浓缩胶分离胶-配方

不连续胶的配置

2017.8.18 10% SDS-PAGE(mL)

12% SDS-PAGE

浓缩胶（mL）

配胶操作步骤：

⑴配胶准备：将玻璃板、梳子有清洁剂或稀酸泡洗，电泳装置用水冲洗并晾干，

亦可用酒精棉球擦洗灌胶面晾干，根据厂家说明书安装玻璃板。

⑵确定所需凝胶溶液体积，按上表给出的数值在一小烧杯中按所需丙烯酰胺浓

度配制一定体积的分离胶溶液。一旦加入TEMED，马上开始聚合，故应立即快速旋动混合物并进入下步操作。

(3)灌bio-rad迷你垂直板两块板共约需7.5ml.故实际操作时，我们通常在加AP

和TEMED前将上述混合液均分为两份。一份放4度保存，下次用；一份继续加0.075ml的AP和3μl的TEMED，混匀后，立即灌胶。用双蒸水封胶，压平胶面。。留出灌注浓缩胶所需空间(梳子的齿长再加0.5-1cm)。(4)等待过程中，配制浓缩胶溶液，AP和TEMED使用前加入。也可进行样品的

准备工作，具体做法在转膜中将又专门讲解。

(5)室温约30分钟-40分钟后聚合。倒去双蒸水，再用滤纸吸净残留水。灌浓缩

胶，立即将梳子插入玻璃板间，完全聚合需15-20分钟

(6)浓缩胶聚合完全后，小心移出梳子。把凝胶固定于电泳装置上，上下槽各加

入Tris-甘氨酸电极缓冲液。