中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)

简介：

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。

Leagene 中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI 磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中。该染液专门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色, 碱性磷酸酶活性部位呈蓝色，位于胞桨，结果较金属盐沉淀法可靠。

组成：

自备材料：

1、载玻片

2、 4%多聚甲醛

3、显微镜

操作步骤(仅供参考)：

(一)、涂片

1、制备新鲜血液或骨髓细胞涂片，NAP 固定液固定，充分水洗。

2、滴加配制好的NAP 孵育液，孵育，水洗。

3、滴加核固红染色液或甲基绿染色液复染。水洗、晾干、镜检。

编号名称

DE0003 4×2ml DE0003 4×10ml Storage 试剂(A): NAP 固定液 2ml 10ml RT 避光试剂(B): NAP 孵育液

B1: AS-BI 染色液 1ml 5ml -20℃ 避光 B2: FBB 染色液

1ml

5ml

4℃ 避光

临用前，B1:B2混合，即为NAP 孵育液，即配即用。试剂(C): 核固红染色液 2ml 10ml RT 避光试剂(D): 甲基绿染色液 2ml

10ml RT 避光

使用说明书

1份

(二) 贴壁培养细胞

1、取6孔板或其他容器培养的细胞，弃液，PBS清洗干净。

2、加入NAP固定液固定或多聚甲醛固定，PBS清洗。

3、滴加配制好的NAP孵育液，放入湿盒中，避光孵育，PBS清洗。

4、入核固红染色液或甲基绿染色液复染。PBS清洗、镜检。

染色结果：

NAP阳性颗粒蓝色

细胞核红色(核固红)或绿色(甲基绿)

结果判断：一般以积分报告结果，根据100个中性粒细胞阳性颗粒进行0～4+计分。

细胞分值染色特点

0 无颗粒

1 稍有颗粒

2 中等程度颗粒

3 多数颗粒

4 充满颗粒

临床意义：

1、类白血病反应积分明显增高，未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。

2、急性细菌性感染积分明显增高，病毒性感染积分多正常或减低。

3、再生障碍性贫血积分常增高，PNH、MDS积分常减低。

注意事项：

1、血液或骨髓细胞涂片应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。

2、培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。

3、NAP孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。

4、复染时，核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。

5、每次染色时，应有阳性对照片。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

组织及血液碱性磷酸酶(AKP ALP)活性检测试剂盒说明书微量法

组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP）活性检测试剂盒说明书微量法货号：BC1595 规格：100T/48S 产品说明： AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。自备仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。标准品：液体×1支（EP管中），2μmol/mL酚标准液，4℃保存。操作步骤：一、粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、10000rpm离心10min，取上清液待测。 2.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。二、测定步骤： 1.分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。 2.试剂三置于37℃水浴中预热30min以上。 3.空白管：取EP管，加入4μL蒸馏水，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；

加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A空白管。 4.标准管：取EP管，加入4μL标准品，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A标准管。 5.对照管：取EP管，加入40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀；最后加入4μL上清液，混匀后于510nm测定吸光度，记为A对照管。 6.测定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A测定管。其中标准管和空白管只需做一管，测定管和对照管每个样均需做。三、AKP/ALP活性计算： a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1.血液中AKP/ALP活力计算活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚定义为一个活性单位。 AKP/ALP活力(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷V样×V样总÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02mL；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V样总：1mL；T：反应时间（min），15min。 2.组织中AKP/ALP活性计算（1）按蛋白浓度计算活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚。 AKP/ALP(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V样)÷T = 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr （2）按样本质量计算活性单位定义：37℃中每克样品每分钟催化产生1μmol酚。 AKP/ALP(U/g)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(V样÷V样总×W)÷T

NGAL中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白

一种新的肾损伤标志物— 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的临床意义中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白( neutrophil gelatinaseassociated lipocalin，NGAL) ，又称人脂质运载蛋白2( lipocalin 2，Ln2) 或噬铁蛋白( siderocalin) ，是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。近年来，NGAL 作为一种新的肾损伤标志物倍受关注。 1、NGAL 的生物学特性 NGAL 是1993 年Kjeldsen 等［1］研究中性粒细胞时发现的一种特殊颗粒组分，与明胶酶B 即基质金属蛋白酶9( matrixmetalloproteinase-9，MMP-9) 密切相关。人类NGAL 基因定位于第9 号染色体长臂( 9q34) ，全长5 869 bp，包括1 695bp 的5'端非转录区、178 bp 的3'端非转录区及由7 个外显子和6 个内含子构成的3 696 bp 的原初转录区; 其相对分子质量为25 000 bp。血小板活化因子( PAF) 、白三烯-B4( LT-B4)和N-甲酸基-甲硫氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸( N-formyl-Met-Leu-Phe) 等是NGAL 的配体［2］。在生理状态下，中性粒细胞、肾小管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、支气管上皮黏液细胞等分泌少量NGAL，而脑和周围神经、结肠、子宫和卵巢、胎盘、甲状腺等组织细胞中NGAL 的表达呈阴性。 NGAL 的生理功能尚不完全清楚，可能参与不同的生理、病理过程，涉及胚胎发育、细胞分化、肿瘤的发生发展、细胞凋亡、炎症免疫应答、脂质代谢等。在胚胎期，NGAL 发挥类似生长因子的作用，参与各类组织发育、生长及分化，促进乳腺癌、食管癌等肿瘤细胞增殖。NGAL 与MMP-9 以二硫键形成12 500 bp 的复合物，延长MMP 的蛋白水解活性，促进MMP-9 对细胞基底膜的降解，从而浸润周围基质，介导癌细胞转移。过去研究认为，NGAL 促进细胞凋亡，但近年来研究发现NGAL 还是一类应激蛋白，在外界有害物质刺激下，细胞分泌NGAL 是一种机体自身防御机制，使组织细胞免于凋亡［3］。NGAL 还是一类新的急性期反应蛋白，作为介导铁离子向胞内运输的新型载体，通过竞争性夺取螯合物中的铁来阻止细菌对铁的吸收，从而抑制细菌生长。 2、NGAL 是急性肾损伤的标志物 2．1 早期诊断急性肾功能损伤( AKI) 时血、尿NGAL 浓度通常会迅速升高，2 h 最为明显( 比临界值升高几十至几百倍) ，血清肌酐( sCr) 、尿酶等传统指标往往要在24 ～72 h 才后明显升高，因而NGAL 可用于AKI 的早期诊断。Mishra等［4］在体外循环术并发AKI 患儿的队列研究中发现，2h 尿NGAL 诊断AKI 的AUCROC 为0．998，其临界值为50 μg /L( ELISA 法) 时，敏感性、特异性分别为100%、98%，而血清NGAL 诊断AKI 的AUCROC 为0．906，其临界值为25 μg /L 时，敏感性、特异性为70%、94%; 多元回归分析显示，2 h 尿NGAL 水平是预测AKI 的强有力预测因子。也发现成年患者2 h 尿、血清NGAL 水平是诊断AKI 的可靠的早期诊断指标。meta 分析表明，NGAL 对AKI 的诊断效能受到标本类型、年龄、检测方法等因素影响，但NGAL 对儿童AKI 的诊断效能优于成年人，可能是成年人受到其他慢性疾病等因素影响。值得注意的是，脓毒血症等危重疾病患者，因受到炎症反应等因素影响，NGAL 可能并不适用于AKI 的早期诊断，诊断特异性欠佳。北美地区研究发现，143 名全身炎症反应综合征及脓毒性休克患儿入院后24 h 内，血清NGAL 诊断AKI 的AUCROC为0．677，在临界值为139 ng /mL 时，敏感性为86%，特异性仅为39%。经多变量分析后发现，血NGAL 并不是发生AKI 事件的预测指标［5］。在成人患者研究中也得到类似结论。另有研究表明，危重患儿48 h 内尿液NGAL 水平可以准确预测AKI 的发生( AUCROC 为0．79) 。但当sCr 升高后，AUCROC降至0．63［6］。ICU 中的AKI 成人患者血浆NGAL水平在48 h 后与正常对照组亦无显著性差异［7］。但李萍珠等［8］发现尿NGAL 可作为脓毒血症后并发AKI 的早期诊断标志物，准确性达0．968，这可能与种族间水平差异有关。 2．2 监测病情进展NGAL 还可以反映肾功能损伤的严重程度。Kusaka 等［9］在接受

组织及血液碱性磷酸酶试剂盒说明书

货号: QS2002 规格：50管/24样碱性磷酸酶（alkaline phosphatase ，AKP/ALP）活性测定试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义： AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。测定原理：在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510 nm吸光度增加速率，来计算AKP 活性。自备仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。标准品：液体×1支（EP管中），2 μ mol/mL酚标准液，4℃保存。粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g离心10min，取上清液待测。 2.细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。测定步骤： 1. 分光光度计预热30min，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。 3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸馏水，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A空白管。 4. 标准管：取EP管，加入20μL标准品，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A标准管。 5.对照管：取EP管，加入20μL上清液，200μL蒸馏水，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A测定管。 6. 测定管：取EP管，加入20μL上清液，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A测定管。第1页，共2页

人(Human)中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒说明书

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL） ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。

碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP微板法)

碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法) 产品简介：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。 Leagene 碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP 比色法，其检测原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。在碱性条件下p -nitrophenol 转变成醌式结构，呈较深的黄色，产物黄色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法测定处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。产品组成：自备材料： 1、水浴锅或恒温箱 2、 96孔板 3、酶标仪操作步骤(仅供参考)： 1、配制显色工作液：取出1支pNPP ，恢复至室温后溶解于ALP Assay buffer ，混匀，冰上预冷备用。新配制的显色工作液应在6h 内用完。 2、配制标准品工作液：取出p -nitrophenol(10mM)恢复至室温后，取10μl 溶解于190μ 编号名称 TE0002 100T Storage 试剂(A): ALP Assay buffer 15ml 4℃ 试剂(B): pNPP 2支 -20℃ 避光试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃ 避光使用说明书 1份

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 简介：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI 磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中, 碱性磷酸酶活性部位呈红色，位于胞桨。组成：操作步骤(仅供参考)： 1、血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP 固定液固定，水洗。 2、滴加配制好的ALP 孵育液，放入湿盒中，避光孵育，水洗。 3、Lea 苏木素染色液复染或甲基绿染色液复染。 4、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。染色结果：临床意义： 1、类白血病反应积分明显增高，未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。 2、急性细菌性感染积分明显增高，病毒性感染积分多正常或减低。 3、再生障碍性贫血积分常增高，PNH 、MDS 积分常减低。编号名称 DE0004 4×2ml DE0004 4×10ml DE0004 4×20ml Storage 试剂(A): ALP 固定液 2ml 10ml 20ml RT 避光试剂(B): ALP 孵育液 B1: AS-BI 染色液 1ml 5ml 10ml -20℃ 避光 B2: FBB 染色液 1ml 5ml 10ml -20℃ 避光临用前，按B1:B2=1:1比例混合，即为ALP 孵育液，即配即用。试剂(C): Lea 苏木素染色液 2ml 10ml 20ml 4℃ 避光试剂(D): 甲基绿染色液 2ml 10ml 20ml RT 避光使用说明书 1份 ALP 活性部位红色细胞核蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)

碱性磷酸酶测定试剂盒注册技术审查指导原则(2016年修订版)

附件1 碱性磷酸酶测定试剂盒注册技术审查指导原则（2016年修订版）本指导原则旨在指导注册申请人对碱性磷酸酶测定试剂盒注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。本指导原则是对碱性磷酸酶测定试剂盒的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。一、适用范围碱性磷酸酶测定试剂盒是指基于分光光度法原理对人血

清、血浆或其他体液中的碱性磷酸酶活性进行体外定量测定的试剂。本指导原则适用于进行产品注册和相关许可事项变更的产品。碱性磷酸酶活性的测定方法目前主要有连续监测法和比色法两类： 1.连续监测法（磷酸对硝基苯酚底物法）碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚（4-NPP），生成对硝基苯酚（4-NP），在特定波长处监测吸光度变化速率，可计算碱性磷酸酶活性。 2.比色法（磷酸苯二钠底物法）碱性磷酸酶催化水解磷酸苯二钠，生成游离酚，酚与4-氨基安替比林结合，经铁氰化钾氧化生成红色的醌衍生物，在特定波长处监测吸光度值，可计算碱性磷酸酶活性。从方法学考虑，本文主要指以碱性磷酸酶水解底物引起特定产物的吸光度的改变对碱性磷酸酶活性进行定量测定的体外诊断试剂，不包括干化学和酶联免疫检测试剂。依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），碱性磷酸酶检测试剂属于酶类检测试剂，管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。二、注册申报资料要求

【CN110133276A】一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910258412.8 (22)申请日 2019.04.01 (71)申请人芜湖森爱驰生物科技有限公司地址 241000 安徽省芜湖市芜湖县安徽新芜经济开发区南次一路369号 (72)发明人王晓波　朱雪姣　朱海峰　 (74)专利代理机构北京润平知识产权代理有限公司 11283 代理人刘兵 (51)Int.Cl. G01N 33/68(2006.01) (54)发明名称一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 (57)摘要本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，所述中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，包括相互独立的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1由以下物质组成：磷酸盐缓冲液80～ 120mmol/L；谷胱甘肽0.5～1.5mmol/L；表面活性剂0.02～1.5g/L；防腐剂0.05～2g/L；牛血清蛋白15～30g/L；解离剂0.02～1g/L，且所述试剂R1 的pH值为6.5～7.5；所述试剂R2由以下物质组成：磷酸盐缓冲液100～150mmol/L；促凝剂8～ 15g/L；阻断剂2～8mg/L；蔗糖5～15mg/L；中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的纳米微球 20～50mg/L；防腐剂0.01～0.05g/L；其中，试剂 R2中组分浓度为组分在试剂中的终浓度，且所述试剂R1的pH值为6.5～7.5。本发明提供的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，检测灵敏度高。权利要求书2页说明书7页CN 110133276 A 2019.08.16 C N 110133276 A

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白参考值范围确定资料

转铁蛋白（TRF）测定试剂盒（免疫比浊法）参考值范围确定资料深圳市锦瑞电子有限公司

转铁蛋白（TRF）测定试剂盒（免疫比浊法）参考值范围确定资料转铁蛋白(Transferrin，TRF，TF，又称为铁传递蛋白、血清运铁蛋白、运铁蛋白、嗜铁蛋白、铁糖蛋白)是一种重要的β-球蛋白，是脊椎动物体内铁的运输者。转铁蛋白是体液中不可缺少的成分，不仅参与铁的运输与代谢，参与呼吸、细胞增殖和免疫系统的调节，还能调节铁离子平衡和能量平衡，更具有抗菌杀菌的保护功能，因而转铁蛋白具有较全面的蛋白质生理功能。转铁蛋白的主要生理功能是把铁离子从吸收和储存的地方运输到红细胞供合成血红蛋白用，或输送到机体的其他需铁部位。转铁蛋白(transferring，TRF)作为一种特殊的蛋白, 已被广泛应用于临床。血清TRF测定可用于贫血的诊断及治疗的监测。血清TRF升高的最常见原因是缺铁性贫血，研究发现血清铁降低，TRF升高可产生在贫血发生之前。目前，血清TRF测定已普遍应用于贫血的诊断和对治疗的监测。血清TRF测定还有助于肝、肾疾病的病情观察和预后判断。近年研究表明，TRF主要在肝脏内合成，反过来又可促进肝细胞的再生，故肝脏发生病变，血清TRF含量降低，且与病情的严重程度一致。 1. 材料和方法 1.1 对象 2011年9－12月到深圳市蛇口人民医院的体检人员，涉及人群有干部、工人、学生、公司职员和医院职工等，对肝肾功能、血脂、血尿常规各项检测指标正常，血压、B超、心电图、X光透视心肺正常的人员。按性别分为两组，每组各120个参考值数据。 1.2 仪器与试剂采用锦瑞电子有限公司的全自动生化分析仪GS400，试剂为本公司生产的液体双试剂，转铁蛋白（TRF）采用免疫比浊法。校准品和两水平值的质控品均为RANDOX生产，校准品为CAL2350复合定标液，批号为685UN；质控为HN1530和HN1532，批号分别为621UN、434UN。

碱性磷酸酶显色剂使用方法

5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate (5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐), BCIP/NBT （四唑硝基蓝）是碱性磷酸酶底物, 产物为深蓝色, 在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP被水解, 水解产物与NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。使用方法 1. 在膜或组织切片，最后一次洗涤完毕后，加入适量BCIP/NBT染色工作液 2. 室温避光孵育5-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深度. 3. 用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应 4. 膜标本可干燥后避光保存；组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可以用中性红复染染色干细胞成骨诱导的常用染色方法有几种碱性磷酸酶（ALP）是成熟成骨细胞的标志性酶，同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。成骨细胞染色方法以ALP为目标物的检测方法： 1 Gomori钙钴法【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。【孵育液配制】 3%β-甘油磷酸钠5ml 2%巴比妥钠5ml 蒸馏水10ml 2% CaCl2 10ml 2% MgSO4 1ml 【步骤】（1）将无菌的玻片放入培养皿中，传代时加入适量的细胞悬液，作细胞爬片，呆细胞长满玻片后取出。（2）PBS冲洗后用冷丙醇固定10min，蒸馏水冲洗数次。（3）入孵育液中，37℃孵育4-6h。自来水冲洗数次。（4）2%硝酸钴中浸3-5min，蒸馏水洗数次。（5）1%的硫化铵中2min，自来水冲洗，自然干燥，封固。【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。 2偶氮偶联法：【孵育液配制】萘酚AS-BI磷酸盐20mg DMSO 0.5ml 0.2mol/L巴比妥醋酸缓冲液（PH 9.2）50ml 六偶氮副品红0.5ml

碱性磷酸酶偏高的原因

碱性磷酸酶偏高的原因当受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。[1] 碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因，具体讨论如下： 1、生理性原因儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期，这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃，所以检测时值会偏高。 2、病理性原因当人体患有阻塞性黄疸、、继发性肝癌、性等时，过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起中的碱性磷酸酶偏高。 3、骨骼有病时，例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。 4、其他不是很常见的疾病，例如肾病、严重性贫血、甲状腺机能不全、白血病等[2]。有何影响碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、、、胆汁淤积性肝炎等的检查。它主要经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、、、时，血清碱性磷酸酶亦可升高，所以对人体的危害是比较大的。酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于，定位于溶酶体内。ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。

(1)前列腺癌：尤其是转移癌ACP明显升高。PAP对的诊断较ACP敏感，二者对晚期前列腺的诊断、疗效观察及预后监测价值更大。 (2)血液病：白血病、、匹克病、、溶血性贫血等ACP活性亦增高。 (3)非恶性前列腺疾病：前列腺炎、前列腺肥大、前列腺梗死等ACP活性也增高。 (4)骨疾病：变形性骨炎、成骨不全、软骨病、骨肉瘤、及某些非前列腺恶性肿瘤的骨转移，ACP活性也可升高。[1] (5)其他：，急、慢性肾炎、尿潴留等ACP活性可增高。是一种糖酵解酶。存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。是能催化乳酸脱氢生成的酶，几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2，〉LDH1。如有释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。乳酸脱氢酶大于300，属于增高，600，高出1倍，有参考价值。如果排除急性心肌梗死、巨幼细胞性贫血及溶血性疾病后，首先要考虑恶性肿瘤。虽不是恶性肿瘤唯一的诊断，但确实对肿瘤诊断有重要的临床意义，最好做进一步检查，防患于未然。糖的吸收途径：小肠绒毛吸收小肠内葡萄糖的方式为二级。小肠内钠离子浓度高于小肠绒毛内的钠离子浓度，因而两者之间存在钠离子浓度差的，通过该钠离子的浓度差，葡萄糖和钠离子可以从小肠内通过离子通道进入小肠绒毛；

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求北京赛诺浦

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）适用范围：用于体外定量测定人体血浆和尿液中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白。 1.1 试剂盒包装规格试剂1：1×20mL，试剂2：1×5mL；试剂1：2×60mL，试剂2：2×15mL；试剂1：3×40mL，试剂2：3×10mL；试剂1：4×60mL，试剂2：4×15mL；试剂1：2×400mL，试剂2：1×200mL；试剂1：2×40mL，试剂2：2×10mL。校准品（选配）：6×0.5mL（六水平）；6×1mL（六水平）；6×3mL （六水平）。质控品（选配）：1×0.5mL；1×1mL；1×3mL。 1.2 试剂盒主要组成成分注：校准品和质控品存在批特异性，具体浓度见对应批次产品标签。

2.1 外观试剂1：无色至淡黄色澄清液体；试剂2：乳白色液体。校准品：无色至淡黄色澄清液体。质控品：无色至淡黄色澄清液体。 2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 试剂空白吸光度在37℃、546 nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度范围应在(0.3，2.0)之间。 2.4 分析灵敏度测定浓度在150ng/mL附近的样本时，吸光度变化值（ΔA）应不小于0.005。 2.5 线性在（50，2500）ng/mL范围内：线性相关系数r不小于0.990；在[500，2500）ng/mL范围内，线性相对偏差应不大于±15%；（50，500）ng/mL范围内，线性绝对偏差应不大于±75ng/mL。 2.6 重复性重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于10%。 2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于15%。 2.8 准确度与已上市产品进行比对试验，在（50，2500）ng/mL范围内，线性相关系数r不小于0.975。在（50，500]ng/mL区间内线性绝对偏差不大于± 75ng/mL；在（500，2500)ng/mL区间内线性相对偏差不大于±15%。 2.9 质控品赋值有效性测定结果在靶值范围内。 2.10 校准品溯源性

碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液法)产品技术要求beiken

碱性磷酸酶测定试剂盒（NPP底物-AMP缓冲液法）适用范围：本品用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性。 1.1包装规格 1.2产品组成成分试剂盒由试剂A 、试剂B 组成，各组分见表2。表2 试剂组成 2.1外观试剂为澄清、透明溶液，无沉淀及絮状悬浮物，外包装完整无破损。 2.2净含量用通用量具量取，试剂的净含量应不少于标示量。 2.3试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度

用试剂盒测试生理盐水，在405nm的波长下测试，1cm光径下试剂吸光度值不大于0.80。 2.3.2试剂空白吸光度变化率用试剂盒测试生理盐水，试剂空白吸光度变化率ΔA/min，应不大于0.005。 2.4分析灵敏度测试一定浓度的碱性磷酸酶，120U/L的碱性磷酸酶引起的吸光度变化率ΔA/min 大于0.024。 2.5线性区间试剂线性在[25，750] U/L区间内，线性相关系数│r│应不小于0.990，当检测范围在[25，100）U/L区间内，绝对偏差不超过±10U/L；当检测范围在[100，750]U/L区间内，相对偏差不超过±10%。 2.6精密度 2.6.1重复性用质控品重复测试所得结果的变异系数CV应不大于5%。 2.6.2批间差用同一水平浓度的质控品分别测试3个不同批号的试剂盒，其相对偏差不大于10%。 2.7准确度进行比对试验（与国内批准上市的试剂盒进行比对），用线性回归方法计算两组结果的相关系数（│r│应不小于0.990）及每个浓度点的偏差。当测试值在[25，40）U/L区间内，偏差不超过±4 U/L；当测试值在[40，750]U/L区间内，偏差不超过±10%。 2.8稳定性试剂贮存在2℃～8℃条件下，有效期为18个月。有效期满后，分别检测2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项，结果符合各项要求。

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒使用说明

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法) 货号：G5610 有效期：6个月有效。产品内容：产品规格试剂(A):ALP Assay buffer 2.5ml 试剂(B):ALP显色液 2.5ml 试剂(C):显色基液7.5ml 试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1ml 试剂(E):ddH2O1ml 产品说明：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过酶标仪测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试

剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。自备材料： 96孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪操作步骤(仅供参考)： 1、配制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O，使浓度达到0.05mg/ml，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。按照下表稀释系列标准品溶液。 012345 010******** Phenol(0.05mg/ml)(μ l) ddH2O(μl)55453525155 相当于金氏单位(U/L)010******** 2、准备样品：（1）细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。（2）血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。（3）高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS 等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒(胶体金免疫层析法)产品技术要求普迈德

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒（胶体金免疫层析法）适用范围：本测定试剂盒用于体外定量测定人血清、血浆、全血或尿液样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的含量。 1.1 包装规格 10人份/盒、20人份/盒、50人份/盒。 1.2 主要组成组分每盒含10/20/50人份试纸条、样品缓冲液（0.1mol/L的Tris-HCl缓冲液，pH 值7.0）和标曲信息卡（二维码）。每人份试纸条配套1份检测卡、1套取样滴管（选配）和1包干燥剂。检测卡由样品垫、硝酸纤维素膜（T线包被鼠抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体；C线包被羊抗鼠多克隆抗体）、金标垫（包被胶体金标记的鼠抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体）、吸水纸、塑料载板组成。 2.1 物理性状 2.1.1 外观测定试剂应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固；标签字迹清晰，无破损。 2.1.2 膜条宽度测定试剂的膜条宽度≥2.5mm。 2.1.3 液体移行速度液体移行速度应不低于10mm/min。 2.2 空白限空白限应不高于50ng/mL。

2.3 精密度 2.3.1 批内精密度批内精密度CV(%）应不高于12.0%。 2.3.2 批间精密度批间精密度R(%）应不高于15.0%。 2.4 线性在[50，1500]ng/mL的范围内，线性相关系数应不低于0.990。 2.5 准确度回收率应在85%～115%之间。 2.6 分析特异性含浓度不低于35mg/mL白蛋白的零浓度中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白样本，检测结果不高于50ng/mL。 2.7 稳定性将测定试剂在4℃～30℃的环境中放置18个月后，取样分别检测2.1、2.2、2.3.1、2.4、2.5、2.6项，结果应符合各项目的要求。 2.8 校准品溯源性按照GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定建立溯源性，提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，溯源至公司内部工作校准品，并与已上市产品比对赋值。

BCIP NBT碱性磷酸酶显色试剂盒

仅供科研使用版本号：180718 BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒【产品组成】【保存条件】 4℃,避光,12个月。【产品概述】 BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit)是一种用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS鉴定等的试剂盒。BCIP/NBT是碱性磷酸酯酶的常用底物，在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。 BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit可用于细胞或组织的碱性磷酸酯酶显色包括诱导多功能干细胞iPS的鉴定，也可用于Western等结合有碱性磷酸酯酶的膜的显色检测\细胞或组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。【使用方法】 1、对于组织切片或细胞样品或膜，在与碱性磷酸酯酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。 2、对于检测内源性碱性磷酸酯酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。 3、按照如下比例依次加入各溶液，混匀后即配制成BCIP/NBT染色工作液： 4、洗涤完毕后，去除洗涤液。 5、加入适量BCIP/NBT染色工作液，确保能充分覆盖样品。 5、室温避光孵育5～30min或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。 6、去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸馏水洗涤1～2次即可终止显色反应。 7、对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色，以便于观察。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋(NGAL)

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白一、临床适应症背景情况中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（Neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）又称人脂质运载蛋白2(lipocalin2,Ln2)或噬铁蛋白(siderocalin)，是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。近年来，NGAL作为一种新的肾损伤标志物倍受关注。早期急性肾损伤、慢性肾病、心肾综合症等疾病血清和尿液中NGAL会显著升高，且其水平监测对病情轻重、疗效及预后判断具有较好的诊断价值。临床检测NGAL主要有免疫层析法、免疫比浊法、速率色散比浊法、乳胶增强免疫比浊法等。胶乳增强免疫比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。肾脏损伤约占所有泌尿生殖道损伤的65%左右。急性肾损伤是一组临床综合征，是指突发(1-7d 内)和持续(>24h)的肾功能突然下降，定义为血清肌酐至少上升0.5mg/dl 1，表现为氮质血症、水电解质和酸碱平衡以及全身各系统症状，可伴有少尿（<400ml/24h或17ml/h）或无尿（<100ml/24h）。肾病的发病迁延难愈，时间超过三个月，病人尿液和相关的血液指标出现异常，肾脏病理学、影像学发现异常，或肾脏的肾小球有效滤过率低于60%，都可统称为“慢性肾病”。慢性肾病如未能及时有效救治，导致病情恶化进展，则随病程迁延，慢性肾病患者将发展成为慢性肾功能不全、肾衰竭，最终形成尿毒症。心肾综合征（cardio-renalsyndrome，CRS)即心脏或肾脏对另一器官的损害不能代偿时，互为因果,形成恶性循环，最终加速心脏和肾脏功能的共同损害和衰竭。其发病率、死亡率高，给社会和患者带来沉重的负担。目前对心肾综合征的认识有限，缺乏有效的治疗措施，是临床处理的难题。早期诊断急性肾功能损伤时血、尿NGAL浓度通常会迅速升高，2h最为明显( 比临界值升十至几百倍)，血清肌酐、尿酶等传统指标往往要在24～72h才后明显升高，因而NGAL可用于急性肾功能损伤的早期诊断。监测病情进展NGAL还可以反映肾功能损伤的严重程度。评估预NGAL可作为急性肾功能损伤的预后指标之一。研究发现，慢性肾病患者的血清、尿NGAL水平显著高于正常人群，并与肾小球滤过率呈密切负相关，而血清肌酐与肾小球滤过率的关联程度不及NGAL。因此，慢性肾病患者NGAL水平不仅是优于血清肌酐反映肾小球滤过率下降的指标，更是评价慢性肾病患者肾脏损伤程度的标志物。心肾综合征是一种心脏和肾脏的病理生理紊乱，即由一个器官的功能不全导致的另一个器官的功能不全，死亡率高，共分为5 个类型。研究发现血NGAL诊断1型心肾综合征时，敏感性和特异性分别为100%、86.7%。因此，作为肾损伤的早期诊断指标，密切监测NGAL水平，有利于临床医生正确评价心肾综合征中的肾功能损伤程度，并及时采取干预治疗，减少并发症的发生。 3.相关的临床或试验室诊断方法目前临床检测NGAL主要有免疫层析法、免疫比浊法、速率色散比浊法、乳胶增强免疫比浊法等. 乳胶增强免疫比浊法具有操作简单，可在几分钟内快速、准确地检测血清蛋白含量，真实反映病情进展和评估治疗效果，对于疾病的早期诊断和治疗具有重要的临床意义；不易受人为操作和外界因素干扰，检测稳定性和重复性都很好；能利用普通的生化分析仪进行检测，容易实现自动化，可在各级基层医疗机构普及和应用等优点。二、描述 1.技术原理采用兔抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体致敏的胶乳颗粒，与待测样本中中性粒细

土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒

货号: QS2902 规格：50管/48样土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。测定原理：碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加50mL蒸馏水充分溶解。试剂三：液体×1瓶，4℃保存。试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1152μL无水乙醇（自备），48 μL蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）标准品：液体1.5mL×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。催化反应：称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。显色反应： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。 2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL蒸馏水，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 空白管。 3. 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL标准液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 标准管。 4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL上清液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 测定管。注意：空白管和标准管只需测定一次。第1页，共2页