PCR法定性检测食用油脂中转基因成分_覃文
收稿日期:2002—01—15
作者简介:覃 文(1957—),女,高级工程师/博士后;研究方向为食品及动物产品生物检测。
文章编号:1003—7969(2002)02—0004—03 中图分类号:TQ646.4 文献标识码:A
PCR 法定性检测食用油脂中转基因成分
覃 文,董 洁,邓鸿铃,高东微
(广州出入境检验检疫局食品实验室,510623广州市珠江新城花城大道66号)
摘要:食用油脂(尤其是精炼油)被认为几乎不含DNA 和蛋白质等生物大分子。针对食用油脂中DNA 含量极低、破坏严重的特点,成功地建立了食用油脂中DNA 提取方法,并从中检测出玉米、大豆内源基因(IVR 、Lectin )以及外源抗虫基因[Cr yIA (b )]和抗除草剂基因(EPSPS ),为油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。
关键词:食用油脂;DNA ;提取;转基因检测
对食用油脂的检验,一直是以食用油卫生标准
中的酸值、过氧化值、羰基值、黄曲霉毒素[1,2]等与安全卫生有关的检验项目进行检验。随着生物技术的发展、人民生活水平的提高,对食用油脂的检验,将会逐渐扩展到对核酸、蛋白质等生物大分子的检验。近年来,我国进口的制油原料中,有相当数量是转基因产品。由于目前世界上已有不少国家规定了转基因食品必须加贴标签或禁止进口,因此,对食用油脂进行转基因成分的检测,就显得尤为重要。如何鉴别食用油脂是否为转基因食品,除了检测原料以外,更多的情况下,是需要从成品食用油中直接进行检测,而从食用油脂中提取出可用于核酸检验的DNA ,是进行该项检验的关键步骤。目前尚未见有关从食用油脂中提取DNA 的报道。本文介绍一种稳定有效且简便易操作的从大豆油、玉米胚芽油等食用油脂中提取DNA 的方法。用该方法提取的DNA ,可以用于转基因成分以及其他核酸成分的检测。本文针对已商品化的转基因大豆、玉米中的外源基因,采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Re -action ,PCR )及基因片段扫描(GeneScan )技术进行检测。
1 材料与方法1.1 材料
食用油脂购自超级市场,部分样品为送检样品。1.2 仪器、试剂
水浴锅,旋涡振荡器,核酸蛋白分析仪,定性(定量)PCR 仪,DNA 测序仪等;PCR 试剂(Promega )及
GeneScan 试剂(Applied Biosystems )。
1.3 方法
食用油脂中DNA 的提取:在2ml 离心管中加入1ml 食用油及400μl TE (Tris -EDTA ),颠倒混匀5min 后13000r /min 室温离心5min 去上层油脂层;将离心管中余下的约400μl 水相溶液按照Wizard ?Genomic DNA Purification Kit (Promega )说明书操作步骤提取DNA ;在沉淀DNA 之前,向离心管中加入≥1μg 植物基因组DNA 作为担体,并加入600μl 室温异丙醇,颠倒混匀2-5次后室温静置45min -60min 沉淀DNA ;沉淀的DNA 经离心、70%乙醇洗涤并干燥后,加入TE 溶液溶解DNA ,置于4℃保存备用。
PCR 扩增玉米内源基因IVR 、大豆内源基因Lectin 以及外源基因Cr yIA (b )、EPSPS 所用引物[3]由宝生物合成,PCR 反应体系和反应条件见文献[4]。从DNA 提取开始,所有实验均设有空白对照、阴性对照及阳性对照。同时,本研究还应用荧光实时定量PCR 技术(相当于定性PCR 与分子杂交),对PCR 结果进行验证(结果未显示)。2 结果与讨论2.1 结果
2.1.1 食用油脂中玉米内源基因I VR 和大豆内源基因Lectin 的检测 检测玉米、大豆的植物内源基因,可以判断从食用油脂中是否成功地提取到DNA ,以及所提取的DNA 是否适合用于PCR 扩增,同时还可以判断所提取的DNA 提取液中是否含有PCR 扩增抑制物,从而避免出现最终检测结果的假阴性。
图1、图2分别显示采用PCR -GeneScan 法检测食用油脂中玉米内源基因IVR 和大豆内源基因Lectin 的结果。
4
中 国 油 脂 2002年第27卷第2期
Dye /Sampl e Peak Minutes
Size
Peak Height Peak Area Data Point
2B ,
8619.23221.89
2068
2886752432B ,8719.30224.0824626385052624B ,9118.88221.9213461487751484B ,9218.95224.1515563802051676B ,8618.71221.7515401602951036B ,8818.79224.1313132437551237B ,9519.09221.8412281410052057B ,9619.13223.006157082521511B ,6218.77221.84264535339511711B ,6418.84224.203290396755137
图1 食用油中玉米内源基因IVR 的检测自上而下:1、2玉米胚芽油;3、4混合油脂; 5空白对照;6阴性对照;7阳性对照
。
Dye /Sampl e Peak Minutes Size Peak Height Peak Area Data Point
14G ,2315.66184.55
133
1144427114G ,2415.71186.071001352428416G ,1915.65184.461621512426716G ,2015.69185.741391684427821G ,2815.64184.33425137229426421G ,2915.68185.745262602614276
图2 食用油中大豆内源特异基因Lectin 的检测
自上而下:1、2大豆色拉油;3空白对照; 4阴性对照;5阳性对照。
由于食用油脂中DNA 含量非常低,提取后目标
DNA 含量及纯度的测定,若采用常规的凝胶电泳或紫外分光光度法,无法确定所提取的DNA 是否含有目标DNA ,凝胶电泳上所显示的条带以及从紫外获取的OD 值,都可能是担体DNA 和目标DNA 的混合信息。因此,食用油脂中所含的DNA 提取是否成功,只有使用特异引物,将目标DNA 通过PCR 扩增来判断,如本研究中制油原料内源基因的检测。从图1、2中可以看出,在市售的玉米胚芽油、大豆色拉油以及送检的混合油脂样品中,分别检出玉米和大豆的内源基因,说明DNA 的提取是成功的。2.1.2 食用油中抗虫基因和抗除草剂基因的检测
除了检测内源性特异基因外,本研究还检测了外源基因抗虫Cr yIA (b )基因及抗除草剂EPSPS 基因。由于本研究中使用的检测外源基因的引物,与检测制油原料(转基因大豆、玉米)的引物相同,因此,在成品食用油脂中检出外源基因,说明该食用油脂的制油原料含有转基因大豆或玉米。见图3、4。
D ye /Sample Peak Minutes Siz e Peak Height Peak Area Data Point
7B ,
6117.50181.62
658
674647717B ,6217.54182.75647749847827B ,6317.64185.526911195548098B ,6217.55181.68660665247848B ,6317.59182.81482555947958B ,6417.68185.4760410401482110B ,6017.58181.744654687479410B ,6117.62182.863463964480510B ,6217.72185.504377426483113B ,5317.59181.64130513900479513B ,5417.63182.77145619089480613B ,5517.72185.521402262874833
图3 食用油中抗虫基因CryIA (b )的检测
自上而下:1、2玉米胚芽油;3、4混合油脂; 5空白对照;6阴性对照;7阳性对照。
5
2002年第27卷第2期 中 国 油 脂
Dye /Sampl e Peak Minutes
Size
Peak Height Peak Area Data Point
7B ,
4315.10126.85
603
501941177B ,4415.13127.79295309141267B ,4515.21129.88712594841467B ,4615.24130.72481495641548B ,3814.90126.86515385040628B ,3914.93127.82214242540718B ,4015.00129.83624489540908B ,4115.03130.693653083409813B ,3414.55126.24186314765396613B ,3514.58127.363353589397613B ,3614.65129.38223416696399413B ,3714.67130.1756343914001
图4 食用油中抗除草剂基因EPSPS 的检测
自上而下:1、2辣椒油;3空白对照; 4阴性对照;5阳性对照。
2.2 讨论
对食用油脂进行转基因成分的检测,是油脂检
验工作中急需解决的问题,其首要前提是需要从油
脂中提取出适合于PCR 扩增的DNA 。
由于食用油脂经过精炼等加工步骤之后,所残留的核酸被严重破坏成碎片状,且含量极低。因此,提取开始前,利用DNA 可溶于水溶液的特性,在食用油脂中加入一定体积的TE 溶液进行洗涤,这一步骤对于成功提取DNA 至关重要。洗涤时的操作手法对于DNA 的得率有一定的影响。担体DNA 的选择,最好选择与目标DNA 的物种相差较远的植物、动物或微生物DNA 。本研究所选用的担体,不影响待测目标DNA 的检出,并作为PCR 反应时的阴性对照。油脂中的DNA 提取是否成功,可以通过检测该油脂所用原料的植物内源特异基因,如玉米油中的I VR 、大豆油中的Lectin 等进行验证。
目前,食用油脂的制油原料已部分使用转基因产品(转基因玉米、转基因大豆、转基因油菜籽)。因此,除了检测制油原料的自身基因外,本研究通过检测外源基因来验证所提取的DNA 是否适用于其他外源基因的检测。结果显示,在食用油脂中亦可检出抗虫基因Cr yIA (b )和抗除草剂草甘膦EPSPS 基因。由此可见,本研究所建立的食用油脂DNA 提取方法简单方便,也可用于不同基因的检测。
参 考 文 献
[1] GB 2716-1988,食用植物油卫生标准[S ].[2] GB 15197-1994,精炼食用植物油卫生标准[S ].[3] Carolyn D .Hurst ,Angus Knight ,Ian J Bruce .PCR detec -tion of geneticall y modified soya and maize in foodstuffs [J ].Molecular Breeding ,1999,5:579-586.
[4] 覃 文,董 洁,等.食品中转基因成分的检测[J ].食
品科学,2001,22(7):59-62.
Qualitative Detection for Geneticall y Modified Organisms in Edible Oils by PCR
QIN Wen ,DONG Jie ,DNEG Hong -ling ,GAO Dong -wei
(Guangzhou Entry -Exit Inspection &Quarantine B ureau of the P .R .of China ,510623Guangzhou )
A bstract :A qualitative method for detecting of transgenic genes in edible oils was reported .It is nor mally consid -er ed that the edible oils ,especially refining oils ,did not contain any DNA ,RNA and proteins .This study has estab -lished a useful method for extraction DNA from the edible oil samples and extracted DNA can be used as template for PCR .The endogenous genes (IVR ,Lectin )and transgenic genes (Cry ,EPSPS )were detected in the edible oil sa mples by the PCR -GeneScan method .
Key words :edible oil ;extraction ;DNA ;detection GMOs
6
中 国 油 脂 2002年第27卷第2期
转基因食品的安全性评价及检测
南京农业大学 硕士研究生课程（论文）考试试卷 课程名称： 学号： 姓名： 所在学院： 任课教师： 南京农业大学研究生院培养处印制
转基因食品的安全性评价及检测方法 摘要：自1996年以来，转基因作物的大规模商业化生产为人们带来了巨大的社会经济效益，但是转基因技术存在一定的风险性，因此加强转基因食品的安全性评价和检测变的尤为迫切和重要。本文从毒理性和致敏性等方面综述了转基因食品的食用安全性评价，并从重组DNA本身以及其产物等角度探讨了转基因食品的检测方法，以期使读者对转基因食品有更加系统、全面的了解。 关键词：转基因食品；益处；安全性评价；检测方法 Progress in Safety Assessment of Genetically Modified Foods Abstract: Since the large-scale commercialized production of genetically modified (GM) crops started in 1996, it has brought great socioeconomic benefits to human beings. Yet transgenic technology may give rise to certain risks, so it is urgent and important to strengthen the safety assessment and detection of GM foods. In this paper, the safety evaluation contents of GM foods are summarized, including toxicity, allergenicity, etc. and discussed the measuring method of GM food from the perspective of recombinant DNA and its products. The target of this paper is to enable the readers to have a more comprehensive understanding of food safety of GM foods. Key words：genetically modified foods; benefit; safety evaluation; detection methods 前言 转基因作物产业化已成为全球新的经济增长点，是增强农业国际竞争力的重要保障。然而，随着转基因作物的研发和产业化规模的不断扩大，由此引起的潜在生物安全问题已经成为争论的焦点。这些问题已经成为与政治、宗教等复杂的社会因素以及国际贸易相交织的综合性问题。科学地解决这些问题，将能够保障和促进我国生物技术研发及产业化的健康发展，跟上世界科技发展前沿和主流，在新世纪的国际竞争中占据主动。提高转基因生物及其产品的安全性，加强转基因生物的安全管理，不仅关系到我国人民的身体健康和环境安全，而且也关系到我国农业生物技术产业的可持续发展。本文旨在通过综述近几年的科学研究，科学、客观的分析转基因食品的安全性，并且列举出几种检测转基因食品的
地中海贫血相关基因检测试剂注册技术审查指导原则
附件3 地中海贫血相关基因检测试剂 注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导注册申请人对地中海贫血相关基因检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对地中海贫血相关基因检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，也不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究和验证资料，相关人员应在遵循法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 地中海贫血（简称地贫）是一种常染色体隐性遗传病，是由于珠蛋白基因发生突变（包括点突变和缺失等），致使珠蛋白肽 —1 —
链合成减少或完全不能合成而导致的一组单基因遗传性溶血性疾病，轻者可无临床表现，重者以进行性溶血性贫血为主要特征。根据珠蛋白肽链合成受到抑制的类型，地贫分为α-，β-和γ-地贫等，临床上最常见的是α-和β-地贫。地贫主要分布在地中海沿岸、东南亚和少数非洲地区，具有明显的种族特性和地域分布差异。地贫是我国南方地区最常见、危害最大的遗传病之一，尤以广西、云南、广东、海南、四川和贵州等省份为甚，云南、海南和广东的地贫基因人群携带率可达10%以上，广西更是达到了20%以上。 α-地贫主要是由于α-珠蛋白基因发生突变而引起。α-珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括胎儿期和成人期表达的2个基因（α2和α1），基因的排列顺序为5’-α2-α1-3’。根据单倍型的情况，可将α地贫分为3类：（1）缺失型α+地贫（-α/），缺失1个α基因；（2）缺失型α0地贫（--/），2个α基因同时缺失；（3）非缺失型α+地贫（αTα/或ααT/ ），1个α1或α2基因发生点突变或少数几个碱基的缺失。中国现已发现至少19种α-珠蛋白基因大片段缺失和38种α-珠蛋白基因点突变。其中，6 种α-珠蛋白基因的突变：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αWSα/（HBA2：c.369C>G）、αQSα/（HBA2：c.377 T>C）；αCSα/（HBA2：c.427T>C）占患病人群总数的98%。 α-地贫基因型和临床分型的关系已经基本阐明。α-地贫的表型严重程度随着功能性α-珠蛋白基因的减少而加重：（1）1个α-基因缺失或点突变（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα），称为静止型α-地贫，通常不贫血，血液学表现为小细胞低色素；（2）2个α- —2 —
双荧光素酶报告基因检测试剂盒使用说明
双荧光素酶报告基因检测试剂盒使用说明 产品说明： 报告基因检测，是真核基因表达调控研究的常用方法。由于检测光量子的方法非常敏感，采用生物发光(bioluminescent)法，是报告基因检测最常用的有效手段。荧光素酶(luciferase)催化底物荧光素的转化，发射出光子。萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和海肾荧光素酶(Ranilla luciferase)催化的发光反应，具有相似的光学特征和很好的浓度线性范围(7~8个数量级的线性范围)，酶的检测灵敏度达10-18mol到10-20mol，但两者催化的化学反应底物和最适反应条件完全不同。这两种荧光素酶配合形成了十分有效的双荧光素酶报告基因系统，其中Ranilla luciferase通常作为内参照。 本试剂盒提供了一体化形式的双荧光素酶检测系统。采用通用裂解缓冲液，适合于两种荧光素酶活性的保持，且与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容；优化的两种酶反应体系，使每种发光反应持续数十分钟，以便于手工操作多个样品；并保证Firefly luciferase发光及时淬灭，不影响后续Ranilla luciferase的测定；优化的反应体系还使两种荧光素酶活性比值趋于合理的敏感范围，更有利于后续数据的比较。 产品内容： 名称数量保存条件5x Universal Lysis Buffer(通用裂解液)25ml-20℃ Fassay Buffer I(虫酶缓冲液)10ml-20℃ Fassay Substrate I(虫酶底物)0.5ml-20℃ Rassay Buffer II(海酶缓冲液)10ml-20℃ Rassay Substrate II(海酶底物)0.2ml-20℃可作100次双荧光素酶检测。低温运输，-20℃或-80℃避光保存。有效期6个月。
食品理化检验技术试题及参考答案
《食品理化检验技术》试题及参考答案 填空题（每小题2分，共计20分） 1．液态食品的相对密度可反应液态食品的和。 2．样品的制备是指对采集的样品进行、。混匀等处理工作。 3．食品中水的有在形式有和两种。 4．膳食纤维是指有在于食物不能被人体消化的和的总和。 5．碘是人类必需的营养素之一：它是的重要组成成分。 6．食品中甜味剂的测定方法主要有、、薄层色谱法等。 7．合成色素是用人工方法合成得到的，主要来源于及副产品。 8．食品中农药残留分析的样品前处理一般包括三个步聚：即、和浓缩。9．赭曲霉毒素的基本化学结构是由连接到β-苯基丙氨酸上的衍生物。 10．镉是一种蓄积性毒物，主要蓄积部位是肾和。 11．丙稀酰胺由于分子中含和，具有两个活性中心，所以是一种化学性质相当活泼的化合物。 12．雷因许氏试验是常用于和快速检验的定性实验。 多项选择题（每小题2分，共计10分） 1．关于保健食品的叙述正确的是（） A．具有特定保健功能 B、可以补充维生素、矿物质 C、适宜特定人群食用 D、具有调节机体功能，不以治疗疾病为目的 2．标准分析法的研制程序包括（） A．立项 B、起草 C、征求意见 D、审查 3．食品样品制备的一般步骤分为（） A．去除非食品部分 B、除去机械杂质 C、均匀化处理 D、无机化处理 4．在常压下于（）0C（）h干燥食品样品，使其中水分蒸发逸出，食品样品质量达到恒重。 A．950C-1050C B、900C-1000C C、2-4h D、4-6h 5．通常食品中转基因成分定性，PCR检测可分为以下几个步骤（） A．确定待测目标序列 B、引物设计和PCR扩增 C、PCR反应体系的构建 D、电泳及结果分系 判断题（每小题2分，共计20分） 1．海豚毒素是一种小分子非蛋白类神经毒素，其毒性比剧毒药物青化钾还要大1000倍，与人的致死量为0.5mg（） 2．塑料种类繁多，按受热后的性能变化可分为热固性和热塑性。（） 3．将真核细胞中主要的已知基因mRNA通过逆转录PCR扩增合成不同基因的c DNA探针，并制 成基因芯片。（） 4．现场样品的采集必须遵照统计学意义上的随机原则，从而使所采集的样品具有代表性，并能最终保证检测结果的可靠性和准确性。（） 5．食品中丙烯酰胺的主要来源是热力加工食品，其形成的机制目前基本的到确认。（）6．PCBs不是公认的持久性有机污染物。（） 7．分光光度法是测定挥发性亚硝胺类化合物的方法。（） 银白色软金属，原子量112.41，密度8.6，熔点320.90C，沸点7670C。（） 8．C d 9．氨基甲酸酯是继有机磷农药后的一类重要的防腐剂。（） 10．皂苷对人体的新陈代谢起着重要生理作用，它可以抵制血清中指类氧化，抵制过氧化酯质生成。（）
诸多检测、实验让你自己判断转基因大豆油是否安全无害!
诸多检测、实验让你自己判断转基因大豆油是否安全无害！ 作者：半解一知半解时间：2013年6月17日 闲话少说，我们看看以下国内一流的研究、检测部门多年来的检测记录吧，自己判断转基因大豆油到底是不是安全无害： 1。《中国油脂》2002年2期广州出入境检验检疫局食品实验室《PCR法定性检测食用油脂中转基因成分》： 【摘要】：食用油脂(尤其是精炼油)被认为几乎不含DNA和蛋白质等生物大分子。针对食用油脂中DNA含量极低、破坏严重的特点，成功地建立了食用油脂中DNA提取方法，并从中检测出玉米、大豆内源基因(IVR, Lectin)以及外源抗虫基因[CryIA(b)]和抗除草剂基因(EPSPS)，为油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。 2。《华北农学报》2004年1期天津农业科学院中心实验室、辽宁省出入境检验检疫局《大豆色拉油中转基因成份检测技术研究》： 【摘要】：针对大豆色拉油中DNA较难提取的问题提出了充分乳化、延长醇沉淀时间和反复富集小片段DNA等措施,有效地从大豆色拉油中提取到DNA,并通过大豆特异内源基因扩增得以证明。从两个不同品种商品大豆色拉油中检测出35S启动子和NOS 终止子外源调控序列,并通过增加所用DNA模板用量检测出目 的基因EPSPS序列,建立了大豆色拉油中转基因成分检测方法。3。《生物化学与分子生物学》2007年安徽大学《食用油DNA 提取方法及转基因成分检测技术的研究》： 该论文明确说明：“通过优化实验对普通PCR法检测外源基因进行分析，得出以下最佳反应条件”、“可提供一种比普通PCR更可靠灵敏的转基因成分定性检测方法”。
4。《东北农业大学学报》2007年6月东北农业大学生命科学学院《转基因大豆及其深加工产品的PCR检测》： 【摘要】：以PCR技术为基础,建立了从大豆及其深加工产品中检测转基因成分的方法.大豆及其深加工产品采用改良的CTAB法进行DNA提取纯化,大豆色拉油DNA则用试剂盒方法进行了提取纯化.对提取的DNA用PCR方法对大豆特异性内源基因lectin进行扩增,设计CaMV35启动子和NOS终止子特异性引物对其是否含有转基因成份进行初步的定性PCR筛选,并用抗除草剂基因CP4EPSPS对阳性结果进行确证.实验结果表明,改良的CTAB法对大豆深加工产品的DNA有很好的提取效果,而试剂盒方法对色拉油的DNA有良好的提取效果;PCR检测转基因的方法快速高效,检测结果与标准相符. 5。《中国油脂》2007年8期广州市产品质量监督检验所食品中心《食用大豆油中转基因成分的检测》： 【摘要】：食用油脂中转基因成分的检测是当前食品检验工作的一个主要方面。针对食用油脂中DNA含量极低、DNA序列片段短、破坏严重的特点，建立了食用油脂中DNA提取方法，通过实时荧光PCR可检测出大豆内源基因（Lectin）以及外源抗除草剂基因EPSPS，为食用油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。 6。《河北农业大学学报》2007年河北农业大学《五重PCR 检测转基因大豆及其食用油脂的研究》 【摘要】：随着转基因产品商品化，转基因植物、动物、微生物加工而成的转基因食品在传统食品市场中的份额在不断加大，转基因食品已经不知不觉的走进了人们的餐桌，进入了食物链。然而，转基因食品中含有新的遗传物质，即外源DNA以及由外源基因编码的新蛋白，而传统食品是不存在这些情况的，并且传统食品是经过人类几千年的食用证明是安全的，因此转基因食品的安全性是摆在人类面前的重大难题；由于转基因食品的安全性在较短的时间内无法确定，因此，目前各国对转基因食品都采用
转基因食品的检测方法材料
生命科学前沿讲座论文 转基因食品的检测方法 姓名：陈继款 系别：生命科学学院 专业：生物信息学 年级：2008级 学号：080567011 指导老师：薛李春 总成绩： 2010年07月02日
转基因食品的检测方法 自1983年世界第一例转基因作物问世以来，目前全球转基因农作物种植面积已达到5 000万hm2以上，大量的转基因农产品被直接或间接的制成人类的食品，呈迅猛发展的趋势。但是转基因作物作为一种新物种，其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定。许多国家以立法或其他形式要求对转基因产品进行标记。我国于2001年5月23日颁布《农业转基因生物安全管理条例》，2002年3月20日开始实行的《农业转基因生物标识管理办法》规定，国家对农业转基因生物实行检验检疫和标识制度。世界各国均对转基因食品及其加工产品出具是否为转基因产品的认定报告。因此转基因产品的检测就显得尤为重要。转基因食品的检测主要从两个方面人手，一是核酸水平，即检测遗传物质中是否含有插入的外源基因；二是蛋白质水平，即通过插入外源基因表达的蛋白质产物或其功能进行检测，或者是检测插入外源基因对载体基因表达的影响，主要检测外源基因对插入位点附近基因影响及对其代谢产物的影响，由于该类型检测成本高，所需时间长，且被认为重要性较低，目前该类检测实际工作中较少涉及。本文分别对核酸和蛋白质两种水平上的检测方法进行综述。 1核酸水平 主要检测报告基因、启动子和终止子，是当前转基因产品检测的重要手段。椰菜花叶病毒(CaMV)35s启动子、胭脂碱合酶NOS终止子等10多种基因和基因片段广泛存在于转基因植物中，这就为检测转基因食品提供了便利。核酸水平的检测可以分为定性和定量两种。 1．1定性检测 1．1．1聚合酶链式反应(PCR) 1996年德国伯恩斯坦大学的Meyer Rolf等论证了PCR检测转基因食品的可能性。利用该方法在鉴定转基因抗除草剂大豆RoundUp ReadyTM Soybean(RRS)和转基因抗虫玉米系列标准品Btl76 Maxi maizer的实验中，可以检测到仅为0．5％转基因成分。Matsuoka等通过对7种转基因玉米转入的外源基因的序列分析，设计了14对检测该7种转基因玉米启动子、终止子和结构基因的引物，分别对转基因玉米、非转基因玉米、转基因大豆、非转基因大豆进行了PCR扩增检测，同时为检测所设计引物的特异性，还对其他作物如水稻、大麦、小麦等进行了PCR扩增，检验结果表明该方法能够快速有效地检测转基因玉米品种。每一次实验均需要设有阴性及阳性对照以确保实验结果可靠性。在样品采集及处理过程中也需要注意防止污染。 1．1．2多重PCR 多重PCR是常规PCR方法的改进，它是在同一个反应中同时扩增两个或多个目标基因序列。这种方法具有更大的可靠性和适应性，并且能降低检测成本。多重PCR可以同时针对几个靶位点进行PCR技术检测。V．T．Forte等利用其设计的多重PCR方法对转基因大豆和Bt玉米样品进行实际检测，结果表明该方法能够准确的检测食品中是否含有转基因成分，其检测结果可以精确到2％～0．1％的范围。Permingeat等仅用两
基因检测试剂行业分析资料
基因检测试剂行业分析 一、行业与市场 中投顾问发布的《2017-2021年中国基因检测行业投资分析及前景预测报告》表示，基因检测在我国的发展随着技术手段的进步正在越来越快速，虽然中国的基因公司数量众多，但实力强大的主流公司只有华大基因、贝瑞和康、安诺优达、达安基因、诺禾致源、百迈克、凡迪生物等，数量不超过十家。在1999年，华大基因公司成立，该公司的核心人物全部来自人类基因组的中国部分。目前员工数量超过5000人，最近几年公司的收入规模已经达到10亿元级别。公司业务范围广泛，几乎囊括了其余公司的所有业务种类。而行业中其他各基因公司所涉及的业务范围都没有明显差异，他们主要靠的科技服务和医学服务的收入起家。华大基因公司业务涉及面广，主要包括无创产前基因检测、辅助生殖、单基因病、新生儿筛查、肿瘤个体化治疗、遗传性肿瘤筛查、心血管病筛查、血液病筛查等项目。无论从测序仪器还是人才储备来说，都是中国基因检测行业的老大。而同行中贝瑞和康的业务主要集中在无创产前基因检测技术（NIPT）和科技服务，很少涉及其他领域，在中国无创产前基因检测技术这个行业中只有华大基因的市场占有率高于贝瑞和康。 1、产业综述
（1）近几年来基因测序市场飞速发展，从2007年的7.94亿美元增长到2013年的45亿美元，年复合增长率为33.5%，预计未来几年依旧会保持快速增长，2018年将达到117亿美元，年复合增长率为21.1%。 （2）基因测序技术以二代基因测序技术为主，三、四代测序技术产业化还在探索中，由于第三、四代DNA测序技术目前面临测序成本高和测序结果准确度相对较低的市场化瓶颈，其大规模商业化仍然需要较长的时间，所以二代测序在5-10年内仍然是基因测序的主流技术。 （3）目前国内企业大多集中在测序服务市场，壁垒低，小企业增长迅速，竞争较为激烈。中国测序平台拥有量仅次于美国，全世界规模较大的基因组研究中心有多个在中国，其中华大基因拥有世界上数量最多、种类最齐全的第二代测序仪，产能约占全球的10%-20%。 （4）基因测序行业的下游产业主要包括医院应用、科研应用、商业应用等，目前科研应用占比最大，其次是商业应用，医疗应用占比最小。 （5）行业平均盈利水平比较高，产业链上游企业掌握大部分话语权。
植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法编制说明
附件7： 出入境检验检疫行业标准草案编制说明（参考格式） 标准草案名称 中文植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法 英文Protocol of the real-time PCR for detecting genetically modified plants and their derived products 与国际标准和国外先进标准一致程度情况□等同 □修改 ?非等效 标准号 英文名称 Protocol of the real-time PCR for detecting genetically modified plants and their derived products 中文名称 植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性 检验方法 任务来源批准立项 的文件名 称和文件 号 植物及其加工产品中转基因 成分实时荧光PCR定性检验 方法 计划编号2011B477r 制（修）订情况□制定?修订替代的标准编号SN/T 1204-2003 起止时间2012年12 月--- 2013 年12 月 项目承担单位中国检科院 起草团队中国检科院，山东出入境检验检疫局，上海出入境检验检疫局 专业类别□食品（化妆品）检验；□卫生检疫；□动物检疫；?植物检疫； □纺织产品检验；□轻工产品检验；□机电产品检验；□化工、矿产品和金属材料检验；□管理；□鉴定；□包装及危险化学品
标准体系表代 码 调整情况无调整2 背景情况
目的、意义原标准是10年前制定的，2003年，全球转基因作物种植面积只有8亿公顷，至2012年，种植面积达亿公顷，全球59个国家或地区批准了2497项申请，涉及25种作物319个转化体。转基因产品呈现出生物技术产品品种多、性状全、成分复杂等新特点，原有标准所涉及的检测方法远远无法满足日常转基因检测的需求。具体存在的问题有，1、转基因筛查用通用元件有很大的发展，急需补充完善相应的检测方法；2、原有标准中的一些检测方法有更新，可采用更先进更灵敏的检测方法；3、品系检测是目前转基因鉴定的重点，原标准中尚未涉及，需制定系统覆盖我国主要进出口作物的品系检测方法；4、现有的标准检测方法较分散，在实际的检测操作中带来很大的不便。基于上述背景，本标准拟制定一项内容全，适用面广，可操作性强、灵敏度高的转基因植物及其产品检测方法。 与国内外相关 标准、文献的关 系 引用国际国内已发布的权威标准方法，属于标准等同采用。
Braf基因突变检测试剂盒说明书
人类B-raf基因V600E突变检测试剂盒（荧光PCR法）说明书 【产品名称】 通用名：人类B-raf基因V600E突变检测试剂盒（荧光PCR法） 英文名：Diagnostic kit for V600E Mutation of Human B-raf Gene(Fluorescence PCR Analysis) 【包装规格】 20测试/盒 【预期用途】 B-raf基因位于7号染色体长臂上，是一种癌基因，属RAF基因家族，有18个外显子，编码一种含783个氨基酸的B-raf蛋白，是EGFR通路RAS/RAF/MEK/MRK/MAPK中重要的转导因子，参与调控细胞生长、分化和凋亡等多种生理过程。 针对EGFR的肿瘤靶向药物通过抑制该途径发生药理作用。研究表明在非小细胞肺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中存在B-raf基因突变，其中第15外显子上V600E点突变最常见，约占所有突变的90%以上，该突变导致B-raf蛋白被异常激活，从而使患者接受EGFR-TKI药物和EGFR单抗类药物治疗失效。据中国2010版《肿瘤学临床实践指南》建议，对K-raf基因检测正常的非小细胞肺癌和结直肠癌患者，应进一步检查B-raf基因的突变状态，以指导靶向药物治疗方案。 本试剂盒以人非小细胞肺癌、结直肠癌肿瘤组织切片提取的基因组DNA为检测样本，用于肿瘤组织B-raf 基因V600E点突变的定性检测，为临床肿瘤靶向药物的个体化用药提供依据。本公司尚无临床实例证实B-raf 基因突变与靶向药物的相关性，其相关性主要来自文献报道，因此本试剂盒检测结果仅用于辅助临床医生对肿瘤患者制定用药方案。 【检验原理】 本试剂盒基于实时荧光PCR平台，结合等位基因特异性扩增（ARMS）技术、野生型基因扩增抑制技术和多重PCR技术检测B-raf基因V600E突变。ARMS技术是指PCR引物的3’端末位碱基必须与其模板DNA互补才能有效扩增，通过设计特异性ARMS引物，对存在V600E突变的B-raf基因靶序列进行PCR扩增放大，并利用FAM基团标记的Taqman 探针对扩增产物进行检测。因为采用了野生型基因扩增抑制剂，使ARMS体系能够耐受更高浓度的背景野生型B-raf基因，降低了试剂盒对基因组样本的DNA浓度要求，提高了检测灵敏度。 为质控扩增体系的有效性，试剂盒设置了内质控和外质控，内质控基因是人类基因组的一个保守片段，长
转基因材料的检测
转基因材料的检测 —转病毒复制酶基因“华农1号”番木瓜的PCR检测 摘要：本实验采用定性的一次PCR反应分析方法，根据提供的转基因植物材料中转入基因，启动子，终止子和基因本身的DNA序列，设计出四对特异的PCR扩增引物35S-F与35S-R、NPT1-F与NPT1-R、HN1F与HN1R、HN2F与HN2R，两对非特异性的PCR扩增引物Nos2-F与Nos2-R 、HN3F与HN3R，然后以华农1号转基因木瓜、野生型木瓜、待测样品的DNA为模板，为模板进行PCR扩增，电泳结果显示野生型木瓜都没有扩增出条带，转基因木瓜都扩增出条带，待测样品除了NPT1-F与NPT1-R没有扩增出条带，其他都有，可以确定待测样品为转基因产品。关键词：转基因；PCR定性检测；转病毒复制酶基因；华农1号 转基因作物从1996年在全球开始进入商品化生产，经过12年的发展,其种植的面积从当年的170万hm2扩大到2007年的1.14亿hm2 [1]，为保护消费者的知情权和选择权，多个国家和地区强制要求对含有一定阈值以上转基因成分的产品进行标识，如欧盟规定转基因成分含量标识的阈值是0.9%[2]，韩国为3.0%[3], 日本是5%[4]等，而美国和加拿大则采用了推荐而非强制的标识制度。我国也从2002年3月开始,要求对大豆、玉米、棉花、番茄、油菜等5种作物的17种产品进行标识[5]，为了适应对转基因产品的标识要求，已经建立了一系列的检测方法，
以基于其中外源DNA检测的聚合酶链式反应PCR应用最广泛[6]。 转基因材料的检测主要是针对选择性标记和报告基因、转入基因、启动子和终止子等方面的检测，是当前转基因产品检测的重要手段。如椰菜花叶病毒(CaMV)35s启动子、胭脂碱合酶NOS终止子等10多种基因和基因片段广泛存在于转基因植物中，这就为检测转基因材料/食品提供了便利。核酸水平的检测可以分为定性和定量两种。 早在20世纪初科学家就发现了病毒具有交互保护作用，近年来，科研工作者也利用这一原理开展了大量的转病毒部分基因组的转基因工作，使得植物病毒病的防治有了新的发展。抗病毒基因多数来自于病毒本身的基因，病毒的外壳蛋白基因、复制酶基因、运动蛋白基因等，并已经在番木瓜上获得成功转化[7]。 本实验根据提供的转基因植物材料中转入基因，启动子，终止子和基因本身的DNA序列，设计出几个适用于检测转基因材料的引物对，然后以野生型番木瓜和转基因番木瓜“华农1号”以及待测样品DNA为模板进行PCR扩增，鉴别待测样品是否为转基因材料。 1 材料与方法 1.1 材料 华农1号 野生型木瓜 待检测样品 1.2 方法 1.2.1 DNA提取 1.2.1.1 称取0.5 g的植物叶片，搁置于研钵中，加入液氮，捣碎叶片。
【CN209988403U】一种生物基因检测用试剂盒【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)实用新型专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201920324735.8 (22)申请日 2019.03.14 (73)专利权人 袁海燕 地址 537200 广西壮族自治区贵港市桂平 市人民西路7号桂平市人民医院 (72)发明人 袁海燕 刘婵媛 李慧敏 侯佳兴 其他发明人请求不公开姓名 (51)Int.Cl. B65D 81/18(2006.01) B65D 77/04(2006.01) B65D 25/10(2006.01) B65D 81/107(2006.01) F25D 3/08(2006.01) B65D 85/30(2006.01) (54)实用新型名称 一种生物基因检测用试剂盒 (57)摘要 本实用新型公开了一种生物基因检测用试 剂盒，包括盒体，盒体内腔的底部设置有冰袋放 置腔，盒体内腔的底部远离冰袋放置腔的一侧固 定连接有放置板，放置板的顶部固定连接有放置 筒，放置筒内腔的顶部与底部均固定连接有固定 块。本实用新型通过设置盒体、冰袋放置腔、放置 板、放置筒、固定块、压缩弹簧、滑板、滑块、卡杆、 橡胶套、试管本体、海绵垫、隔板和保温腔的配合 使用，解决了现有的生物基因检测用试剂盒在使 用时，由于试剂盒内部的试管放置架对试管的固 定效果较差，导致现有的生物基因检测用试剂盒 在使用过程中易造成试管松动，导致内部液体流 失的问题，方便了使用者的使用，提高了生物基 因检测用试剂盒的实用性。权利要求书1页 说明书3页 附图2页CN 209988403 U 2020.01.24 C N 209988403 U
亚麻籽中转基因成分检测实时荧光PCR法编制说明
《亚麻籽中转基因成分检测实时荧光PCR法》 编制说明 一、任务来源 根据国家认证认可监督管理委员会2010年下达的标准编写任务通知(计划编号：2010B323k)，由辽宁出入境检验检疫局主持制定。 二、意义 亚麻籽是世界上重要的油料作物之一，富含多量不饱和，这些脂肪酸可以加速，提高能力，分解，平衡血压，以及压抑制和增长等多种功效。以、、和为主的西方，对亚麻子作为功能的研究和开发作了大量的工作，亚麻籽也作为辅料添加在谷物早餐、面包、混合坚果和快餐食品中。1996年加拿大萨克斯其万大学培育了一种具有抗除草剂性状的转基因亚麻籽FP967品系，又称为CDC Triffid 转基因亚麻籽。后来被除名并规定永久不得商业化耕种，FP967品系转基因亚麻籽可以说是世界上独一无二的转基因亚麻籽。2009年，非法转基因亚麻籽在欧洲23国以及韩国、斯里兰卡、新加坡、泰国等28个国家发现，谷物、面包等产品若发现受污染都会下架。面对生物基因工程技术对我国经济利益带来的冲击和国外转基因产品对生态环境和消费者可能带来的风险，对转基因亚麻籽进行检测具有重要的现实意义。 三、制标依据和研究过程 本标准的编制工作引用和参考了GB/《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求进行编写。此外，参考了国内外相关文献，主要有： 1. GB/T 标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则 2. NOST-Spec construct-specific method for the detection of CDC triffid flax (Event FP967) using real-time PCR, EU-CRL. 标准研制过程中，在方法的特异性、灵敏度等方面做了大量实验，并对所建立的标准方法进行了应用研究。 本标准经过验证实验，证明切实可行。 本标准检验方法是在以上研究、验证和鉴定的基础上进行起草的。 四、FP967品系转基因亚麻籽品系介绍和检测引物的来源 1. FP967品系转基因亚麻籽 FP967品系转基因亚麻籽，又称为CDC Triffid 转基因亚麻籽。由加拿大萨克斯其万大学所培
食品中转基因成分检测
食品中转基因成分检测 第4章 DNA提取和纯化 M.Somma
目录 第４章 DNA提取和纯化 引言 3 提取方法 4 纯化方法 4 CTAB提取和纯化方法 6 分光光度计测定DNA含量9 分光光度计测定DNA的原理9 核酸浓度测定10 实验12 参考文献16
引言 在所有重组DNA技术和大多数分子生物学研究中，核酸的提取和纯化是实验的第一步。核酸提取方法研究的目的，是为了从不同来源的材料中获得高纯度的核酸，以便于利用聚合酶链式反应 (Polymerase Chian Reaction, PCR) 进行转基因品系的特异性分析。核酸的质量和纯度是PCR分析的关键因素之一。获取高纯度的核酸，避免抑制污染物，需要选择合适的DNA提取方法。表1列出了在PCR检测中可能抑制反应效率的污染物。为了防止由于样品中PCR抑制物的存在导致出现假阴性结果，强烈推荐设置一个对照实验以测试PCR抑制作用。基于此目的，一般采用植物特异性(真核或叶绿体) 或种属特异性的PCR检测。 表1. PCR反应过程中的一些抑制物 抑制物抑制浓度 SDS > 0.005% 苯酚> 0.2% 乙醇> 1% 异丙醇> 1% 乙酸钠> 5 mM 氯化钠> 25 mM EDTA > 0.5 mM 血色素> 1 mg/ml 肝磷脂> 0.15 i.m/ml 尿素> 20 mM 反应混合物> 15% 目前有许多种核酸提取和纯化技术，一般基于以下准则来选择最适宜的提取纯化技术：z目标核酸 z来源生物 z起始材料(组织、叶片、种子、加工过的材料等) z对结果的要求(产量、纯度、纯化所需时间等等) z下游应用 (PCR、克隆、标记、印迹、RT-PCR、cDNA合成等等)
地中海贫血基因检测试剂盒标准操作规程
1.目的： 本试剂盒用于定性检测α地中海贫血和β地中海贫血，可用于检测从人血液或血斑样本中获得的人基因组DNA中与地中海贫血相关的25个突变位点，包括19个β地中海贫血和6个α地中海贫血的突变位点。检测结果可以辅助临床诊断，也可用于流行病学调查、婚检及产前检测等领域。 2.责任人： 3.适用范围： 本标准化操作规程适用于晶芯?地中海贫血基因检测试剂盒（微阵列芯片法）整体解决方案操作使用的全过程。 4.PCR扩增： 4.1 设备与耗材 4.1.1 4℃/-20℃冰箱； 4.1.2 超净工作台2台（分别用于PCR体系配制和模板加样）； 4.1.3 微型高速离心机（Eppendorf，5424）； 4.1.4漩涡混合器； 4.1.5 PCR扩增仪（博奥生物集团有限公司，晶芯?E-Cycler TM96 PCR仪）； 4.1.6单道移液器（1000μl，200μl，20μl），8道移液器（10μl），灭菌枪头（1000μl，200μl，20μl）； 4.1.7 离心管架，96孔板，1.5ml离心管，PCR扩增管或八连排管（200μl）； 4.1.8 记号笔，手套（无粉乳胶，PE）； 4.1.9 75%酒精棉，废液缸和消毒液； 4.2 试剂 晶芯?地中海贫血基因检测试剂盒（微阵列芯片法）B部分中的扩增试剂A，B，C，D，
E以及PCR扩增酶试剂，阳性对照品（博奥生物集团有限公司）。 4.3 样本 人基因组DNA（提取方法详见干血斑基因组提取标准操作规程）。 4.4 实验前准备 4.4.1 打开超净台紫外灯照射20min，开风机15min后打开日光灯进行操作； 4.4.2 准备实验用品，包括PCR扩增试剂，离心管架，96孔板，移液器等； 4.4.3 从-20℃冰箱取出PCR扩增试剂及基因组DNA，室温融化，涡旋混匀后瞬时离心； 4.4.4 核对样本名称及数量，排好顺序，将样本的加样顺序记录下来。 4.5 操作过程 4.5.1 用75%酒精棉擦拭双手，超净台面，移液器，96孔板及离心管架； 4.5.2 按照加样顺序准备PCR反应管，并在管盖和管身同时做好相应标记； 4.5.3根据样本数目准备5倍数量的200μl PCR扩增管，在试剂准备区内，将融化后混匀的PCR 扩增试剂A、B、C 、D、E按17μl/管，分别分装到5个PCR 扩增管中。再分别向这5个PCR扩增管中加入3μl的PCR扩增酶试剂。
PCR法定性检测食用油脂中转基因成分_覃文
收稿日期:2002—01—15 作者简介:覃 文(1957—),女,高级工程师/博士后;研究方向为食品及动物产品生物检测。 文章编号:1003—7969(2002)02—0004—03 中图分类号:TQ646.4 文献标识码:A PCR 法定性检测食用油脂中转基因成分 覃 文,董 洁,邓鸿铃,高东微 (广州出入境检验检疫局食品实验室,510623广州市珠江新城花城大道66号) 摘要:食用油脂(尤其是精炼油)被认为几乎不含DNA 和蛋白质等生物大分子。针对食用油脂中DNA 含量极低、破坏严重的特点,成功地建立了食用油脂中DNA 提取方法,并从中检测出玉米、大豆内源基因(IVR 、Lectin )以及外源抗虫基因[Cr yIA (b )]和抗除草剂基因(EPSPS ),为油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。 关键词:食用油脂;DNA ;提取;转基因检测 对食用油脂的检验,一直是以食用油卫生标准 中的酸值、过氧化值、羰基值、黄曲霉毒素[1,2]等与安全卫生有关的检验项目进行检验。随着生物技术的发展、人民生活水平的提高,对食用油脂的检验,将会逐渐扩展到对核酸、蛋白质等生物大分子的检验。近年来,我国进口的制油原料中,有相当数量是转基因产品。由于目前世界上已有不少国家规定了转基因食品必须加贴标签或禁止进口,因此,对食用油脂进行转基因成分的检测,就显得尤为重要。如何鉴别食用油脂是否为转基因食品,除了检测原料以外,更多的情况下,是需要从成品食用油中直接进行检测,而从食用油脂中提取出可用于核酸检验的DNA ,是进行该项检验的关键步骤。目前尚未见有关从食用油脂中提取DNA 的报道。本文介绍一种稳定有效且简便易操作的从大豆油、玉米胚芽油等食用油脂中提取DNA 的方法。用该方法提取的DNA ,可以用于转基因成分以及其他核酸成分的检测。本文针对已商品化的转基因大豆、玉米中的外源基因,采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Re -action ,PCR )及基因片段扫描(GeneScan )技术进行检测。 1 材料与方法1.1 材料 食用油脂购自超级市场,部分样品为送检样品。1.2 仪器、试剂 水浴锅,旋涡振荡器,核酸蛋白分析仪,定性(定量)PCR 仪,DNA 测序仪等;PCR 试剂(Promega )及 GeneScan 试剂(Applied Biosystems )。 1.3 方法 食用油脂中DNA 的提取:在2ml 离心管中加入1ml 食用油及400μl TE (Tris -EDTA ),颠倒混匀5min 后13000r /min 室温离心5min 去上层油脂层;将离心管中余下的约400μl 水相溶液按照Wizard ?Genomic DNA Purification Kit (Promega )说明书操作步骤提取DNA ;在沉淀DNA 之前,向离心管中加入≥1μg 植物基因组DNA 作为担体,并加入600μl 室温异丙醇,颠倒混匀2-5次后室温静置45min -60min 沉淀DNA ;沉淀的DNA 经离心、70%乙醇洗涤并干燥后,加入TE 溶液溶解DNA ,置于4℃保存备用。 PCR 扩增玉米内源基因IVR 、大豆内源基因Lectin 以及外源基因Cr yIA (b )、EPSPS 所用引物[3]由宝生物合成,PCR 反应体系和反应条件见文献[4]。从DNA 提取开始,所有实验均设有空白对照、阴性对照及阳性对照。同时,本研究还应用荧光实时定量PCR 技术(相当于定性PCR 与分子杂交),对PCR 结果进行验证(结果未显示)。2 结果与讨论2.1 结果 2.1.1 食用油脂中玉米内源基因I VR 和大豆内源基因Lectin 的检测 检测玉米、大豆的植物内源基因,可以判断从食用油脂中是否成功地提取到DNA ,以及所提取的DNA 是否适合用于PCR 扩增,同时还可以判断所提取的DNA 提取液中是否含有PCR 扩增抑制物,从而避免出现最终检测结果的假阴性。 图1、图2分别显示采用PCR -GeneScan 法检测食用油脂中玉米内源基因IVR 和大豆内源基因Lectin 的结果。 4 中 国 油 脂 2002年第27卷第2期
转基因成分的检测方法综述
12江苏农业科学2017年第45卷第5期 —12— 阮先乐，张杰?转基因成分的检测方法综述[J]?江苏农业科学，2017,45(5):12-15. doi：10. 15889/j. issn. 1002 - 1302. 2017. 05. 003 转基因成分的检测方法综述 阮先乐，张杰 (周口师范学院生命科学与农学学院，河南周口466〇01) 摘要:随着转基因生物在全世界的广泛应用，转基因成分检测技术越来越受到广大消费者、各国政府及相关机构 人员的重视。本文从聚合酶链式反应（PCR)检测技术、环介导等温扩增检测技术、近红外光谱检测技术、生物传感器 检测技术、生物芯片检测技术和蛋白质检测技术等方面进行综述，并提出今后转基因成分检测技术的发展趋势和研究 方向。 关键词:转基因;成分;检测方法 中图分类号：Q785 文献标志码：A文章编号：1002 -1302(2017)05 -0012 -03 转基因成分检测技术是进行转基因生物研究和安全管理 的重要技术保障。研究人员可以利用此技术辅助判断是否成 功地把目的基因转人受体细胞，目的基因是否在受体细胞中 成功地表达及转基因生物对环境、食用安全性的影响，从而建 立一套高效的技术研究体系;另一方面，转基因生物安全管理 部门也有必要建立一套转基因成分检测技术标准，使各项工 作得以顺利实施。2002年欧盟要求对转基因产品从生产、运 输、保存、销售等过程进行全程的跟踪和检测[1]。现在已有 65个国家和地区对转基因产品采取强制性的标志管理制度，但也有一些国家和地区采取自愿标志模式[2]。2014年5月27日，我国农业部发布《农业部关于进一步加强农业转基因 生物安全监管工作的通知》，要求各级农业部门，要以水稻、玉米、大豆和油菜种子为重点，依法严厉查处非法生产、加工、销售转基因种子的行为。2015年10月1日起施行的《中华 人民共和国食品安全法》第六十九条明确要求生产经营转基 因食品应当按照规定显著标志。 1转基因成分检测技术 1.1 PCR检测技术 PCR检测技术是一种灵敏度高、技术较成熟的转基因成 分检测方法。根据特异性的不同可把它分为筛查法、目的基 因特异性、构造特异性和事件特异性4种方法[3]。检测的主 要基因包括调控基因、标记基因和目的基因，其中调控基因包 括启动子和终止子。常用的启动子是花椰菜花叶病毒CaMV 33S,终止子是脂肪碱合成酶NOS,标记基因有抗草丁 膦基因）(抗卡那霉素基因）、他