Waterse2695高效液相色谱仪操作规程.docx
WaterS e2695高效液相色谱仪操作规程
1 目的
指导和规范WaterS e 2695 高效液相色谱仪的操作。
2 适用范围
该操作规程适用于Water e 2695 高效液相色谱仪的操作。
3 职责检验员应按操作规程进行仪器操作，质量监督员负责监督该操作规程的正确执行。
4 操作
4.1 仪器组成和开机
4.1.1 仪器组成
本仪器由WaterS e 2695 分离单元、WaterS 2998 二极管阵列检测器、WaterS ELSD 2424 蒸发光散射检测器、Empower3 色谱工作站和打印机组成。
WaterS e2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气，可容纳120 个样品瓶的自动分离单元，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘；显示器，键盘用户界面。
4.1.2 开机
4.1.2.1 依次接通WaterS e 2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。
4.1.2.2接通WaterS e2695分离单元后，约20s仪器开始自检，约3mn内各部件的初始化完成，待主屏幕上方标题区出现“Idle ”时，仪器进入待命状态。
4.2溶剂管路系统的准备
4.2.1 流动相脱气
确认所有溶剂管路都充满溶剂，按［Menu/StatUS l,进入"Status(I)"屏幕，光标选“DegaSSer”，按［Enter】。
4.2.2 灌注
当色谱仪流路没有溶剂或系统中有空气时，需进行干灌注(DryPrime),注入流动相。
否则，进行湿灌注(Wet Prime)以驱除气泡。干灌注：按主机面板上［Menu / Status l,进入“StatUS(1)”显示，按［Direct FUnction l,选择"Dry Prime”，选溶剂通道，如OPen A,选“DUratiOnlli按数字键输入5分钟，按” COntinue”，待限定时间结束后，重复操作，使所需的
溶剂通道注满流动相。湿灌注：进入αStatUS(1)"显示，选溶剂通道，输入100%,按［Direct FUnction］,选“ Wet Prime ”，按【OK l,根据面板提示设置流速及时间(默认流速为7. 5ml
Z min ,一般不用更改，时间可设置为5min),按【0K1。
4.3 样品管理系统的准备
4.3.1 冲洗自动进样器
在“ StatUS(1)”，屏幕下，光标选“ Composition ”，输入流动相的组成。按【DireCt
FUnCtion］, 光标选“ PUrge InjeCtOr ”，按【Enter］,显示“ PUrge InjeCtOr” 屏幕，输入“ SamPIe Loop Volumes 6. 0”，光标下移“ COmPreSSiOn Check”，按任意数字键，按【OK］。
4.3.2 冲洗进样针
在主屏幕下，按【Diag］，显示“ Diagnostics ”屏幕，按【Prime Ndl WaSh l，显示“ Prime NeedIe WaSh”屏幕，按［Start］，30s内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit】。
4.3.3 冲洗柱塞杆密封垫
在主屏幕下，按【Diag］，显示” Diagnostics”屏幕，按【Prime Seal Wash l，显示“ Prime Seal WaSh ”屏幕，按［Start］，30s内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close l【EXit IO 待排放口有水流出，按【Half l 【CloSe l、【Exit l。
4.3.4 装入样品与转盘打开样品舱门，显示"Door is Open" 屏幕，将样品盘取出，把样品瓶插入样品盘后，装入样品盘，按【Next 】直至所有样品盘装毕，关好舱门。
4.4 色谱柱平衡
换上检验所需的色谱柱和流动相，进入"Status（I）”显示，选择流路、设定流速、柱温，
按【Enter】开始注入流动相，通常情况下约1 5?30分钟色谱柱可达到平衡，可以开始进样，
采集数据。
5 Empower 3 软件的应用
5.1 建数据采集方法
5.1.1 双击电脑屏幕上的"Empower" 快捷图标，出现Empower 登录界面，输入用户名和密码。
5.1.2 单击高级键，选择用户类型和QuickStart 界面。
5.1.3 选择QuickStart 界面，点击“确定” ，然后选择选定的操作项目以及色谱系统（仅
查看数据可选择色谱系统中的“没有系统” ），单击“确定” 。
5.1.4 登录Empower 的QuickStarlt 界面。
5.2 编辑仪器方法和方法组（以e2695_2998 为例）。
5.2.1 ．采集栏单击“方法组编辑向导” ：
5.2.2 选择“新建”选项。
5.2.3 弹出仪器方法编辑器。
5.2.4 单击“ 2695”，弹出2695 编辑界面。
5.241 Aliance系统（包括2695、2795和2695D）通用编辑页面中，可选择“单次输送体积”，请针对不同的流速选定适当的单次输送体积，以确保最佳的流速精度与准度。
5.2.4.2 查看脱气选项，确认设置正确。
5.2.4.3 流量选项中设置“泵模式” 、“总流量”以及流动相配比。
5.2.5 单击2998，弹出2998 编辑界面。
5.2.5.1 3D数据采集：在通用栏中选择启用3D数据，输入检测波长的范围；
5.2.5.2采集2D数据，点击“ 2D通道”，最多可同时采集8个不同波长的通道的数据。
5.2.6 点击“文件” ，选择“另存为” ：输入仪器方法名称，点击“保存” ；点击“文件” ，选择“退出” 。
5.2.7 在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击“下一步（N）”。
5.2.8 在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择“无处理”、“无报告” ），点击下一步。
5.2.9 输入方法组名称，单击“完成” 。
5.3 进样
点击进入“平衡系统／监视基线”界面，选择相应的仪器方法，点击“平衡／监视器，在监视窗口监视基线至系统平衡，停止系统监视状态，点击“进样”。
5.3.1．单进样：点击，进入“定义单进样参数”编辑界面，输入样品名、功能、方法组等参数，点击“进样” 。
5.3.2 使用向导建立样品组和样品组方法。
5.3.2.1 选择“运行样品”，然后单击“样品队列” ，进入样品列表。
5.3.2.2 单击“新建样品组向导” ，建立样品组。
5.3.2.3选择创建样品组方法类型为“ LC或PDA',然后点击“定义样品板”。
5.3.2.4 在“选择标准进样在那里开始”中选择合适的选项。检查开始加载样品瓶的位置是否正确，点击“下一步” 。
5.3.2.5在描述标样中需要设置一下内容：样品组中的标样数：×;每瓶标样进样次数：X; 进样体积：x;运行时间：XX;方法组XXX;点击“选项”：输入下一进样延迟时间X;点击下一步。
5.326样品数：X;每瓶样品进样次数：X;进样体积：X;运行时间：X;方法组X;点
击选项：输入下一进样延迟时间X;点击下一步。
5.3.2.7 在识别标准样界面中，输入标样名称，增量后缀使用1．在识别样品界面中，输入
样品名称，增量后缀使用a。点击下一步。
5.3.2.8 运行模式选项中选择“只测试” 。查看摘要，点击下一步。【注：弹出组分编辑器，输入标样中每个组分的名称（内标不需要输入含量）。可以直接关闭该窗口，在处理数据的时候再添加】。
5.3.2.9 点击完成，在菜单栏中选择文件。
5.3.2.10 为方法组命名并保存样品组方法。
5.3.2.11 单击“样品队列” ，打开运行样品窗口，点击运行当前样品组方法键，选择运行。
5.3.2.11 选择需运行的样品组名称，点击运行。
5.3.2.13 样品组运行过程中，在“正在运行”栏中正在运行以及运行完毕的样品以红色显示。（注：以向导建立的样品组首行功能一般为清除校正，一般在运行样品前删除该行或改为“平
衡” 。）
5.4 建立数据处理方法
5.4.1 2D 数据处理方法
5.4.1.1 单击“浏览项目”键，在“样品组”中选择目标样品组。
541.2在样品组上点击鼠标右键选择“查看相关→通道”，样品组在单个通道中显示。
5.4.1.3 选择定最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看，会显示未处理的色谱图形。
5.4.1.4 点击处理方法向导快捷键，选择创建新处理方法，点击确定。
5.4.1.5确认处理类型为LC,积分方式可选择为传统，再点击使用处理方法向导，选择确定。
5.4.1.6 常按鼠标左键,选择色谱图上最窄峰。（注：在色谱图区域方可以放大某个需
要监测的峰。点击鼠标右键全视图可以还原色谱图。）
5.4.1.7 在色谱图的积分界面选择一段典型基线作为积分的阈值,点击下一步。
5.4.1.8 常按鼠标左键,在基线上选取积分的起止时间点。
5.4.1.9 建议选择最小峰高,选择所要积分的高度最小峰（或键入相应数值）。小于此
峰高90％的峰将不被积分。点击下一步。
5.4.1.10 定量方法选择面积,组分信息选择含量,校正类型选择线性。点击下一步。
5.4.1.11 跨通道内标样界面点击否。
5.4.1.12 因为选择的是标样,点击峰1 可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或者键入运行样品相应的名称。添加组分名称相匹配的标准含量,然后点击下一步。
5.4.1.13 如果是多点校正样品,跳过添加含量的窗口直接点击下一步。（单点校正可在
这里添加含量）。
5.4.1.14 选择外标法：
5.4.1.15 选择单一内标样,需要在下拉菜单中选择或键入内标相应的名称,然后点击下一步。
5.4.1.16 选择多重内标需要输入所有内标的名称。
5.4.1.17 为处理方法命名,点击完成。色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结果,包括积分。
5.4.1.18 如需为积分方法添加积分事件，鼠标右键点击色谱图窗口，选择添加积分事件。积分事
件所示功能会立刻应用于处理方法中。
5.4.1.19 编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键。有任何更改均需再次保存处理方法。
5.4.1.20 点击峰表底部可预览2D 通道和峰。
5.4.1.21 点击“浏览项目”键，选择“通道”或“样品组”标签栏，右键点击目标样品组或通道并选择处理。
5.4.1.22 在处理界面，选择使用指定的处理方法，选择相应的处理方法名称，点击清除校正，选择校正并定量。
5.4.1.23 点击确定，数据处理，产生结果。可在结果栏中查看。
5.4.2 建立3D 数据处理方法
5.4.2.1 点击“浏览项目”键，在“样品组”中选择目标样品组。
5.4.2.2 在样品组上点击鼠标右键选择查看相关通道，样品组中各个数据在单个通道中显示。
5.4.2.3 选择定量最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看。
5.4.2.4 在预览界面选择“轮廓线”标签栏，会显示未处理的轮廓图。
5.4.2.5 从处理或右键下拉菜单中选择提取色谱选项。
5.4.2.6 键入所需要提取的波长，按回车键，得到该波长的色谱图。
5.4.2.7点击处理方法快捷键，选择创建新处理方法，确认处理类型为PDA,积分方式
可选择为传统，再点击使用处理方法向导，点击确定。
5.4.2.8 常按鼠标左键，选择色谱图上最窄峰。（注：在色谱图区域内可以放大某个需
要监测的峰。点击鼠标右键选择全视图可以还原色谱图。）
5.4.2.9 在色谱图的积分界面选择一段平滑的基线作为积分的阈值，点击下一步。
5.4.2.10 常按鼠标左键，在基线上选取积分的起止时间点。
5.4.2.11 建议选择最小峰高，选择所要积分的高度最小峰（或键入相应数值）。小于此
峰高90％的峰将不被积分。点击下一步。
5.4.2.12 定量方法选择面积，组分信息选择含量，校正类型选择线性。点击下一步。
5.4.2.13 跨通道内标样界面点击否。
5.4.2.14 因为选择的是标样，点击峰1 可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或者键入运行样品相应的名称。添加组分名称相匹配的标准含量，然后点击下一步。
5.4.2.15 如果是多浓度点的一组标样，跳过添加含量的窗口直接点击下一步。（单一浓
度可以在这里添加含量）。
5.4.2.16 选择外标法：
5.4.2.17 选择内标法单一内标样校正，需要在下拉菜单中选择或键入内标相应的名称，然后点击下一步。
5.4.2.18 选择多重内标需要输入所有内标的名称。
542.19 PDA纯化及匹配选项：
5.4.2.20 为处理方法命名，点击完成。色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结果，包括积分。
5.4.2.21 在“文件”下拉菜单中选择“另存为”方法组，将该处理方法存入方法组。
（注：
3D 数据必须用方法组处理。）
5.4.2.22 如需为积分方法添加积分事件，鼠标右键点击色谱图窗口，选择添加积分事件。积分事件所示功能会立刻应用于处理方法中。
5.4.2.23 编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键。
5.4.2.24 点击“浏览项目”键，选择“通道”或“样品组”标签栏，右键点击目标样品组或通道并选择处理。
5.4.2.25 在处理界面，选择使用指定的处理方法，选择相应的处理方法名称，点击清除校正，选择校正并定量。
5.4.2.26 点击确定，数据处理，产生结果。可在结果栏中查看。
6 查看结果和视图筛选
6.1 选择“结果”标签栏，使用视图筛选器从下拉菜单中选择今天。
6.2 选择需查看的结果，右键点击选择查看。
6.3 查看结果点击快捷键，查看每个组分的校正曲线。切换至主窗口点击。
7 预览结果并创建报告方法
7.1 点击“预览项目”切换回结果表显示状态。
7.2 选中一个或多个结果，点击鼠标右键选择预览。
7.3 若选取一个结果，在预览窗口选择使用一下方法：使用缺省单个报告，单击确定。
7.4 预览报告并查看数据。点击“编辑方法”键修改报告方法。
7.5 双击色谱图或峰结果表编辑报告属性。
7.6 点击文件，选择保存，为新建的报告方法命名。点击预览报告。
7.7如需将报告保存为PDF格式，点击。
8 方法组的建立以上讲解了如何建立仪器方法、处理方法和报告方法，组合可以得到一个方法
组。
8.1 监视区单击方法组编辑向导：
8.2 弹出新方法组：选择仪器方法界面。选择相应的仪器方法，点击下一步。
8.3 选择缺省方法界面选择相应的处理方法和报告方法，导出方法缺省。点击下一步。
8.4 命名方法组，点击完成。
8.5 在运行样品时，方法组／报告方法中调用该方法组，可以自动完成采集、处理、报告数据流程。
9 数据管理
9.1 项目的备份
9.1.1在QuickStart 界面，选择菜单“管理一备份当前项目” 。
9.1.2 出现“项目备份向导” ，点击下一步。
9.1.3 出现“项目备份向导一选择目的地' '通过浏览选择目的地，建议选择在非操作系统安装的硬盘分区内。选择完成，单击“确定” 关闭后，回到项目备份窗口，单击“下一步”。
9.1.4 出现“项目备份向导一备份显示” 。确认数据的复制已经成功，再单击“下一步” 。
9.1.5 出现备份数据向导一开始界面。点击完成，结束备份。
9.2 项目的还原
9.2.1在QuickStart 界面，选择菜单“管理” ，下拉菜单中选择“还原项目” 。
9.2.2 出现“还原项目向导” 。通过“浏览”选择被还原的项目所在的路径，单击“确定”。
9.2.3 单击下一步。
9.2.4如出现类似以下内容的对话框（项目名test 已经被使用。请输入另一个项目名），则需为还原的项目另起一个名字。
9.2.5 在“输入磁盘空间配额' '页中，输入项目名，并注意此处的“表空间配额”应不得小于欲还原的项目原有的配额（数据文件大小），然后单击“下一步” 。
9.2.6 如果需要，可以在此页面中，选择该项目是否属于某个父项目。
9.2.7 在“还原显示' '中，如果出现如下对话框（还原的项目需要被更新到下一个版本），单击“确定” 。（注：当还原由Millennium 或Empower 的先前版本创建的项目时，需要为该项目选择时区。）
9.2.8 在“还原显示” 中，等待数据还原结束后，单击“完成”。（注：提示：在重装Empower 软件之后，可以通过还原项目将相关的项目数据进行还原。）
10 项目管理
10.1 新建项目
10.1.1 进入到Empower3 的QuickStart 界面。在菜单中选择“管理一创建新项目” 。
10.1.2 出现“新项目向导”的对话框，选择新建项目的父项目：
10.1.3单击“下一步” ，弹出“新建项目向导一表空间” ，表空间50MB 为默认设置，可根据需要增减。
10.1.4 出现“新建项目向导一选项”页。选择用于本项目的选项，如果无法确定适当的设置，请接受默认选项。单击“下一步” 。
10.1.5 新建项目向导一访问控制：根据需要选择设置对您所创建的项目具有访问权限的用户和用户组，或者接受缺省的选项，然后单击“下一步” 。
10.1.6 新建项目向导一复制所选项：需要选择复制的项目，一般选择Defaults 项目。（注：此
页的复制是指从另一个项目复制现有设置，可以复制项目的“视图筛选器”、“白定义字段” 、“方法”和“参数” 。所以，一般不允许更改或使用Defaults 项目中的任何数据。）
10.2 查看及更改项目属性在建立了新项目以后，可以根据需要在不同的项目之间进行切换。
10.2.1 进入Empower3 的Quick$tart 界面，选择菜单“管理一改变系统／项目” 。
10.2.2 改变系统／项目：根据需要进行选择项目或者选择系统（如果存在二个或者二个以上的系统）。选择完毕后，单击确定。
如果选择了“在该窗口切换项目／系统” ，当前的项目／系统会被新选中的项目／系统所替代，如果选择了“为项目／系统打开新窗口” ，则会为选中的项目重新打开另外一个QuiekStart 的界面。
10.2.3 在新的项目／系统的QuickStart 界面内即可进行下一步的操作。
10.3 系统配置
10.3.1 在QuickStart 界面，选择菜单“视图一系统” ，查看系统。
10.3.2 出现系统信息窗口。在该窗口中，可以在地址栏中查看显示的地址是否与仪器的设置相同。此外，可从“仪器”选项卡里的“正常?”一栏中查看仪器状态，在正常状态下，应显示“是”字样。
如有仪器在“正常?”一栏出现“否” ，可单击“扫描仪器”进行检查。如检查后显示“是”，即恢复正常。（注：当仪器联机出现错误，或者出现“仪器出错”字样的时候，即可通过采集服务器属性来查看仪器状态，判断可能引起该问题的原因。）
10.3.3 创建或连接到新的色谱系统
10.3.3.1 在QuickStart 界面，选菜单“管理一新建系统” 。
10.3.3.2 出现“新建色谱系统向导一输入类型”页面，选择系统类型为“新建系统” 。然后单击“下一步” 。
10.3.3.3 出现“新建色谱系统向导一选择系统”页面，在“可用仪器”组中，选中新系统的组件，然后用鼠标拖拽至右侧“新系统仪器”组中。选择完毕，单击“下一步” 。如有误选，则如法，将误选的新系统仪器，用鼠标拖拽回“可用仪器”组中。（注：可重复使用已配置系统中的仪器，但一次只能有一个使用共享仪器的系统可以在线。）
10.3.3.4 出现“新建色谱系统向导一访问控制”页面。（注：您创建系统时，您即为系
统的所有者。系统创建后，可以修改系统的属性及更改所有者、访问权限和配置等详细信息。)
11 关机
11.1 使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针和柱塞杆密封垫，确保2695 分离单元已彻底冲洗干净后，关闭电源开关。
11.2 数据采集完毕后，关闭所用检测器的电源开关。
11.3 数据处理并打印报告后，关闭计算机和打印机电源开关。
11.4 试验结束，在仪器使用记录表上登记，仪器管理人员审核签字。
12 仪器维护与保养
12.1 每次使用前后，查看分离单元上各溶剂瓶中溶剂的量，及时补充各瓶中相应的溶剂。
12.2 每次使用前后，打开分离单元最下面的分离泵的舱门，查看各管路接口，有无缓冲盐析出的情况。如出现白色盐渍，应拆下其所在的部件，先后用水和甲醇超声清洗，并安装好。
12.3 随时检查仪器的使用记录。
12.4 如长时间不使用该仪器，则需每半年按照《高效液相色谱仪期间核查规程》检查一次，并做好维护记录。
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作 1. 目的：明确安捷伦高效液相色谱仪的规范操作，确保数据的准确性。 2. 范围：适用于安捷伦高效液相色谱仪。 3. 职责：检验人员对此负责。 4.操作规程： 系统组成 本系统由1个溶剂二元输送泵（分主/A泵和副/B泵）、手动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。 准备 4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的μm滤膜过滤，超声脱气20min。 4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。 4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的μm滤膜过滤。 4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常 将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等。 开机： 4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。4.3.2 打开1200 LC 各模块电源。 4.3.3 待各模块自检完成后，双击[Instrument 1 Online]图标，化学工作站自动与1200LC 通讯，进入的工作站画面如下所示。 4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部工具栏]，[ 显示状态工具栏]，[系统视图],[样品视图]，使其命令前有[√]标志，来调用所需的界面。 4.3.5 把流动相放入溶剂瓶中。
4.3.6 打开冲洗阀。 4.3.7 点击[泵]图标，点击[设置泵…]选项，进入泵编辑画面。 4.3.8 设流速：5ml/min，点击[确定]。 4.3.9 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[启动]，点击[确定] ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。 4.3.10 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[关闭]，点击[确定]关泵，关闭冲洗阀。 4.3.11 点击[泵]图标，点击[设置泵…选项]，设流速：min。 4.3.12 点击泵下面的瓶图标，如下图所示（以单元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积，点击[确定]。 数据采集方法编辑 4.4.1开始编辑完整方法：从[方法]菜单中选择[编辑完整方法…] 项，如下图所示选中除[数据分析]外的三项，点击[确定]，进入下一画面。 4.4.2方法信息 4.4.2.1在[方法注释]中加入方法的信息（如：测试方法）。 4.4.2.2 点击[确定]，进入下一画面。 4.4.3 泵参数设定 4.4.3.1 在[流速]处输入流量,如1ml/min，在[溶剂B]处输入,(A=100-B) ,也可[插入]一行[时间表] ,编辑梯度。在[压力限]处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。 4.4.3.2 点击[确定]，进入下一画面。 4.4.4 柱温箱参数设定 4.4.4.1 在[温度]下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。并选中它,点击[更多>>] 键,如图所示,选中[与左侧相同]，使柱温箱的温度左右一致。 4.4.4.2 点击[确定]，进入下一画面。 4.4.5 检测器参数设定：检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区 域。参比带宽：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省
液相色谱仪验证报告
Agilent1200液相色谱仪A验证报告文件编码：REC-JYYQ-B001-01-00
目录 1．概述 2．验证目的 3．验证依据及验证范围 4．验证工作小组 5．验证方案审批 5.1验证方案起草 5.2验证方案会签 5.3验证方案批准 5.4验证方案实施 6.验证内容 6.1安装确认 6.1.1 文件资料 6.1.2售后服务 6.1.3 消耗性备品备件 6.1.4安装检查 6.1.5安装确认结论及批准 6.2 运行确认 6.2.1 灵敏度及稳定性测试 6.2.2运行确认结论及批准 6.3性能确认 6.3.1 系统适用性试验： 6.3.2定量重复性试验 6.3.3性能确认结论及批准 7.验证结论 8.最终批准
1.概述 液相色谱仪为安捷伦科技有限公司生产（检测器为紫外检测器，色谱柱有C18柱，可以进行含量、有关物质和聚合物的定量或定性分析。我司在购买前对该产品的性能、价格、外观和售后服务进行了广泛地调查研究，在同类产品中价格适中、性能稳定、美观且售后服务好。 2、验证目的 为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，也为了确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标，对该仪器进行验证。 2.验证依据及适用范围 参照国家技术监督局“实验室液相色谱仪检定规程”及中国药典2008版附录V D液相色谱法起草本验证方案。本验证方案适用于实验室液相色谱仪的验证。 4.验证工作小组 成立由组成的验证工作小组，担任验证工作小组组长。 5.验证方案审批 6.验证内容 6.1安装确认 6.1.1 文件资料
检查人日期 检查人日期 检查人日期6.1.4安装检查 对照使用说明书要求安装，确认环境、电源等符合要求。 检查人日期6.1.5安装确认结论及批准 6.2 运行确认(见计量局计量证书) 证书号： 运行确认结论及批准：
高效液相色谱法的标准操作规程
高效液相色谱法的标准操作规程 1 定义及概述： 1.1 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。 1.2 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。 1.3 高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理组成。检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外—可见检测器。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2 高效液相色谱仪的使用要求： 2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无渗漏连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
Waters_2695_型高效液相色谱仪操作方法
Waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法 1 仪器组成及开机 1.1 仪器组成本仪器由Waters 2695 分离单元、2996型二极管阵列检测器、2420蒸发光散射检测器、色谱管理工作站和打印机组成。 2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机（或氦气脱气机），可容纳120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。 1.2 开机依次接通2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接通2695 分离单元后，约20s 仪器开始自检，约1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“Idle ”时，仪器进入待命状态。 2 溶剂管理系统的准备 2.1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【Menu/Status 】，进入“Status （1 ）”屏幕，光标选“Degasser ”，按【Enter 】，显示选项屏幕，光标下移选“Continuous ”，按【Enter 】。 2.2 启动溶剂管理系统 2.2.1 干启动，当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status （1 ）”屏幕下，按【Direct Function 】，光标选“Dry Prime ”，按【Enter 】，显示“Dry Prime ”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如【OpenA 】，光标选“Duration ”，按数字键输入5min ，按【Continue 】，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。 2.2.2 湿启动在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Compomtion ”中欲使用的流动相，输入10 0％，按【Direct Function 】，光标选“Wet Prime ”，按【Enter 】，显示“Wet Prime ”屏幕，输入7.5Ml/min 和6min ，按【OK 】，待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。 2.2.3 平衡真空脱气机在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Composition ”，输入流动相的组成，按【Enter 】再用光标选“Degasser ”中的“Normal ”，按【Enter 】，按【Direct Function 】，光标选“Wet Prime ”，输入0.000mL/min 和10min. ，按【OK 】。待限定时间结束后，按【Abort Prime 】。 3 样品管理系统的准备 3.1 冲洗自动进样器在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Composition ”，输入流动相的组成。按【Direct Function 】，光标选“PurgeInjector ”，按【Enter 】，显示“Purge Injector ”屏幕，输入“Sample Loop Volumes 6.0 ”，光标下移“Compression Check ”，按任意数字键，按【OK 】。 3.2 冲洗进样针在主屏幕下，按【Diag 】，显示“Diagnositcs ”屏幕，按【Prime Ndl Wash 】，显示“Prime Needle Wash ”屏幕，按【Start 】，30s 内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit 】。 3.3 冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下，按【Diag 】，显示“Diagnosities ”屏幕，按Prime Seal Wash ，显示“Prime Seal Wash ”屏幕，按【Start 】，待排放口有水流出，按【Halt 】、【Close】、【Exit 】。 3.4 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“Door is Open ”屏幕，装入样品盘，按【Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。 4 编辑分析方法及执行样品分析表 在主屏幕下，按【Develop Methods 】，显示“Methods ”屏幕。 4.1 编辑分析方法 4.1.1 建立新的分离方法在“Method ”屏幕下，按【New 】、【Separation Methods 】，输入方法名，按【Enter 】，显示分离方法屏幕，该屏幕共有6 页，通过按【Next 】或【Prev 】切换。如需设定梯度，在第（ 1 ）页按【Gradient 】，输入后按【Exit 】；如需设定色谱柱的温度，在第（ 4 ）页输入后按【Exit 】；在第（6 ）页设定检测器的种类，光标选“Absorbance Detector ”，按【Enter 】，光标选“48 6﹨2487 ”，按Abs （1 ）图标，设定检测波长，按【OK 】、【Exit 】、【Save 】。 4.1.2 编辑已建立的分离方法在“Methods ”屏幕下，光标选欲编辑﹨修改的分离方法的图标，按【Edit 】，编辑\ 改各种分析参数，按【Exit 】、【Save 】。 4.2 编辑执行样品分析表 4.2.1 建立新的样品组在“Methods ”屏幕下，按【New 】、【Sample Set 】，输入样品组名，按【Enter 】，显示方法组屏幕，在样品组表中输入待分析样品的信息。在“Vial ”中输入样品放置的位
液相色谱仪操作规程
1 目的 规Waters e2695液相色谱仪的操作规程，正确使用本仪器，保证检测工作顺利进行以及操作人员、设备、周围环境的安全。 2 适用围 本指导书适用于Waters e2695液相色谱仪、2489紫外检测器及随机工作站。 3 职责 3.1操作人员按本规程操作仪器，对仪器进行日常维护，作使用登记。 3.2保管人员负责监督仪器操作是否符合规程，对仪器进行定期维护，保养。 3.3科室负责人负责对仪器综合管理。 4 仪器性能指标 4.1.Alliance e2695系统 4.1.1 泵/溶剂管理系统：相互独立控制的线性双柱塞驱动装置,双压力传感器反馈回路, 无脉动, 无需混合器和阻尼器。 4.1.1.1溶剂数：4 4.1.1.2流速围：0.001--10.000ml/min, 以0.001ml为增量 4.1.1.3流速精度：±0.075%RSD 4.1.1.4流速准确度：±1.0%RSD 4.1.1.5操作压力：0-6000psi(0-410bar) ，可设上,下限 4.1.1.6混合围：0.0~100.0%，以1% 增量 4.1.1.7梯度准确度：±0.5%，不随反压变化 4.1.1.8梯度精度：±0.15%，不随反压变化 4.1.1.9压缩补偿：自动，连续 4.1.1.10梯度曲线：多种梯度曲线: 线性, 凸线和凹线等11种 4.1.1.11系统体积：< 650μL, 不随反压变化
4.1.2 自动进样器/样品管理系统： 4.1.2.1样品盘数：120位,分5个样品盘,每个样品盘可放置24个2ml样品瓶 4.1.2.2进样次数：每个样品可进样1到99次 4.1.2.3进样精度：<0.5%RSD 4.1.2.4样品污染度：<0.1% 4.1.2.5进样准确度：±1 uL 4.1.2.6进样体积：0.1 to 100 uL 4.1.2.7进样线性度：> 0.999 coefficient of deviation 4.1.3 在线柱塞清洗装置： 可在线清洗柱塞杆，可防止因缓冲盐溶液结晶而造成的堵塞，延长密封圈的使用寿命。 4.1.4 在线脱气装置： 4.1.5柱温箱： 4.1. 5.1温度设定围：室温至65℃ 4.1. 5.2温度稳定性：±0.15℃ 4.1. 5.3柱容量：4根7.8X300柱 4.2检测器： 4.2.1 2489双波长紫外检测器 双通道紫外检测器，可进行双波长同时测定；最新专利梯形狭缝池设计，确保低噪音，高灵敏度，宽线性围；Maxplot,Ratioplot优化灵敏度，检测共流出物杂质，可作简单峰纯度鉴定。 4.2.1.1波长围：190-700nm 4.2.1.2 灯：氘灯，具有灯优化软件,可以延长灯的使用寿命，可编程控制灯的开关 4.2.1.3波长准确度：±1.0nm 4.2.1.4波长重现性：±0.1nm 4.2.1.5光谱带宽：5nm 4.2.1.6噪音：5 X 10-6AU 4.2.1.7漂移：≤1 X 10-4AU/hr
高效液相色谱法测定手册
高效液相色谱法测定手册 一目的：制定高效液相色谱法，规范高效液相色谱法的测定操作。 二适用范围：适用于高效液相色谱法的测定。 三责任者：品控部。 四正文 1 简述 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需在色谱分离前或后经过衍生化反应方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱；离子交换填料，用于离子交换色谱；具一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。 高效液相色谱仪基本由泵，进样器，色谱柱，检测器和色谱数据处理系统组成。检测器最常用的为可变波长紫外可见光检测器，其他检测器有如示差折光检测器和蒸发光散射检测器等。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2 高效液相色谱仪的使用要求 2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705—90）”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
高效液相色谱仪操作三要点
高效液相色谱仪操作三要点 高效液相色谱仪（HPLC）现已成为有机化学分析的重要手段之一。同样，在食品分析中，无论是残留分析还是成分分析，HPLC 也已成为不可或缺的分析仪器。和其它分析仪器一样，你若想让HPLC 很好地为你工作、得到可靠的数据，首先你要保养好它，使它处于一个良好的待机状态，这样你操作它进行分析时就可以比较顺利地获得理想的结果。而且良好规范的操作习惯可以延长仪器使用寿命。大家在学校或接受仪器公司培训的时候，老师或工程师会提出很多的操作注意事项。但要是总结归纳一下，最重要的有三点：脱气、过滤和冲洗。本文围绕这三点进行讨论，给新从事HPLC 分析的工作者一点操作建议，希望能对正确的操作仪器有一点帮助。更欢迎有经验的专家介绍使用经验，提出好建议。 一、脱气 流动相脱气对于避免HPLC 系统出问题，顺利得到一个理想的数据是一个很有效的措施。HPLC 系统内是不希望有气泡存在的。HPLC 泵在输送液体时要产生很大的力量，由于气体的压缩比与液体相比大的多，因而当气泡存在时，你将观察到瞬间的流速降低和系统压力下降。如果这个气泡足够大，液相泵将不能输送任何溶剂，而且如果压力低于预先设定的压力低限，泵将停止工作。有些泵设计可以很好地排除气泡，而也有一些泵设计当气泡存在时将停止运转。当一个气泡通过输液泵时，由于系统压力大，气泡通常会溶解在流动相溶液中，随流动相通过柱子。但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压，因而气泡可能在检测器流通池中又显现，在色谱图上会出现不规律的毛刺。为解决这个问题，有些仪器公司设计一个反压控制器，这样可以在检测器出口提供足够的压力保持气泡始终溶解在流动相中直到它们流出检测器。当然，这个压力不能超过流通池所能承受的压力极限，否则可能损坏检测器。紫外/可见光（UV/VIS）检测器的液相色谱图中的噪音毛刺通常是气泡进入并通过流通池的征兆。有些检测器对空气的存在也非常敏感，但表现出的征兆与UV/VIS 不同，例如有报导说，当使用荧光（FL）检测器时，流动相中溶解氧的存在可能会使一些化合物失去荧光性。此外，对于利用待测物质在电极表面发生氧化还原反应引起电流变化而进行检测的电化学（EC）检测器，对流动相中的溶解氧的存在也非常灵敏。此外，气泡的存在有时还会导致保留时间不重现。所以，必须注意消除流动相中的空气，并且还应避免空气由管路（如PTFE 管）渗透进 流动相中。如果适当地关注在使用之前脱去流动相中溶解进的空气，上述这些问题均能避免，或把影响降至最低。常用的脱气方法有如下几种： 1. 吹氦脱气法。 利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa 压力下，以约60 mL/min 流速通入流动相储液容器中10～15min，可以很有效地从流动相中排除溶解的空气，能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置，一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味着1L 氦气通过1L 流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好，但我们国内氦气价格较高，很少有实验室采用此方法。 2. 加热回流法。 此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率，否则溶剂会丢失，混合流动相的比例会有变化。 3. 抽真空脱气法。 此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa 即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化，从而影响到实验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。4. 超声波脱气法。
高效液相色谱仪 液相色谱仪检定规程
高效液相色谱仪(HPLC)是分析实验室常用的测试仪器之一，其应用越来越广泛。此种仪器在使用过程中，难免会出现各种各样的问题，并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚预防和排除这些故障的方法，就可正确地使用仪器并最大限度地发挥仪器的性能。今天我们要从以下几个方面和您分享下在使用高效液相色谱仪中需注意的几个问题。 一、使用试管的问题 1、试管的洁净问题。高效液相色谱分析法是一个很灵敏的分析方法，如果因使用不洁净的试管，便会影响试验结果的准确性。例如，在用甲醇作溶剂来溶解样品时，所用的小试管是用橡胶塞来做盖子的，因此，在每次进样时，都有一个保留时间固定的干扰峰存在，后经证实，此干扰峰是由甲醇浸泡橡胶塞而溶下的组分所产生，换用玻璃试管后，干扰峰消除。 2、塑料试管的溶解问题。近年来，一次性塑料试管给试验人员带来了极大的方便，但是，在使用过程中一定要注意有机溶剂对试管的溶解现象，在利用此种试管提取样品时，有些有机溶剂(如氯仿等)对管壁有溶解现象，这些被溶解下来的物质有时也能在检测器上产生信号，从而干扰样品的测定。这时，可用相同的实验条件先行试验一下，看看不含被抽提物时，提取液在检测器上能否产生干扰信号，如确有干扰信号存在，就只能换用耐有机溶剂的玻璃试管了。 3、被测样品在试管壁上的吸附问题。这个问题也应引起注意，否则也会影响测试结果的准确性，在治疗药物监测(Therapeutic Drug Monitoring,TD
M)中，有些被测药物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃试管的管壁上，因此，操作中宜采用聚丙烯管，为防止提取中吸附现象的发生，可采用0. 5%的已二胺已烷液做为提取剂，可有效地防止吸附。 二、操作进样阀的问题 目前，在分析型高效液相色谱仪中常用的进样阀是7725型进样阀，其内部的六通阀结构使进样操作非常方便，但是，如果使用不当，也会带来问题。例如，在高效液相色谱法的试验过程中，有时会有异常色谱峰的出现以及重现性不好的问题，这主要是由于操作方法不当所引起，要想解决此类问题，需从以下几个方面入手。 1、进样量的控制。用进样阀来进样时，阀内的样品环是定量的，(一般分析型进样阀的样品环体积为20ul)，由于进样时，注射到进样阀内的样品溶液在样品环的管路中有径向的速度梯度(即管轴处比管壁处的液流速度快)。因此，要想使样品环中充满样品溶液，从而使用进样阀来准确地定量，则必须使进样量大于样品环体积的2倍。如果用注射器来控制进样量，则最大只能注射样品环体积1/2的量，这样才能防止部分样品由溢流管溢出从而导致定量分析的误差。 2、进样阀的清洁问题。如果样品环中有上次进样时样品的残留，必然会污染下次注射进的样品，为防止这种现象的发生，应按下列步骤操作：a.进样阀有2个位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置时，以注射器将流动相注入进样阀内清洗几次，每次用量大约40ul；b.然后将进样阀板手扳至
waters 2695 高效液相色谱仪操作规程
Waters Alliance 高效液相色谱仪操作规程 一、概述 1.设备使用范围：主要用于样品中食品添加剂、农药残留、兽药残留、毒素、污染物、非法添加物测定。 2.设备主要技术/性能指标： 四元溶剂混合支持等度和梯度应用，具有11个独特的梯度曲线。自动混合持术能够以任何比例混合四种溶剂。先进的溶剂分配功能。串联流路具有无脉冲溶剂分配，无需使用湿润器。在线溶剂脱气和溶剂自动压缩实现准确的流路。集成的密封清洗实现稳定操作，并且所有溶剂类型均符合规格。 检测器包括光电二极管阵列、示差折光检测器。 二、使用要求 1.存放环境温度10～30℃，湿度≤80%，电压220V。 2.流动相和纯水应用微孔滤膜过滤（纯有机相或含一定比例有机相的用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的用水系滤膜）。一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。如需使用，应重新过滤。流动相的pH值应在色谱柱填料允许的范围内。该泵带有真空脱气机，可不超声，但要在泵电源开启后，等脱气机停止工作后（约需5分钟）再进行泵的其它操作。 3.流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。 三、操作程序 A：开机步骤 1.打开计算机，进入Windows界面。 2.打开仪器电源，待仪器各部分自检完成。 3.将2695泵密封垫清洗管路、洗针管路以及ABCD管路分别放入适当的溶剂。
4.Prime seal wash：按2695面板Diag键，选择Prime SealWash，清洗泵头，直至 出口管有液滴流出，按Halt，停止Prime，再按close关闭界面。。 5.Prime needle wash：再选择Prime NdlWash，清洗进样针1-2次,直至黄管有液体喷出。Close并Exit，退出Diag界面。 6.Dry Prime：按2695面板Menu/Status键,再按Direct Function键做Dry Prime (注: 此操作仅在管路中没有液体时执行,否则直接进入步骤6)。 7.Wet Prime：按2695面板Menu/Status键,再按Direct Function键做Wet Prime，5mL/min分别冲洗当天实验需要使用的管路各2分钟。 8.Purge Injector：按2695面板Menu/Status键,再按Direct Function键做Purge Injector，灌注注射器一次。 B：新建方法 1.运行Empower3软件，用户名：system，密码：manager。 2.点击“Run Samples”选择存放数据文件的项目“project”和仪器系统，进入样 品采集界面，确认仪器通讯正常。 3.按“edit method set ”按钮，建立方法组，设置仪器方法。 4.在右下方仪器方法下拉菜单中，选取设置好的仪器方法，按“monitor”按钮，观 察基线，待基线平稳，按停止按钮,可准备进样。 C：样品分析 1.将样品放入2695样品盘中，记录每一个样品对应的位置号。 2.Empower软件中，先单进样一次，若条件合适，确定运行时间。 3.在“samples”状态编辑样品表，开始自动进样。 D：数据处理及打印 1.在Empower3软件中运行“Browse Project ”，在“Channel”表中打开数据，建 立处理方法。 2.用建立好的处理方法处理数据。 3.在“Results”表中选择要打印的结果，选择“Report method ”，打印数据。
气相色谱仪期间核查规程
气相色谱仪期间核查作业指导书 1 编制目的 在气相色谱仪两次检定/ 校准之间，进行期间核查，验证该设备是否保持检定/ 校准时的状态，确保其检验结果的准确性和有效性。 2 适用范围 适用于本实验室所使用的GC2014C气相色谱仪（FID）的期间核查。 3 核查内容 一般检查、基线噪声、检测限、定量重复性。 4 标准物质 异辛烷—正十六烷标准溶液，浓度：100ng/ μL 5 核查依据 5.1 JJG 700-1999 《气相色谱仪检定规程》； 5.2 气相色谱使用说明书。 6 核查条件 表 1 检测器 FID 检定条件 柱箱温度（℃）160 汽化室温度（℃）230 检测器温度（℃）230 所用标准物质异辛烷—正十六烷 7 核查方法 7.1 一般检查 7.1.1 仪器应有下列标志：仪器名称、型号、制造厂名、出厂日期和出厂编号，国 内制造的仪器应标注制造计量器具许可证标志。 7.1.2 在正常操作条件下，用肥皂液检查气源至仪器所有气体管路的接头，应无泄 漏。 7.1.3 仪器的各调节旋钮、按键、开关、指示灯工作正常。
7.2 基线噪声和基线漂移 按 表 1 设 置色 谱 核查条件，待基线稳定后，调 节输示图，待 基线稳定后，记录基线半小时。测量并计算基线噪音和基线漂移。 7.3 定量重复性 按 表 1 设置色谱核查条件，待基线稳定后，用入 异辛烷 —正十六 烷 标准溶样1μ样6 次，以溶质峰面积测量的相对差 RSD 表 示。按下 面公式计算相对差RSD ： n RSD= ( ) /( 1) 1 100 2 x x n i x i 1 7.4 FID 检测器检测限 将 7.3 中得到的色谱图积分处理，记录标准物质峰面积。按下面公式计算检测 限。 式中： D ——检测限（g /s ）； D FID 2NW A N 基线A ）； W ——标准物 (g) ； A ——标准物质峰面积； F C ——校正后的载(mL/min) 。 8 评定 气相 色谱仪期 间核查的 合表 2 中的要求，视为期间核以 正常使用。 表 2 气相色谱期间核查主要标 检测器 FID 技术指标 基线噪音 ≤ 1.0 ×10 -12 A 基线漂移（30min ） ≤ 1.0 ×10 -11 A 检测限 ≤ 5.0 ×10 -10g/s 定量重复性 ≤ 3% 9 核查周期 在 仪 器 设 备 两 次 检 定 之 间12 个月核查一次。
U3000高效液相色谱仪操纵制度及封面
安徽省产品质量监督检验检验研究院仪器设备 操作规程 （cg———2016） 设备编号（） 仪器名称U3000 液相色谱仪操作规程 编制 审核 批准 2016 年月日
U3000高效液相色谱仪操作规程 一基本原理 U3000高效液相色谱系统由：①输液泵②自动进样器、③色谱柱温箱、④检测器、⑤数据处理系统组成。 使用高效液相色谱时，液体待检测物由流动相带入色谱柱，通过压力在色谱柱中移动，由于试样中各组分在色谱柱内固定相与流动相间分配或吸附特性的差异，不同的物质组分顺序离开色谱柱，经检测器检测得到不同的色谱峰信号，依据组分的保留时间和响应值（峰面积或峰高）进行定性和定量分析。
二操作前准备 1.1流动相的配制： 1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。 1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜（0.45um）还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。 1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。1.2对照品供试品处理： 1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品，用适当的溶剂（最好采用流动相或流动相的主成分）进行充分溶解（也可借助超声波进行超声溶解），使其浓度为 0.1~1mg/mL（根据检测结果再适当调节溶液的浓度）。 1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜（0.45um）还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。 1.3色谱柱的选择：根据样品的性质选择适当的色谱柱。 三操作顺序 1.开机
2.1打开UPS（不间断电源）电源，打开仪器接线板电源开关； 2.2打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑； 2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源； 2.4双击屏幕右下角“服务管理器”快捷图标,出现对话界面后点击“启动仪器控制器”启动,等显示“本地仪器控制器运行空闲”,可以关闭界面。 2.5双击在桌面上的Chromeleon 7图标（工作站主程序）。 2.6在左下方点击仪器，则在右边会自动显示该仪器控制面板。 2.7旋开泵上的排液阀(两圈以上)；设置A通道为100%，点击“冲洗”，然后再出现的对话框中点击“忽略并执行”；（默认冲洗5分钟）；然后分别“冲洗”流路中其他通道气泡；排完气泡后关闭排液阀； 2.8设置流动相的比例及流速后，点击“马达”。此时泵自动会以设置的流速进行运行。
高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤： 1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。 2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。 4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7)．设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。 8)．进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。 9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。 10)．填写登记本，由负责人签字。 注意事项： 1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。 2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
实验室液相色谱仪检定规程
MV_RR_CNG_0173 实验室液相色谱仪检定规程 1. 实验室液相色谱仪检定规程说明 编号 JJG705-1990 名称 （中文）实验室液相色谱仪检定规程 （英文）Verification Regulation for Liquid Chromatograph Used in Laboratory 归口单位 国家标准物质研究中心 起草单位 国家标准物质研究中心 主要起草人 赵 敏 (国家标准物质研究中心) 批准日期 1990年7月28日 实施日期 1991年1月1日 替代规程号 适用范围 本规程适用于新制造、使用中和修理后带有紫外-可见光(固定波 长或可调波长)、荧光(固定波长或可调波长)和差示折光检测器的实验室液相色谱仪的检定。 主要技术 要求 1 外观 2 输液系统 3 柱恒温箱温度设定值误差ΔT ：小于±2℃，控温稳定性误差T c ：小于或等于1℃(无柱箱仪器不检此项)。 4 定性、定量测量重复性 5 检测器性能 是否分级 否 检定周期（年） 2 附录数目 5 出版单位 中国计量出版社 检定用标准物质 相关技术文件 备注 2. 实验室液相色谱仪检定规程摘要 一 概 述 实验室液相色谱仪(以下简称仪器)是由输液系统、进样器、色谱柱、检测器和数据记录 处理装置等几部分组成的分析仪器。图1是典型的液相色谱仪组成方框图。它利用样品中各组份在色谱柱中固定相和流动相间分配系数或吸附系数的差异，将各组份分离后进行检测，并根据各组份的保留时间和响应值进行定性、定量分析。
图1 液相色谱仪组成方框图 二 技术要求 1 外观 1.1 仪器应有下列标志：名称、型号、制造厂名、出厂日期、系列号(或编号)等。 1.2 仪器要成套、完整。 1.3 仪器各调节旋钮、按键、开关等能正常工作，无松动。指示灯灵敏。 1.4 电源线、信号电缆等插、接头与插座紧密配合。 1.5 输液管路应为不锈钢管，接头紧密、牢固，在规定的压力范围内无泄漏。 2 输液系统 2.1 泵流量设定值误差S S：小于±2％～5％；*流量稳定性误差S R，小于±2％～3％。 ：小于3％。 2.2 梯度准确度误差T c i 3 柱恒温箱温度设定值误差ΔT：小于±2℃，控温稳定性误差T c：小于或等于1℃(无柱箱仪器不检此项)。 4 定性、定量测量重复性 4.1 *定性测量重复性误差(8次测量)RSD定性：小于或等于1.5％。 4.2 *定量测量重复性误差(8次测量)RSD定量：小于或等于3.0％。 5 检测器性能 5.1 紫外－可见光检测器 5.1.1 固定波长紫外检测器波长示值误差：小于±2 nm。 5.1.2 可调波长紫外－可见光检测器波长示值误差：小于±2 nm；重复性误差：小于±1 nm。 5.1.3 *基线漂移：小于或等于5×10－3(AU/h)。 基线噪声：小于或等于5×10－4(AU)。 5.1.4 最小检测浓度(静态)：4×10－3g/mL(萘的甲醇溶液)。 5.1.5 线性范围：大于或等于103。 5.1.6 吸光度选择器换档误差：小于或等于2.0％。 5.2 荧光检测器 5.2.1 波长示值误差：小于±5 nm(固定和可调波长)。 5.2.2 *灵敏度：10－8g/mL硫酸奎宁溶液在记录仪上有满量程70％以上的响应(检测器范围档置最小，记录仪输入电压与检测器输出电压相同)。 5.2.3 *基线漂移：小于或等于±5×10－3(AU/h)。 基线噪声：小于或等于±5×10－4(AU)。 5.2.4 *最小检测浓度：5×10－10g/mL(硫酸奎宁的硫酸水溶液)。 5.2.5 线性范围：大于或等于103。 5.2.6 范围选择器换档误差：小于或等于2.0％。 5.3 差示折光检测器
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项 一、操作步骤： 1.开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能） 注：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。 2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。 3.排气结束后，关闭所有排气阀。先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。 注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。（不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同） 4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。 二、使用中常见的问题及注意事项 1.过滤时有时会出现流动相漏液。可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。 注意：操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。 2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。
最新高效液相色谱使用方法
最新高效液相色谱使用方法 一、流动相准备 将流动相按比例混合，注意混合的流动相必须相互溶解，最好能将流动相混合在一起，若相互溶解性不好，可分成两种。流动相配好后，将管路放入，注意不要将瓶口密封。 二、开机 首先将真空泵打开，待泵的指示灯由黄变绿打； 打开600泵开关，按Direct键，进入操作菜单。 三、抽气 抽取管路A液体：先将注射器旋转插入，将旋钮由Run转至 Draw,抽液，完成后将旋钮由Draw至Run，再将注射器旋转取下，反复1-2次，抽至管路内无气泡。 抽取管路B液体：在泵操作菜单上将B设为100%，给0.2ml/min的流速，听到泵转换的声音后，将流速设为0，以抽取管路A的步骤进行抽气。 四、调节流动相比例与流速 在泵操作菜单上设定流动相比例，并以0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml/min的速度逐步升高流速，每次间隔3-5分钟。 五、2410示差检测器的使用 1、打开2410示差检测器开关 2、调整检测器内、外温度 3、实验前一天晚上，使用“purge”状态平衡过夜，若第二天还要做实验，结束工作后不关机，节省第二天的平衡时间，保持0.2ml/min的流速。 六、2487紫外检测器的使用 1、打开2487示差检测器开关，机器自动进入自检过程，约需7分钟。 2、设置检测波长 3、预热30分钟左右，即可注样测定。
试验四、番茄内源激素高效液相色谱法测定 一、样品准备 取新鲜番茄根、茎、叶5克左右，液氮冷冻，放入冰箱储存。配80％甲醇，冰箱冷冻。 二、提取 样品放入预冷研钵，加l0ml 80％的冰冻甲醇研磨至匀浆，转入小烧杯中，再用甲醇清洗研钵2次，每次l0ml，转入小烧杯中。小烧杯放入冰箱(0～4℃)冷藏14小时以上。 三、过滤 取出用漏斗滤纸过滤，并用10m180％甲醇清洗残渣，合并滤液；如果提取液中沉淀物或色素多，则用10000g离心l0~12min，上清液转入冻干瓶中。 四、浓缩 将冻干瓶中的液体用减压蒸干机蒸干(至瓶中液体结冰)，然后用2m1 80％的甲醇冲洗，如果有浑浊物，再次用离心机12000g离心l0min，倒入带有刻度的试管中，为保证试管中的液体有5ml左右，将不足5ml的试管中再加入一些甲醇。 五、萃取 提取液中加入等量石油醚萃取，用力振荡，待静止分层后，用胶头滴管吸取上层液体弃去，此过程反复进行，直至醚层不再有颜色。 六、过柱纯化 萃取脱色后液体吸入针管，通过C18小柱滤除色素，用1~2m1甲醇清洗小柱一次，若滤出色素，将液体吸回，用新小柱重新滤一次（小柱使用前要用甲醇浸泡，用后再用甲醇反复冲洗，再浸泡）。 七、二次浓缩 液体转入蒸发皿中，60℃蒸干，用lml甲醇洗脱。 八、过滤 0．45um滤膜过滤，滤液收集到小瓶中，冷冻待测定。 九、测定与计算 用标样做标准曲线，分别为10，50，100，200，500mg／ml。进样量为20ul。 测定条件：流速为lml／min，柱温设定为35℃，测定波长为260nm，流动相甲醇：3％乙醇＝45：55 计算：通过曲线计算样品中激素浓度。
高效液相色谱仪日常维护
高效液相色谱仪维护保养规程 1. 高压恒流泵为整个色谱系统提供稳定均衡的流动相流速，保证系统的稳定运行和系统的重现性。高压输液泵由步进电机和柱塞等组成，高压力长时间的运行回逐渐磨损泵的内部结构。在升高流速的时候应梯度势升高，最好每次升高0.2ml/min当压力稳定时再升高，如此反复直到升高到所需流速。 2. 保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洁；定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洁过滤器，清洁后用纯水清晰到中性，保持过滤器畅通无阻。 3. 所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.45um薄膜过滤。而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。 4. 所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.45um水膜过滤后使用，超纯水和哇哈哈纯净水或同等级水可直接使用，所有试液均新用新配，配置后液体需经过0.45um水膜过滤后使用，并且在进样的样品都必须经过0.45um薄膜针筒过滤后进样。 5.流动相保存时间：纯有机相，比如甲醇，乙腈等为1个月；水相（含超纯水，磷酸水，乙酸水，缓冲盐水，离子对试剂等）最好现配现用，存放不超过3天为宜；水相与有机相混合的为7天。有效期内，每一到两天要进行脱气。水相每两天进行过滤、脱气，有效期内如发现有长毛和浑浊，视为变质要进行重新配制。
6. 采用保护柱，延长柱寿命。如污染物堆积于保护柱柱头，造成柱压升高，柱效下降，峰型变差时，卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。 7. 在仪器检测完了后，均使用水：甲醇=95：5清洗了管路和色谱柱1 小时以上，使用水：甲醇=5：95保存管路和色谱柱40分钟以上。 8. 定期清洗在线过滤器：把在线过滤器卸下，先用甲醇超声30分钟，最后用超纯水超声30分钟。 9. 仪器使用结束，饱和完色谱柱后，在不接通色谱柱的情况下，将所有非纯有机试剂通道插入已过滤并超声处理的纯化水中，开启泵。冲洗30分钟后，将纯化水换成色谱甲醇冲洗30分钟后，关闭电源。 10. 实验结束后用洁净干布擦拭仪器及电脑表面，切忌用湿布擦拭及水冲洗，最后罩上仪器罩。