酶工程实验报告

指导老师：

学号：20070830

姓名：

班级：生物技术班

**师范大学生命科学学院07级

2010-11-15

生物工程实验指导（酶工程部分）

实验一木瓜蛋白酶的分离纯化及酶活检测

一、概述

以半胱氨酸内肽酶为主（包括木瓜蛋白酶，简称PAP、木瓜蛋白酶Ω，简称CAR、木瓜凝乳蛋白酶，简称CHP和木瓜凝乳蛋白酶M，简称GEP）的木瓜蛋白酶是从植物番木瓜中分离纯化而得的一种混合酶。这种酶广泛存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中以为成熟的果实乳汁中含量最高，约占乳汁干中的40%。其最大的用途是在食品工业方面，防除啤酒冷藏

混浊，嫩化肉类，生产调味品，烘烤面包，乳酪制品及谷类和速溶食品的蛋白质强化生产。在动物饲料加工方面，用于鱼蛋白浓缩物和油籽饼处理，能提高氮的可溶性指数和蛋白质的可分散指数。少量在皮革工业作软化剂、纺织工业作丝织品脱胶清洁剂和废胶卷回收报等。在医药方面，主要用于治胃炎、消化不良以及用于肉赘摘除、伤痕处理、脱毛、清洁皮肤和新近的裂腭整形外科及制木瓜凝乳蛋白酶注射剂治疗脊骨盘脱出症等。

木瓜蛋白酶是一种巯基蛋白酶，其专一性较差，能分解比胰脏蛋白酶更多的蛋白质。木瓜蛋白酶是单条链，有211个氨基酸残基组，相对分子量23000。木瓜凝乳蛋白酶，相对分

子量36000，约占可溶性蛋白质的45%。溶菌酶，相对分子量2500，约占可溶性蛋白质的20%。

木瓜蛋白酶为白色、淡褐色无定型粉末或颗粒。略溶于水、甘油，不溶于乙醚、乙醇和氯仿。水溶液无色至淡黄色，有时呈乳白色。最适pH为5.0～8.0，微吸湿，有硫化氰臭。

最适温度65℃，易变性失活。木瓜蛋白酶等电点pH＝9.6。半胱氨酸、硫化物、亚硫酸盐和EDTA是木瓜蛋白酶激活剂，巯基试剂和过氧化氢是木瓜蛋白酶的抑制剂。

二、实验目的

1、学习和掌握木瓜蛋白酶分离纯化的原理、方法和工艺过程，包括盐析、酶活力保护、结晶与重结晶。

2、掌握木瓜蛋白酶活力的测定方法和原理。

三、能力培养目标

1、蛋白质分离纯化的工艺流程，特别是盐析操作技术的熟练掌握；

2、酶活力检测方法的掌握。

四、实验难点

采用盐析分离纯化技术制备酶类产品时如何保证酶活力的同时提高酶产品的得率。

五、实验方式、方法建议

1、集中式训练：学生在老师的讲解和指导下按如下步骤操作训练；

2、启发和探索式：老师提供木瓜蛋白酶的理化、生物学特性、相关分离纯化技术和工艺，让学生查阅资料，然后在下面生产工艺基础上进行一些工艺和操作参数的试验，比如在（NH4)2SO4分级分离后采用层析分离或透析，试验层析或透析操作参数和比较集中工艺的优劣，以培养学生灵活运用分离纯化技术的能力。六、实验原辅材料和仪器设备

1．原辅材料

（1）木瓜乳汁的采集及采后处理

在清晨或中午下雨后，选择2.5～3月龄已充分长大的青木瓜，用锋利刀片在未成熟的

青果表面纵割3～4条线，下刀深度在2mm深以内，环绕茎干装一倒伞型收集盘，接收流下的乳汁。割后30～60s乳汁停止流出，把粘在果上的乳汁赶入收集盘。用浸过硫酸钙或杀菌剂溶液的洁净布擦果，防切口感染。

（2）硅藻土和河沙：硅藻土选用化学纯试剂，河沙经清洗、浮选、烘干后过60～80目筛。

（3）半胱氨酸、（NH4)2SO4和NaCl均选用化学纯试剂。

（4）酶稀释液：半胱氨酸0.03mol/L（0.1537g）、EDTA.2Na0.00603mol/L（0.0935g），两者分开用适量蒸馏水溶解，再将EDTA.2Na溶液倒入半胱氨酸溶液中，使其溶解，调节至pH 4.5，定容至25ml。

（5）酪蛋白溶液(底物)：称磷酸氢二钠1.447g加蒸馏水约80ml，溶解后加入0.80g酪蛋白，水浴上加热搅拌溶解，待完全溶解后，冷至室温，调pH至7.0，定容至100ml，摇匀。

（6）TCA溶液(变性剂)：称三氯醋酸(TCA)2.247g，乙酸钠1.824g，冰醋酸2g，定容至l00ml。

（7）酪氨酸标准液(50μg/ml)：称105℃烘至恒重的酪氨酸5.0㎎，用0.1 mol/L HCl 定容至100ml。

2．主要仪器设备：研钵、高速冷冻离心机、紫外分光光度计、恒温水浴锅。

七、训练内容和步骤

1、木瓜蛋白酶的分离纯化（下午组数据）

(1)粗提：木瓜乳汁100g(实验中28.8g)、硅藻土50g(14g)和筛选过的砂子75g(21.8g)混匀，在室温下加100ml-150ml（50ml）半胱氨酸溶液(0.04mol/L，pH5.7)，，在研钵中充分磨匀，静置后倾出上清液，再用150ml（50ml）半胱氨酸溶液重复研磨和洗提，然后用半胱氨酸溶液定容到500ml（166ml）(粗体积)，用布氏漏斗过滤。以下几步尽量在冰浴上进行。

(2)除不溶物：取50ml滤液于小烧杯中，在搅拌下慢慢加入1mol/LNa0H溶液调pH至9.0，用36个1.5ml离心管盛装，离心(4℃,8000rpm／min，10min)，取上清液。

(3)（NH4)2SO4分级分离：取38ml上清液于小烧杯中，加入9.23g(NH4)2SO4至40%饱和溶液（1L：243g），静置2h。离心(4℃,8000rpm／min，10min)，弃上清液，用饱和(NH4)2SO4溶液洗沉淀一次，剩6管。

(4)NaCl分级沉淀：加半胱氨酸溶液(0.02mol/L，pH7.0)至满管，慢慢加入0.12g固体NaCl，静置lh，离心(4℃,8000rpm/min，20min)弃上清液。

(5)结晶：在沉淀中加半胱氨酸溶液(0.02 mol/L，pH5.7)至满管，立即调pH至6.5，静置30min，置于4℃下过夜，在4℃下离心(8000rpm/min，25min)，收集结晶。

(6)重结晶：将上述结晶在室温下溶于少量蒸馏水(蛋白酶浓度约1%)。在搅拌下慢慢加入饱和NaCl溶液(10ml／300ml蛋白溶液)，当约75%的溶液加入后。木瓜蛋白酶将开始结晶，置于4℃下过夜，收集结晶。

2、木瓜蛋白酶活性测定

(1)样品处理：在盛装结晶（样重约0.01g）的1.5ml离心管中加入酶稀释液500ul，混匀盖严，将酶激活15min以上(激活时半胱氨酸的浓度要高于0.03mol/L，而且要当天配制，激活的酶最好在2h内测完)备用。

(2)木瓜酶活力测定：将已激活的酶液置于37℃水浴保温10min ,吸取预热37℃酪蛋白液500ul加入此管，在37℃反应10min,立即加入300ul，TCA摇匀；另取已激活的样液500ul，加入300ul TCA，37℃保温10min后立即加入预热37℃酪蛋白液500ul，摇匀。以后管为对照，测前管的OD275值，即A=1.581。另取酪氨酸标准液，以蒸馏水作空白对照，测OD275值，即As=0.318。

As：50ug/ml酪氨酸的光吸收值；

A：1ml激活酶作用于底物所得产物的光吸收值；

50：标准酪氨酸的微克数/毫升；

10：反应时间(min)；

500：酶第一次稀释倍数(定容体积)；

3:激活时酶液的稀释倍数；

11：测定时酶液的稀释倍数。

八、实验结果与讨论

1、记录木瓜蛋白酶工艺、操作条件、各原辅材料和试剂用量。

盐析沉淀法是许多蛋白酶初步纯化阶段又一经常采用的方法。其原理为中性无机盐离子在较低浓度时会增加蛋白质的溶解度，但当盐浓度增加到一定的程度时盐离子与蛋白质表面具有相反电荷的离子基团结合使排斥力减弱而凝聚，同时，蛋白质表面的水化膜被破坏而引起蛋白质的沉淀。本实验盐析使用的中是性盐有硫酸铵和NaCl。

2、记录产品的形态及产品的重量。

它的外观为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性。约重0.01g

3、计算木瓜蛋白酶的产量、酶活力和实际得率。

A=1.581。As=0.318。酶活力=41016509（u/g）

4、对上述分离纯化方法进行评价。

木瓜蛋白酶的活力是41016509（U/g）。

A的吸光值大于1，可能不会特别准确。会出现误差，看能否通过稀释来解决该问题。

酶稀释液又不容物存在，可能的原因有：pH不合适；药品本身的原因；药品混合的顺序不对；溶解时需要加热或者超声波处理等。

提高溶液浓度可能更加有利于结晶和重结晶，以及沉淀等。

实验二尼龙固定化木瓜蛋白酶及其应用研究

实验目的：

1、掌握尼龙为载体戊二醛为交联剂对木瓜蛋白酶进行固定化的方法。

2、了解检验固定化酶活力的方法。

一、材料与主要试剂

尼龙(6)或(66)，市售140目。木瓜蛋白酶，本室制备，比活力205 U/mg蛋白。啤酒。酪蛋白(进口分装)，戊二醛(E . Meyck)，考马斯亮蓝G-250(sigma)等均为生化试剂或分析纯试剂。

二、方法

1、固定化木瓜蛋白酶制备

将尼龙布剪成约2g左右的小方块，置于干净培养皿中，用含18.6% CaCl2和18.6%水的甲醇溶液处理10min，洗净吸干。再用3.65mo1/L HCl水解45min，洗至pH中性，吸干。用5%戊二醛(25%水的戊二醛溶液和硼酸缓冲液配制)20℃交联20min，用0.1 mol/L pH7.8磷酸缓冲液洗除多余戊二醛。将2g（一小块）处理尼龙布剪成小块放入1.5ml离心管中，立即加入1mg/mL酶液(0.1g木瓜蛋白酶溶于0.1 mol/L pH 7.2磷酸缓冲液并定容至100mL，活力44.7U/mL，比活力205 U/mg蛋白)至满管，置于4-15℃冰箱中固定3h。用0.1 mol/L pH7.5磷酸缓冲液(含0.5mo1/L NaCl)洗至洗脱液在280nm波长处无光吸收，木瓜蛋白酶即固定在尼龙布上。

2、酶活力及蛋白质含量测定

取O.1mL酶液加入0.9mL激活剂(上述缓冲液内含20 mmol/L Cys, 1 mmol/L EDTA)37℃保温恒定，加人同样预热的 1 %(W/V)酪蛋白溶液(上述缓冲液配制))1 mL,37℃反应10min，加人3mL10%三氛乙酸((TCA)溶液终止反应(对照管先加TCA，后加底物)。275nm波长下比色。在上述条件下每增加1个光吸收单位的酶量为1个酶活力单位(U)。取0.1g固定化酶加入1mL 激活剂其余同溶液酶活力测定。蛋白质含量测定，按考马斯亮蓝G-250法。

3、考马斯亮蓝G-250法

称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶解于50mL95%乙醇中，再加入100 mL85%（W/V）的磷酸，混匀，配成原液。临用前取原液15mL，加蒸馏水稀释至100mL,双层滤纸过滤，即为缓冲液A，4℃保存。

0.5mg/mL标准牛血清白蛋白溶液的配制：准确称取5mg牛血清白蛋白，溶解于适量的蒸馏水后，用缓冲液A定容至10mL。

（1）牛血清白蛋白标准曲线的测定

取6支试管，按下表加入标准蛋白溶液和缓冲液A。

管号0 1 2 3 4 5

标准蛋白溶液/uL 0 40 80 120 160 200

缓冲液A/ uL 500 460 420 380 340 300

标准蛋白含量/mg.mL-10 0.04 0.08 0.12 0.16 0.20

在各管中分别加入5mL缓冲液A，混匀，室温放置2min。以0号管为空白对照，用1cm 光程比色杯测量各样品在波长595nm下的吸光度A595。以A595为纵坐标，标准蛋白质含量为横坐标，在坐标纸上标准曲线。

（2）样品蛋白质含量的测量

取样品溶液500uL,再加入5mL缓冲液，混匀，室温放置2min，测量其在波长595nm下的吸光度A595。再根据标准曲线查出相当于标准蛋白的量，从而计算样品的蛋白质浓度（mg/mL）。

三、结果与讨论

1、固定化条件

溶液酶浓度对固定化的影响；温度，pH和固定时间对酶固定化的影响。

2、固定化酶的性质（Km值双倒数作图法）

3、固定化酶的效率

酶活实验结果是如表一：

实验对象A

275

对照管 1.004 1.004 1.004

标准管 1.119 1.119 1.119

固定化酶实验管 1.048 1.048 1.048

表一

0.001为一个酶活单位。1.048-1.004=0.044。固定化酶的活力为44U。

吸光值有些大，结果可能应该小于44U。

吸光值与蛋白质的含量如表二，ABS标准曲线如图一。

标准蛋白质含量mg.mL-1A 595

0.04 0.101 0.102 0.102 0.08 0.168

0.12 0.165 0.170 0.184

0.16 0.263 0.273 0.271 0.20

0.634

0.627 0.636

表二

ABS标准曲线

0.04

0.08

0.12

0.120.16

0.2

y = 2.938x - 0.0863

R 2 = 0.7424

00.10.20.30.40.50.60.70

0.050.10.15

0.20.25

蛋白质浓度（mg/ml）

A 595

图一：ABS 标准曲线

0.066814

0.11

将A 595吸光值0.11代入图一中公式，算出待测蛋白质的浓度为0.066814（mg/mL ）。 R 2

＜0.99，所以结果有可能可够准确，但是蛋白质含量0.066814（mg/mL ）左右，有蛋白质被分解，进一步说明酶被固定。蛋白质减少量约为1-0.66814=0.33184mg 。固定化酶的优点：

①固定化酶可以多次使用，且在多数情况下，酶的稳定性提高，因而单位酶催化的底物量大增，用酶量大减，即单位酶的生产力提高。②固定化酶极易与底物、产物分开，因而产物溶液中没有酶的残留，使产物提纯工艺简化，产率提高，产品质量较好。③固定化酶催化的反应条件易于控制，可以装柱连续反应，进行自动化生产，节省劳动力，减少反应器占地面积。④与溶液酶相比，固定化酶更适合实现多酶反应。 ⑤辅酶固定化和辅酶再生技术的应用，可使固定化酶和能量再生系统或氧化还原系统合

3、本实验戊二醛做为交联剂，能在线型分子间起架桥作用从而使多个线型分子相互键合交联成网络结构，固定在尼龙上三．实验分析

1、酶在水溶液中以自由的游离状态存在，但是固定后酶分子便从游离的状态变为牢固地结合于载体的状态，其结果往往引起酶的性质的改变。为此，在固定化酶的应用过程中，必须了解固定化酶的性质与游离酶之间的差别，并对操作条件加以适当调整。

2、由于固定化的方法不同，固定化酶的活力和性质也有所不同.上述实验用的是交联法。我们还可以用物理吸附法、结合法、包埋法等来使酶固定

酶工程实验所需仪器和材料

材料：1.木瓜青果；2.尼龙(6)或(66)，市售140目 3.浸过硫酸钙或杀菌剂溶液的洁净抹布

4.啤酒

药品：1.焦亚硫酸钠 2.硅藻土和河沙3.半胱氨酸、4.（NH4)2SO4 5.NaCl 6.EDTA.2Na 7.磷

酸氢二钠 8.酪蛋白(进口分装) 9.三氯醋酸(TCA) 10.乙酸钠 11.冰醋酸 12.酪氨酸 13.氢氧化钠 14.石英砂 15.磷酸氢二钠 16.酪蛋白 17.戊二醛(E . Meyck)，18.考马斯亮蓝G-250(sigma) 19.CaCl2 10.甲醇 21. HCl 22.磷酸缓冲液 23.95%乙醇 24.磷酸 25牛血清白蛋白等均为生化试剂或分析纯试剂。

仪器：1.刀片 2.伞型收集盘 3. 60～80目筛 4.ph计 5. 25ml，100ml容量瓶 6.研钵7.

高速冷冻离心机8.紫外分光光度计9.恒温水浴锅10.布氏漏斗

2010-11-15

淀粉酶活力测定实验报告

淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的: 1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义; 2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。二、实验原理: 淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热，70? 15min 则被钝化。测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。三、实验用具: 1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，离心机，电磁炉。 2、实验材料与试剂 (1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g，定容至 1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。 (2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6

的柠檬酸缓冲液; (3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入; (4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中; (5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用 0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至 6.8，加水稀释至1000ml即得。 (6)0.4mol/L的NaOH溶液; (7)1%NaCl溶液。 (8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm) 四、操作步骤 1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。取上清液1.0ml，用pH 为6.8的缓冲溶液稀释5倍，所得酶液。 2、a- 淀粉酶活力测定 (1) 取试管4支,标明2支为对照管,2支为测定管。 (2) 于每管中各加酶液lml ,在 70?士0.5? 恒温水浴中准确加热15min ,取出后迅速用流水冷却。 (3) 在对照管中加入4m1 0.4mol/L氢氧化钠。 (4) 在4支试管中各加入1ml pH5.6的柠檬酸缓冲液。 (5) 将4支试管置另一个40?士 0.5? 恒温水浴中保温15min ,再向各管分别加入40?下预热的1,淀粉溶液 2m1,摇匀,立即放入40?恒温水浴准确计时保温 5min。取出后向测定管迅速加入4ml 0.4mol/L氢氧化钠,终止酶活动,准备测糖。

细胞培养实验和Western Blot实验报告

细胞培养实验和Western Blot实验报告姓名：张人龙学号：YX16100508115 专业：中医骨伤科学实验一：细胞培养 1.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物工程在医学上的应用打下基础。 2.实验原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。近年来，在体细胞遗传、分化、胚胎发生、肿瘤发生、免疫学、细胞工程、放射生物学以及老年学等一系列的研究领域中得到广泛的应用，并取得了丰硕的成果。细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。 3.实验用品 3.1 材料和标本乳兔、HeLa细胞(人宫颈癌细胞) 3.2 器材和仪器手术器械、平皿、培养瓶、吸管、离心管(灭菌后备用)、酒精灯、烧杯、超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜。 2.3 试剂含有5％小牛血清的MEM培养液、0.01mol／L PBS，0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液、75％乙醇。 4.实验方法 4.1 原代细胞培养 4.1.1 原理细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来，广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成一种重要生物技术，并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短，性状与体内相似，适用于研究。一般说来，幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。

植物染色体制片与观察实验报告

植物染色体制片与观察实验报告（洋葱组）姓名：蔡梦雅 1230170010 同组成员：曹鉴云陈锦容刘艳马彦霞一、中文摘要：染色体（Chromosome），是细胞内具有遗传性质的物体，易被碱性染料染成深色，又叫染色质。其本质是脱氧核甘酸，是细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体，是遗传物质基因的载体。这里我们用洋葱染色体作为代表使用压片法制片并且进行观察。二、关键词：染色体洋葱压片法三、引言：洋葱（onion）是百合科（Liliaceae）葱属中以肉质鳞片和鳞芽构成鳞芽的2年生草本植物，其学名为Allium cepa L，染色体数为2n=2x=16。由表1和图1可见,洋葱的8对染色体中,有7对(第1~7对)染色体,臂比在1·01~1·70之间,为中部着丝点染色体,1对(第8对),臂比为4·74,为近端部着丝点且带随体的染色体;依据STEB-BINS[4]的核型分类标准,洋葱的染色体核型在遗传进化上属较古老的2A型。100多年来有关染色体与染色体组结构功能的研究一直是生命科学最活跃的研究领域之一，现今人们完成基因组测序后回到对染色体上进行基因定位和作图，因此有关染色体的研究在基因组合功能基因组时代都有重要意义，陈瑞阳教授历时25年的研究完成的《中国主要植物染色体研究》对我国2834种植物染色体数目进行了报道，完成了1045种植物的核型分析，积累了宝贵的染色体基础数据创建了我国植物染色体研究信息平台。研究染色体进化与生物进化的有不可分割的关系,国际对染色体的化学成分,DNA含量,碱基组成和以染色体数目、形态、结构、大小等为特征的核型进化与物种形成和演化关系的研究,为揭示生物进化趋势提供染色体方面的科学资料，总的来说对染色体的研究在各类学科领域内都有着重要的意义。国内外对洋葱的研究主要在其成分和药用方面，在细胞遗传上张自力和陈瑞阳等对洋葱的C带显示法进行过研究，田秋元等对洋葱的核型分析及有关制片方法进行了探讨。植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞核染色体。我们设计了不同的实验方案探究如何制作优良的植物染色体玻片，掌握染色体技术。四、材料与方法： 1.取材洋葱（Aillum cepa）的鳞茎 2.实验器具和药品 2.1器具 a.载玻片 b.盖玻片 c.烧杯 d.量筒 e.培养皿 f.滤纸 g.玻璃棒 h.镊子i.手术刀 2.2药品 a.0.1mol/L醋酸钠溶液 b.0.25%秋水仙素 c.冰醋酸 d.无水乙醇 e.1mol/LHcl f.纤维素酶 g.果胶酶 h.卡宝品红 2.3试剂配制卡诺固定液：用3份无水酒精，加入1份冰醋酸（现配现用）。酸解液：一份无水乙醇与一份1mol/L 盐酸1:1进行配制。酶解液：用0.4g的纤维素酶和0.15g的果胶酶溶解在20ml蒸馏水里。

江苏省高中生物第九讲实验(一)学案苏教版必修1

第九讲实验(一 ) 测试内容测试要求五年考情检测生物组织中的还原糖、脂肪和蛋白质实验原理实验材料用具、实验方法步骤实验结果及其分析 B A C 2013、2014、2015、2017(选)、 2016(主) 观察植物细胞的质壁分离和复原实验原理实验材料用具、实验方法步骤实验结果及其分析 B A C 2015(选)、2016(选、主) 观察植物细胞的有丝分裂实验原理实验材料用具、实验方法步骤实验结果及其分析 B A C 2013(主)、2015(选)、2016(主 ) 1.还原糖与________发生作用，生成________沉淀；脂肪被________染成________；蛋白质与________发生作用，产生________反应。 2.观察有丝分裂时常用的材料是____________细胞。染色体易被________________(如龙胆紫、醋酸洋红)染成深色。 3.有丝分裂装片的制作过程：________→________→________→________。 4.植物细胞的________相当于一层半透膜，当细胞液的浓度________外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁与原生质层都出现一定程度的收缩。由于原生质层比细胞壁的伸缩性________，当细胞失水时，原生质层就会与细胞壁分离开来，也就是________。当细胞液的浓度________外界溶液的浓度时，外界溶液中的水分就透过原生质层进入细胞液中，使细胞质壁分离复原。 5.光学显微镜的放大倍数：显微镜的放大倍数等于________放大倍数与________放大倍数的________。物镜越长，放大倍数越________，距装片距离越________；目镜越长，放大倍数越________。 6.显微镜的成像特点：显微镜下所成的像是倒立的放大的虚像，如字母“b”所成的像是________。要移动物像到视野中央时，应向________方向移动装片。 1.斐林试剂与双缩脲试剂的比较 (1) 溶液浓度不同：斐林试剂中NaOH浓度为0.1 g/mL，CuSO4浓度为0.05 g/mL；双缩脲试剂中NaOH浓度为0.1 g/mL，CuSO4浓度为0.01 g/mL。 (2) 使用方法不同：斐林试剂使用时，先把NaOH溶液和CuSO4溶液等量混合，然后立即使用，并需进行水浴加热后观察；双缩脲试剂使用时，先加入NaOH溶液，再滴加几滴CuSO4溶液，振荡后直接观察。 2.光学显微镜的使用

实验三、淀粉酶活性的测定实验报告

实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的： 1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义； 2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。二、实验原理：淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；β-淀粉酶不耐热，70℃ 15min 则被钝化。测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力（单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量）。三、实验用具： 1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，离心机，电磁炉。 2、实验材料与试剂（1）0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液：A液：称取柠檬酸20.01g，定容至1000ml；B液：称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml；取A液55ml与B液145ml混匀。（2）1%可溶性淀粉溶液：1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液；（3）1%3,5-二硝基水杨酸试剂：称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入；（4）麦芽糖标准溶液：取麦芽糖0.1g溶于100ml水中；（5）pH 6.8的磷酸缓冲液:取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1000ml即得。（6）0.4mol/L的NaOH溶液；（7）1%NaCl溶液。（8）实验材料：萌发的谷物种子（芽长约1cm）四、操作步骤 1、酶液提取：取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。取上清液1.0ml，用pH 为6.8的缓冲溶液稀释5倍，所得酶液。 2、a- 淀粉酶活力测定 (1) 取试管4支,标明2支为对照管,2支为测定管。 (2) 于每管中各加酶液lml ,在 70℃士0.5℃恒温水浴中准确加热15min ,取出后迅速用流水冷却。 (3) 在对照管中加入4m1 0.4mol/L氢氧化钠。 (4) 在4支试管中各加入1ml pH5.6的柠檬酸缓冲液。 (5) 将4支试管置另一个40℃士 0.5℃恒温水浴中保温15min ,再向各管分别加入40℃下预热的1％淀粉溶液2m1,摇匀,立即放入40℃恒温水浴准确计时保温5min。取出后向测定管迅速加入4ml 0.4mol/L氢氧化钠,终止酶

果胶酶实验报告

实验报告果胶酶在果汁生产中的作用一．实验目的 1.探究不同温度对果胶酶活性的影响; 2.探究不同 ph 对果胶酶活性的影响; 3.探究果胶酶的用量对果汁生产的影响。二．实验原理 1.果胶酶的活性受温度影响。处于最适温度时，活性最高。果肉的出汁率、果汁的澄清度与果胶酶的活性大小成正比。 2.果胶酶的活性受ph影响，处于最适ph，酶的活性最高，高于或低于此值活性均下降。果肉的出汁率、果汁的澄清度与果胶酶的活性大小成正比。 3.在一定的条件下，随着酶浓度的增加，果汁的体积增加；当酶浓度达到某一数值后，在增加酶的用量，果汁的体积不再改变，此值即是酶的最适用量。三．实验材料与用具苹果、果胶酶、盐酸溶液、榨汁机、电子天平、恒温水浴锅、烧杯、量筒、试管、漏斗、温度计、玻璃棒、滤纸、滴管、三脚架四．实验步骤（一）温度对果胶酶活性的影响 1.制备果汁选取一个中等大小的苹果( 约 200g) 洗净后，不去皮，切成小块，放入榨汁机中，加入约 200ml 水，榨取 2min，制得苹果泥。量取一定体积的苹果泥，不同条件下处理后，用滤纸进行过滤即可得到果汁； 2.取9支试管编号并分别加入等量的果汁和果胶酶； 3.将9支试管分别放入30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃的水浴锅中保温10分钟； 4.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据。（二）ph 对果胶酶活性的影响 1.制备果汁； 2.取5支试管编号并分别加入等量的果汁和果胶酶； 3.将5支试管放入40℃恒温水浴锅中加热； 4.待试管内温度稳定后在5支试管分别加入ph分别为5、6、7、8、9的盐酸溶液； 5.恒温保持10min； 6.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据。（三）果胶酶的用量对果汁生产的影响 1.配制不同浓度的果胶酶溶液准确称取纯的果胶酶1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、 7mg、8mg、9mg，配制成相等体积的水溶液，取等量放入9支试管中，并编号1～ 9。； 2.在9支试管中加入等量的苹果汁； 3.将上述试管放入恒温水浴加热一段时间。 4.将不同浓度的果胶酶分别迅速与各试管的苹果泥混合，然后再放入恒温水箱中。 5.恒温水浴约20分钟 6.过滤后测量果汁的体积四．实验结果五．分析与结论篇二：果胶酶活性测定实验报告一、实验设计二、实验报告篇三：果胶的实验报告

植物烟草实验

烟草叶片愈伤组织诱导摘要用不同成分培养基，附加0.8%琼脂，3%蔗糖，调pH5.8—6.0，取烟草叶片作为外植体进行愈伤组织诱导培养，计算污染率、诱导率以及诱导情况，观察愈伤组织的发生情况。实验表明，养分较高的培养基，外植体生长情况较好。当细胞分裂素高于生长素的浓度时，有利于分化出芽；细胞分裂素低于生长素的浓度时，有利于分化出根；当细胞分裂素及生长素的浓度适合时，愈伤组织不分化，但是生长旺盛。关键词：烟草叶片愈伤组织诱导前言烟草（Nicotiana tabacum）又名草烟，属茄科烟草属的一年生草本植物，本属约有60种，原产于美洲和大洋洲[1]。烟草是重要的经济作物和工业原料作物，其体内所含的烟碱等生物碱是非常宝贵的医药及化工原料[2]。有报道烟草细胞悬浮培养物获得细胞分裂素类物质，因此很有必要对烟草的组培快繁进行研究，以获得更有效的方法提高产率和产量。柯善强综述植物细胞的遗传全能性与组织培养形态发生控制[3]，戴冕进行了烟草叶肉原生质体再生植株的研究[4] ,徐瑞娟等通过烟草花序苞叶的离体培养分化出花芽[5],战淑敏用烟草叶组织培养直接获得再生植株[6]。本实验以烟草叶片组织为外植体进行组织培养，诱导愈伤组织，观察愈伤组织诱导情况。 1.材料与方法 1.1 配置培养基母液，每2人为一个小组，配置以下培养基，并分装，灭菌，然后室温下放置一周。 1.2 取烟草叶片取烟草的嫩叶片作外植体。先用自来水冲洗干净，再用蒸馏水洗2次后，置于超净台上，于无菌条件下先用75%的酒精浸泡30秒，然后置于无菌瓶中用10%次氯酸钠溶

液浸泡20分钟至30分钟，再用无菌水冲洗4次，最后在无菌培养皿中将嫩叶片切成1cm见方小块，接种在培养基中。 1.3.1 观察污染情况：观察是否有细菌性污染（菌斑呈粘液状,接种后1-2天出现）和真菌性污染（出现不同颜色霉菌,接种后3-10天出现），并计数。计算污染率。污染率(%)=污染的材料数/总接种材料数×100%[7] 1.3.2 观察各培养基中的外植体产生愈伤组织的情况，愈伤组织出现时间和愈伤组织形态特征（颜色和质地等），计数形成愈伤组织的材料数，并计算诱导率。诱导率(%)=形成愈伤组织的材料数/总接种材料数×100%[7] 2.结果及分析 2.1愈伤组织诱导情况三天后发现部分组有细菌性污染（如图1），7天后发现部分有真菌性污染。计算出污染率和如表1所示：表1. 愈伤组织诱导的污染情况造成污染的可能原因有：叶片消毒灭菌不彻底，接种室超净工作台消毒不彻底，接种操作时操作不规范等等。叶片在第4天后边缘慢慢上卷，外植体开始膨胀，于接种后第7 天膨大成圆拱型，愈伤首先发生在叶片边缘, 为黄绿色颗粒状，有些呈现半透明。随着进一步培养, 10天愈伤组织不断加大。排除褐变及感染的外植体后，诱导情况如表2所示：表2.愈伤组织诱导情况

实验二之淀粉酶活力测定实验后思考题及淀粉酶实验报告写作提示(2012.3.19上传)

实验二、萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定。（报告写作提示及思考题）注意：实验二整体是为了完成如何在正确的总体思路的指导下合理设计实验方案及其细节。所以我们首先以对生物催化剂-酶的基本认识确定了酶活测定实验的总体设计思路，并在其指导下，明确了总体方案及最关键的设计细节。然后以我们比较熟悉的禾谷类种子的萌发状态及其代谢途径为具体思考对象，进行了淀粉酶活力测定相关的分析，然后认可并已完成了前人设计的实验。所以淀粉酶活力测定实验报告的结果就绝不仅仅是计算得出的两个酶活力数据，或说那两个数据只是一个必然的实验数据，“实验结果”是我们设计并完成了对淀粉酶，这类在禾谷类种子萌发过程中起关键作用的酶的活力的测定，即，是实验设计本身。所以结果分析应该是围绕实验设计展开。根据实验具体实施过程中可操作性的特点、操作误差对结果的可能影响，以实际材料完成实验后得到的具体结果数据结合相关生理功能一起思考判断，是否能初步确定该实验设计不仅理论上可行而且实验后的结果也可信，从而最终确认整个实验设计的基本合理可行可信。实验后思考题： 1．α-淀粉酶活性测定时70℃水浴为何要严格保温15分钟？保温后为什么要立即于冰浴中骤冷？而经如此处理，为什么在随后的40℃温浴和酶促反应中就能保证β-淀粉酶不会再参与催化反应。 2．酶的最适反应温度（一般都是生理温度）和最适保存温度（一般0℃以下）为什么不一样？而这两个状态都是需要维护酶的空间结构。 3．为什么3，5-二硝基水杨酸与还原糖的反应要先沸水浴然后再稀释测定？ 4. 在设计酶活测定的实验时，要求酶促反应初速度对底物浓度的小量变化不敏感，具体要求为：在底物浓度有10%的变化幅度范围内，而所测初速度的变化幅度小于1%。则【S】/K M应该大于多少才能保证这一点？（设定为米氏酶） 5.转氨酶在细胞内的作用及生理意义？细胞内有众多的转氨酶，但相关研究及医学临床应用中却几乎都是只检测谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活力，而极少测定其它转氨酶活力，你推测可能的原因会是什么？为什么？ 6、转氨酶催化的是双底物可逆反应，根据酶活力测定的总体思路，要保证测定反应的初速度，根据实验指导所提供的资料，你认为是否保证了这一点？是如何保证的？ 7、指导所提供的两个转氨酶活力测定实验方案，设计的酶促反应时间是多少？终止酶促反应用的什么试剂？与淀粉酶活力测定规定的酶促反应时间相比是否有差异？差异可能的原因你分析认为会是因为什么？

细胞工程实验报告

原理，实验步骤或实验方法，实验结果与分析，注意事项，实验感悟实验一培养基母液的配制一、实验目的通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法二、实验原理配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。三、实验材料、试剂和仪器设备 1.试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 , CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O, , KI,CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水NAA,6-BA 2.仪器设备电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml、1000ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。四、实验步骤 1 大量元素母液的配制先用量筒称量适当蒸馏水放入500ml烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取： NH 4NO 3 ,KNO 3 , KH 2 PO 4 , MgSO 4 ·7H 2 O, CaCl 2 ·2H 2 O，待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。 2 微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平依次称取MnSO 4·4H 2 O, ZnSO 4 ·7H 2 O H3BO3 , KI, Na 2 MoO 4 ·2H 2 O，CuSO 4 ·5H 2 O, CoCl 2 ·6H 2 O,按制备母液I的方法逐个溶解，转移至容量瓶中，然后定容至500ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。 3铁盐母液的制备

果酒果醋实验报告

课程学号姓名分数国产50L发酵罐的使用实验目的：了解发酵罐的使用方法以及调节控制参数实验材料：国产50L发酵罐实验1 发酵罐蒸汽灭菌系统及反应系统的使用（1）蒸汽灭菌系统的介绍 ①高温高压蒸汽对发酵罐的灭菌操作 ②高温高压蒸汽对发酵罐夹套的灭菌操作（2）发酵罐罐体反应系统的介绍 ①发酵罐发酵参数的设定操作 ②发酵罐进样、接种和排污的操作实验2 发酵罐使用前的清洗和各项参数的设定 ①发酵罐罐体发酵前先用5%的NaOH清洗，然后用蒸馏水清洗至中性 ②发酵罐发酵温度、时间、pH值、搅拌时的转速等参数的设定芦柑果酒、果醋酿造条件的探讨实验目的：了解并掌握芦柑汁的防褐变和澄清处理的原理及方法；了解果酒果醋的基本过程实验3 芦柑汁的防褐变和澄清处理一．材料与仪器:新鲜芦柑；偏重亚硫酸钠；果胶酶；柠檬酸C 6H 8 O 7 〃H 2 O；碳酸氢钠NaHCO 3 ；JYZ-A560榨汁机；PL-203电子天平器等。二．实验步骤:选取个头饱满，色泽均一的芦柑，剥开，分离果皮、肉、瓤，除籽、榨汁，向果汁中添加适量偏重亚硫酸钠静臵1h，然后再分别用 8、16、32层纱布过滤。三．实验方案: （1）研究不同偏重亚硫酸钠添加量对芦柑汁褐变程度的影响，得出最适的偏重亚硫酸钠添加量。

课程学号姓名分数（2）分别研究果胶酶添加量、pH、温度、时间对芦柑汁澄清效果的影响，优化果胶酶的作用条件。四．测定方法:（1）果汁澄清度的测定采用分光光度法（2）果汁可溶性固形含量(%)的测定采用折光法（3）果汁中果胶物质的定性检测采用酒精法（4）pH的调定实验4 芦柑果酒发酵条件探讨一．实验材料与试剂:新鲜芦柑；酿酒高活性干酵母；白砂糖；偏重亚硫酸钠 Na 2S 2 O 5 ；碳酸氢钠；柠檬酸C6H8O7〃H2O；果胶酶。二．实验仪器:JYZ-A560榨汁机；烧杯；玻璃棒；纱布；PL-203电子天平；HH-4数显恒温水浴锅；温度计；量筒；广口瓶；液封管等。三．测定方法：温度计；pH测定：pH计；可溶性固形物的测定：手持糖量计。四．工艺流程：复合果胶酶 ↓ 芦柑→预处理→榨汁→添加偏重亚硫酸钠→过滤→酶解→静臵澄清→调整糖度→调整pH→酒精发酵→过滤→装罐→杀菌→成品 ↑ 安琪酵母五．实验步骤 1原料处理选用成熟度高、无腐烂、个头饱满、色泽均一的新鲜芦柑为原料，剥开，分离果皮、肉、瓤，尽量去除籽、白皮层和囊衣。榨汁：采用榨汁机对处理后的芦柑进行榨汁。防褐变处理：按照0.05g∕L的偏重亚硫酸钠添加量，将其加入榨得的芦柑果汁中，用玻璃棒搅拌均匀，防止芦柑汁发生褐变。过滤：将芦柑汁分别经4层、8层、16层、32层纱布过滤。

1340064《植物细胞工程》课程教学大纲

GDOU-B-11-213 《植物细胞工程》课程教学大纲课程简介课程简介：本课程以植物细胞工程有关的概念、基本原理、操作程序和关键技术为主线，系统传授植物细胞的全能性、植物细胞脱分化和再分化、植物快速微繁殖、人工诱发单倍体、植物胚胎培养、植物单细胞培养与突变体筛选、原生质体培养、细胞融合、人工种子、超低温冷冻贮藏种质、细胞遗传转化体系等内容。课程大纲一、课程的性质与任务：本课程为作物遗传专业研究生的专业课，其涉及当今生物科技领域的许多高新技术。本课程在专业性上起着承上启下的作用：植物学、植物生理生化和作物遗传学作为本课程的基础课程；基因工程和作物育种学则是本课程的延伸和提高课程。它将理论教学和技能性教学融为一体，是开展科学研究和生产开发的重要工具。二．课程的目的与要求：学生学完本课程后，应掌握植物细胞工程有关的概念、基本原理、操作程序和关键技术。三．面向专业：本课程适宜作物遗传育种专业研究生选修。四．先修课程：学习本课程前，应先修《植物学》《植物生理生化》、《作物遗传学》、《作物栽培学》等有关课程。五．本课程与其它课程的联系：先修课《植物学》为本课程打下植物发育的基础知识；《植物生理生化》为本课程打下植物生理生化的专业基础知识；《作物遗传学》为本课程打下植物遗传变异的专业基础知识；《作物栽培学》为本课程打下作物对光、温、水、肥环境条件要求的专业知识。本课程为后续课程《作物育种学》提供细胞水平的育种手段；为后续课程《基因工程》提供组织培养手段。六．教学内容安排、要求、学时分配及作业：（教学要求按从高到低分掌握-A、理解-B、了解-C三种） 0 绪论（1学时） 0.1 植物细胞工程的概念和任务植物细胞工程概念（A）。植物细胞工程的内容（C）：器官培养、胚胎培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养、培养技术的延伸。植物细胞工程的任务（B）：研究剌激因子和营养条件（无机和有机营养、激素）；环境条件（光、温、湿）；形态发生规律、遗传的稳定性和变异性。

唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文

唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文 2 唾液淀粉酶活性观察实验报告一、实验目的 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性； 2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。二、基本原理 1.酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2，铁粉地H2O2分解也有催化作用，但其效率远低于酶。 2.酶的活性受温度的影响。在一定的温度范围内，温度升高，酶的活性也会增大。当到了最大值后，此时温度为酶的最适温度，由于温度过高，酶开始失活，导致酶的效率降低，最后完全失活。 3.酶的活性受PH值的影响。酶在一定范围的PH值下才有活性，高于或低于最适PH，都会使酶的活性降低。 4.酶活性常受到某些物质的影响。有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂，有些物质能使酶的活性降低，称为抵制剂。 5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化：淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦

芽糖+少量葡萄糖加碘后：蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色三、试剂与器材影响唾液淀粉酶活性的研究摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异，实验结果表明，影响唾液淀粉酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作用；淀粉酶具有高度专一性，其活性受温度、ｐＨ值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有差异。关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性 2影响唾液淀粉酶的活性的因素实验目的观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。实验原理人唾液中淀粉酶为α-淀粉酶，在唾液腺细胞中合成。在唾液淀

细胞原代培养细胞生物学实验报告

细胞生物学实验报告细胞原代培养姓名：学号：班级：专业：同组成员：一、实验原理

细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。原代培养的方法： 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。用Hanks 液洗涤2—3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20－30分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。取材注意事项：取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。二、实验目的 1、理解细胞原代培养原理 2、熟悉细胞原代培养方法与过程 3、了解细胞原代培养的应用 4、独立进行细胞原代培养操作三、实验材料手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。动物：9-12日龄的鸡胚蛋四、实验步骤

《苹果酒酿造工艺实验》实验报告

《苹果酒酿造工艺实验》实验报告专业：姓名：学号：一、实验目的为了培养我们实验研究能力和理论联系实际能力，了解果酒酿制原理，学习苹果酒酿制技术，提高我们的动手能力，把学到的书本知识运用到实际操作中，并加深我们对书本上理论知识的理解和运用，用实验室的简单操作来模拟工厂里大批量的生产，有利于我们进入工作岗位后能更快的适应生产。具体目的如下： 1、了解苹果原料的预处理及苹果汁防氧化方法，熟悉苹果榨汁的方法、亚硫酸的使用及榨汁机的使用； 2、研究外加酶制剂辅助酶解对苹果酿造品质的影响； 3、掌握果酒活性干酵母的活化方法及接种方案，熟悉苹果酿造工艺参数及检测方法； 4、通过发酵过程各种参数的变化，了解苹果酒酿造的动态变化规律； 5、熟悉倒瓶的操作，明确倒瓶的作用，了解补加SO2的作用及添加量的控制，了解后发酵及陈酿的工艺过程及作用等。二、原理苹果酒是以苹果为主要原料，经破碎，压榨，低温发酵，陈酿而成的水果酒。苹果酒为低度酒，含有较丰富的营养，适量饮用可舒筋活络，增进身体健康。苹果酒是一种低度含酒精果汁饮料，融合了啤

酒与果汁的优点，口感清醇，营养丰富。它采用上等苹果为原料，通过低温发酵，自然老熟的工艺酿造而成。它包含苹果与生物发酵所产生的双重营养成分，人体所需的氨基酸，以及苹果酒特有的果类酸；能够帮助人体代谢，维持平衡。苹果中还含有钙，镁等众多矿物质及微量元素能维持人体内的酸碱平衡。苹果酒酿造工艺流程：新鲜苹果→分选→清洗→切片、破碎榨汁→果汁处理→静 ↑↑↑ 异Vc钠亚硫酸（苹果酸）果胶酶、白砂糖置→分离→发酵→倒瓶→补加 SO2 →陈酿→调配→澄清 ↑↑↑ 皂土下胶酵母 16℃，约40天→过滤→催熟→过滤→装瓶→贮酒→成品 ↑ 70℃，10min 三、实验原料、仪器、药品原料：苹果等仪器：1000ml的锥形瓶2个、保鲜膜、移液管、电炉、250ml锥形瓶若干、玻璃棒、胶头滴管、榨汁机

植物保生长与环境实训大纲

《植物生长与环境》实验教学大纲《植物生长与环境》实验是《植物生长与环境》课程教学过程中的重要环节，是对理论教学的重要补充和验证，是实践技能培养的重要途径。实验内容的安排以实用性为宗旨，以提高实践技能为目的，做到与理论教学相辅相成，互相促进，提高教学效果。按校种植类专业教学计划要求，《植物生长与环境》实验分12个项目，教学30学时。具体内容如下：实验实训一显微镜的构造及使用方法实验实训二植物的细胞结构的观察实验实训三植物营养器官的观察实验实训四植物生殖器官的观察实验实训五快速测定种子生命力的方法实验实训六土壤含水量测定与田间验墒技术实验实训七土壤样品的采集与制备实验实训八土壤酸碱度的测定实验实训九降水量与空气湿度的观测实验实训十土壤温度与空气温度的测定实验实训十一土壤速效氮、磷、钾的测定

实验实训十二化学肥料定性鉴定实训大纲实验实训一显微镜的构造及使用方法一、目的要求 1. 了解显微镜的构造、性能及成像原理。 2. 掌握显微镜的正确适用及维护方法。二、实验内容显微镜各部分的名称和作用。显微镜的使用方法。显微镜的保养与使用注意事项。实验实训二植物的细胞结构的观察一、目的要求：（1）学会制作和观察植物细胞的临时装片．（2）认识植物细胞的基本结构．（3）会画植物细胞结构图．二、实验内容: 1、临时玻片标本切片的制作。 2、光学显微镜下植物细胞结构观察 3、生物绘图法。通过观察切片掌握细胞的基本结构。三、实验作业绘洋葱鳞叶表皮细胞结构图，并注明各部分名称

实验实训三植物营养器官的观察一、目的要求 1、掌握双子叶植物和单子叶植物根的结构特点。了解种子植物的根尖分区。 2、掌握枝、芽和茎的外部形态和类型。掌握双子叶植物茎的内部构造。 3、掌握叶的组成、叶片的形态、叶脉的类型、单叶与复叶的区别、复叶的类型、叶序。掌握叶的解剖结构。 4、学会叶脉书签的制作。二、实验内容：根、茎、叶的形态描述和内部解剖结构的观察三、实验作业绘出根茎叶结构图实验实训四植物生殖器官的观察一、实验目的要求: 掌握花的基本结构及其形态变化，认识各种花和花序的类型。重点掌握雄蕊和雌蕊的构造。二、实验内容: 1、油菜花的观察

淀粉酶活性测定实验报告

班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：03 淀粉酶活性的测定一、研究背景及目的酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作用方式，可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。β-淀粉酶存在于休眠的种子中，而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。 α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3 ,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。这3 种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延迟(内二、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在下则发生钝化。本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性，在高温下（70℃）下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定，由于麦芽糖能将后者还原生成硝基氨基水杨酸的显色基团，将其颜色的深浅与糖的含量成正比，故可求出麦芽糖的含量。常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性。实验中为了消除非酶促反应引起的麦芽糖的生成带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。在实验中要严格控制温度及时间，以减小误差。并且在酶的作用过程中，四支测定管及空白管不要混淆。

实验三-从果皮中提取果胶

从果皮中提取果胶一、实验目的 1、学习从从果皮中提取果胶的基本原理和方法, 了解果胶的一般性质。 2、掌握提取有机物的原理和方法。 3、进一步熟悉萃取、蒸馏、升华等基本操作。二、实验原理果胶是一种高分子聚合物，存在于植物组织内，一般以原果胶、果胶酯酸和果胶酸3种形式存在于各种植物的果实、果皮以及根、茎、叶的组织之中。果胶为白色、浅黄色到黄色的粉末，有非常好的特殊水果香味，无异味，无固定熔点和溶解度，不溶于乙醇、甲醇等有机溶剂中。粉末果胶溶于20倍水中形成粘稠状透明胶体，胶体的等电点pH值为3.5。果胶的主要成分为多聚D—半乳糖醛酸，各醛酸单位间经a—1，4糖甙键联结，具体结构式如图1。图1 果胶的结构式在植物体中，果胶一般以不溶于水的原果胶形式存在。在果实成熟过程中，原果胶在果胶酶的作用下逐渐分解为可溶性果胶，最后分解成不溶于水的果胶酸。在生产果胶时，原料经酸、碱或果胶酶处理，在一定条件下分解，形成可溶性果胶，然后在果胶液中加入乙醇或多价金属盐类，使果胶沉淀析出，经漂洗、干燥、精制而形成产品。三、主要仪器和药品仪器：恒温水浴锅、真空干燥箱、布氏漏斗、抽滤瓶、玻棒、纱布、表面皿、精密pH试纸、烧杯、电子天平、小刀、小剪刀、真空泵、。药品：干柑桔皮、稀盐酸、95％乙醇(分析纯)等。四、实验内容 1、柑桔皮的预处理称取干柑桔皮20g，将其浸泡在温水中(60～70℃)约30min，使其充分吸水软化，并除掉可溶性糖、有机酸、苦味和色素等；把柑桔皮沥干浸入沸水5min进行灭酶，防止果胶分解；然后用小剪刀将柑皮剪成2～3mm的颗粒；再将剪碎后的柑桔皮置于流水中漂洗，进一步除去色素、苦味和糖分等，漂洗至沥液近无色为止，最后甩干。 2、酸提取根据果胶在稀酸下加热可以变成水溶性果胶的原理，把已处理好的柑桔皮放入水中，控制温度，用稀盐酸调整pH值进行提取，过滤得果胶提取液。 3、脱色将提取液装入250ml的烧杯中，加入脱色剂活性炭；适当加热并搅拌20min，然后过滤除掉脱色剂。 4、真空浓缩将滤液于沸水浴中浓缩至原液的10％为止，以减少乙醇用量。 5、乙醇沉淀将浓缩液用适量（约为浓缩后滤液体积的1.5倍）的95％乙醇沉淀约30min，减压过滤后用稀乙醇洗涤，然后用水洗涤得果胶。 6、真空干燥

2019-2020年高考生物精华学案动物生命活动的调节之体液调节

2019-2020年高考生物精华学案动物生命活动的调节之体液调节班级姓名学号日期编号：34 【考纲要求】【复习目标】（1）描述动物激素的调节 ①概述体液调节的概念 ②举例说明动物激素的概念和特点 ③简述人体内主要的内分泌腺所分泌激素的种类与主要作用 ④举例说出激素间的协同作用和拮抗作用 ⑤比较神经调节和激素调节的特点（2）探讨动物激素在生产中的应用 ①了解动物激素在农业生产上的运用情况 ②评价动物激素在生产中应用的利与弊【自主学习】一、人体内主要的内分泌腺所分泌激素的种类与主要作用（创新P167，考点2，要点整合表格）

二、甲状腺激素分泌的分级调节三、激素调节的特点四、神经调节和体液调节的关系（创新P169，考点4）【试试身手】 1、青蛙垂体提取液中有促进雌蛙排卵的激素，该激素作用的器官是 A、甲状腺 B、胰腺 C、卵巢 D、肾上腺 2、将蛙的卵巢放入含有蛙脑垂体提取液的培养液中，同时检测某种激素的含量。经过一段时间培养后，再检测培养液中该激素的含量，发现该激素含量增加，这种激素是 A．促性腺激素释放激素 B．促性腺激素 C．促甲状腺激素 D．雌激素

3、右图为人体甲状腺激素分泌调节的示意图，下列叙述中错误的是 A．甲状腺机能亢进患者激素③分泌过多 B．缺碘时激素①和②浓度都高于正常水平 C．图中共有3处箭头表示负反馈调节 D．垂体还能分泌与激素③有相似生理效应的激素 4、有同一器官分泌，且生物效应相反的一组激素是 A．胰岛素和胰高血糖素 B．肾上腺素和肾上腺皮质激素 C．促甲状腺激素和生长激素 D．甲状腺激素和促甲状腺激素 5、右图①②③表示人体细胞间信息传递的三种主要方式。下列描述错误的是 A. 方式①②的信息传递缓慢，方式③传递迅速 B. 方式③的信息传递不通过体液 C. 体温调节可能涉及①②③三种传递方式 D. 方式①②的信息传递都经过血液循环，存在反馈调节 6、关于人体激素的叙述，错误的是 A．激素在人体内作为信息物而发挥作用 B．激素在人体内含量较低，但有高效的生物催化作用 C．甲状腺激素除了促进人体产热，还有其他生理效应 D．正常人体内，激素的分泌受反馈调节 7、关于下丘脑功能的叙述，正确的是 ①可参与血糖平衡的调节②有调节躯体运动的高级中枢③可合成和分泌促甲状腺激素释放激素④垂体通过下丘脑控制性腺的生长发育 A．①② B．②③ C．②④ D．①③ 8．研究发现，胰岛素必须与细胞膜上的胰岛素受体结合，才能调节血糖平衡。如果人体组织细胞膜缺乏该受体，则可能导致 A.细胞减缓摄取血糖，血糖水平过高 B.细胞减缓摄取血糖，血糖水平过低 C.细胞加速摄取血糖，血糖水平过高 D.细胞加速摄取血糖，血糖水平过低 9．在人体内，可以在同一细胞中产生的是