血清总胆固醇(TC)测定操作规程
血清总胆固醇(TC)测定操作规程
A1．2 原理
血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。醌亚胺的最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。反应式如下：
胆固醇酯+H2O CEH 胆固醇+游离脂肪酸
胆固醇+02 CHOD △4-胆甾烯酮十H202
2H202+4－氨基安替比林+酚 POD 昆亚胺
+4H2O
A1．3 标本采集与处理
对于血脂分析，特别需要强调“分析前”各个环节的质量管理。
A1．3．1 受检者(体检对象或病人)的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样。对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。对体检对象及做前瞻性观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24h 内不作剧烈运动。
A1．3．2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响血脂水平。例如站立
5 min可使血脂浓度提高5％，15 min提高16％，故在采血前至少应***5min。一般从
肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1 min，穿刺成功后立即松开止血带。静脉阻滞5min 可使甘油三酯增高10％～15％。
A1. 3．3 抗凝剂：我国多用血清作血脂检验。如用血浆，多主张用EDTANa2(1mg／mL)抗凝。抗凝血浆中的总胆固醇和甘油三酯水平比血清中约低3％，EDTA用量越多，血浆水平偏低越明显。但肝素抗凝不影响血浆中水平。
A1．3．4 标本处理：血标本应尽快送实验室。室温下放置30min～45min后离心分离
血清或血浆，置洁净试管加盖保存。在室温中放置不超过3 h，4C保存可稳定4天。置-70'C可长期保存，但不可反复冻融。
A1．4 试剂
A1．4. 1 酶试剂：本科使用XX公司XX产
品号试剂盒，为干粉试剂。临用前用水复溶
即可使用。每瓶干粉用水XX ml复溶。复溶后试剂内各主要成分如下：
磷酸盐缓冲液pH7.7 0．4mol/L
假单胞菌胆固醇酯水解酶≥800 U/L
奴卡氏菌胆固醇氧化酶≥400U/L
辣根过氧化物酶≥1000U/L
胆酸钠 3mmol/L
4—氨基安替比林 0.5mmol/L
酚 3.5mmol/L
聚氧乙烯表面活性剂 3g/L
A1.4.2 总胆固醇校准血清：也由XX公司提供，产品号为XX。
A1.4.3 试剂与校准血清的稳定性：未开瓶的试剂于4℃保存，可稳定至有效期。复溶的试剂在2℃～8℃可稳定7天，15℃－25℃可稳定3天。如在稳定期内试剂出现明显的粉红色，弃去不用o
A1.5 仪器， XX型号光电比色计，具500nm～520nm滤光片。
A1.6 操作
标本为及时分离的空腹血清，以及肝素或EDTA抗凝血浆。本法为终点法。测定时标本管与标准管分别加入标本与标准血清各
10uL，酶试剂1．00mL，混匀后在37℃放置5 min，或20℃～25℃放置10min后用比色计比色，以试剂空白调零，波长500nm或520nm，颜色至少稳定60min。
A.1．7 计算
A测定
C= ×C0 -------------------------(A1)
A标准
式中：C——测定血清总胆固醇浓度，mmol ／L；
A测定——标本管吸光度；
A标准——标准管吸光度；
Co——校准血清中总胆固醇浓度，mmol／L；
A，1．8 操作性能
A1．8．1 精密度：批内CV<1.5％，批间
CV<2.5％；
A1．8．2 准确度：以参考方法(ALBK法)定值的血清为校准品时，本法测定结果与ALBK 法基本一致。
A1．8．3 灵敏度：以酚为显色剂，总胆固醇为5.2mmol／L时的显色吸光度A500nm 约0.30—0.35。
A1．8．4 可报告范围：血清与酶试剂用量之比为1：100时，测定上限为13 mmol／L。
A1．8．5 特异性：血清中多种非胆固醇甾醇会不同程度地与本试剂显色。一般人血清中非胆固醇甾醇约占总胆固醇的1％，在常规测定时这种影响可以不计。
A1．8．6 干扰：血红蛋白高于2g/L时会引起正干扰；胆红素>170umol/L时有明显负干扰。抗坏血酸与甲基多巴血中浓度高于治疗
水平时也使结果偏低。高甘油三酯血症(血清混浊)在本法中(血清与试剂量1：100时)一般无明显影响。
注
1 本法为中华医学会检验学会推荐的总胆固醇测定常规方法(见中华医学检验杂志1995，18：185)。
2 试剂中两种酶－胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的质量十分重要。必须能有效地水解各种脂肪酸的胆固醇酯(有些微生物来源的酯酶不易水解花生四烯酸酯)，对胆固醇的氧化必须完全。选择试剂盒时应测试对血清标本总胆固醇的反应速度，好的试剂一般能在5min内(有的只要1min～2min)反应达到终点。反应不能在10min内完成的试剂不宜采用，其原因可能是原酶质量不好或酶用量太少，后者可使高胆固醇结果偏低。本法所用试剂，要求标本与酶试剂用量的比例为l：100，使可报告范围上限达13mmo1/L，过多地提高标本比例，会使测定上限降低。如果标本中总胆固醇浓度超过13mmol／L，可
用生理盐水稀释后重新测定。现在临床很少要求做游离胆固醇测定，如需做游离胆固醇测定，最简便的也是酶法，即在上述总胆固醇试剂中省去酯水解酶；一般游离胆固醇约占胆固醇的30％左右。
3 总胆固醇测定要求标准化，与国际标准取得一致，必须有准确可靠的标准参考物质(SRM)。
1)酶法测定总胆固醇时，血清中大部分胆固醇是酯化的，而且血清基体对酶反应有明显影响，不可使用纯胆固醇溶液为标准。国际上由美国国家标准与技术研究院(NIST)提
供代号为SRM909的人参考血清，作为总胆固醇测定的一级标准；我国也已建立了国家一级标准GBW 09138“人血清胆固醇标准物质”。常规使用的试剂盒必须具有可追溯于以上参考血清的校准血清，方能保证检验结果准确可靠。
2)不可使用总胆固醇的定值控制品作标准。
3)本法使用的校准血清为液态，用前必须充分混匀。
A1. 9 参考值
人群血脂水平主要决定于生活因素，特别是饮食营养，所以各地区调查所得参考值高低不一，应根据冠心病流行病学研究及临床经验统．一制定高胆固醇划分标准。欧美国家制定的标准大致相同，40岁以上人群总胆固醇水平高低的划分大致可定为：
合适水平<5.17mm01/L(200mg/d1)；
边缘水平5.17mm01/L～
6.46mmol/L(201mg/dl～219mg/dl)；
高胆固醇血症≥6.47mm01/L(≥220mg/dl)。
A1. 10 临床意义
影响总胆固醇水平的因素有：
A1．10．1 年龄与性别。总胆固醇水平往往随年龄上升，但到70岁或80岁后有所下降，
中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性；
A1．10．2 长期高胆固醇、高饱合脂肪酸和高热量饮食可使总胆固醇增高；
A1．10．3 遗传因素；
A1．10．4 其他。如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可使总胆固醇升高。
高胆固醇血症是冠心病的主要危险因素之一。病理状态下高胆固醇有原发与继发的两类。原发的如家属性高胆固醇血症(低密度脂蛋白受体缺陷)、家属性apo—B缺陷症、多源性(polygenic)高总胆固醇、混合性高脂蛋白血症。继发的见于肾病综合征、甲状腺机能减退、糖尿病、妊娠等。
低总胆固醇血症也有原发的与继发的，前者如家属性的无β或低脂蛋白血症；后者如甲亢、营养不良、慢性消耗性疾病等。低总胆固醇者容易发生脑出血，也可能易患癌症(未证实)。肝脏是胆固醇及卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)合成的器官，严重肝病病人
血清总胆固醇不一定很低，但由于血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活力低下，血清胆固醇酯占总胆固醇的比例可低达50％以下。
A1．11 参考文献
中华人民共和国卫生部医政司编．全国临床检验操作规程(第二版).南京：东南大学出版社，1997．268
血清总胆固醇(TCH)测定及临床意义
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地区调查所得参考值高低不一，以致各地区有各自的高Tc划分标准。现在国际上以显著增加冠心病危险的Tc水平（医学决定水平）作为划分界限。在方法学标准化的基础上，采用共同的划分标准，有助于避免混乱。 我国《血脂异常防治建议》提出的标准为：理想范围：＜5.2mmol/L(＜200mg/dL) 边缘升高：5.23～5.69mmol/L(201～219mg/dL)升高：≥5.72mmol/L （≥220mg/dL） 美国胆固醇教育计划（ncep），成人治疗组提出的医学决定水平如下：理想范围：＜5.2mmol/L(＜200mg/dL)边缘升高：5.2～6.2mmol/L(200～239mg/dL)升高：≥6.21mmol/L（≥240mg/dL）【临床意义】 影响Tc水平的因素有：①年龄与性别：Tc水平往往随年龄上升，但到70岁后有所下降。中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性。②长期的高胆固醇、高饱和脂肪和高热量饮食，可使Tc增高。 ③遗传因素。④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使Tc升高。 增高：高总胆固醇是冠心病的主要危险因素之一，有原发和继发两种，原发常由遗传因素引起如家族性高胆固醇血症（低密度脂蛋白受体缺陷）、家族性apob缺陷 症、多源性高Tc、混和性高脂蛋白血症等。继发的见于肾病综合征、甲状腺功能减退、糖尿病、胆总管阻塞、粘液性水肿、妊娠等。
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 【原理】 血清中总胆固醇(total cholesterol ，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol ，FC)和胆固醇酯(cholesterol ester ，CE)两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢，H 2O 2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。 【试剂】 1．胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献) GOOD's 缓冲液(pH6.7) 50mmol/L 胆固醇酯酶 ≥200U/L 胆固醇氧化酶 ≥100U/L 过氧化物酶 ≥3 000U/L 4-AAP 0.3mmol/L 苯酚 5mmol/L 2．胆固醇标准溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇200 mg ，用异丙醇配成100 ml 溶液，分装后，4℃保存，临用取出。也可用定值的参考血清作标准。 【操作步骤】 终点法检测TC 按下表依次加样。 酶法测定TC 操作步骤 项目 测定管 标准管 空白管 血清(μl) 50 － － 标准液/定值血清(μl) － 50 － 蒸馏水(μl) － － 50 酶试剂(μl) 1.50 1.50 1.50 混匀后，37℃保温5 min ，用分光光度计比色，于500 nm 波长处以空白管调零，读出各管吸光度。 【计算】 血清TC (mmol/L)＝ 标准管吸光度 测定管吸光度 ×胆固醇标准液浓度
【参考范围】血清参考值：3.0～5.20 mmol/L；危险阈值：5.20～6.20 mmol/L；高胆固醇血症：≥6.20 mmol/L。 【临床意义】 1．TC增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。 2．TC降低常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。 【注意事项】 1．试剂中酶的质量影响测定结果。 2．若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。 3．检测标本可为血清或者血浆(以肝素或EDTAK2抗凝)。 【评价】本方法线性范围为≤19.38 mmol/L (750 mg/d1)。 本方法特异性好和灵敏度高，既可用于手工操作，也可自动化分析；既可作终点法检测，也可作速率法检测。 在终点法中血红蛋白高于2 g/L时引起正干扰；胆红素高于0.1 g/L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小。高TG血症对本法无明显影响。 检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。
血清胆固醇的定量测定
血清胆固醇的定量测定 摘要：目的：定量测定人血清胆固醇。方法：采用磷硫铁法测定胆固醇含量。结果：该人血清胆固醇为132mg/ml。结论：该人的胆固醇含量正常。 关键词：胆固醇；磷硫铁法 胆固醇参与血浆蛋白的组成，是细胞膜的结构成分，胆汁酸盐，肾上腺皮质激素，维生素D等的前体。胆固醇的测定方法包括化学显色法（磷硫铁法和邻苯二甲醛法）和酶学法（试剂盒），本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇。血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇则溶在无水乙醇中。在乙醇提取液中加入磷硫铁试剂，胆固醇和试剂会产生紫红色化合物，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定。 1 仪器与试药 1.1 仪器 721型分光光度计；离心机；试管；EP管； 1.2 药品与试剂人血清；10%三氯化铁溶液；磷硫铁试剂；胆固醇标准溶液；无水乙醇 2 方法 2.1 胆固醇的提取取人血清约100μL，分装到两个EP管中，每个管中分别加入200μL无水乙醇，摇匀，每个管中加入无水乙醇1000μL，摇匀，静置10min，离心（3000rpm，5min），得到上清液备用。 2.2 比色测定取三支试管，分别按照表1加入如下试剂。摇匀，室温静置10min。将混合溶液加入比色皿中，若比色皿过大，可加入无水乙醇稀释，放入分光光度计中进行测定吸光度。 表1 试管编号1（测定管）2（标准管）3（空白管）胆固醇提取液 1.0ml ———— 胆固醇标准液—— 1.0ml ——无水乙醇———— 1.0ml 磷硫铁试剂 1.0ml 1.0ml 1.0ml 2.3 计算人血清胆固醇=(OD 2/OD 1 )×0.08×(100/0.04)= (OD 2 /OD 1 )×200，其中， OD 2表示测定管的吸光度，OD 1 表示标准管的吸光度。 3 结果与讨论 3.1 计算结果 OD 2为0.096，OD 1 为0.145，计算可得，人血清胆固醇为132mg/ml. 3.2 讨论正常人胆固醇含量约为110-220 mg/ml，从结果来看，我们可以看处这个人的胆固醇含量是正常的。在实验操作中，配制试剂时要格外吸小心，看清标注以免搞错，胆固醇过高，会引起动脉粥样化，甚至引起冠心病，胆固醇过低，会使人抵抗力不足，容易引发感染性疾病。
实验六蛋黄总胆固醇的测定(邻苯二甲醛法)(精)
实验六蛋黄总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法） 一、实验目的 1、学习分光光度计的原理及操作。 2、学习用分光光度法测定蛋黄中总胆固醇（脂肪）含量及标准曲线的制作。 二、基本原理 胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生紫红色物质，此物质在550nm由最大吸收值，可用比色法测定。胆固醇含量在400mg/100ml之内与吸光度呈现良好线性关系。本法操作简便，灵敏、稳定。 实验相关原理 根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法，称为分光光度法(spectrophotometry)。该法具有一定的灵敏度和准确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂，故应用很广。 吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收定律。 吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波长。 1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的特性常数。在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。 2. 溶剂不同，其吸光系数亦不同。 3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。如将不同波长的单色光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲线上有极大值的部分，称为吸收峰。吸收峰所对应的波长，称为最大吸收波长，以符号λmax表示，这是物质定性的依据之一。 4.单色光的纯度也影响吸光系数。单色光越纯，即经单色器分光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。定量方法： 1、吸光系数法 2、标准曲线法 不是任何情况下都能适用的。特别是在单色光不纯的情况下，测得的吸光度值可以随所用仪器不同而在一个相当大的幅度内变化不定，若用吸光系数换算成浓度，则将产生很大误差。 先配制一系列浓度不同的标准溶液，在测定条件相同情况下，分别测定其吸光度，然后以标准溶液的浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A—C关系图，在相同条件下测出样品溶液的吸光度，就可以从标准曲线上查出样品溶液的浓度。 3、对照法 标准曲线的制作 （1）配置一系列浓度不同的标准溶液。 （2）在测定条件相同的情况下，分别测定其吸光度。 （3）以标准溶液浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A-C关系图。 （4）在相同条件下测出样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出浓度。 定性方法： 将一系列不同波长的单色光，照射到含待测组分的溶液，可测得相应的一系列吸光度。如果以吸光度为纵坐标，以波长为横坐标作图，便可得到该待测物质的吸收曲线。由于每一种物质均有其特征的吸收曲线，故可与其标准品比较而定性。但在实际工作中常用λmax 和ε来定性，λmax可从吸收曲线中吸收峰所对应的波长直接找出；ε通常需配制待测物质三种不同浓度的溶液，于1cm
血清总胆固醇的测定和血清蛋白分离实验
血清总胆固醇的测定 实验目的： 测量血清中总胆固醇的含量 实验原理： 胆固醇酯加水在胆固醇酯酶的催化下生成游离胆固醇和脂肪酸。游离胆固醇加氧在胆固醇氧化酶作用下生成胆烷4-烯-3-酮和过氧化氢，过氧化氢再加4-氨基安替比林和酚在过氧化物酶的作用下生成醌亚胺，醌亚胺在500nm 有特异吸收峰，吸收的强度与胆固醇含量成正比。反应如下： 胆固醇酯+H 2O 胆固醇酯酶 → 游离胆固醇+脂肪酸 游离胆固醇+O 2 胆固醇氧化酶→ 胆烷-4-烯-3-酮+H 2O 2 H 2O 2+4-氨基安替比林+酚过氧化物酶→ 醌亚胺染料+H 2O 实验操作： 取干净干燥的小试管3支，标号，按下表操作 混匀，置37℃水浴5-6分钟，以空白管校零，在500nm 波长下比色读取各管吸光度。 实验结果： As= 0.214 A T =0.143 标准管胆固醇含量mmol/L=5.00mmol/L 测定管胆固醇含量mmol/L=3.34mmol/L 分析讨论： 为保证实验结果准确，滴加液体时可以先滴加量少的液体，再滴加含量较大的 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 实验目的： 醋酸纤维薄膜电泳把血清蛋白分离，并测定血清蛋白种类 实验原理：
带电颗粒在电场作用下，向着与其所带电性相反的电极移动，称电泳。醋酸纤维薄膜电泳可把血清 蛋白分离为：清蛋白、α 1、α 2 、β、γ-球蛋白5条区带 实验操作： 1.点样：取在缓冲液中浸泡的醋酸纤维薄膜一条（ 2.5×8cm），轻轻夹于滤纸中，吸去多余的缓冲液，在薄膜的毛面上距一端约1.0cm～1.5cm处，用点样气沾上血清后迅速压一下，然后将毛面向下使两端紧贴在四层滤纸上，加盖，平衡2～3分钟，通电电泳。 2.电泳：恒压120V，0.6mA/cm，时间50～60分钟。 3.染色：电泳完毕后，关闭电源，将薄膜取出，直接浸入氨基黑染色液中染色，取出用漂洗液浸洗3～4次，至背景完全无色为止。 实验结果: 电泳后出现5条区带，从正极到负极，分别为清蛋白、α 1、α 2 、β、γ，点样线。 分析讨论： 在醋酸纤维薄膜上点血清时要在毛面上点样，点样时要快速且血清量不能过多或者过少。电泳时把点样端放在电泳负极处。染色时间不能过短否则会导致最后得到的结果不够明显。
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法) 简介： 胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C 27H 46O ，分子量为3860.65。胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。 Leagene 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH 水解为游离胆固醇，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder 反应)。分光光度计在500~520nm 处进行比色测定。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 样本处理： ①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。 ②细胞样本： a 、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，离心，弃上清，留取沉淀。 b 、用PBS 或生理盐水清洗1~2次，离心，弃上清，留取沉淀。 c 、加入200~300μl 的PBS 或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W ，每次3~5s ，间隔30s ，重复3~5次。亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。 ③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理盐水或PBS ，冰浴条件下手动或机械匀浆。离心，取上清待用。 2、 分光光度计(1ml 比色杯)、半自动生化分析仪TC 测定操作: 编号 名称 TC1213100T Storage 试剂(A): COD-PAP 工作液 Good's buffer 2×50ml -20℃ 避光 胆固醇氧化酶 胆固醇激酶 稳定剂 试剂(B): TC 标准(5mmol/L) 1ml -20℃ 避光 试剂(C): ddH 2O 1ml RT 使用说明书 1份
实验三血清总胆固醇的测定
实验三血清总胆固醇的测定 目的要求 了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。 实验原理 血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、临床诊断和营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 ~ 250mg/mL。 胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一种方法。 胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关系。 本法不必离心，颜色产物也比较稳定。 试剂和器材 一、试剂 邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg，以无水乙醇溶至50mL冷藏，有效期为一个半月。 混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。 标准胆固醇贮存液（1mg/mL）：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定溶至100mL。 标准胆固醇工作液（0.1mg/mL）：将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰乙酸稀释至100mL。 二、测试样品 0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。 三、器材 试管1.5×15cm（×11）；移液枪，量筒50mL分光光度计。 操作方法 一、制作标准曲线 取9支试管编号后，按下表顺序加入试剂：
加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm波长处测定光吸收值。以总胆固醇量（mg%）为横坐标，光吸收值为纵坐标做出标准曲线。 二、样品测定 取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定： 加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm下测定光吸收值。然后，从标准曲线上可查出样品中总胆固醇的含量。 注意事项 1.本法在20～37℃条件下显色。 2.混合酸粘度比较大，颜色容易分层，比色前一定要混匀。 思考题 1. 本实验操作中特别需要注意些什么？为什么？ 2. 酯类难溶于水，将它们均匀分散在水中则形成乳浊液，为什么正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？
实验七__胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
生物化学与分子生物学设计实验 （胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一肟 法测定血清尿素） 小组成员： 班级：麻醉11-2班 日期：2012年12月19 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一肟法 测定血清尿素
实验目的 1、掌握酶法测定总胆固醇的原理和方法。 2、学习用比色法测定血清尿素。 3、巩固有关胆固醇和尿素的知识。 4、进一步熟练UV2100型分光光度计的 重点、难点： 重点：1、氧化酶法测定总胆固醇的原理 2、二乙酰一肟法测定血清尿素的注意事项 难点：氧化酶法测定总胆固醇的原理 一、实验原理 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇 血清总胆固醇(TC)包括：游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)两部分。本实验是胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化物酶相偶联发生的偶联反应。 第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA) 。 第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2。 第三步：H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含 量成正比。 （二）二乙酰一肟法测定血清尿素 二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。 二、操作步骤 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇
终点法检测TC，取试管3支按下表依次加样。 酶法测定TC操作步骤 加入物(μl) 空白管标准管测定管血清－－20 标准液或定值血清－20 －蒸馏水20 －－ 酶试剂 1 000 1 000 1 000 混匀后，37℃保温10 min，每管加3ml水混匀，用分光光度计比色，于500 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度。 （二）二乙酰一肟法测定血清尿素 取试管3支，按下表依次加样。 二乙酰一肟法操作步骤 加入物(ml) 空白管标准管测定管 血清－－0.02 尿素标准应用液－0.02 － 蒸馏水0.02 －－ 二乙酰一肟溶液0.5 0.5 0.5 酸性试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴加热12min，取出置冷水中冷却5min，以空白管调零，在540nm处读取各管吸光度。 三、注意事项 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇 1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致； 2、比色应在30min内完成； 3、试管在操作前尽量保持干燥； 4、试剂中酶的质量影响测定结果；
血清胆固醇含量的测定实验报告
实验二 血清胆固醇含量的测定的实验报告 实验目的：学会利用氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理和方法。 实验原理：血清胆固醇由游离胆固醇（30%）和胆固醇酯（70%）组成。血清胆固醇经酯化酶水解后，生成游离胆固醇和脂肪酸；在胆固醇氧化酶的作用下，游离胆固醇产生的H 2O 2与4-氨基安替比林和DHBS 反应生成微红色的醌亚胺。醌亚胺在520nm 有特异吸收，反应产生的颜色与胆固醇含量成正比。 胆固醇酯+ H 2O ???→?胆固醇酯酶 胆固醇+脂肪酸 胆固醇+O 2?? ??→?胆固醇氧化酶 △4胆甾烯酮+ H 2O 2 H 2O 2+4-氨基安替比林+DHBS ???→?过氧化物酶 醌亚胺+ H 2O 实验步骤： 1、取2支试管分别加入的血清和标准胆固醇溶液，并分别标注为“H ”和“SH ”试管。往每支试管加入的沉淀剂，在室温下静置15min ，用2000rad/min 的离心机分离10min 。 2、准备5支试管分别标注为“T ”（总胆固醇）、“H ”（高密度脂蛋白胆固醇）、“ST ”（标准总胆固醇）、“SH ”（标准高密度脂蛋白胆固醇）、“B ”（空白实验）。按照下表准备各支试管：（标准胆固醇浓度为50mg/dL ）
3、准备好以上试管后，充分混合并在37。 的温度下放置20min ，用波长520nm 的分光光度计测量各支试管的吸光度值。 实验结果： 计算公式：总胆固醇=ST T 吸光度值吸光度值×02 .01 .0×50 高密度脂蛋白胆固醇=SH H 吸光度值吸光度值×50 代入数据得：总胆固醇=252 .0167 .0×02.01.0×50=（mg/dL ） 高密度脂蛋白胆固醇=430 .0605 .0×50=（mg/dL ）
食物中胆固醇含量一览表
食物中胆固醇含量一览表 胆固醇的摄入量以每天小于300毫克为宜（相当于1个鸡蛋黄中含的胆固醇量）
十种食物帮你刮掉胆固醇 胆固醇是人体不可缺少的营养物质。它不仅作为身体的组成成分，还是合成许多重要物质的原料，但是长期大量摄入胆固醇不利于身体健康，会使血清胆固醇升高，增加患心血管疾病的危险，并诱发脂肪肝。据美国每日健康网报道，通过长期研究，美国洛玛琳达大学研究人员的一项最新研究成果显示，已经患高胆固醇血症的人要常吃以下10种食物： 苹果：因富含果胶、纤维素和维生素C，有非常好的降脂作用。如果每天吃两个苹果，坚持一个月，大多数人血液中的低密度脂蛋白胆固醇(对心血管有害)会降低，而对心血管有益的高密度脂蛋白胆固醇水平会升高。 胡萝卜：富含果胶酸钙，它与胆汁酸发生化学反应后从大便中排出。身体要产生胆汁酸势必会动用血液中的胆固醇，从而促使血液中胆固醇的水平降低。 玉米：含有丰富的钙、磷、硒和卵磷脂、维生素E等，具有降低血清胆固醇的作用。 牡蛎：富含锌及牛黄酸等，尤其是牛黄酸可促进胆固醇分解，有助于降低血脂水平。 杏仁：胆固醇水平正常或稍高的人，可以用杏仁取代其膳食中的低营养密度食品，达到降低血液胆固醇并保持心脏健康的目的。 海带：含丰富的牛黄酸，可降低血压及胆汁中的胆固醇；含食物纤维褐藻酸，也可以抑制胆固醇的吸收，促进排泄。 大蒜：能减少肝脏合成胆固醇。每天只需吃3瓣大蒜，便可有效降低有害的胆固醇，使有益胆固醇升高，使心脏病的发病率减少50%。 牛奶：含较多的钙质，能抑制体内胆固醇合成酶的活性，也可减少人体对胆固醇的吸收。 蜜橘：含有丰富的维生素C，多吃可以提高肝脏解毒能力，加速胆固醇转化，降低血清胆固醇和血脂的含量。 茶：含有咖啡碱与茶多酚，有提神、强心、利尿、消腻和降脂之功能。经常饮茶，可以防止人体内胆固醇的升高。 正确认识胆固醇 “谈胆固醇色变”，是很多人，特别是中老年朋友的真实心态。 其实，这是一种认识上的“误区”。对胆固醇的看法，无论是血清胆固醇，还是膳食胆固醇，均应持“一分为二”的态度，客观评价胆固醇的“功”与“过”。一、“一分为二”看血清胆固醇： 临床上将血总胆固醇增高称为高胆固醇血症。目前，我国医学界将血清总胆固醇水平大致分为以下三个等级：
总胆固醇测定试剂盒标准操作程序.
总胆固醇测定试剂盒标准操作程序 1. 摘要 本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆样本中总胆固醇的含量。 2. 适用范围 程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中总胆固醇的含量。 3. 职责 使用AU5811自动生化分析仪进行测定总胆固醇浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。 4. 检测方法 上海科华生物工程股份有限公司生产的总胆固醇测定试剂盒采用的是氧化酶法。 5. 原理 O H ESPAS O H O H O O H 222222244+???→?+-+-?+????→?++???→?+醌亚胺氨基安替比林胆甾烯酮 游离胆固醇脂肪酸 游离胆固醇总胆固醇过氧化物酶胆固醇氧化酶胆固醇酯酶 ESPAS:N-乙基-N-(3-磺丙基)-间-茴香胺 血清中的总胆固醇在胆固醇酯酶的作用下水解成游离胆固醇和脂肪酸,游离胆固醇在胆固醇氧化酶的催化下,氧化成Δ4-胆甾烯酮和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物4-氨基安替比林和ESPAS 反应生成红色化合物醌亚胺。 由于醌亚胺在波长550nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内，550nm 处吸光度的变化值与样本中总胆固醇的含量成正比 6. 仪器 AU5811自动生化分析仪 7. 试剂 7.1 试剂来源： 上海科华生物工程股份有限公司提供 7.2 试剂瓶内主要成分： R1：胆固醇酯酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、ESPAS （ADPS ）； R2：胆固醇氧化酶、4-氨基安替比林； 校准品：胆固醇 7.3 试剂稳定性：
血清总胆固醇(TC)测定操作规程
血清总胆固醇(TC)测定操作规程 A1．2 原理 血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。醌亚胺的最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。反应式如下： 胆固醇酯+H2O CEH 胆固醇+游离脂肪酸 胆固醇+02 CHOD △4-胆甾烯酮十H202 2H202+4－氨基安替比林+酚 POD 昆亚胺 +4H2O A1．3 标本采集与处理 对于血脂分析，特别需要强调“分析前”各个环节的质量管理。
A1．3．1 受检者(体检对象或病人)的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样。对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。对体检对象及做前瞻性观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24h 内不作剧烈运动。 A1．3．2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响血脂水平。例如站立
血清总胆固醇(TCH)测定 及临床意义
血清总胆固醇(TCH)测定及临床意义 【正常参考值】 人群血脂水平主要取决于生活因素，特别是饮食和营养，所以各地区调查所得参考值高低不一，以致各地区有各自的高TC划分标准。现在国际上以显著增加冠心病危险的TC水平（医学决定水平）作为划分界限。在方法学标准化的基础上，采用共同的划分标准，有助于避免混乱。 我国《血脂异常防治建议》提出的标准为： 理想范围：＜5.2 mmol/L(＜200 mg/dL) 边缘升高：5.23～5.69 mmol/L(201～219 mg/dL) 升高：≥5.72 mmol/L（≥220 mg/dL） 美国胆固醇教育计划（NCEP），成人治疗组提出的医学决定水平如下： 理想范围：＜5.2 mmol/L(＜200 mg/dL) 边缘升高：5.2～6.2 mmol/L(200～239 mg/dL) 升高：≥6.21 mmol/L（≥240 mg/dL） 【临床意义】 影响TC水平的因素有：①年龄与性别：TC水平往往随年龄上升，但到70岁后有所下降。中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性。②长期的高胆固醇、高饱和脂肪和高热量饮食，可使TC增高。③遗传因素。④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。 增高：高总胆固醇是冠心病的主要危险因素之一，有原发和继发两种，原发常由遗传因素引起如家族性高胆固醇血症（低密度脂蛋白受体缺陷）、家族性apoB缺陷
症、多源性高TC、混和性高脂蛋白血症等。继发的见于肾病综合征、甲状腺功能减退、糖尿病、胆总管阻塞、粘液性水肿、妊娠等。 减少：低总胆固醇也有原发和继发两种，前者常由遗传因素引起如家族性的无或低β脂蛋白血症，后者如甲状腺功能亢进、营养不良、慢性消耗性疾病、恶性贫血、溶血性贫血等。
总胆固醇试剂盒使用说明书
自己从试剂说明书上打的，主要是为了了解酶比色法测定总胆固醇的原理。 总胆固醇试剂盒使用说明书 Cholestero Kit (CHO) 酶比色法 通用型（冻干粉） 用途： 本试机用于测定人血清中总胆固醇的浓度。 测定原理： 总胆固醇+??→?CEOD O H 24Δ-胆甾烯酮 + 22O H 胆固醇+2O ??→?GPO 磷酸二羟丙酮+22O H 222O H +4-氨基安替砒啉+4-氯酚??→?POD 醌亚胺+O H 24 试剂稳定性： 原装试剂在2~8℃避光保存，有效期36个月。 试剂复溶后在2~8℃保存稳定1月，在15~25℃保存稳定3天。 样品： 新鲜无溶血血清。 操作步骤： 波长：500nm (480~520nm) 反映温度：37℃ 比色杯光径：1cm 取一定量R2(参看R1瓶签)复溶 1瓶R1，溶解后即为工作液。 分别混合均匀，在37℃保温6分钟，以试剂空白管校零，度校准A 及样品A 。 计算：
总胆固醇浓度= 校准 样品A A ×校准浓度（mmol/L 或mg/dl ） 参考值： 中老年人合适水平＜5.17mmol/L(200mg/dl) 临界值3.17mmol/L~6。47mmol/L(200mg/dl~250mg/dl) 高胆固醇血症＞6.47mmol/L(250mg/dl) 各医院应根据本地区实际情况建立自己的参考值。 线性上限：` 总胆固醇浓度可达12.93mmol/L(500mg/dl) 主要性能指标： 1. 试剂空白吸光度：在500nm(480~520nm)处，A ≤0.1。 2. 准确性：相对偏差不超过±5%。 3. 瓶间差：变异系数（CV%）≤3% 4. 批间差：随机抽取三批试剂盒的批间差≤4%。 5. 线性误差：在1.13mmol/L~11.29mmol/L 范围内不超过±10%。 注意事项： 1. 若样品胆固醇含量过高，可用生理盐水稀释样品，重新测定。结果乘以稀释倍数。 2. 本产品仅用于体外诊断，内含叠氨钠，应避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。 3. 本产品应在2~8℃条件下贮存。 4. 若试剂在全自动生化分析仪上使用，可参照本公司提供的相应型号仪器的参数，并在本 公司技术人员指导下使用。 禁忌症：暂未发现
血清总胆固醇酶试剂法测定法
血清总胆固醇酶试剂法测定法 1.实验原理 胆固醇酯酶(CHE)、胆固醇氧化酶(CHO)、过氧化物酶(POD)、Trinder反应偶联比色终点法。反应式如下： CHE 胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸 CHO 胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2 POD 2H2O2 + 4-氨基安替比林+ 苯酚醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。 3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂威特曼总胆固醇试剂盒试剂1 试剂2 6.1.1 试剂准备试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂 6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪
8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP 文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总胆固醇校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠检测结果。 12. 参考值范围（mmol/L） 合适范围： 5.2mmol/L 高度危险临界值： 5.2～6.2mmol/L 高度危险范围：>6.2mmol/L 13. 临床意义：胆固醇由体细胞合成和来自对食物的吸
血清总胆固醇测定法
血清总胆固醇测定法 1.实验原理 胆固醇酯被胆固醇酯酶水解酶(CEH)水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚（三者合称PAP）反应，生成红色醌亚胺色素（Trinder反应）。醌亚胺的最大吸光度在500nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。反应式如下： CEH 胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸 COD 胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2 POD 2H2O2+ 4-AAP +酚苯醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。 3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1
周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂欧泰克总胆固醇试剂盒（货号：112 1307170 1 试剂8×70ml） 6.1.1 试剂组成 Tris缓冲液pH7.3 50mmol/L 酚20mmol/L 4-氨基安替比林 1.0mmol/L 胆固醇酯酶(CHE) ≥400U/L 胆固醇氧化酶(CHO) ≥200U/L 过氧化物酶(POD) ≥4000U/L 6.1.2 试剂准备试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂
实验七、血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法)
实验七、血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法） 实验目的： 掌握磷硫铁法测定血清胆固醇的原理、方法及临床意义。 实验原理： 总胆固醇的测定有化学比色法(磷硫铁法和邻苯二甲醛法)和酶学方法(试剂盒)两类。本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇含量。 用无水乙醇提取血清中的胆固醇，再与硫磷铁试剂作用，产生颜色反应，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定血清中胆固醇含量。 血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇及其酯溶解在无水乙醇。在乙醇提取液中，加磷硫铁试剂，胆固醇及其酯与试剂形成比较稳定的紫红色化合物，此物质在560nm 波长处有特征吸收峰，可用比色法作胆固醇的定量测定。正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均正常值在110～220mg/100ml。 胆固醇含量在400mg/100ml内，与A（或OD）值呈良好线性关系。 实验讲授： 722型分光光度计的使用 722型分光光度计的使用 测量原理 分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律：当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收是有选择性的，各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。所以根据定律当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶液时，溶液对光的吸收程度A与溶液的浓度c（g/l）或液层厚度b (cm) 成正比。其定律表达式A = abc（a是比例系数）。当c的单位为mol/l时，A = εbc，比例系数用ε表示，称为摩尔吸光系数。其单
位为L·mol-1·cm-1，它是有色物质在一定波长下的特征常数。 T (透光率) = I/I0 A (吸光度) = -lgT 或 A = K·C·L (比色皿的厚度) 测定时，入射光I, 吸光系数和溶液的光径长度不变时，透过光是根据溶液的浓度而变化的，即“K”为常数。比色皿厚度一定，“L”、“I0”也一定。只要测出A即可算出“C”。《分光光度计的表头上，一行是透光率，一行是吸光度。》 722型分光光度计的使用 1、将灵敏度旋钮调至“1”档（信号放大倍率最小）。 2、开启电源，指示灯亮，选择开关臵于“T”，波长调至到测试用波长。仪器预热20分钟。 3、打开试样室（光门自动关闭），调节透光率零点旋钮，使数字显示为000.0。（调节100%T旋钮），盖上试样室盖，将比色皿架处于蒸馏水校正位臵，使光电管受光，调节透光率100%旋钮使数字显示100.0。如显示不到100.0，则可适当增加微电流放大的倍数。（增加灵敏度的档数同时应重复（3）调节仪器透光率的“0”位）但尽量使倍率臵于低档使用。这样仪器会有更高的稳定性。 4、预热后，按（3）连续几次调整透光率的“0”位和“100%”的位臵，待稳定后仪器可进行测定工作。 吸光度“A”的测量 将选择开关臵于A 。调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为零，然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。 浓度C的测量 将选择开关由“A”旋至“C”，将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路即可读出被测样品的浓度值。 使用方法 （1）预热仪器将选择开关臵于“T”，打开电源开关，使仪器预热20分钟。为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开，使光路切断。（2）选定波长根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的单色波长。 （3）固定灵敏度档在能使空白溶液很好地调到“100%”的情况下，尽可能采用灵敏度较低的挡，使用时，首先调到“1”挡，灵敏度不够时再逐渐升高。但换挡改变灵敏度后，须重新校正“0%”和“100%”。选好的灵敏度，实验过程中不要再变动。 （4）调节T=0% 轻轻旋动“0%”旋钮，使数字显示为“00.0”，（此时试样室是打开的）。（5）调节T=100% 将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的比色皿放入比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试样室盖子轻轻盖上，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示正好为“100.0”。
食物中胆固醇含量对照表
胆固醇食物含量对照表 一、前言 随着经济的快速发展，民众的生活型态及疾病的形式也随之改变。国人主要的死因，早年以传染病为主，到了1980年代已转变以癌症、脑血管疾病、意外事故、心脏病和糖尿病为主。胆固醇与冠状动脉硬化疾病息息相关，控制低密度脂蛋白胆固醇的高低也成为预防心血管疾病的重要指标。当血液中的总胆固醇浓度或低密度脂蛋白胆固醇浓度高于正常值时，即称为高胆固醇血症。 美国心脏学会建议：每人每日所进食的胆固醇不应超过300毫克。高胆固醇血症的饮食原则除控制油脂摄取量，少吃油炸、油煎或油酥的食物外，少吃胆固醇含量高的食物，如：内脏、蟹黄、虾卵等，皆可降低心血管疾病的发生率；因此，了解食物中胆固醇含量，做好饮食控制是非常重要的。 依据行政院卫生署国民健康局2008年公告针对台湾地区于2003年高血压、高血糖、高血脂盛行率大型调查中，发现65岁以上、不分男女，有36.9%的民众血压过高、20.7%的民众呈现高血糖的状况、而不正常高胆固醇的比率则是12.2%，高血压及高血糖的患者常常合并有高胆固醇的问题。所以，为了预防心血管疾病，饮食的控制非常重要，而如何增加大众对于胆固醇摄取量的了解，就是医护人员非常重要的任务。
每100克食物中胆固醇的含量：
三、食物中胆固醇的含量(二)
下列10种食物有助于降低胆固醇（低密度胆固醇）苹果：因富含果胶、纤维素和维生素C，有非常好的降脂作用。如果每天吃两个苹果，坚持一个月，大多数人血液中的低密度脂蛋白胆固醇（对心血管有害）会降低，而对心血管有益的高密度脂蛋白胆固醇水平会升高。 胡萝卜：富含果胶酸钙，它与胆汁酸发生化学反应后从大便中排出。身体要产生胆汁酸势必会动用血液中的胆固醇，从而促使血液中胆固醇的水平降低。 玉米：含有丰富的钙、磷、硒和卵磷脂、维生素E等，具有降低血清胆固醇的作用。 牡蛎：富含锌及牛黄酸等，尤其是牛黄酸可促进胆固醇分解，有助于降低血脂水平。 杏仁：胆固醇水平正常或稍高的人，可以用杏仁取代其膳食中的低营养密度食品，达到降低血液胆固醇并保持心脏健康的目的。 海带：含丰富的牛黄酸，可降低血压及胆汁中的胆固醇；含食物纤维褐藻酸，也可以抑制胆固醇的吸收，促进排泄。 大蒜：能减少肝脏合成胆固醇。每天只需吃3瓣大蒜，便可有效降低有害的胆固醇，使有益胆固醇升高，使心脏病的发病率减少50%. 牛奶：含较多的钙质，能抑制体内胆固醇合成酶的活性，也可减少人体对胆固醇的吸收。 蜜橘：含有丰富的维生素C，多吃可以提高肝脏解毒能力，加速胆固醇转化，降低血清胆固醇和血脂的含量。 茶：含有咖啡碱与茶多酚，有提神、强心、利尿、消腻和降脂之功能。经常饮茶，可以防止人体内胆固醇的升高。
血清总胆固醇测定操作规程
血清总胆固醇测定操作规程 A1．2 原理 血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(T rinder反应)。醌亚胺的最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。反应式如下： 胆固醇酯+H2O CEH 胆固醇+游离脂肪酸 胆固醇+02 CHOD △4-胆甾烯酮十H202 2H202+4－氨基安替比林+酚 POD 昆亚胺+4H2O A1．3 标本采集与处理 对于血脂分析，特别需要强调“分析前”各个环节的质量管理。 A1．3．1 受检者(体检对象或病人)的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样。对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。对体检对象及做前瞻性观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24h内不作剧烈运动。 A1．3．2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响血脂水平。例如站立5 min可使血脂浓度提高5％，15 min提高16％，故在采血前至少应***5min。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1 min，穿刺成功后立即松开止血带。静脉阻滞5min可使甘油三酯增高10％～15％。 A1. 3．3 抗凝剂：我国多用血清作血脂检验。如用血浆，多主张用EDTANa 2(1mg／mL)抗凝。抗凝血浆中的总胆固醇和甘油三酯水平比血清中约低3％，ED TA用量越多，血浆水平偏低越明显。但肝素抗凝不影响血浆中水平。 A1．3．4 标本处理：血标本应尽快送实验室。室温下放置30min～45min后离心分离血清或血浆，置洁净试管加盖保存。在室温中放置不超过3 h，4C保存可稳定4天。置-70'C可长期保存，但不可反复冻融。 A1．4 试剂 A1．4. 1 酶试剂：本科使用XX公司XX产品号试剂盒，为干粉试剂。临用前用水复溶即可使用。每瓶干粉用水XX ml复溶。复溶后试剂内各主要成分如下：磷酸盐缓冲液pH7.7 0．4mol/L 假单胞菌胆固醇酯水解酶≥800 U/L 奴卡氏菌胆固醇氧化酶≥400U/L 辣根过氧化物酶≥1000U/L 胆酸钠 3mmol/L 4—氨基安替比林 0.5mmol/L 酚 3.5mmol/L 聚氧乙烯表面活性剂 3g/L