奶粉中蛋白质含量测定

奶粉中蛋白质含量测定报告

朱文轩B09070116

前言：在许多蛋白质研究的领域中，用一种快速准确的方法来检测蛋白浓度是必不可少的。一种新建立的考马斯亮蓝法在许多实验中已成为首选方法用来定量的检测蛋白浓度。与传统的Lowry法相比，该法更易操作，更快，更灵敏，此外，它受其他一些试剂和非蛋白成分干扰也较小。该考马斯亮蓝法其检测原理是基于染料考马斯蓝G250和蛋白质之间形成的特异性结合。详细的研究表明[1]，该染料可以自由存在于四种不同的离子形式中。相比之下，染料更多的阴离子形式与蛋白质结合且结合后显蓝色，在590 nm左右具有最大吸收。因此通过定量测定染料的蓝色离子的量就可以算出蛋白质的量，这通常可以在595 nm处测定吸光度获得。

实验部分：

实验流程图：

前期原料配备

标准曲线绘制

样品测定

实验过程：1、称取奶粉样品，配制成5mg/ml的溶液。取0.3ml 该溶液于试管，再加入0.7ml去离子水，9ml考马斯亮蓝G-250，配制成奶粉含量为150μg/ml的样品溶液。

2、配制的标准牛血清蛋白（BSA）溶液为0.4mg/ml,选用五个点绘制标准曲线，五点BSA溶液体积分别为0.1，0.2，0.4，0.6，0.8ml，相应的加入9ml考马斯亮蓝G-250，和水，每份配制成体积为10ml 的溶液，即每份含BSA量为40，80，160，240，320μg。浓度为4，8，16，24，32μg/ml。配制两组相同的分别为A1组和A2组。表格如下：

0 1 2 3 4 5

0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8

标准牛血清蛋白

（BSA）/ml

去离子水/ml 1 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2

考马斯亮蓝

9 9 9 9 9 9

G-250/ml

3、做紫外分光光度测试，得每份试剂蛋白质-色素结合物在595nm波长下的最大光吸收A。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

4、根据所测数据通过作图得直线A=aC+d(A为蛋白质-色素结合物在595nm波长下的最大光吸收,C为溶液浓度)。再对样品做紫外分光光度测试，得其最大光吸收A'，则样品中蛋白质浓度为C'=（A'－d）/a。固样品蛋白质含量计算公式为10C'/1500×100%。

主要试剂和仪器：

考马斯亮蓝G-250，去离子水，标准牛血清蛋白（BSA ）移液管20ml 两支，50ml 一支，紫外分光光度仪，15个25ml 比色管，石英比色皿一对。实验结果与数据分析：

每份试剂蛋白质-色素结合物在595nm 波长下的最大光吸收A ，表格如下：

样品中蛋白质-色素结合物在595nm 波长下的最大光吸收A'，表格如下： 1 2 3 平均 A'/

L ·g-1·cm-1

0.380

0.451

0.457

0.429

数据处理得标准曲线：

2 3 4 5 A1/ L ·g-1·cm-1 0.092 0.169 0.340 0.688 0.839 A2/ L ·g-1·cm-1 0.083 0.208

0.317

0.613

0.836

平均

0.0875 0.1885 0.3285 0.6505 0.8375

根据公式C'=（A'－d）/a得C'=17.175μg/ml

根据公式10C'/1500×100%得样品蛋白质含量为11.46%。

参考文献：

［1］Zuo,S.-S.and Lundahl,P.A micro-Bradford membrane pro-

tein assay[J].Analyt.Biochem,2005,284:162-164.

[2]宁正祥.食品成分分析手册[M].北京:中国轻工业出版

社, 1997: 72-81.

[3]许家喜.蛋白质的检测方法与乳制品中蛋白含量测定

[J].大学化学, 2009, 24(1): 66-69

实验设计总结：1、由于移液管操作的不熟练，造成配制溶液时出现一些偏差，标准曲线中有个点误差太大，曲线拟合度做得不是很好。要多练习移液操作。

2、蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，

完成反应十分迅速。但其结合物在室温下只能1h内保持稳定。

3、经过此次实验，对紫外分光光度仪使用更加熟练。

4、误差分析：（1）比色管没洗干净，有残留水和乙醇

（2）移液操作出现误差

（3）做平行实验时取液不准确

(整理)6种方法测定蛋白质含量.

6种方法测定蛋白质含量一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： NH2CH2COOH+3H2SO4――2CO2+3SO2+4H2O+NH3(1) 2NH3+H2SO4――(NH4)2 SO4(2) (NH4)2 SO4+2NaOH――2H2O+Na2SO4+2NH3(3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。二、双缩脲法（biuret法）（一）实验原理双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。（二）试剂与器材 1.试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05NaOH配制。（2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4?5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6?4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。 2.器材：可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。（三）操作方法 1.标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20～25℃）下放置30分

奶粉中蛋白质含量测定方法的改进

Q u a l i t y C o n t r o l□质量安全使用说明。该文件是针对作用对象、适应症和剂量的。必须小心地按照剂量、治疗频率、治疗期和治疗途径使用。只要有一个参数被改变，如果没有预先咨询兽医的话，就不可能正确地应用停药期。兽医可以根据“层叠”法则，在标准停药期的基础上，重新固定一个新的停药期（对于重复用药的情况），并能够科学地维持这个新选择，以保证动物源食品不含有抗生素残留。在任何情况下，兽医都得负起责任。遵守治疗途径对于保证抗生素的良好扩散和控制残留风险是十分重要的。抗生素标签外的使用（也就是说修改了权威机构提供的使用条件）只有在例外的情况下才能发生。实际上，例外的情况应该仅限于所谓的“罕见“微生物（这表示市场有限，实验室不会去为此开发一个专门的方案）和零星的使用说明（因为有些感染的发生几率很小，所以不是整个范围的抗菌谱都被测试过，这造成了相关的官方使用说明的缺失）。在任何情况下，标签外的使用都必须符合 “层叠”决策树，使用决策树时要按照时间顺序排列所描述的步骤。在欧洲，使用的物质必须是记载在2377/90 （MRL）法规的附录I、II、III中的，并且必须遵守标准的停药期（对牛奶和鸡蛋至少7天，对肉而言至少28天）。在这方面尤其要注意不要偏离规定的停药期，否则对于风险预防可能是有害的。处方单会列出相关药品并告知农场主施用方法，而且会修改停药期，在修正过的停药期内，动物源的食品都不能上市。处方以处方单的形式开出，必须要跟养殖人员解释清楚，以保证遵守治疗方法和停药期。另外，可追踪性也是一个关键因素，很多国家规定农场主必须保留处方，如在法国，养殖户需保留处方5年，兽医需保留处方10年。 6.3 农场记录：监控药物使用的关键要素在大多数国家，农场主和兽医都必须在农场记录簿上记录他们对动物的处置。起初这一要求被看作是一种束缚，但现在正逐渐成为许多农场主和兽医们的一个不可替代的牧群健康指标。符合法规要求的记录要包含农场主的预先评估和兽医的医学评估。治疗方案的实施、警示限值的定义和必要的跟踪查访都要基于上述记录。显然数据的电脑化可以使分析变得更简单，相关性和精确性也会更好。■ 蛋白质是乳及乳制品中的主要成分，它对乳制品的理化特性有着重要的影响。测定蛋白质的方法很多，目前最基本和最常用的方法是先测定总氮量，再乘以不同食品的蛋白质系数，即为食品中蛋白质的含量。目前，国家标准的测定总氮量的方法仍采用凯氏定氮法。该方法数值准确性和重现性较好，但检验步骤繁琐，费时较长，不适合企业现场实时监测。因此，一些仪器公司开发出凯氏定氮仪测定蛋白质含量，由于仪器测定时称样量少，消化速度较传统方法大大提高，特别是仪器蒸馏时产生的蒸汽量大，蒸馏速度也较传统方法快很多，并且仪器检测得出的数据和传统方法偏差不大。因此，很多企业，甚至是一些检验监督机构也都采用凯氏定氮仪测定蛋白质含量。但由于定氮仪比较昂贵（进口设备大约需要16 万～20万元），一般小企业无法承受，而传统方法又由于费时较长，不利于生产过程的监控。因此，如何找到一种既省时又经济适用，且数据准奶粉中蛋白质含量测定方法的改进 ■ 徐亚麦刘鑫黑龙江龙丹乳业科技股份有限公司【摘要】在蛋白质含量的测定中，通过将传统方法与现代仪器方法有效结合，大大节省了检测时间，节约了检验试剂。该方法和传统方法相比，测定结果的精确性和重现性较好，实验结果比较稳定，适用于乳品企业快速监控产品蛋白质指标。关键词：蛋白质；测定原理；测定方法 59 2010.1

蛋白质含量测定(凯氏定氮法)资料

食品中蛋白质含量测定（凯氏定氮法）一、目的与要求 1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理。 2、掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。二、实验原理蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。三、仪器与试剂硫酸铜（CuSO4·5H20）硫酸钾硫酸（密度为1.8419g/L）硼酸溶液（20g/L）氢氧化钠溶液（400g/L）0.01mol/L盐酸标准滴定溶液。混合指示试剂：0.1%甲基红乙溶液液1份，与0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合。微量定氮蒸馏装置：如图3-所示。图3-微量凯氏定氮装置 1、电炉； 2、水蒸气发生器（2L平底烧瓶）； 3、螺旋夹a； 4、小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处）； 5、反应室； 6、反应室外层； 7、橡皮管及螺旋夹b；8、冷凝管；9、蒸馏液接收瓶。四、实验步骤 1、样品消化称取样品约2.00g（±0.001g），移入干燥的100mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾，稍摇匀后瓶口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以450角斜支于有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。试剂空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。

6种方法测定蛋白质含量

6种方法测定蛋白质含量 [ 文章来源： | 文章作者： | 发布时间：2006-12-25| 字体： [大中小] 一、微量凯氏（kjeldahl ）定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： nh 2ch 2cooh+3h 2so 4——2co 2+3so 2+4h 2o+nh 3 (1) 2nh 3+h 2so 4——(nh 4)2so 4 (2) (nh 4)2so 4+2naoh ——2h 2o+na 2so 4+2nh 3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。二、双缩脲法（biuret 法）（一）实验原理双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg 蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris 缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。（二）试剂与器材

几种测蛋白含量方法的比较

蛋白质含量测定方法的比较及肽含量的测定（一）蛋白质测定方法的比较（原理、优缺点）蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲法、福林酚法（Lowry 法）和紫外吸收法、考马斯亮蓝法。其中考马斯亮蓝和福林酚法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20 倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。定氮法较复杂，但准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。在选择方法时应该考虑：（1）实验测定要求的灵敏度和精确度；（2）蛋白质的性质；（3）溶液中存在的干扰物质；（4）测定花费时间。蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲法、福林酚法（Lowry 法）和紫外吸收法、考马斯亮蓝法。其中考马斯亮蓝和福林酚法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20 倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。定氮法较复杂，但准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。在选择方法时应该考虑：（1）实验测定要求的灵敏度和精确度；（2）蛋白质的性质；（3）溶液中存在的干扰物质；（4）测定花费时间。 1 微量凯氏定氮法（GB 5009.5-2010） 1.1原理样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。 1.2操作方法样品经前处理、炭化、消化、蒸馏、滴定等主要步骤 1.3特点准确度较高，适用于0.2~ I.Omg氮，误差为土2%;操作复杂费时，整个过程需要耗时8~10h,试剂消耗量大。，测得结果为总氮含量，包括蛋白氮和非蛋白氮含量;适用范围广，几乎所有样品均可用此方法。 2双缩脲比色法

奶粉中的主要成分讲解

1.母乳与牛奶中乳清蛋白的比例？奶类中的蛋白质主要是由乳清蛋白和酪蛋白组成，乳清较容易被消化，母乳中的70%乳清蛋白，30%酪蛋白；牛奶中含20%乳清蛋白，80%酪蛋白。 2.a-乳清蛋白的作用？（1）提高蛋白质的生物利用度，从而降低蛋白质的总量，有效降低宝宝肾脏的负担。更容易让宝宝消化吸收。（2）抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化，有免疫刺激作用从而提高免疫力。（3）含有丰富的色氨酸（快乐因子），有助于促进宝宝的神经发育，调节睡眠情绪，增进食欲。（4）可以在宝宝体内转化成牛磺酸，保证视力、心脏、大脑的正常发育，并有抗疲劳作用。（5）是唯一能结合钙的乳蛋白成分，可紧密结合2个ca2＋,有利于骨骼发育和维持骨骼健康。（6）婴儿期重要的器官及神经系统的发育都是在高质量的睡眠中完成的。缺少α-乳清蛋白的摄入可能影响宝宝的睡眠质量，宝宝睡眠不好可能会使宝宝烦躁哭闹、消化吸收减弱奶量降低、生长发育迟缓。 3.牛磺酸牛磺酸又称牛胆酸最初是从雄牛的胆汁中发现的，是一种非蛋白质氨基酸是婴幼儿生长发育的必需氨基酸。牛磺酸对促进大脑生长发育,增强机体免疫能力；对心血管系统有较强的保护作用，有增强心肌细胞功能等作用；可以促进脂肪乳化和视网膜的发育，帮助神经传导和视觉机能的完善。成人可以通过肝合成牛磺酸，由于婴幼儿的身体内酶类的合成的系统还没有完全发育好，还不能通过自身合成，婴幼儿体内所需要的牛磺酸只能依靠食物来提供。各种食物中包含的牛磺酸的数量也是不一样的，一般说来，植物性的食物中是不会包含牛磺酸的，动物性的食物中含有的牛磺酸却是相当的丰富，比如平均每一百克的食物中含有的牛磺酸的数量是这样的：牛奶四毫克，人初乳七十毫克，人成熟乳五十四毫克，猪肉五十毫克，牛肉三十六毫克，羊肉四十七毫克以及鸡肉三十四毫克等。母乳中含有的牛磺酸要比牛奶中多十几倍，人的初乳中的牛磺酸的含量要比成熟乳来的更加的多，母乳是婴儿体内牛磺酸的主要来源，牛乳、鸡蛋等食品中几乎不含牛磺酸。所以喂养的时候建议尽量母乳喂养，在母乳不足的情况下，要给宝宝适量添加婴幼儿配方奶粉。以保证体内各种营养素的供给。 4.OPO结构脂 OPO目前是一种比较珍贵的成份，它的结构与母乳中脂肪非常相近，因此放在奶粉里更亲和人体，促进宝宝营养的吸收。（1）帮助DHA、AA的有效利用，促进智力发育，使宝宝头脑更聪明；（2）与可溶性膳食纤维组合，帮助增加肠道双歧杆菌的数量，改善胃肠道，激活免疫细胞，降低胃肠道疾病发生率；

实验七蛋白质含量的测定

实验七蛋白质含量的测定衡量食品的营养成分时，要测定蛋白质含量，但由于蛋白质组成及其性质的复杂性，在食品分析中，通常用食品的总氮量表示，蛋白质是食品含氮物质的主要形式，每一蛋白质都有其恒定的含氮量，用实验方法求得某样品中的含氮量后，通过一定的换算系数。即可计算该样品的蛋白质含量。一般食品蛋白质含氮量为l0％如肉、蛋、豌豆、玉米等，其换算系数为6.25，小麦取5.70，大米5.95、乳制品6.38、大豆5.17，动物胶5.55。一、目的与要求：掌握微量凯氏法测定蛋白质总氮量的原理及操作技术。包括样品的消化，蒸馏吸收及滴定与含氮量的计算。二、原理：凯氏定氮法：食品经加硫酸消化使蛋白质分解，其中氮素与硫酸化合成硫酸铵。然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收后，再用盐酸或硫酸滴定根据盐酸消耗量，再乘以一定的数值即为蛋白含量，其化学反应式如下。 ( 1 ) 2NH2(CH2)2COOH+13H2S04(NH4)2S04+6C02+12S02+ 16H2 (2)(NH4)2SO4+2NAOH-----2NH2+2H2O+NA2SO4 (3)2NH3+4H3BO3----(NH4)2B4O7+5H2O (4) (NH4)2B407+H2S04+5H20-(NH4)9SO4+4H2BO2 三、试剂与仪器： 1、硫酸钾 2、硫酸铜 3、硫酸 4、2％硼酸溶液 5、40％氢氧化钠溶液 6、混合指示剂：把溶解于95％乙醇的0.l％溴甲酚绿溶液10毫升和溶于95％乙醇的0.l％甲基红溶液2毫升混合而成． 7、0.OINHCL标准溶液或0．01N硫酸标准溶液． 8、凯氏微量定氮仪一套。 9、定氮瓶100m1或50ml一只。

蛋白质测定实验报告

蛋白质测定方法——化学报告

蛋白质的检测酚试剂法灵敏度较高 20~250mg 费时蛋白质在碱性溶液中其肽键与 Cu2+螯合，形成蛋白质一铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物酚类、柠檬酸、硫酸铵、 tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用由上表可大致了解五种检测蛋白质的方法，下面以实验的形式进行详细阐述：

1 材料与方法 1.1 仪器材料 (1)仪器:凯氏定氮仪、紫外分光光度计、可见光分光光度计、工作离心机、布氏漏斗、抽滤泵。 (2)试剂及原材料:牛奶、酸奶、豆浆、0.12mol/LpH=4. 7醋酸- 醋酸钠缓冲液、乙醇-乙醚等体积混合液、浓H2SO4 、40%氢氧化钠、30%过氧化氢、2%硼酸溶液、0. 050molPL标准盐酸溶液、硫酸钾- 硫酸铜接触剂、混合指示剂、标准蛋白溶液、双缩脲试剂、考马斯亮蓝G- 250试剂。 1.2 实验方法 (1)凯氏定氮法测定蛋白质含量将待测样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨(消化) ,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。为了加速消化,可以加入CuSO4 作催化剂和加入K2SO4 以提高溶液的沸点,而加入30%过氧化氢有利于消化溶液的澄清。消化好的样品在凯氏定氮仪内经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至定量硼酸溶液中,然后用标准盐酸溶液进行滴定,记录,计算出样品含氮量。每个样品做三次重复测定,取平均值。 (2)紫外吸收法测定蛋白质含量蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质,吸收峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。此外,蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用。低浓度的盐,例如, 生化制备中常用的(NH4)2SO4 等和大多数缓冲液不干扰测定,特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测,因为此时只需测定蛋白质浓度的变化,而不需知道其绝对值。此法的特点是测定蛋白质含量的准确度较差,干扰物质较多,在用标准曲线法测定蛋白质含量时,对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质有一定的误差,故该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质,会出现较大的干扰。核酸的干扰可以通过查校正表,再进行计算的方法加以适当的校正。但是因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不相同的,虽然经过校正,测定的结果还是存在一定的误差。此外,进行紫外吸收法测定时,由于蛋白质吸收高峰常因pH的改变而有变化,因此要注意溶液的pH值,测定样品时的pH要与测定标准曲线的pH相一致。取待测样品制成蛋白浓度大约在0. 1～1. 0mgPmL的蛋白质溶液,用紫外分光光度计进行比色,对照标准曲线得出样品含氮量。每个样品做3次重复测定,取平均值。 (3)双缩脲法测定蛋白质含量

蛋白质含量测定方法及其比较资料2

蛋白质含量测定法（一）蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩脲法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。五种蛋白质测定方法比较

值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： NH2CH2COOH+3H2SO4——2CO2+3SO2+4H2O+NH3 (1) 2NH3+H2SO4——(NH4)2SO4 (2) (NH4)2SO4+2NaOH——2H2O+Na2SO4+2NH3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。二、双缩脲法（Biuret法）（一）实验原理双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。（二）试剂与器材

蛋白质含量测定方法汇总

实验七蛋白质含量测定测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有染料法，双缩脲(Biuret)法，酚试剂法(Lowry)法及紫外吸收法。 [目的要求] 1．掌握测定蛋白质的含量基本方法。 2．了解染料法、双缩脲法、Lowry法和紫外吸收法测定原理。一、染料法 [实验原理] 在酸性溶液中染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合，此时考马斯亮蓝G-250颜色从红色变为蓝色，吸收高峰从460nm移至595nm。利用这个原理可以测定蛋白质含量。该法近年在某些方面有取代经典的Lowry法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。本法的缺点是：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。 [器材] 吸量管；试管；721型分光光度计 [试剂] 1.标准牛血清白蛋白溶液：配成0.1mg/ml的溶液。 2.待测蛋白质溶液。 3.染料溶液：称取考马斯亮蓝G-250 0.1g溶于95%的酒精50ml，再加入85%的浓磷酸100ml，用水稀释至1000ml,混匀备用。

[操作步骤] 1．标准曲线的绘制：按上表分别向各支试管内加入各种试剂，充分混匀，5min后在595nm波长处以0号管调零,测定各管吸光度值（A）。以吸光度值为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。 2．样品测定：取1ml样品溶液（约含25～250微克蛋白质），加入染料溶液5ml混匀，5min后测定其595nm吸光度值，对照标准曲线求得蛋白质浓度。二、双缩脲(Biuret)法测定蛋白质含量 [实验原理] 在碱性溶液中，双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO-NH2)，或与此相似的基团[如—CH2-NH2，—CS-NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。蛋白质分子含有众多肽键(—CO-NH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量

奶粉中蛋白质含量实验方法

【摘要】目的尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分不测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白质的含量。结果待测溶液中蛋白质浓度在0～250 μg/ml 范围内标准曲线呈线性关系，其回归方程为：Y=301.12X-73.42，相关系数r=0.998，平均回收率为100.2%。结论结合三氯乙酸沉淀的BCA法适用于奶粉中蛋白质的快速检验和掺伪检验。

【关键词】奶粉；蛋白质；BCA法；三氯乙酸；三聚氰胺 A rapid and simple method of protein determination in powdered milk Zhang Zhiqiao, Shen Guodong, Wang Gang First Middle School of Hefei, Anhui Provincial Hospital Affiliated to Anhui Medical University, Hefei 230001 ［Abstract］Objective To explore a rapid and simple method of protein determination in powdered milk without other nitrogen-containing compound disturbance in Kjeldahl determination.Methods Conjugated with protein precipitation with trichloroacetic acid, BCA (bicinchoninic acid) method was used. According to the positive relationship of protein content with the 570 nm absorbance, protein content was calculated in powdered milk.Results Protein content in milk solution showed a good linear relationship at the detection ranges of 0-250 μg/ml, with regression equation: Y=301.12X-73.42 and related coefficient: 0.998, and the average recovery rate was 100.2%.Conclusion BCA method conjugated with trichloroacetic acid is adaptable to the rapid and

蛋白质浓度的测定

蛋白质浓度的测定一．紫外吸收法 1. 近紫外吸收光谱法（280 nm）原理：蛋白质中含有色氨酸与酪氨酸残基，这两种氨基酸残基具有吸收紫外光的性质，它们的紫外光吸收谱峰值在280 nm附近。某些蛋白质含有二硫键，也会在280 nm附近吸收紫外光。近紫外吸收法就是根据这个性质，对蛋白质进行定量。因为不同的蛋白质中所含有的色氨酸与酪氨酸的数量存在很大的差异，所以蛋白质在280 nm处的吸光度A280也存在非常大的差异。比如，当蛋白质浓度为1 mg/ml时，吸光度A280可为0-4之间的任何值。但是，大部分的蛋白质的吸光度A280时0.5-1.5之间的某个值。该方法测定蛋白质的浓度具有明显的优缺点。这种方法操作简单，测定完成后，样品可以被回收，对buffer没有特殊要求，这是该方法的优点。该方法的缺点是：其他的生色基团会影响蛋白质吸收光谱的测定，比如核酸在该波长的紫外吸收能力非常强，少量的核酸就会对蛋白质吸光值的测定造成很大的干扰。同时，不同的蛋白质的消光系数需要在实验前确定。蛋白质浓度的计算：朗伯比尔定律：A(absorbance) = ε c l，因此：c（mg/ml）= A/ε l (cm)。消光系数：当蛋白质浓度为1 mg/ml，光径为1 cm时，所测得的吸收值为该蛋白质的消光系数。蛋白质的消光系数计算公式：A280 (1 mg/mL) = (5690n w + 1280n y + 120n c)/M。其

中M为蛋白质分子质量，5690、1280与120分别是色氨酸、酪氨酸与半胱氨酸的消光系数，n是该氨基酸残基的数目。 2. 远紫外吸收光谱法在190-210 nm范围内，蛋白质中的肽键具有非常强的吸收紫外光的能力。此波长范围内，肽键在190 nm处的吸收值是其在205 nm的2倍，而且在190 nm，氧气对紫外光的吸收非常强，因此，通常取205 nm处的吸收值对蛋白质进行定量。对于1 mg/ml的蛋白质溶液，它们的消光系数通常在30-35之间。对于不同的蛋白质，其消光系数差别很小。该方法的优点是操作简单，灵敏度高，样品可以回收。缺点：在使用前，必须对分光光度计进行准确校正，多种buffer，heme or pyridoxal groups在该波长具有很强的吸收紫外光的能力。测定： 1.用生理盐水溶解蛋白质样品，确保其在215 nm处的吸收值小于1.5。 2.磷酸钾buffer不影响吸收值的测定。 3.计算公式：A2051 mg/mL = 27 + 120 (A280/A205) 或Protein concentration (μg/mL) = 144 (A215– A225)。 Notes: 1.使用这两个方法进行蛋白质定量时，最佳的吸收值范围为0.05-1，当吸收值为0.3时，测定的结果最精确。 2.如果样品浑浊，可以扣除310 nm处的吸收值。

几种蛋白质含量测定方法的比较

几种蛋白质含量测定方法的比较【摘要】：蛋白质含量测定方法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析之一。目前常用的方法有凯氏定氮法、双缩脲法(Biuret)、紫外吸收法、考马斯亮蓝法（Bradford），Folin —酚试剂法（Lowry）杜马斯燃烧法。其中Bradford 法灵敏度颇高，比紫外吸收法灵敏10～20 倍,比Biuret法灵敏100 倍以上。凯氏定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。过去Folin—酚试剂法法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以在本公司订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。测定农产品中全氮的凯氏定氮法在许多国家已被杜马斯然烧定氮法所代替，杜马斯燃烧法是基于在高温下(大约 900 ℃），通过控制进氧量、氧化消解样品的原理而进行氮测定的。这6种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，每种方法都有其优缺点，在选择方法时应考虑：⑴实验对测定所要求的灵敏度和精确度；⑵蛋白质的性质；⑶溶液中存在的干扰物质；⑷测定所要花费的时间【关键词】：凯氏定氮法双缩脲法紫外吸收法考马斯亮蓝法 Folin—酚试剂法杜马斯燃烧法一、凯氏定氮法 1.1原理凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸收和滴定4 个过程。其原理是样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化，含氮有机物分解产生氨,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。然后加碱蒸馏放出氨, 氨用过量的硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。 1.2特点凯氏定氮法是目前分析有机化合物含氮量常用的方法，是测定试样中总有机氮最准确和最简单的方法之一，被国际国内作为法定的标准检验方法。凯氏定氮法样品的最佳消化条件为硫酸铜2.50 g, 硫酸钾0.10 g,浓硫酸4.00 mL；硫酸铜的用量为影响消化时间的主要因素,硫酸钾和浓硫酸用量为第二和第三主要因素；用此最佳条件做实验, 消化时间仅为12 min；与其他硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸用量方法对比,该法所需消化时间最短,试剂用量减少,可降低实验成本,也降低了对环境的污染。凯氏定氮法适用范围广泛，测定结果准确,重现性好，但操作复杂费时,试剂消耗量大。若采用模块式消化炉代替传统的消化装置, 可同时测定几份样品，节省时间,提高了工作效率，适用于批量蛋白质的测定,具有准确、快速、简便、低耗、稳定的优点。二、双缩脲法(Biuret ) 2.1原理双缩脲(NH3CONHCONH3)是两个分子脲经180 ℃左右加热,放出1 个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4 形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能够以1 个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。

食物中蛋白质含量的测定

一、实验摘要：蛋白质是含一定量氮的有机化合物。其测定方法也有很多种。不同的方法都有其优点和缺点，以及它们的适用范围不同。紫外吸收法（方便快捷，0.2-2mg/ml）凯氏定氮法（粗蛋白测定，0.2 – 2.0mg /ml) 双缩脲法（1-10mg /ml) 福林酚法（0.005-0.10mg /ml) G250 （0.025-0.20mg /ml) （考马氏亮蓝法） BCA法（0.010-1.2mg/ml；0.0005-0.001mg/ml）此次实验采用牛奶样品在凯氏烧瓶中经浓硫酸和催化剂消化后，使蛋白质分解，产成的氨与硫酸结合生成硫酸铵，再在强碱条件下蒸馏出氨，并用硼酸吸收，以标准盐酸滴定，根据标准酸消耗的量，乘以一定系数，即可计算样品中蛋白质的含量。此次实验中使用的是乳制品，系数F=6.38.这种测定方法即为凯氏定氮法。因为食品中除蛋白质外，还含有其他含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白质。此次实验后，我们组的最终得率为2.77%。二、实验目的： 1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理 2、掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理，蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等 3、侧面了解测定食品中蛋白质含量的多种方法和优劣三、基本原理：利用浓硫酸及催化剂与食品试样一同加热消化，使蛋白质分解，其中C、H 形成CO 2、H 2 O逸出，而氮以氨的形式与硫酸作用，形成硫酸铵留在酸液中。然后将消化液用NaOH碱化，蒸馏，使氨游离，用水蒸气蒸出，被硼酸吸收。用标准盐酸溶液滴定所生成的硼酸铵，从消耗的盐酸标准液计算出总氮量，再折算为粗蛋白含量。 1.有机物中的氮在强热和CuSO4，浓H2SO4作用下，消化生成（NH4）2SO4 反应式为：H2SO4==SO2↑+ H2O +[O] R-CH2-COOH+[O]==R-CO-COOH+ NH3↑

大米中蛋白质含量的测定

目的意义：水稻是重要的粮食作物之一，其品质优劣是值得人们重视的问题。一个高产水稻品种，往往由于食味差、或营养不丰富，而不受大众的欢迎。因此，在保证高产的同时，还要改善稻米的品质。本实验将测定大米品质的几个重要生化指标，为水稻育种提供理论依据。 Ⅰ大米蛋白质含量的测定——考马斯亮兰G—250法一、原理考马斯亮G—250是一种染料，在游离状态下呈红色，在465nm波长处有最大光吸收。它能与蛋白质稳定结合，结合蛋白质后变为青色，在595nm处有最大吸收，在一定蛋白质浓度范围内（0～1000μg/ml），蛋白质—色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。该法反应迅速，蛋白质与考马斯亮兰G—250的结合反应能在2分钟内达到平衡。结合物在室温下1小时内保持稳定，反应非常灵敏，可测出微克级蛋白质含量，是最近新发展起来的一种较理想的蛋白质定量法。二、实验材料、仪器及试剂 1．仪器： 721型分光光度计离心机50ml容量瓶10ml刻度试管研钵量筒移液管 2．试剂：（1）牛血清白蛋白（1000μg/ml）：称取100.00mg牛血清白蛋白，溶于100ml蒸馏水中，配制成标准蛋白质溶液。（2）考马斯亮兰G-250溶液：称取100ml考马斯亮兰G—250，溶于50ml 90%乙醇中，加入85%（W/V）的磷酸100ml，最后用蒸馏水定容到1000ml，过滤，常温下可放置1个月。（3）0.1mol/LnaOH：称取4g氢氧化纳，用蒸馏水溶解，并定容至1000ml。 3．材料：大米粉三、实验方法 1．标准曲线的制作：取6只10ml刻度试管，编号，按下表数据配制牛血清白蛋白标准溶液。准确吸取上述各管溶液0.1ml，对应放于另外6支10ml刻度试管中，加入5ml考马斯亮兰G-250溶液，盖塞，将试管中溶液给向倒转混合，放置2分钟后，用10mm光径的比色杯在595nm波长下比色。以光密度值为纵坐标，以蛋白质浓度值为横坐标，制作出标准曲线。 2．样品中蛋白质提取：（1）准确称取稻米粉0.5克，放入研钵中，加2ml0.1mol/L NaOH，研磨成匀浆，转入到10ml离心管中，再用6ml 0.1mol/ L NaOH分三次洗涤研钵，洗液一并转入10ml离心管中，

蛋白质含量测定方法

蛋白质含量测定院系名称食品与生物工程学院学生姓名孙洪磊学号200606021064 专业班级生工06 - 2 指导教师马美范二○○九年四月一日

蛋白质含量测定方法比较蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。一、双缩脲法（Biuret法）（一）实验原理双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。（二）试剂与器材 1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH配制。（2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4?5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6?4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需重新配制。 2. 器材：可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。（三）操作方法 1. 标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20~25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。 2、样品的测定：取2~3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。二、Folin—酚试剂法（Lowry法）（一）实验原理

测定奶粉中蛋白质的真实含量

凯氏定氮法测奶粉中真实蛋白质的含量摘要实验用凯氏定氮法测定奶粉中的蛋白质含量，将硫酸及催化剂与奶粉一同加热消化，使蛋白质分解，其中C、H形成CO2、H2O逸出，而氮以氨的形式与硫酸作用，形成硫酸铵留在酸液中。然后将消化液碱化，蒸馏，使氨游离，用水蒸气蒸出，被硼酸吸收。用标准盐酸溶液滴定所生成的硼酸铵，消耗的盐酸标准液计算出总氮量，再折算为粗蛋白含量。关键词: 凯氏定氮法蛋白质消化蒸馏 1前言：劣质奶粉的出现严重地损害了人民群众的健康,劣质奶粉的主要特点是蛋白质含量远低于正常值。正是利用氮与蛋白质含量间的关系，实验室测定蛋白质的非直接性，一些不法人士钻了蛋白质中氮的含量。他们利用三聚氰胺含有很高的氮，将三聚氰胺残掺杂近奶粉中以提高奶粉的蛋白质含量。而长期饮用这些蛋白质含量极低的奶粉，首先会导致婴儿严重营养不良，随后会引起各种并发症，在外来细菌的侵袭之下，婴儿几乎完全丧失了自身的免疫能力，病情发展十分迅速，最后婴儿头部严重水肿，几乎看不清五官，全身皮肤也出现了大面积的高度溃烂，伤口长时间无法愈合，最后导致呼吸衰竭而死亡。因此，测定奶粉中蛋白质含量，对掌握其营养价值和品质的变化，保障人体的健康，合理配料，为乳制品深加工提供数据十分重要，此外，蛋白质分解产物对乳制品的色、香、味都有一定的作用，所以测定具有深远意义。 2实验目的（1）学习凯氏定氮法的测定蛋白质的原理；（2）掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量的计算等。 3实验原理各种天然有机物的含氮量通常用微量凯氏定氮法（micro-Kjeldahl method）来测定。当有机含氮化合物与浓硫酸共热消化，氮转化为氨，氨与硫酸结合成硫酸铵。消化产生

食品中蛋白质的含量测定

蛋白质的测定方法测定食品中的蛋白质含量有二种方法，一是凯氏微量法，二是自动定氮分析法。一．凯氏微量法有手工滴定定氮和自动定氮仪定氮，实验者可根据经济条件设备而定。 1.原理蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用过量硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。 2NH2（CH2）2COOH+13H2SO4 （NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2O （NH4）2SO4+2NaOH 2NH3+2H2O+Na2SO4 2.方法本法参照GB 5009.5 -85 适用于各类食品及饲料中蛋白质的测定 3.试剂所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。试剂均为分析纯。 3.1硫酸铜 3.2硫酸钾 3.3浓硫酸 3.4 2%硼酸溶液（或1%的硼酸） 3.5 混合指示剂：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2 份0.1%甲基红乙醇溶与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。 3.6饱和氢氧化钠：500g氢氧化钠加入500ml水中，搅拌溶解，冷却后放置数日，澄清后使用。 3.7 0.01mol/L或0.05mol/L盐酸标准溶液：需标定后使用(配制及标定方法见附录) 4.仪器消化炉凯氏定氮蒸馏装置万分之一电子天平凯氏定氮蒸馏装置：如图所示 5. 操作步骤 5.1样品处理：精密称取0.1~2.0g固体样品或2~5g半固体样品或吸取液体样品5~20ml，放入100ml 或500ml凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜，0.3g硫酸钾及3~20ml浓硫酸，放置过夜后小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，取下放冷后用约2～10ml蒸馏水冲洗瓶壁，混匀后继续加热至液体呈蓝绿透明，取下放冷，小心加10~20ml水混匀，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白实验。