯胺0．5g溶于100ml浓硫酸中，用20ml蒸馏水稀释
十一、阿氏(Alsever)血液保存液
柠檬酸三钠·2H2O 8g
柠檬酸 0．5g
无水葡萄糖 18．7g
NaCl 4．2g
蒸馏水 1000ml
将各成分溶解于蒸馏水后，用滤纸过滤，分装，0．56—0．70kg/cm2(8—10磅/英寸2)，灭菌20分钟。冰箱保存备用。
pH8．6离子强度0．075mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥 2．76g
巴比妥钠 15．45g
蒸馏水 1000ml
1%离子琼脂
琼脂粉 1g
巴比妥缓冲液50ml
蒸馏水 50ml
1%硫柳汞 1滴
称取琼脂粉1g先加至50ml蒸馏水中，于沸水浴中加热溶解，然后加入50ml 巴比妥缓冲液，再滴加1滴1%硫柳汞溶液防腐，分装试管内，放冰箱中备用。
常用溶液及其配制
常用溶液及其配制 1.非电解质溶液 常用5%～10%葡萄糖液，前者为等渗液，后者为高渗液。但由于葡萄糖输入体内后被迅速代谢成二氧化碳和水同时释放能量，或转化糖原储存，不能维持有效渗透压，故输液时不计算其张力，只用于供给水分及能量。 2.电解质溶液 （1）0.9%氯化钠（生理盐水）：每升含Na+和Cl-各为154mmol，与血浆离子渗透压相似为等渗液，但钠、氯之比为1：1，与人体血浆钠（142mmol）、氯（103mmol）的比例不同（血浆钠、氯比例约3：2），若大量或长期单独补给可使血氯增高，造成高氯性酸中毒。若用2份生理盐水和1份1.4%碳酸氢钠，配成2：1溶液，则钠氯之比为3：2较符合血浆。 （2）碱性液体：常用于纠正酸中毒也可配置其他溶液。①1.4%（1/6M）碳酸氢钠是等渗液，成品为5%，用5%～10%葡萄糖稀释3.5倍后，即为等渗液。1.4%碳酸氢钠4ml/kg或5%碳酸氢钠1ml/kg，可提高二氧化碳结合力1mmol/L，此为小儿纠酸的首选。②11.2%乳酸钠，稀释6倍，浓度1.87%（1/6M）时为等渗液。乳酸钠需在有氧情况下，经肝脏分解产生HCO3-而发挥作用，故小儿期纠酸不宜作为首选。 （3）10%氯化钾：纠正低血钾用。 3.混合溶液 将几种液体按不同比例配制成各种混合溶液，使之更适合于不同性质脱水补液的要求。 （1）2：1等渗液：为2份生理盐水与1份1.4%碳酸氢钠或1.87%乳酸钠。该液体有利于补充血容量，常用于低渗性脱水或重度脱水的扩容。 （2）4：3：2液：为4份生理盐水、3份5%～10%葡萄糖液、2份1.4%碳酸氢钠或1.87%乳酸钠。2/3张液。常用于中度以上或低渗性脱水。 （3）2：3：1液：为2份生理盐水、3份5%～10%葡萄糖液、1份1.4%碳酸氢钠或1.87%乳酸钠。1/2张液。常用于轻、中度等渗性脱水。 （4）维持液：为4份5%～10%葡萄糖液、1份生理盐水，并含0.15%氯化钾的混合液。常用于高热、肺炎等的维持输液。 （5）口服补液盐其成分为氯化钠0.35g、碳酸氢钠0.25g、氯化钾0.15g、葡萄糖2g、水100ml.2/3张液。用于口服补液。
常用溶液配制方法
一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml 水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml 水中，分成小份贮存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。
常见缓冲溶液的配制
常见缓冲溶液的配制 缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH 值，正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们时蛋白质、重碳酸盐缓冲体系。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。 在生化研究工作中，常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系pH 值的变化往往直接影响到我们工作的成效。如果提取酶实验体系的pH值变化或变化过大，会使酶活性下降甚至完全失活。所以我们要学会配制缓冲溶液。 由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，在生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的反应。硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。 柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。 磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。 三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑止的作用。其主要缺点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris一缓冲液，在4℃时是8.4，在37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液拿到37℃测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，缓冲能力很差。 缓冲液的pH值由哪些因素决定？ 设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式： 根据此式可得出下列几点结论： （1）缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸一定，但酸和盐的比例不同时，可以得到不同的pH值。当酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。 （2）酸和盐浓度等比例也增减时，溶液的pH值不便。 （3）酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，一般地说缓冲液有效缓冲范围为PK±1pH。 从上述可知，只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度）时，可按公式计算出[盐]和[酸]的量。这样算涉及到对数的换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，经计算已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。讲义附录部分节录有磷酸缓冲液的配制表。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。 经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。 所以500ml 0.1M磷酸缓冲液需要Na2HPO4量为: 需Na2HPO4量为 : 计算好后，按计算结果称好药品，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，便得所需的缓冲液。 各种缓冲溶液的配制，均按下表按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确的浓度才能进行，如醋酸、NaOH等 常用体系 1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05M） X ml 0.2M甘氨酸 +Y ml 0.2M盐酸再加水稀释至200ml pH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml 2.2 50 44.0 3.0 50 11.4 2.4 50 32.4 3.2 50 8.2 2.6 50 24.2 3.4 50 6.4 2.8 50 16.8 3.6 50 5.0
各种化学试剂标准溶液的配制
各种化学试剂标准溶液的 配制 Prepared on 21 November 2021
常用试剂的配制一、标准溶液的配制 1、硫酸（H 2SO 4 ）溶液的配制： 1000mL浓度c（1/2H 2SO 4 ）=0.1mol/L，即c（H 2 SO 4 ）=0.05mol/L的硫酸溶液的配制： 取3mL左右的浓硫酸缓缓注入1000mL水中，冷却，摇匀。 新配制的硫酸需要标定，其标定方法如下： 称取于270-300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠0.2g，溶于50mL水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，用配制好的硫酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。同时做空白试验（取50mL水，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，同样用硫酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色）。 计算公式为： 式中： m：无水碳酸钠的质量，g； V 1 ：滴定时所用的硫酸的体积，mL； V 2 ：空白滴定时所用的硫酸的体积，mL； M：无水硫酸钠的相对分子质量，g/mol，[M（1/2Na 2CO 3 ）=52.994）]。 测定氨氮时，氨氮含量的计算： 式中： 氨氮：氨氮含量，mg/L； V 1 ：滴定水样时所用的硫酸的体积，mL； V 2 ：空白滴定时所用的硫酸的体积，mL； M：硫酸溶液的浓度，mol/L； V：水样的体积，mL。 2、重铬酸钾（K 2Cr 2 O 7 ）溶液的配制 1000mL浓度c（1/6K 2Cr 2 O 7 ）=0.2500mol/L，即c（K 2 Cr 2 O 7 ）=0.0417mol/L的重铬酸钾溶液的 配制： 称取12.258g于120℃下干燥2h的重铬酸钾溶于水中，并移入容量瓶中，定容至1000mL，摇匀，备用。
标准溶液配制
溶液配制 标准溶液的配置与标定 一、1N、0.5N、0.1N硫酸标准溶液 1、配制 1N硫酸标准溶液 量取98%的浓硫酸280ml，慢慢倒入装有10L水瓶中，摇匀待标 0.5N硫酸标准溶液 量取98%的浓硫酸140ml，慢慢倒入装有10L水瓶中，摇匀待标 0.1N硫酸标准溶液 量取98%的浓硫酸28ml，慢慢倒入装有10L水瓶中，摇匀待标 2、标定 1）标定方法 1N硫酸标准溶液 吸取25ml1N碳酸钠基准液于250ml三角烧瓶中，加入2D0.05%甲基橙指示剂，用配制好的硫酸标准溶液滴定至橙色，煮沸5min，冷却后继续滴定至橙色为终点。 0.5N硫酸标准溶液 吸取10ml1N碳酸钠基准液于250ml三角烧瓶中，加入2D0.05%甲基橙指示剂，用配制好的硫酸标准溶液滴定至橙色，煮沸5min，冷却后继续滴定至橙色为终点。 0.1N硫酸标准溶液 吸取25ml1N碳酸钠基准液于250ml三角烧瓶中，加入2D0.05%
甲基橙指示剂，用配制好的硫酸标准溶液滴定至橙色，煮沸5min，冷却后继续滴定至橙色为终点。 2）计算 N=N1*V1/V 式中：V1－碳酸钠基准液用量 ml N1－碳酸钠基准液当量浓度 V－消耗硫酸标准溶液的用量 ml 二、10%、25% 10%硫酸溶液 量取98%的浓硫酸600ml，慢慢倒入装有10L水瓶中，摇匀待标25%硫酸溶液 量取98%的浓硫酸1600ml，慢慢倒入装有10L水瓶中，摇匀待标 2、标定 1）标定方法 10%硫酸溶液 吸取配制好的10%的硫酸溶液5ml于250ml三角烧瓶中，加入3D 甲基红指示剂，用1N的氢氧化钠标准溶液滴定，滴至由红色变为橙色即为终点。（消耗的氢氧化钠标准溶液应在10.85ml以上，方可达到10%浓度） 25%硫酸溶液 吸取配制好的25%的硫酸溶液5ml于250ml三角烧瓶中，加入3D 甲基红指示剂，用1N的氢氧化钠标准溶液滴定，滴至由红色变为橙
环境监测原始记录表
环境监测原始记录表 环境保护监测中心站 2012年
目录 1. 地表水采样原始记录表19.离子选择电极原始记录表 2. 大气采样原始记录表20.分光光度法分析原始记录表 3. 降水采样原始记录表21.原子吸收分光光度法分析原始记录表 4. 降尘采样原始记录表22.气相色谱分析原始记录表 5. 土壤采样原始记录表23.离子色谱分析原始记录表 6. 底质（底泥、沉积物）采样原始记录表24.细菌总数测定原始记录表 7. 污染源废水采样原始记录表25.粪大肠菌群测定原始记录表 8. 固定污染源排气中气态污染物采样原始记录表26.区域环境噪声监测原始记录表 9. 固定污染源排气中颗粒物采样原始记录表27.城市交通噪声监测原始记录表 10.烟气烟色监测现场记录表28.污染源噪声监测原始记录表 11.pH值分析原始记录表29.机动车排气路检原始记录表 12.电导率分析原始记录表30.一般试剂配制原始记录表 13.色度分析原始记录表（铂钴比色法）31.校准曲线配制原始记录表 14.色度分析原始记录表（稀释倍数法）32.标准溶液配制与标定原始记录表 15.重量分析原始记录表33.样品交接记录表 16.容量法分析原始记录表34.样品分析任务表 17.五日生化需氧量分析原始记录表35.样品前处理原始记录表 18.一氧化碳分析原始记录表36.大气采样器流量校准原始记录表
xx 省环境监测原始记录表（ 1 ） 地表水采样原始记录表 采样目的： 方法依据：GB12998-91 采样日期： 年 月 日 枯 丰 平 pH 计型号及编号： DO 仪型号及编号： 电导仪型号及编号： 采样： 送样： 接样： .第 页 共 页
实验室常用溶液及试剂配制(重新排版)
实验室常用溶液及试剂配制 一、实验室常用溶液、试剂的配制-------------------------------------------------------1 表一普通酸碱溶液的配制 表二常用酸碱指示剂配制 表三混合酸碱指示剂配制 表四容量分析基准物质的干燥 表五缓冲溶液的配制 1、氯化钾-盐酸缓冲溶液 2、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 3、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 4、乙酸-乙酸钠缓冲溶液 5、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 6、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 7、氨水-氯化铵缓冲溶液 8、常用缓冲溶液的配制 二、实验室常用标准溶液的配制及其标定-----------------------------------------------4 1、硝酸银（C AgNO3=0.1mol/L）标准溶液的配制 2、碘（C I2=0.1mol/L）标准溶液的配制 3、硫代硫酸钠（C Na2S2O3=0.1mol/L）标准溶液的配制 4、高氯酸（C HClO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 5、盐酸（C HCl=0.1mol/L）标准溶液的配制 6、乙二胺四乙酸二钠（C EDTA =0.1mol/L）标准溶液的配制 7、高锰酸钾（C K2MnO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 8、氢氧化钠（C NaOH=1mol/L）标准溶液的配制 三、常见物质的实验室试验方法 ----------------------------------------------------------6 1、柠檬酸（C6H8O7·H2O） 2、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 3、氟（Fˉ）含量的测定 4、磷（P）的测定 5、硫酸铜（CuSO4·5H2O） 6、硫酸锌（ZnSO4·H2O） 7、硫酸亚铁（FeSO4·H2O） 8、砷 9、硫酸镁（MgSO4） 四、维生素检测--------------------------------------------------------------------------------8 1、甜菜碱盐酸盐 2、氯化胆碱
实验室常用溶液的配制
实验室常用溶液的配制 1．30%丙烯酰胺溶液（100ml） 【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的蒸馏水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于4℃温度。 【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸，因此大于1年的溶液应该被丢弃。 2．40%丙烯酰胺（用于DNA测序，1L） 【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml 的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。置棕色瓶中保存于室温。 【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。 3．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液（1ml） 【配制方法】在0.8ml蒸馏水中溶解60mg ATP，用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水稀释1ml 【注意】分装成小份保存于-70℃ 4．10mol/L乙酸铵溶液（1L） 【配制方法】把770g乙酸铵溶解于800ml蒸馏水中，加水稀释至1L后过滤除菌。在4°C 储存。 【注意】乙酸铵是热不稳定的。不要高压灭菌。 5．10%过硫酸铵溶液（10ml） 【配制方法】把1g过硫酸铵溶于8ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至10ml。该溶液可在4℃保存数周。 6．1mol/L CaCl2溶液（200ml） 【配制方法】称取54g CaCl2·6H2O并溶解在170ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至200 ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。 【用法】制备感受态细胞时，将等分试样解冻，用蒸馏水稀释至100ml。通过Nalgene过滤器（0.45微米）过滤除菌，并在使用前冷却至0℃。 7．2.5mol/L CaCl2溶液（20ml） 【配制方法】称取13.5g CaCl2·6H2O并溶于15ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至20ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。 8．脱氧核苷三磷酸（dNTPs）溶液 【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种 dNTP的实际浓度。
常见缓冲溶液配制方法
常见缓冲溶液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液：取5mol/L醋酸溶液，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取氯化钙0.294g，加L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L 盐酸溶液调节pH值至，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液，再用水稀释至250ml。 巴比妥缓冲液：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至，滤过。 巴比妥缓冲液：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用L盐酸溶液调节pH值至，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至～。 邻苯二甲酸盐缓冲液：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。 枸橼酸盐缓冲液：取％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液：甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液与乙液混合，摇匀。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml。 硼砂－氯化钙缓冲液：取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约调节pH值至，加水稀释至1000ml。 硼砂－碳酸钠缓冲液～：取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml与硼砂溶液27ml，混匀。 硼酸－氯化钾缓冲液：取硼酸3.09g,加L氯化钾溶液500ml使溶解，再加L氢氧化钠溶液210ml。 醋酸盐缓冲液：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。 醋酸－锂盐缓冲液：取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠18g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.4g，加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至，再加水稀释至100ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml。 醋酸－醋酸钾缓冲液：取醋酸钾14g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸铵缓冲液：取醋酸铵7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml。
标准溶液配制作业指导书-1
标准溶液的配制作业指导书 1．目的： 规范标准溶液配制活动、保证标准溶液（标准物质）准确、可靠，量值溯源稳定。 2．适用范围： 适用于技术中心检验测试用标准溶液（标准物质）的制备、标定、验证、有效期限的规定和标识等活动。 3．职责： 3.1配制人员：记录配制、稀释过程和数据；加贴标签； 3.2审核（复核）人员：检查配制过程符合性，计算有效性和结果准确性。 4．工作过程及要求 4．1基本要求 4.1.1方法选择：按照检验、测试、分析标准（方法）规定执行或按照国家标准（如GB/T601、GB/T602等）规定执行。 4.1.2制备标准溶液用水，应符合GB/T6682-92中二级水的规定，特殊项目、微量测定用元素标准溶液配制用水应符合GB/T6682-92中一级水的规定。 4．1.3配制标准溶液所用试剂的纯度应为基准剂试、高纯试剂、光谱纯试剂。 4．1.4所用分析天平的砝码需定期校正，滴定管、容量瓶及移液管使用已校正的。 4．1.5标定标准溶液所用的基准试剂应为容量分析工作基准试剂。 4．1.6制备标准溶液的浓度系指20℃时的浓度，在标定和使用时，如温度有差异，应按附表1进行补正。 4．1.7“标定”或比“较较”标准溶液浓度时，平行试验不得少于4次，平行测定结果的极差（即最大值和最小值之差）与平均值之比不得大于0.1%，结果取平均值。浓度值取四位有效数字。 4．1.8对规定用“标定”和“比较”两种方法测定浓度时不得略去其中任何一种，且两种方法测得的浓度值之差不得大于0.2%，以标定结果为准。 4．1.9制备的标准溶液浓度与规定浓度相对误差不得大于5%。 4．1.10配制浓度等于或低于0.02mol/L的标准溶液时，应现用现配。 4．1.11碘量法反应时，溶液的温度不能过高，一般在15-20℃之间进行。 4．1.12标准贮备液有效期为两个月。滴定分析用标准溶液在常温（15-25℃）下，保存时间一般不超过2个月。 4．1.13微量测定用工作液应用标准溶液逐级冲稀成所需工作液，每次吸取体积不得小于5ml。4．1.14微量测定所用标准溶液在常温（15-25℃）下保存期一般为2个月，有效期内出现混浊、沉淀或颜色有变化时，应重新制备。 4.2 配制方法 4.2.1滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备按照检验、测试、分析标准（方法）规定执行或按GB/T601－2002执行 4.2.1.1直接配制法 用分子量求出欲配制的浓度质量。 在分析天平上准确称取一定量已干燥的基准物放入洁净的烧杯中溶于水，转入已校正的容量瓶中用水稀释至刻度，摇匀。 根据物质的重量，溶液的体积计算出其准确浓度。 配制标准溶液校核登记。
常用溶液的配制方法
常用溶剂的配制方法 1.磷酸缓冲液： 0.15M，pH=7.4磷酸缓冲液： KH2PO4：2.041g+100ml水K2HPO4·3H2O：10.3g+300mL水 两液混合即成400mL，0.15M，pH=7.4的磷酸缓冲液 0.2mol/L 不同pH的磷酸缓冲液：先配制0.2 mol/L的磷酸二氢钾溶液和0.2 mol/L的磷酸二氢钾溶液，然后按下表配制：
2.硼酸缓冲液 0.15M，pH=8.2硼酸缓冲液： 四硼酸钠溶液：2g+35 mL水硼酸溶液：3.246g硼酸+350 mL水 两液混合即成700 mL，0.15M，pH=8.2的硼酸缓冲液 0.2 mol/L（硼酸根），不同pH的硼酸缓冲液：先配制0.2 mol/L的硼酸溶液和0.05 mol/L的四硼酸钠溶液，然后按下表配制： 3.甘氨酸-盐酸缓冲液：0.2 mol/L 0.2 mol/L甘氨酸溶液（15.01g/L）
4.柠檬酸缓冲液：0.1mol/L C6H8O7·H2O:0.1mol/L 溶液为21.01g/L Na3C6H5O7·2H2O：0.1mol/L溶液为29.41g/L
5.Tris-HCl缓冲液：0.1mol/L 100mL0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与一定量的0.1mol/L盐酸混匀，可得0.1mol/L，不同pH的缓冲液。 200mL 0.1M Tris（2.42g）加入0.1M HCl 24mL→pH=9，0.1M Tris-HCl buffer 6.醋酸缓冲液：0.2mol/L 0.2mol/L醋酸钠：27.22g三水醋酸钠（无水的为16.4g）+1L水 0.2mol/L醋酸：11.55mL冰醋酸+1L水
各种缓冲液的配制方法
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1．甘氨酸–盐酸缓冲液（L ） X 毫升 mol/L 甘氨酸+Y 毫升 mol/L HCI ，再加水稀释至200毫升 甘氨酸分子量 = ， mol/L 甘氨酸溶液含克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（ mol/L ） X 毫升 mol/L 邻苯二甲酸氢钾 + mol/L HCl ，再加水稀释到20毫升 邻苯二甲酸氢钾分子量 = ， mol/L 邻苯二甲酸氢溶液含克/升 3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 Na 2HPO 4分子量 = ， mol/L 溶液为克/升。 Na 2HPO 4-2H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液含克/升。 C 4H 2O 7 ·H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液为克/升。 4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 ② 5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（ mol/L） 柠檬酸C6H8O7·H2O：分子量， mol/L溶液为克/升。 柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量， mol/L溶液为克/毫升。 6．乙酸–乙酸钠缓冲液（ mol/L） Na2Ac·3H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 7．磷酸盐缓冲液 （1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（） Na2HPO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 Na2HPO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 Na2HPO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。
常用溶液配制方法题库1-2-10
常用溶液配制方法题 库1-2-10
问题： [单选,A1型题]配制100ml的0.2molL盐酸（36.46molL），已知市售盐酸的浓度为37%，比重1.19，所需盐酸的体积为（） A.1.66L B.1.66ml C.1.98ml D.1.98L E.1.66×10ml
问题： [单选,A1型题]以下关于当量的概念错误的是（） A.当量浓度是指1L溶液中所含溶质的Eq数（1ml溶液中所含溶质的mEq数）表示的浓度，表示为μ B.已知NaOH的分子量为40，计算NaOH当量为40 C.当量浓度的单位可以用1ml溶液中所含溶质的Eq数表示 D.当量的计算方法为分子量与阳离子的价数的比值 当量浓度是指1L溶液中所含溶质的Eq数（1ml溶液中所含溶质的mEq数）表示的浓度。表示为μ，其中体积和Eq数一一对应。
问题： [单选,A1型题]缓冲溶液能够对抗外来少量强酸强碱的原因，错误的是（） A.多元酸的酸式盐及其对应的次级盐，弱碱及其对应的盐，弱酸极其对应的盐所组成的缓冲溶液的作用机制相似 B.以醋酸-醋酸钠缓冲系为例，NaAc是缓冲溶液的抗酸成分 C.以醋酸-醋酸钠缓冲系为例，HAc是缓冲溶液的抗碱成分 D.缓冲作用是有一定限度的，一旦强酸、强碱量过大，缓冲溶液将丧失原有缓冲能力 E.起到缓冲作用的两种以上的组成成分都可以组成缓冲溶液 缓冲溶液可由下列三种成对的组分组成，它们分别是弱酸及其对应的盐，多元酸的酸式盐及其对应的次级盐，弱碱及其对应的盐。 (免费小游戏 https://www.360docs.net/doc/4e1422056.html,/)
问题： [单选,A1型题]制备75%乙醇，即将75ml纯乙醇加入25ml蒸馏水，因此其百分浓度可计为（） A.重量-重量百分浓度 B.重量-体积百分浓度 C.体积-体积百分浓度 D.体积-重量百分浓度 E.以上均可 百分浓度的标准定义是每100份溶液中所含溶质的份数，用符号（%）表示，其包括重量-重量（gg）即每100g溶液中所含溶质的克数，重量-体积（gml）即100ml溶液中所含溶质的克数，体积-体积百分浓度（mlml）即每100ml溶液中所含溶质的毫升数。其用公式表示为百分浓度=（溶质的份数／溶液的份数）×100%。
缓冲溶液的配制
缓冲溶液 缓冲溶液是一类能够抵制外界加入少量酸和碱的影响，仍能维持pH值基本不变的溶液。该溶液的这种抗pH变化的作用称为缓冲作用。缓冲溶液通常是由一或两种化合物溶于溶剂（即纯水）所得的溶液，溶液内所溶解的溶质（化合物）称之为缓冲剂，调节缓冲剂的配比即可制得不同pH的缓冲液。 缓冲溶液的正确配制和pH值的准确测定，在生物化学的研究工作中有着极为重要的意义，因为在生物体内进行的各种生物化学过程都是在精确的pH值下进行的，而且受到氢离子浓度的严格调控，能够做到这一点是因为生物体内有完善的天然缓冲系统。生物体内细胞的生长和活动需要一定的pH值，体内pH环境的任何改变都将引起与代谢有关的酸碱电离平衡移动，从而影响生物体内细胞的活性。为了在实验室条件下准确地模拟生物体内的天然环境，就必须保持体外生物化学反应过程有体内过程完全相同的pH值，此外，各种生化样品的分离纯化和分析鉴定，也必须选用合适的pH值，因此，在生物化学的各种研究工作中和生物技术的各种开发工作中，深刻地了解各种缓冲试剂的性质，准确恰当地选择和配制各种缓冲溶液，精确地测定溶液的pH值，就是非常重要的基础实验工作。下表列出某些人体体液的pH值： 7.1 基本概念 ⑴Br?nsted-Lowry酸碱理论（又称酸碱质子理论）。1923年由
丹麦化学家J.N.Br ?nsted 和英国化学家T.M.Lowry 同时提出了酸碱质子学说，发展了酸碱理论，被后人称为酸碱质子理论或Br ?nsted-Lowry 酸碱理论。他们认为凡能释放质子的分子或离子（如：H 2O ，HCl ，NH 4+，HSO 4— 等）称为酸，凡能接受质子的分子或离子（如：H 2O ，NH 3，Cl —等）称为碱。因此，一种酸释放质子后即成为碱，称为该酸的共轭碱，同样一种碱与质子结合后，形成对应的酸，称为该碱的共轭酸。 A —H ＋ B — A ＋ B —H 酸1 碱2 碱1 酸2 酸1 是 碱1的共轭酸， 碱2 是 酸2 的共轭碱。 如盐酸在水中的解离： HCl Cl — ＋ H + HCl 是酸，Cl —是它的共轭碱。 ⑵ 缓冲体系的设计： 强电解质溶于水几乎全部解离为正负离子，弱电解质溶于水时，则不完全解离，只有部分的分子解离出正负离子，其馀以分子形式存在于溶液中。例如弱酸（HA ）及其盐溶于水时，只有部分HA 解离为 H + 和 A —离子，其平衡方程式如下： K 1 HA A — ＋ H + (1-1) K2 ][]][[HA A H K a -+= ∴ ][] [][-+=A HA K H a (1-2) (1-2)式两边取负对数： ][] [lg lg ]lg[HA A K H a -+ =＋－－ (1-3) (1-3)式中： [HA] — 为弱酸的浓度 [H +] — 为HA 解离出的氢离子浓度 [A —] — 为HA 的共轭碱的离子浓度 K 1 — 为酸解离的速度常数 K 2 — 为A —与H + 缔合的速度常数
化验室常用溶液的配制
化验室常用溶液的配制 1.碘化钾试液 取碘化钾0.14g与碘酸钾90mg,加水125ml使溶解，再加盐酸125ml，即得。本液应置玻璃瓶内，密闭，在凉处保存。 2.N－乙酰－L－酪氨酸乙酯试液 取N－乙酰－L－酪氨酸乙酯24.0mg,加乙醇0.2ml使溶解，加磷酸盐缓冲液（取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.6ml，混合，pH值为7.0）2ml，加指示液（取等量的0.1％甲基红的乙醇溶液与0.05％亚甲蓝的乙醇溶液，混匀）1ml,用水稀释至10ml，即得。 3.乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液 取对二甲氨基苯甲醛1g，加乙醇9.0ml与盐酸2.3ml使溶解，再加乙醇至100ml，即得。 4.乙醇制氢氧化钾试液 可取用乙醇制氢氧化钾滴定液(0.5mol/L)。 5.乙醇制氨试液 取无水乙醇，加浓氨溶液使每100ml中含NH3 9～11g，即得。本液应置橡皮塞瓶中保存。 6.乙醇制硝酸银试液 取硝酸银4g，加水10ml溶解后，加乙醇使成100ml，即得。乙醇制
溴化汞试液取溴化汞2.5g，加乙醇50ml，微热使溶解，即得。本液应置玻璃塞瓶内，在暗处保存。 7.二乙基二硫代氨基甲酸钠试液 取二乙基二硫代氨基甲酸钠0.1g，加水100ml溶解后，滤过，即得。 8.二乙基二硫代氨基甲酸银试液 取二乙基二硫代氨基甲酸银0.25g,加氯仿适量与三乙胺1.8ml，加氯仿至100ml，搅拌使溶解，放置过夜，用脱脂棉滤过，即得。本液应置棕色玻璃瓶中，密塞，置阴凉处保存。 9.二苯胺试液 取二苯胺1g，加硫酸100ml使溶解，即得。 10.二氨基萘试液 取2,3－二氨基萘0.1g与盐酸羟胺0.5g,加0.1mol/L盐酸溶液100ml,必要时加热使溶解，放冷滤过，即得。本液应临用新配，避光保存。 11.二硝基苯试液 取间二硝基苯2g，加乙醇使溶解成100ml，即得。 12.二硝基苯甲酸试液 取3，5－二硝基苯甲酸1g，加乙醇使溶解成100ml，即得。
各种化学试剂标准溶液的配制
常用试剂的配制一、标准溶液的配制 1、硫酸（H 2SO 4 ）溶液的配制： 1000mL浓度c（1/2H 2SO 4 ）=0.1mol/L，即c（H 2 SO 4 ）=0.05mol/L的硫酸溶液的配制： 取3mL左右的浓硫酸缓缓注入1000mL水中，冷却，摇匀。 新配制的硫酸需要标定，其标定方法如下： 称取于270-300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠0.2g，溶于50mL水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，用配制好的硫酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。同时做空白试验（取50mL水，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，同样用硫酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色）。计算公式为： 式中： m：无水碳酸钠的质量，g； V 1 ：滴定时所用的硫酸的体积，mL； V 2 ：空白滴定时所用的硫酸的体积，mL； M：无水硫酸钠的相对分子质量，g/mol，[M（1/2Na 2CO 3 ）=52.994）]。 测定氨氮时，氨氮含量的计算： 式中： 氨氮：氨氮含量，mg/L； V 1 ：滴定水样时所用的硫酸的体积，mL； V 2 ：空白滴定时所用的硫酸的体积，mL； M：硫酸溶液的浓度，mol/L； V：水样的体积，mL。 2、重铬酸钾（K 2Cr 2 O 7 ）溶液的配制 1000mL浓度c（1/6K 2Cr 2 O 7 ）=0.2500mol/L，即c（K 2 Cr 2 O 7 ）=0.0417mol/L的重铬酸钾溶液的配 制： 称取12.258g于120℃下干燥2h的重铬酸钾溶于水中，并移入容量瓶中，定容至1000mL，摇匀，备用。 3、硫酸亚铁铵标准溶液的配制：
分子生物学常用溶液的配制
（2）LB（Luria-Bertani）液体培养基的配制：清洗250mL三角瓶，称取适量的yeast extract（酵母提取物）、tryptone（胰蛋白胨）、NaCl，加入200mL蒸馏水，铝箔纸包扎封口后，待高压蒸汽灭菌。 注意：①LB液体培养基常用于大肠杆菌增殖培养；②在LB培养基中，酵母提取物提供维生素和矿物质，蛋白胨提供碳源、氮源及能量，NaCl提供适当的渗透压；③不必定容，可直接加
入200mL蒸馏水；④氨苄青霉素等抗生素受热易分解，必须在培养基经高压蒸汽灭菌、且温度降至50℃以下时加入。 （3）溶液I、II、III的配制：清洗适当容积的试剂瓶，称取适量粉末状的葡萄糖，选择适当量程的微量移液器，移取所需体积的母液。溶液I、III需要在最后用100mL量筒定容，待高压蒸汽灭菌。溶液II现用现配，室温下放置。 注意：①溶液I、II、III用于质粒的制备；②正确使用微量移液器。 （4）配制TE（pH8.0）溶液，待高压蒸汽灭菌。 注意：①TE溶液用于溶解各类DNA；②由于Tris-HCl和EDTA溶液为常用试剂，故常常先配制高浓度的储存液，4℃冰箱中保存备用；③由于0.5M Tris-HCl（pH8.0）和0.5M EDTA（p H8.0）均已调好pH值，配制pH8.0的TE溶液时不必再调节pH值；④正确使用微量移液器。 （5）配制10×TAE电泳缓冲液，待高压蒸汽灭菌。 注意：10×TAE电泳缓冲液为高浓度的储存液，使用时稀释10倍作为1×TAE工作液，电泳槽中添加电泳缓冲液和配制琼脂糖凝胶所用的电泳缓冲液浓度应一致，都使用1×TAE工作液。 （6）配制6×上样缓冲液，待高压蒸汽灭菌。 注意：电泳上样前，取适量6×上样缓冲液与DNA样品（如质粒溶液、PCR产物、酶切产物等）混合，使上样缓冲液在混合物中的终浓度约为1×。 （7）配制EB储存液（10mg/mL），室温下保存。 注意：①在自来水中加入数滴EB储存液即可用于琼脂糖凝胶的染色；②由于EB有致癌嫌疑，操作时必须戴一次性塑料手套，禁止戴着塑料手套接触非EB区，操作完毕手套扔在指定的纸篓。
溶液各种配制
附录：常用试剂配制及应用 一、常用缓冲液、试剂的配制 碳酸盐缓冲液(Carbonate-Bicarbonate Buffer) 由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH>9的缓冲液配制（附表1）。 附表1. 0.2 mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7） 磷酸缓冲液(Phosphate Buffers，PB) 磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值， PO4：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21；所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽。NaH 2 HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32。 Na 2 另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用pH缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较小，如0.1mol/L缓冲液稀释10倍其pH变化小于0.1。 磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（Ca2+）、镁离子（Mg2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些生物化学反应过程，如对某些酶
的催化活性具有一定程度的抑制作用。 NaH 2PO 4 的pH值偏酸性，可用作pH<4的缓冲液。 Na 2HPO 4 的pH值偏碱性，可用作pH>10的缓冲液。 而pH＝6～8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaH 2PO 4 与Na 2 HPO 4 两种磷 酸盐混合配制（附表2）。 附表2. 0.2 mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.2） 磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-buffered saline, PBS) 磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。 NaCl 8g KCl 0.2g Na 2HPO 4 1.44g KH 2PO 4 0.24g