高效液相色谱基础理论测试题

1、高效液相色谱仪的组成包括什么

检测器，柱温箱、四元泵、自动进样器、色谱工作站

2、液相色谱条件包括哪些内容

样品、色谱柱、流动相、流速、柱温、进样量、检测波长、响应时间、峰宽、极性、狭缝

3、Agilent液相色谱为了保护泵内的蓝宝石杆而独有的装置叫做其所用溶剂

为

在线Seal-wash，90%水+10%异丙醇

4、液相色谱柱怎么维护

色谱柱绝对不能进蛋白样品、血样，生物样品。?要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。?长时间不用仪器，应该将柱子取上用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相（如甲醇）保存，因为纯水易长霉。柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动; 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净;要注意流动相的脱气; 避免使用高粘度的溶剂作为流动相; 进样样品要提纯;严格控制进样量; 每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品;每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱; 若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭;

1、注意正确地使用和存放色谱柱，不锈钢柱色谱柱可选用以下的溶剂保存：正相柱用烃类溶剂，反相柱用甲醇，离子交换柱用水或甲醇/水。某些专用分析色谱柱要注意制造商规定的保存条件。另外，要注意溶液的PH值，一般控制在PH2-8范围内，其硅胶柱PH>8时会发生硅胶溶脱的情况，键合型柱PH<2时会发生键合相断裂。

2、色谱柱污染后可采用合适的溶剂冲洗，使柱效再生。

⑴硅胶柱可以使用正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇和水按顺序冲洗色谱柱，经过净化的色谱柱必须进行水活化，即按上述相反的顺序冲洗。柱再生时所需要的有机溶剂要严格进行脱水处理。

⑵反相柱可以用甲醇、氯仿、正庚烷冲洗，键合C18柱一般用甲醇冲洗，必要时可用

0.5 M EDTA钠盐溶液冲洗，然后用水冲洗，以达到去除柱内盐类。

⑶键合型的离子交换柱可以用缓冲溶液、水、甲醇冲洗。

3、对污染严重的色谱柱在冲洗无效时，需将柱内填料取出进行处理或更换新的填料，还可以用更换柱头填料的方法即将柱头入口处的被污染的填料取出，重新补装和柱内同类型的填料，然后在改变柱流向进行再生。这种逆流再生柱的方法，可以救活大部分柱子。

4、注入色谱柱的溶剂、标液、样品溶液都必须严格过滤，以去除杂质，防止堵塞色谱柱。当用反冲洗方法无效时，可将柱口过滤装置取下，用弱酸溶液处理，去除污物或定期

更换。

5、建议：为了保护色谱柱，避免给分析带来不必要的麻烦，请使用保护柱!!

5、操作液相时发现压力很小，可能的原因是什么；操作过程若发现压力非

常高，可能的原因是什么如何解决

压力很小：排气阀没有完全关闭、色谱柱没有连接不良、系统管件连接有漏、泵的单向阀闭锁不全、泵腔有气泡

压力过高：管路已堵、色谱柱赌赛、

6、对于流动相含有缓冲盐的，进样完后如何进行冲洗

1、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗

2、再用5：95的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。

3、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。7、平衡色谱柱一般需要多长时间

不同的柱子柱体积不一样，所以平衡需要的时间也不一样，原则是用10到15倍柱体积的流动相过柱子就行。如果使用离子对试剂，离子对试剂是要上到色谱柱上面去的，平衡时间大概要在2h左右才能保证啊

8、为了延长氘灯的寿命应该如何操作

在每天的使用过程中不要频繁开关灯，频繁开关灯会缩短氘灯的使用寿命。一般情况下，我们应该在早上打开氘灯开始一天的分析工作，一天的工作完成后，冲仪器之前可以关闭氘灯，中间如果不进行分析工作也不要关灯，即一天一开一关；间隔4小时以上可以关灯，否则不需关灯。不要让检测池长期保存在缓冲液体系中，用纯水冲洗，保存在甲醇中。

9、样品在进样前需要进行的处理是

除去微粒，减少杂质干扰，如采用高速离心、过滤超滤、选择性沉淀、衍生反应、液-固萃取，液-液萃取，SPE等手段进行净化，上机前采用合适的滤膜过滤。

另外还要注意样品的溶剂与流动相的极性关系。

10、运行过程中自动停泵可能的原因是什么

每台泵都有压力上限，系统达到预定值时会自动停泵，在梯度洗脱中应考虑因流动相的变化而引起的压力变化，避免上限压力过低造成中途停泵。在贮器中流动相被抽干或严重渗漏时会自动停泵。有时下限压力设在0也会自动停泵。系统出现其他故障时可能停泵，