植物细胞工程实验报告

植物细胞工程

实验报告

学院：农学院

班级： 07生物技术（2）班

姓名：袁峰

学号： B0704091

时间： 2009年11月

指导老师：莫庭辉老师

目录

实验一、培养基母液的配制

实验二、培养基的配制与灭菌

实验三、香蕉吸芽的组织培养

实验四、烟草叶片的消毒、接种和培养

实验五、柱花草外植体的消毒、接种和培养实验六、木薯外植体的消毒、接种和培养实验七、桉树外植体的消毒、接种和培养实验八、玉米不成熟胚的消毒、接种和培养实验九、花生成熟胚的消毒、接种和培养实验十、水稻盾片的消毒、接种和培养

实验十一、洋葱的组织培养（自选实验）

植物细胞工程实验

一、实验目的

1、了解植物组织培养技术的基本原理。

2、掌握植物材料灭菌、接种和培养。

3、学习培养基的配制与灭菌。

二、实验原理

根据植物细胞具有全能性的特点，在人工的控制条件下，将植物的任何器官、组织或细胞，放在人工合成的培养基中进行培养，使其生长、分化并形成完整植株。

实验一、培养基母液的配制

一、实验目的

掌握培养基母液的配制。在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。

二、实验试剂与仪器设备

1、药品试剂：

母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。

2、仪器设备：

电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。

三、实验内容

（一）母液的配制

1、大量元素母液的配制

无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入

30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70℃)。溶解后，在1000mL量筒中，混合后用重蒸馏水定容到1000mL。其中CaCl2单独配制。在加入母液时CaCl2应最后加入，以免形成沉淀。将配好的混合液倒入细口瓶中，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，配1000mL培养基取此母液50mL。

2、微量元素母液的配制

无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用量的200倍，用微量0.0001g的电光分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解。混合定容于100ml容量瓶中保存于冰箱中,配制培养基时，每配制1000mL培养基取此母液5mL.

3、铁盐母液的配制

无机盐中铁盐母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。

4、有机元素的配制

无机盐中有机元素母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。

实验二、培养基的配制与灭菌

一、各培养基配制

1、香蕉培养基：

诱导和继代培养基：①、MS＋BA 3.0 mg／L

②、MS＋NAA 0.5 mg／L

③、MS

生根培养基： MS＋NAA0.5mg／L

2、烟草叶片培养基：

诱导和继代培养基：①、MS＋BA 1.0 mg／L

②、MS＋BA 1.0 mg／L＋NAA 0.5 mg／L

③、MS

生根培养基： MS＋NAA 0.2 mg／L

3、木薯外植体培养基：

诱导和继代培养基：MS＋BA 0.05 mg／L＋NAA0.02mg／L＋GA30.05mg／L

生根培养基： MS＋BA 0.05 mg／L＋NAA0.02mg／L＋MET4mg／L

4、柱花草培养基

5、桉树外植体培养基：

芽的诱导培养基：1／2 MS＋BA 0.5 mg／L＋IBA 1.0 mg／L

芽的增殖培养基：MS＋BA 0.5 mg／L＋IBA 0.2 mg／L

生根培养基： 1／2 MS＋NAA 0.2 mg／L

6、花生胚培养基

7、玉米胚培养基：

①、MS

②、MS＋NAA 0.2 mg／L

③、MS＋BA 3.0 mg／L＋2，4-D 2.0 mg／L

8、水稻盾片培养基：

诱导培养基：MS＋2，4-D 2.0 mg／L＋BA 1.0 mg／L

分化培养基：MS＋BA 2.0 mg／L

生根培养基：MS＋NAA 1.5 mg／L

9、自选材料—大蒜培养基

诱导培养基：MS＋NAA 1.0 mg／L

续待培养： MS＋2，4-D 0.1 mg／L＋BA 1.0 mg／L

二、培养基的配制及消毒：

（1）按照MS培养基的配方（以配制1LMS培养基为例）取大烧杯加入先前配制好的母液其中包括：大量元素50ml、微量元素5ml、铁盐10ml、有机元素10ml，最后加钙盐50ml 充分混匀。再加入30g食用白糖，加入适量的去离子水使总量将近1L，混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml量筒定容，最后向培养基中添加8.0g卡拉胶混匀。注意事项：

○1配制MS时，钙盐一定要最后加入；

○2调好PH值后再加卡拉胶（或琼脂）。

（2）培养基配制好后分装到培养瓶中每瓶约30ml，盖好瓶盖帖上标签。需要加入激素的培养基在定容到1000ml后加入所需的激素。混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml 容量瓶定容，最后向培养基中添加8g卡拉胶，混匀后进行分装，然后装入高温高压灭菌锅进行灭菌（一般培养基用0.1MPa，121.5℃，15～30分钟可达到彻底灭菌的目的）。灭菌好后取出冷却备用。

（3）培养环境条件：培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d，每隔7天观察一次。

三、超净操作台的消毒

消毒时先用75%的酒精对超净台的各处进行消毒，点燃酒精灯放于超净台右侧，再对实验工具进行灼烧灭菌，后放于架上冷却待用。并依次将实验中所用培养基瓶及所需试剂瓶进行消毒，置于超净台左侧，注意实验中要用75%的酒精对手进行消毒。

实验三、香蕉吸芽的组织培养

香蕉是热带、亚热带地区的重要水果，也是华南四大名果之一，在果树栽培中占有相当的比重。香蕉栽培具有速生快长、投产早、产量高、效益好、供应期长等优点，是我国南方大宗高效的经济果树。传统的繁殖方法多是采用吸芽分株法，这种方法的繁殖系数低，速度慢，难以满足当前大规模的栽培生产，且容易传播疾病。利用组织培养的技术来对香蕉优质品种进行无性繁殖，这样不但可以保持香蕉的优良性状，加快繁殖速度，而且，试管苗不带病虫害和病毒病，并且，利用组织培养技术得到的幼苗生长比较一致，有利于田间的管理和采收。因此，香蕉的组培苗越来越受到人们的欢迎。本实验主要是掌握香蕉的无性繁殖技术，了解各种激素对香蕉组织的诱导、分化的效果。

1、材料和方法:

1.1材料

(1)香蕉吸芽：从农学院苗圃香蕉种质资源圃挖取品种优良无病虫害的香蕉吸芽

(2)实验采用MS基本培养

(3)诱导和继代培养基：①MS＋BA3mg／L

②MS＋NAA0.5mg／L

③MS

(4)根培养基： MS＋NAA0.5mg／L

(5)PH：约为 5.8-6

1.2方法

1.2.1外植体消毒方法

用自来水冲洗吸芽表面的泥土，剥离外假茎，只留下茎和假茎各2-3cm长，假茎的的直径有2-3cm，然后，用洗衣粉清洗一遍，用自来水冲洗，转入无菌室后将外植体用70%

酒精处理1min,0.1%升汞浸泡15min，其间不断搅拌，弃去升汞用无菌水洗3遍（无菌水漂洗：将从升汞中取出的香蕉吸芽组织块转入无菌水中漂洗，不断摇动使漂洗干净）留在瓶中备用。

1.2.2诱导培养

将香蕉吸芽放到无菌工作台的无菌纸上，用消毒刀将外植体的假茎的最外层剥掉，以及有消毒刀将已经变色的茎外面一小层也切掉，然后从外植体茎中间一分为二，分别接入诱导和继代培养基①、②、③中（①4瓶、②2瓶、③2瓶）。7天后观察，发现诱导和继代培养基①中香蕉吸芽组织裂开程度较高，并且有转绿现象。②、③中的无明显变化。7天后，将所有的香蕉吸芽转接入诱导和继代培养基①中（实验作了4瓶）培养，7天后观察，香蕉吸芽组织块基部、边缘有明显的愈伤组织产生，继续培养7天后观察，可以看出已有2-4个小芽分化出来。让其继续培养14天，然后将每一个吸芽根据其的分化程度切成2-4分再接至诱导和继代培养基①中培养中继续培养。（注意：香蕉吸芽分化诱导培养时要避光培养才会产生分化。）

1.2.3根的诱导

等到分化出来的芽长到1-2cm长后，将其从香蕉吸芽组织中切下来，接入生根培养基中。14天后观察发现，芽苗基部长出了白色的不定根，28天后，根的长度长到了2-3cm，生根率高。

1.2.4炼苗和移栽

将培养瓶转入自然条件下，放置2天，然后每天逐渐松动培养瓶瓶盖，3天后打开瓶盖1/4， 1天后打开瓶盖1/2放置1天，再完全打开瓶盖放置2天后将幼苗取出，用清水将培养基洗去，小心的栽入沙床中，将沙床置于阴凉的通风处，注意保持沙床的水分。一星期后可放置于自然条件下。一周后即可移栽置大田。

1.2.5培养条件：

培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d（注意香蕉吸芽诱导期无需光照）,每个星期观察一次。

2、实验结果与分析：

2.1 在诱导和继代培养中用诱导和继代培养基①、②、③三个培养基进行对比实验，结果表明诱导和继代培养基①中香蕉吸芽组织块长势、分裂情况最好。所以①最适合用作香蕉吸芽组织培养的培养基。

2.2 经过丛生芽诱导和增殖过程，香蕉吸芽产生愈伤组织，并逐渐诱导出了许多小的芽。并且从实验中我们发现随着继代培养的进行，到了第2次以后的三次继代培养，香蕉分化出来的芽也越多，并且香蕉幼苗的生长比较一致。

2.3 将增殖后的香蕉幼苗接种至生根培养基中长出了白色的不定根。

2.4 本实验由于污染结果只剩下一瓶而且长势不好，可能由于一开始没有截去足够底部。

实验四、烟草叶片的消毒、接种和培养

烟草具养价值高于任何奶有药用、工业用、保健美容等价值，其中卷烟就是烟草的最主要产品，从烟叶中提取的蛋白质其营类的蛋白质，而烟碱有杀菌止血的功能，是医院必备的药品。在中国烟叶和卷烟的销量很大，是国家的高积累、高税率商品，在国民经济中占有重要的地位，自1987年以来税利连续居全国首位。烟草在外国被称为“现金作物”或“货币作物”。目前烟草一般采用有性繁殖，但繁殖的烟苗不均衡，易发生变异，而且易感病菌，造成多种病害发生，品质退化，从而影响经济收人。用嫩叶片的组培方法，可以保持优良品种的优良性状，减少病虫害，从而达到高产优质的目的。另外，烟草生长速度快，生长周期短，所以是基因工程中最为广泛使用的模式植物之一。本实验的目的主要是掌握无菌操作技术，探讨有利于烟草叶片的诱导和分化的较适激素。

1、材料和方法:

1.1材料

1）、烟草叶片

2）、MS为基本培养基

3）、诱导和继代培养基：① MS＋BA 1.0 mg／L

② MS＋BA 1.0 mg／L＋NAA 0.5 mg／L

③ MS

4）、生根培养基： MS＋NAA 0.2 mg／L

1.2方法

1.2.1外植体消毒方法

将烟草叶片洗净，将烟草叶片左右垫与牛皮纸上用手术刀切取2cm长，2cm宽的无主叶脉、主侧叶脉的长方形叶片块（10片左右），置于75%的酒精溶液中消毒10s左右，在转入加了1-2滴土温的0.1%的升汞溶液中消毒8-10min，期间注意不断摇动，取出叶片置于无菌水中清洗3次，留于最后清洗的无菌水中备用。

1.2.2诱导培养

将烟草叶片取出将叶片周遍切去，再将每片叶切成2片，分别接入诱导和继代培养基①、②、③中，培养7天后观察。继续培养21天后，将诱导继代培养后的烟草转接入烟草分化培养基（即诱导和继代培养基②）中培养，7天后观察。

1.2.3继代培养

继续培养7天后，从分化培养基中取出烟草幼苗分成小丛后转接诱导和继代培养基③中，培养7天后观察。（如果需要分化获得更多的烟草幼苗可以再次接入分化培养基中培养）1.2.4生根培养

继续培养7天后，从分化培养基中取出烟草幼苗取其中生长健壮的切下，然后按照幼苗的大小和健壮程度将幼苗分类后分别转接入生根培养基中培养7天后观察。

1.2.5炼苗和移栽

将培养瓶转入自然条件下，放置2天，松动培养瓶瓶盖再放置2天，打开瓶盖放置2天，将幼苗取出，用清水将培养基洗去，小心的栽入沙床中，将沙床置于阴凉的通风处，注意保持沙床的水分。一星期后可放置于自然条件下。两周后即可移栽置大田。

1.2.6培养条件：

培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d，,每个星期观察一次。

2、实验结果与分析：

（1）有些烟叶的边缘有褐化现象，这可能是由于切烟叶时无菌刀太热所至，但是没有污染情况。由此可见，对烟草的消毒方法和消毒时间是很适宜的。

（2）烟草叶片在诱导和继代培养基①、②、③中的情况如下：接到诱导和继代培养基②中的叶片卷曲程度最大，③中的无卷曲现象，①有卷曲现象但没有②程度大。

（3）培养14天后的观察结果：诱导和继代培养基②中的叶片边缘已经可以看到有明显的愈伤组织，①中接入的叶片也有愈伤组织，但是无②中的多和明显。

（4）培养28天后的观察发现，诱导和继代培养基①中接入的叶片愈伤化特别明显，基本上整个都可以看成整个都是愈伤组织了，②中可以看出已经分化出了一些小的幼苗，③中的叶片与第7天观察的一样，无明显变化。

（5）将②中的愈伤组织切成四分，分别接在分化培养基中培养7天后烟草叶片分化出了更多的小幼苗。

（6）在生根培养基中培养7天后观察，幼苗底部有一点点白色须须，14天后观察有少许不定根长出，并且已经长到了4-6cm长左右。

实验五、柱花草外植体的消毒、接种和培养

柱花草是异花授粉植物，有性繁殖很容易引起变异，很难保持物种的优良性状，无性繁殖如扦插等繁殖得很慢，无法满足生产的需要。而柱花草组培快繁可使桉树保持其遗传稳定性，其繁殖系数。本实验主要是学习和掌握柱花草的组织培养技术。

1、材料和方法：

1.1材料

1）柱花草枝条

2）培养基叶片愈伤组织诱导分化的培养基为 M S+BA4mg/L+NAA1.0mg/ml+30mgL白糖+ 8mg/L卡拉胶;

继代增殖的培养基为M S+ BA4 mg/L+ NAA0.01mg/ml +30mg/L白糖+ 8mgL卡拉胶;

芽伸长培养基为M S+BA0.4+ NAA 0. 1mg/ml+ 8 g/L卡拉胶+30 g/L白糖

1.2方法

1.2.1外植体的消毒方法

将柱花草枝条洗净，置于75%的酒精溶液中消毒10s左右，在转入0.1%的升汞溶液中消毒8-10min，期间注意不断摇动，取出叶片置于无菌水中清洗3次，留于最后清洗的无菌水中备用。

1.2.2接种

将柱花草枝条置于牛皮纸上用手术刀切取叶片。将叶片周遍切去，接种于培养基上，一瓶接两到三片叶片。放到培养房中培养,数天后观察。

2.实验结果与分析

柱花草全部褐化或者污染，无存留。褐化原因可能是消毒时间过长，污染原因可能是操作不当造成。

实验六、木薯外植体的消毒、接种和培养

木薯是耐旱、高产的块根作物，其块根富含淀粉，是节粮型的淀粉资源，在饲料、食品、化工、医药、纺织、造纸等方面。在我国南亚热带地区，木薯是仅次于水稻、甘薯、甘蔗和玉米的作物。木薯是用其茎干来进行无性繁殖的，但是往往新品种刚刚出现时，其茎干是非常有限的，因此，对优质品种的迅速推广是非常不利的。利用组织培养的方法不仅可以保持母树的性状，而且繁殖速度快，有利于品种的推广。本实验主要是学习和掌握木薯的组织培养技术。

1、实验材料与方法：

1.1实验材料：

1）、木薯幼枝

2）、以MS为基本培养基

3）、诱导和继代培养基：MS＋BA0.05mg／L＋NAA0.02mg／L＋GA30.05mg／L

4）、生根培养基： MS＋BA0.05mg／L＋NAA0.02mg／L＋MET4mg／L

1.2方法

1.2.1外植体的消毒方法：

从苗圃剪取幼嫩木薯枝条，剪去叶子，然后以一个芽节为一段（芽节上下端保持1.5cm 左右）切下，置于75%的酒精溶液中消毒5s，在置于0.1%升汞溶液中消毒10-12min左右，其间注意不断摇动，取出木薯枝条置于无菌水中清洗3次。

1.2.2继代培养

将消毒好的木薯枝条取出，置于无菌的牛皮纸上，切去上下端各一小部分后，接入继代培养基中培养（实验中共接6瓶），7天后观察。

1.2.3生根培养

继续培养7天，将继代培养基中培养的木薯枝条取出，切取新发出的幼枝，同样以一个芽节为一段切开，保证芽节上部分短一些，下部分长一些。7天后观察，14天后观察。

1.2.4培养条件：

培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d，每个星期观察一次。

2、实验结果与分析

（1）继代培养中所接入的6瓶有4瓶污染，这可能是由于木薯枝条的大小不一，灭菌不够全面，或者由于来自不同的植株，可能有植物内生菌的存在所至，也可能是实验操作过程中染菌所至。

（2）继代培养7天后观察，从木薯的枝条芽节出新发出了枝条约长有1-2cm左右，14天后长有3-4cm左右。

实验七、桉树外植体的消毒、接种和培养

桉树是当今世界三大速生树种之一,已成为我国大面积造林和“四旁”植树的主要树种。它的显著特点是:①材质坚硬,材、皮、叶、花的经济价值都很高,既是用材林、经济林、防护林、风景林，又是很好的能能源树种；②繁殖容易，速生丰产，特别是幼林期生长快，大大缩短了生长周期，大而获得较高的经济效益；③种类多，抗逆性强，既有耐热品种，也有耐寒品种，病虫害少，较耐用品瘦瘠，要在不同气候带栽种，深受群众喜爱。桉树的木材是造纸、坑木、造船等良材，叶子可提油料，树皮可提树脂，残渣培养食用菌后还可当肥料，花是良好蜜源。

桉树是异花授粉植物，有性繁殖很容易引起变异，很难保持物种的优良性状，无性繁殖如扦插等繁殖得很慢，无法满足生产的需要。而桉树组培快繁可使桉树保持其遗传稳定性，其繁殖系数大，一年内一个桉树带节茎段，可以繁育百万株以上的苗木。本实验主要是学习和掌握桉树的组织培养技术。

1、实验材料与方法：

1.1实验材料：

1）、桉树幼枝

2）、以MS为基本培养基

3）、芽的诱导培养基：1／2MS＋BA0.5mg／L＋IBA1.0mg／L

4）、芽的增殖培养基：MS＋BA0.5mg／L＋IBA0.2mg／L

5）、生根培养基： 1／2MS＋NAA0.2mg／L

1.2、方法

1.2.1外植体的消毒方法：

采取幼嫩桉树枝条（选取腋芽还没有抽出芽枝的），剪去叶子，置于清水下洗净，在洗衣粉水中浸泡20min左右，清洗干净后用流水（自来水）冲洗到下午做实验时。取出以一个芽节为一段（芽节上端保持1-1.5cm，下端2cm左右）切下，置于75%的酒精溶液中消毒5s，在置于0.1%升汞溶液中消毒10-12min，其间注意不断摇动，取出桉树枝条置于无菌水中清洗3次。

1.2.2芽的诱导培养

将消毒好的桉树枝条取出，置于无菌的牛皮纸上，切去上下端各一小部分后，接入芽的诱导培养基中培养（实验中共接8瓶）。因为8瓶培养基中桉树枝条全都转为褐色所以芽的增殖培养基和生根培养基没有做。

1.2.3培养条件：

培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d，每个星期观察一次。

2、实验结果与分析

7天后观察，6瓶培养基中桉树枝条全都转为褐色或污染，表明已经全军覆没。转为褐色可能是由于灭菌时间过长，桉树已经受到伤害；而污染可能是由于操作时手上带的菌掉入或接种的器具没有灭菌好（该次所用的酒精是已使用过的并且里面含有许多植物残体）。

实验八、玉米不成熟胚的消毒、接种和培养

玉米组织培养及再生，目的是让外植体能够高频率地诱导出愈伤组织，建立高效的体细胞再生体系，为玉米遗传转化操作和细胞工程研究创造有利条件。

1、实验材料与方法：

1.1实验材料：

1）、玉米种子

2）、培养基：MS

1.2方法

1.2.1种子的消毒方法：

从新鲜的玉米棒上剥下玉米粒（20粒左右），直接在转入0.1%升汞溶液中消毒8-10min 左右，期间注意不断摇动，取出置于无菌水中清洗3次留于瓶中备用。

1.2.2诱导培养

将消毒好的玉米粒取出，置于无菌的牛皮纸上，切开玉米粒将其胚挑出接入MS培养基中培养。7天后观察，14天后再观察。

1.2.3炼苗、移栽

将培养瓶转入自然条件下，放置2天，松动培养瓶瓶盖再放置2天，打开瓶盖放置2天，将幼苗取出，用清水将培养基洗去，小心的栽入沙床中，将沙床置于阴凉的通风处，注意保持沙床的水分。一星期后可放置于自然条件下。一周后即可移栽置大田。

1.2.4培养条件：培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d，每个星期观察一次。

2、实验结果与分析

（1）7天后观察，MS培养基中不成熟玉米胚已发育成玉米苗，根、茎、叶齐全且长势良好高度达到了4-6cm左右，14天后观察，高度已经高达12cm左右。

（2）炼苗后幼苗生长良好，叶片由淡黄色逐渐转绿，茎长壮，接近正常幼苗形态。

实验九、花生成熟胚的消毒、接种和培养

1、实验材料与方法：

1.1实验材料：

1）、花生种子

2）、培养基：MS

1.2方法

1.2.1种子的消毒方法：

取成熟花生剥取花生粒（15粒左右），直接置于75%的酒精溶液中消毒10s，在转入0.1%升汞溶液中消毒6-10min左右，期间注意不断摇动，取出置于无菌水中清洗3次留于瓶中备用。

1.2.2诱导培养

将消毒好的花生粒取出，置于无菌的牛皮纸上，将其子叶掰开将其胚挑出接入MS培养基中培养。7天后观察，14天后再观察。

1.2.3炼苗、移栽

将培养瓶转入自然条件下，放置2天，松动培养瓶瓶盖再放置2天，打开瓶盖放置2天，将幼苗取出，用清水将培养基洗去，小心的栽入沙床中，将沙床置于阴凉的通风处，注意保持沙床的水分。一星期后可放置于自然条件下。

1.2.4培养条件：

培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d，每个星期观察一次。

2、实验结果与分析

（1）7天后观察，MS培养基中成熟花生胚已发育成花生苗，根、茎、叶齐全且长势良好高度达到了3cm左右，14天后观察，高度已经高达5-7cm。

（2）炼苗后幼苗生长良好，叶片增多，茎长壮，接近正常幼苗形态。

实验十、水稻盾片的组织培养

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，约有40%的世界人口以稻米为主食，因此，培育高产优质的水稻品种一直是世界范围的重要研究课题。在过去的几十年中，矮化育种和杂种优势的推广利用大大提高了世界水稻产量。

水稻的花药培养使人们得到了纯合二倍体植株，大大缩短了水稻的杂交育种年限。提高选择效率。由于水稻盾片取材方便，在实际的研究工作中作为诱导愈伤组织的外植体材料来源应用越来越广泛。本实验主要是进一步熟悉无菌操作技术，学习利用水稻盾片来诱导愈伤组织，然后分化形成植株。

1、实验材料与方法：

1.1实验材料：

1）、水稻干燥成熟种子

2）、培养基采用MS培养基

3）、诱导培养基：MS＋2，4-D2.0mg／L＋BA1.0mg／L

4）、分化培养基：MS＋BA2.0mg／L

5）、生根培养基：MS＋NAA1.5mg／L各培养基的PH均为5.8。

1.2方法

1.2.1外植体的消毒方法：

取水稻种子20-30粒，剥去其颖壳，在室温下直接浸于 0.1%升汞溶液中消毒6min左右，其间注意不断摇动，取出种子置于无菌水中清洗3次。

1.2.2诱导培养

将消毒好的水稻种子取出，接入诱导培养基中培养（实验中共接5瓶）。

1.2.3分化培养

继续培养7天后将水稻种子取出于无菌牛皮纸上，切取靠近胚的一端的乳头状突起愈伤组织转接入分化培养基中培养，同时也可切取水稻发出的幼苗靠近根端的1cm小段接入分化培养基中培养。

1.2.4 生根培养

将愈伤组织长出来的幼苗从愈伤组织上切下来，按照大小进行分类，然后接入到生根培养基中。

1.2.5培养条件

培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d，每个星期观察一次。

2、实验结果与分析

（1）诱导培养7天后观察发现，水稻种子发出一株小苗约有4cm左右，但没有观察到明显的水稻根，此外在靠近水稻种子胚处长有白色的乳头状突起愈伤组织。分析表明此培养基诱导水稻盾片产生愈伤组织，且此培养基有抑制水稻种子生根的效果。

（2）由于时间问题1.2.2、1.2.3和1.2.4步没有做。

3、实验小结：

在本实验中，在诱导培养14天后，我们观察发现，同一瓶培养基中，不同的植株的到的愈伤组织的小不一样，这可能是由于不同的水稻种子的成熟程度不同，所引起的。长出

来的水稻苗细长可能是由于没有灯照射引起的。

实验十、洋葱的组织培养（自选材料）

实验目的：为了证明植物细胞的全能性

实验原理：植物的每一个细胞中都包含发育成完整植株的能力，即细胞的全能性

实验材料：4个洋葱，MS，KT 0.5mg.L, 2.4-D , 2.0mg.L ，蔗糖，琼脂，NAOH, 手术刀，镊子，酒精灯，超净工作台，牛皮纸

实验步骤：1.配好MS培养基，加入KT0.5mg.L， 2.4-D , 2.0mg.L

2.向上述溶液加蔗糖3%，加琼脂0.8%，调PH为5.7~5.8

3.把配好的培养液倒入4个瓶子中，加盖，121摄氏度，高压灭菌14分钟。

4.无菌外植体的获得：将洋葱初略的处理下，剥去外面的几层

5.切除顶部的2/3后用升汞浸泡8分钟，在超净工作台上操作。用无菌水洗3次，每次1分钟。用刀和镊子将洋葱处理至中间的一个小芽，将芽切成两半，分别放入瓶子中。

6.将接好的洋葱外植体放在20摄氏度，2000lx光照下，光照时间13小时一天。

实验结果：整个一个组有16瓶，污染了4瓶，污染率为25%，没污染的，其中有4瓶有生长的现象。

实验分析：实验结果表明，洋葱的组织培养成活率高，容易培养。污染的4瓶是属于操作上的问题，所以要严格的按照无菌操作的每一步来做。没有生长的瓶子，说明是接种外植体的部位不对，要没有高度分化的部分，容易生长，形成愈伤组织。