各种蛋白标签汇总
各种蛋白标签汇总
蛋白标签
蛋白标签(ｐroｔeinｔag)就是指利用DＮＡ体外重组技术,与目得蛋白一起融合表达得一种多肽或者蛋白,以便于目得蛋白得表达、检测、示踪与纯化等。随着技术得不断发展,研究人员相继开发出了具有各种不同功能得蛋白标签。目前,这些蛋白标签已在基础研究与商业化产品生产等方面得到了广泛得应用。
?标签得分子量小,只有~０、84KD,而GSＴ与蛋白Ａ分别为～26KＤ与~3０KD,一般不影响目标蛋白得功能;
?Ｈis标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在得条件下或变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强得蛋白得到应用,后者在纯化包涵体蛋白时特别有用,用高浓度得变性剂溶解后通过金属螯与亲与层析去除杂蛋白,使复性不受其它蛋白得干扰,或进行金属螯与亲与层析复性;
?Ｈis标签融合蛋白也被用于蛋白质—蛋白质、蛋白质－DＮA相互作用研究;
?His标签免疫原性相对较低,可将纯化得蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。
?可应用于多种表达系统,纯化得条件温与;
?可以与其它得亲与标签一起构建双亲与标签、
Flag标签蛋白
Flag标签蛋白为编码8个氨基酸得亲水性多肽(DＹKDＤDDK),同时载体中构建得Ｋoｚak序列使得带有FL ＡG得融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。ＦLAG作为标签蛋白,其融合表达目得蛋白后具有以下优点:
?FLＡG作为融合表达标签,其通常不会与目得蛋白相互作用并且通常不会影响目得蛋白得功能、性质,这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
?融合FLAG得目得蛋白,可以直接通过FＬAG进行亲与层析,此层析为非变性纯化,可以纯化有活性得融合蛋白,并且纯化效率高、
?FLAG作为标签蛋白,其可以被抗FＬＡG得抗体识别,这样就方便通过WｅｓterｎBｌot、ELＩSA等方法对含有FLAＧ得融合蛋白进行检测、鉴定。
?融合在N端得FLAG,其可以被肠激酶切除(DＤＤＫ),从而得到特异得目得蛋白。因此现ＦＬAG 标签已广泛得应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。
ＭBP(麦芽糖结合蛋白)
ＭBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K１2得mａlＥ基因编码、MBP可增加在细菌中过量表达得融合蛋白得溶解性,尤其就是真核蛋白。ＭBP标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一得蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白得Ｎ端或Ｃ端。纯化:融合蛋白可通过交联淀粉亲与层析一步纯化。结合得融合蛋白可用10mＭ麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。结合亲与力在微摩尔范围。一些融合蛋白在0、2%Triｔon X—100或0.２５％Tｗｅen20存在下不能有效结合,而其她融合蛋白则不受影响、缓冲条件为ｐH7、0到8。５,盐浓度可高达1M,但不能使用变性剂。如果要去除MBP融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。
检测:可用MＢP抗体或表达得目得蛋白特异性抗体检测。
GST(谷胱甘肽巯基转移酶)
GＳT(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身就是一个在解毒过程中起到重要作用得转移酶,它得天然大小为２6KD、将它应用在原核表达得原因大致有两个,一个就是因为它就是一个高度可溶得蛋白,希望可以利用它增加外源蛋白得可溶性;另一个就是它可以在大肠杆菌中大量表达,起到提高表达量得作用。GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白得表达,可以在大肠杆菌与酵母菌等宿主细胞中表达。结合得融合蛋白在非变性条件下用1０mM还原型谷胱甘肽洗脱。在大多数情况下,融合蛋白在水溶液中就是可溶得,并形成二体。GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便得检测、标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶得降解并提高其稳定性。在大多数情况下GＳT融合蛋白就是完全或部分可溶得。?纯化:该表达系统表达得GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Gｌｕtaｔhionｅseｐｈarose)亲与树
脂进行纯化。GST标签蛋白可在温与、非变性条件下洗脱,因此保留了蛋白得抗原性与生物活性。ＧSＴ在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂得结合能力,因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如:盐酸胍或尿素等、?如果要去除GＳT融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。?检测:可用GＳT抗体或表达得目得蛋白特异性抗体检测。
ＨA
HＡ标签蛋白,标签序列YPYDVＰDYA,源于流感病毒得红细胞凝集素表面抗原决定簇,9个氨基酸,对外源靶蛋白得空间结构影响小, 容易构建成标签蛋白融合到Ｎ端或者C端。易于用Anti-HA抗体检测与EＬISA
检测、
ｃ－Mｙｃ
Ｃ—Ｍyc 标签蛋白,就是一个含１1个氨基酸得小标签,标签序列Glu—Glｎ－Lys—Leu-Iｌe－Ｓeｒ—Ｇlu—Ｇlｕ—Ａｓp—Ｌeu,这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同得蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。Ｃ—Ｍｙc tａg已成功应用在Westeｒn-ｂlot杂交技术、免疫沉淀与流式细胞计量术中, 可用于检测重组蛋白质在靶细胞中得表达。
eGFP
ｅGFP标签蛋白,就是增强型绿色荧光蛋白eGFP,激发波长为488nｍ,发射波长为507nm,其就是由野生型绿色荧光蛋白GFP通过氨基酸突变与密码子优化而来得。相对于GＦP,eGFP荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建得Kozak序列使得含有eGFＰ得融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高、ｅGFP 作为标签蛋白,其融合表达目得蛋白后具有以下优点:
?不用破碎组织细胞与不加任何底物,直接通过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目得基因得表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针、
?其自发荧光,不需用目得基因得抗体或原位杂交技术就可推知目得基因在细胞中得定位等情况。?同时细胞内得其它产物不会干扰标签蛋白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性、
?其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量得药物筛选、因此现eGＦＰ表达标签被广泛地应用于基团表达调控、转基因功能研究、蛋白在细胞中得功能定位、迁移变化及药物筛选等方面。
此外由我公司提供得ＩRＥS双顺反子载体,可同目得基因共表达eGFP,用于目得基因得体内蛋白示踪研究。
eＹFP
eYＦP标签蛋白为增强型黄绿色荧光蛋白eYFP,激发波长为513nm,发射波长为5２7nｍ,其就是由野生型黄绿色荧光蛋白YFP通过氨基酸突变与密码子优化而来得。相对于ＹFP,eYFP荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建得Ｋoｚak序列使得含有eYFP得融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。eYFP作为标签蛋白,其融合表达目得蛋白后具有以下优点:
?不用破碎组织细胞与不加任何底物,直接通过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目得基因得表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针、
?其自发荧光,不需用目得基因得抗体或原位杂交技术就可推知目得基因在细胞中得定位等情况、?同时细胞内得其它产物不会干扰标签蛋白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性、
?其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量得药物筛选。因此现ｅYFP 表达标签被广泛得应用与基团表达调控、转基因功能研究、蛋白在细胞中得功能定位、迁移变化及药物筛选等方面。
此外由我公司提供得IRES双顺反子载体,可同目得基因共表达ｅYFP,用于目得基因得体内蛋白示踪研究。
ｅCFP
ｅCFP标签蛋白为增强型青色荧光蛋白eCFP,激发波长为４３3nm或453ｎm,发射波长为475nm或5０1nｍ,其就是由野生型青色荧光蛋白CＦＰ通过氨基酸突变与密码子优化而来得。相对于CＦP,ｅCFP荧光强度更强、荧光性质更稳定、同时载体中构建得Koｚak序列使得含有eCFP得融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。ｅCFＰ作为标签蛋白,其融合表达目得蛋白后具有以下优点:
?不用破碎组织细胞与不加任何底物,直接通过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目得基因得表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针。
?其自发荧光,不需用目得基因得抗体或原位杂交技术就可推知目得基因在细胞中得定位等情况。?同时细胞内得其它产物不会干扰标签蛋白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性。
?其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量得药物筛选、因此现ｅＣFP表达标签被广泛得应用与基团表达调控、转基因功能研究、蛋白在细胞中得功能定位、迁移变化及药物筛选等方面。
Avi Tag
AvｉTａｇ标签蛋白就是一个１5 个氨基酸得短肽,具有一个单生物素化赖氨酸位点,与已知天然可生物素
化序列完全不同,可以加在目标蛋白得Ｎ端与C端。融合表达后,可被生物素连接酶生物素化,为了纯化重组蛋白选用低亲与性得单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物,除了用于蛋白质分离纯化,还用于蛋白质相互作用研究。
Avi Tag标签系统具有以下几大优点:
?无论在体外或者体内,几乎所有得蛋白都可以在一个独特得Avi Tag位点轻易且有效地被生物素化;
?生物素化就是通过酶与底物得反应来实现,反应条件相当温与而且标记得专一性极高;
?生物素Ａvi Ｔaｇ只有1５个氨基酸,对蛋白空间结构得影响非常小、
SNＡP—Taｇ
SNＡP-Tag就是新一代得蛋白标签技术,不仅专一性极高而且稳定,最大得优点就是适用于多种环境下得蛋白质检测与纯化,如活细胞内、溶液中、或固态相(如SDＳ—ＰＡGEｇｅlｓ)等。
SNAＰ-Ｔａg就是从人得O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移(O６-alkyｌguaniｎe—DNA-ａlｋｙltｒａnsferaｓe)获得。无论体内还就是体外,SNＡP-Tａg都能与底物高特异性地共价结合,使蛋白标记上生物素或荧光基团(如荧光素与若丹明)。ＳNAP所带得活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带得侧链苯甲基基团,释放出了鸟嘌呤、这种新得硫醚键共价结合使SNAP所带得目得蛋白携带上了苯甲基基团所带得标记物。苯甲基鸟嘌呤在生化条件下稳定,并且没有其她蛋白会与这类物质作用,所以SＮAP标签反应就是高特异得。检测:生物素或各种颜色荧光得底物(如荧光素、若丹明)可渗透进入细胞,方便快捷地进行活细胞内SNAP－Tａｇ融合蛋白得标记与检测。它们也可特异性地标记大肠杆菌,酵母与哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化得蛋白液中得SNAP-ｔａｇ融合蛋白。
将纯化得或未纯化得SＮAＰ-Tag融合蛋白与表面固定了苯甲基鸟嘌呤得基质混合,蛋白即可特异与底物作用,形成共价键,融合蛋白间接被固定在了基质表面上,可以达到更方便快捷地研究蛋白功能或纯化蛋白得目得。
Halo Tag
HaloＴaｇ?标签蛋白就是一种脱卤素酶得遗传修饰衍生物,可与多种合成得HaloTａg?配基有效地共价
结合、这个分子量为３3KDａ得单体蛋白能融合在重组蛋白得N端或Ｃ端,并在原核与真核系统中表达。HａlｏTag?配基就是小分子化学物,能够在体外或体内与HaｌoＴａg?蛋白共价结合。这些配基由两个关键组分组成:(1)一个通用得ＨalｏＴag?反应联结子,结合ＨaloTａg?蛋白;(2)一个功能基团,例如荧光染料或亲与媒介。?能够共价与特异性结合多种合成得报告基团与亲与配基得特性,使得HaloTag?蛋白能够用于检测与亲与结合或固相化固定目得蛋白。
SUMO
SUＭO标签蛋白就是一种小分子泛素样修饰蛋白(Smａll uｂｉquitin-liｋe modifiｅr),就是泛素(ｕbiqｕitin)类多肽链超家族得重要成员之一。在一级结构上,SUMO与泛素只有1８％得同源性,然而两者得三级结构及其生物学功能却十分相似。研究发现SUMO可以作为重组蛋白表达得融合标签与分子伴侣,不但可以进一步提高融合蛋白得表达量,且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠,提高重组蛋白可溶性等功能。?此外SUＭO还有一项重要得应用,就就是可用于完整地切除标签蛋白,得到天然蛋白。因为SＵＭO蛋白水解酶(我公司可提供)能识别完整得ＳＵMO标签蛋白序列,并能高效地把SUMＯ从融合蛋白上切割下来。切除SUMＯ后,经过亲与层析,去除标签蛋白部分,就得到与天然蛋白一样得重组蛋白。所以ＳUＭO标签也常用于与其她标签一起应用,作为特异酶切水解位点。
常见tag蛋白标签介绍
蛋白标签 蛋白标签（proteintag ）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。 美国GeneCopoeia （复能基因）为客户提供50多种蛋白标签，可以满足客户的不同需求，包括各种最新型的标签，如：SNAP-Tag ?、Halo Tag?、AviTag ?、Sumo等；也提供齐全的各种常用标签，如eGFP、His、Flag等等标签。 以下是部分蛋白标签的特性介绍，更加详细的介绍可在查询克隆产品的结果列表里面看到各种推荐的蛋白标签和载体。 标签纯化促进溶解度抗体效价细胞标记 His6++/-+/- Flag++/-+ GST+++ MBP++++ His-MBP++++ HA+ eGFP/CFP/YFP+++ Myc+ His-Myc++ His-AviTag ?++++++ Sumo++++ His-Sumo+++++ SNAP-Tag ?++++++ Halo Tag ?++++++ TrxHIS His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特 的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析（IMAC），对重组蛋白进行分离纯化。使用His-tag有下面优点： 标签的分子量小，只有?0.84KD，而GST和蛋白A分别为?26KD和?30KD，—般不影响目标蛋白的功能； His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性； His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究； His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。 可应用于多种表达系统，纯化的条件温和； 可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。 Flag标签蛋白 Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK ），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：
融合蛋白标签
在蛋白质功能及结构研究过程中，研究的首要任务就是利用多种方法获得纯化的具有完整结构及生物学功能并能够正确折叠的高度纯化蛋白质。除了蛋白质的研究，具有特定生物活性的高价值蛋白质的生产也需要对蛋白质产品进行纯化。因此，科研人员和工业生产往往大量采用多种多样的表达系统来获得高表达的蛋白质，对其纯化后进行研究或加工，这些表达系统包括原核表达系统、酵母菌表达系统、昆虫动物细胞表达系统、真核细胞表达系统等。 如何将系统中表达的目标蛋白质与其他蛋白分离，一直是表达纯化中的一个重点。为了克服从复杂样品中纯化单一蛋白质这种困难，科学家利用生物物质，特别是酶和抗体等蛋白质，具有识别某种特定物质并与该物质分子特异性结合的能力，利用生物分子间的这种特异性结合能力而形成的亲和纯化技术。亲和标签纯化技术已广泛应用于蛋白质，特别是重组蛋白的分离纯化中。在重组蛋白的亲和纯化中，利用基因工程技术，将经过改造优化的亲和标签与目标蛋白融合表达，通过一步简单快速的亲和层析，直接获得纯度较高的重组融合蛋白，已成为重组蛋白纯化的一个通用方法，具有结合特异性高、纯化步骤简便、纯化条件温和、适用性广泛等优点，为蛋白质的有效纯化提供了一条解决的途径，广泛应用于蛋白质结构与功能的研究及重组蛋白纯化工艺的开发中。 自从20世纪70年代中期融合标签技术出现以来，亲和标签已成为一种重组蛋白纯化十分有效的工具，具有结合特异性高、纯化条件温和、纯化步骤简便、适用性广泛等显著优势。通常，亲和标签定义为对特定的生物或化学配基具有高度亲和力的一段氨基酸序列。到目前为止，已经出现了种类众多、功能各异、用途多样的亲和标签，极大地促进了对重组蛋白的有效纯化。 根据自身分子量大小的不同，亲和标签可以分为两大类：一类是结合固定化配基的短肽标签，如His-tag、FLAG-tag、Strep-tagⅡ等；另一类是识别小分子配基的蛋白标签，如GST、MBP等。 短肽标签： His-tag：His标签是目前高通量蛋白纯化最普遍使用的亲和标签，广泛用于多种重组蛋白在各种表达系统的表达与纯化中。His标签一般为5~15个组氨酸，被认为是重组蛋白纯化的首选标签，具有以下优点：（1）位于目标蛋白Ｎ端的His标签与细菌的转录翻译机制相互兼容，利于蛋白的表达；（2）His标签几乎
常见tag蛋白标签介绍
蛋白标签 蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。 美国GeneCopoeia（复能基因）为客户提供50多种蛋白标签，可以满足客户的不同需求，包括各种最新型的标签，如：SNAP-Tag?、Halo Tag?、AviTag ?、Sumo等；也提供齐全的各种常用标签，如eGFP、His、Flag等等标签。 以下是部分蛋白标签的特性介绍，更加详细的介绍可在查询克隆产品的结果列表里面看到各种推荐的蛋白标签和载体。 标签纯化促进溶解 度 抗体效价细胞标记 His6++/-+/- Flag++/-+ GST+++ MBP++++ His-MBP++++ HA+ eGFP/CFP/YFP+++ Myc+ His-Myc++ His-AviTag?++++++ Sumo++++ His-Sumo+++++ SNAP-Tag?++++++ Halo Tag?++++++ TrxHIS His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。使用His-tag有下面优点： ·标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能； ·His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性； ·His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究； ·His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。 ·可应用于多种表达系统，纯化的条件温和； ·可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。 Flag标签蛋白 Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点： ·FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。 ·融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。·FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。·融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。
常见tag蛋白标签介绍讲课讲稿
常见t a g蛋白标签介 绍
蛋白标签 蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。 美国GeneCopoeia（复能基因）为客户提供50多种蛋白标签，可以满足客户的不同需求，包括各种最新型的标签，如：SNAP-Tag?、Halo Tag?、AviTag?、Sumo等；也提供齐全的各种常用标签，如eGFP、His、Flag等等标签。 ?标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能； ?His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性； ?His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究； ?His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。 ?可应用于多种表达系统，纯化的条件温和； ?可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。 Flag标签蛋白 Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点： ?FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。 ?融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。?FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。 ?融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。 MBP（麦芽糖结合蛋白） MBP（麦芽糖结合蛋白）标签蛋白大小为40kDa，由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBP标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。纯化：融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。结合亲和力在微摩尔范围。一些融合蛋白在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效结合，而其他融合蛋白则不受影响。缓冲条件为pH7.0到8.5，盐浓度可高达1M，但不能使用变性剂。如果要去除MBP融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。
各种蛋白标签汇总修订稿
各种蛋白标签汇总内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
各种蛋白标签汇总 蛋白标签 蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。 TrxHIS His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可
用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。使用His-tag有下面优点： 标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能； His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性； His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究； His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。 可应用于多种表达系统，纯化的条件温和； 可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。 Flag标签蛋白 Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点： FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。 融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
蛋白表达标签
蛋白质融合表达的标签及切割研究 蛋白质融合表达的标签及切割研究 摘要：随着蛋白质组学技术的迅猛发展，重组蛋白的使用在近年来大大增加。许多蛋白质、结构域或者肽类能与目标蛋白融合。利用融合蛋白的有助于目标蛋白的纯化和检测这个优点被广泛赞同。本文对多种融合标签及切割方法做了简单的概述。 引言 近年来,一些抗原表位的肽类和蛋白质已被用于大量生产重组蛋白质.这些亲和标签系统具有以下特征:(a)一步的吸附纯化,(b)对三级结构和生物活性影响小,(c)可方便且专一的去除以产生天然蛋白质,(d)在纯化过程中重组蛋白的分析简便准确,(e)适用于大量的不同蛋白质.有几种不同的策略用于大规模生产重组蛋白质.其中一种办法是使用很小的肽标签,这些标签不会与融合的蛋白质发生干扰.使用最为广泛的有多聚精氨酸,FLAG-,多聚组氨酸-, S-, and Strep II-tag等. 对于某些应用,小标签无需去除.这些标签不像大标签具有免疫原性,经常可以直接作为抗原用于产生抗体. 小标签对于融合蛋白的三级结构和生物活性的影响取决于标签的位置和氨基酸组成.另一种方法是使用大的肽类或蛋白质作为融合蛋白.，它们的使用可以增加目标蛋白的溶解性.缺点是对于一些应用如结晶或抗体产生等,标签必须加以去除.一般来说,对于特定的目标蛋白很难决定最佳的融合系统.这取决于目标蛋白本身(如稳定性,疏水性),表达系统,纯化后蛋白的用途. 1．融合标签 融合标签的作用是用于检测和纯化目的蛋白，有时也用来增加目的蛋白在细胞质中的可溶性或帮助将目的蛋白运转到细胞周质中以提高目的蛋白的生物活性。
1 .1多聚精氨酸-标签(Arg-tag) 精氨酸-标签通常由5或6个精氨酸组成.它已被成功用作细菌C末端标签,精氨酸是碱性最强的氨基酸,带5个精氨酸标签的蛋白质可以结合到阳离子交换树脂SP-Sephadex上, 而大部分杂蛋白不结合.结合后,带标签的蛋白质在碱性pH下运行线性NaCl梯度洗脱得到.当C末端为疏水性区域时,多聚精氨酸可能影响蛋白质的三级结构.氨酸残基的C末端序列可用羧肽酶B处理去除.这一酶促处理已被成功用于一些例子,但常常由 于低的切割得率或者在期望的蛋白质序列间发生不必要的切割而受到限制.然而精氨酸标签并不常用,与第二标签联用是很有趣的蛋白质纯化工具. 1．2 多聚组氨酸-标签(His-tag) 已广泛采用的方法是利用固定化金属螯合层析纯化带有由多聚组氨酸残基组成的一个短的亲和标签的重组蛋白质.固定化金属螯合层析的基础是固定在基质上的过渡态金属离子(Co2+, Ni2+,Cu2+, Zn2+)与特定的氨基酸侧链之间的相互作用.组氨酸是与固定化金属离子作用最强
蛋白标签技术简介及常用蛋白标签
蛋白标签技术简介及常用蛋白标签 蛋白质作为生命活动的主要执行者，人们对其功能和生物学机能的研究逐步深入。那么如何分离和研究某一特定蛋白呢？蛋白标签技术的广泛应用可以有效的解决这令许多研究者颇为头疼的问题。目前，一些肽类和蛋白质被广泛的用于大量生产重组蛋白，它们与目的蛋白融合表达，以便于目的蛋白表达、检测、示踪和纯化。这类多肽或蛋白，被称为蛋白标签（Protein Tag）。例如MyC、His、GST、HA等。而标签抗体可以高特异地结合对应的标签融合多肽或蛋白，籍以分离纯化和分析检测目的蛋白。目前，云克隆推出了一系列蛋白标签抗体，让您从容面对蛋白实验。 先简单介绍一下系列蛋白标签。 HA标签蛋白，标签序列YPYDVPDYA，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，9个氨基酸，对外源靶蛋白的空间结构影响小,容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于被Anti－HA抗体检测和ELISA检测。 MYC标签蛋白，MYC标签蛋白是一个含11个氨基酸的小标签，标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。Myc tag已成功应用在Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中,可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。 FLAG，Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 GST，谷胱甘肽巯基转移酶在解毒过程中起到重要作用，它的天然大小为26KD。由于GST高度可溶，可增加外源蛋白的可溶性，另外GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可提高表达量。GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathione sepharose)亲和树脂进行纯化。而且，GST标签蛋白可在温和、非
各种蛋白标签汇总
各种蛋白标签汇总标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]
各种蛋白标签汇总 蛋白标签 蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。 标签纯化促进溶解度抗体效价细胞标记 His6++/-+/- Flag++/-+ GST+++ MBP++++ His-MBP++++ HA+ eGFP/CFP/YFP+++ Myc+ His-Myc++ His-AviTag++++++ Sumo++++ His-Sumo+++++ SNAP-Tag++++++ Halo Tag++++++ TrxHIS His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。使用His-tag有下面优点： 标签的分子量小，只有~，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能； His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性； His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究； His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。 可应用于多种表达系统，纯化的条件温和； 可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。 Flag标签蛋白 Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点： FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。 融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
基因克隆载体上的各种常用蛋白标签
基因克隆载体上的各种常用蛋白标签 蛋白标签(proteintag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。 美国GeneCopoeia(复能基因)为客户提供50多种蛋白标签，可以满足客户的不同需求，包括各种最新型的标签，如：SNAP-Tag?、Halo Tag?、AviTag?、Sumo等;也提供齐全的各种常用标签，如eGFP、His、Flag等等标签。 以下是部分蛋白标签的特性介绍，更加详细的介绍可在查询产品的结果列表里面看到各种推荐的蛋白标签和载体。 TrxHIS His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测;二是构成独特的结构特征(结合配体)利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。使用His-tag有下面优点： 标签的量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能; His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性; His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究; His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。 可应用于多种表达系统，纯化的条件温和; 可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。 Flag标签蛋白 Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽(DYKDDDDK)，同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点： FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。 融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。 FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。
常见蛋白质标签总结
https://www.360docs.net/doc/967306751.html,/bbs/home.php?mod=space&uid=34800&do =blog&id=38530 常见蛋白质标签总结（Flag、HA、cMyc、CBP等） Protein tags are peptide sequences genetically grafted onto a recombinant protein. Often these tags are removable by chemical agents or by enzymatic means, such as proteolysis or intein splicing. Tags are attached to proteins for various purposes. 一、氨基酸标签（含小肽标签） A stretch of amino acids is added to the protein and enables the recovery of the labelled protein by its unique affinity. Usually its easiest to add the tag to either end of the protein to ensure its accessibility and not to disturb the protein folding. 1.组氨酸标签（His tag）一般为6个组氨酸，用Ni2+（Cu2+）亲和层析纯 化 2.FLAG tag ：N-DYKDDDDK-C ，recovered with specific antibody 3.HA tag： an epitope derived from the Influenza protein haemagglutinin (HA， 禽流感病毒血凝素)，e.g. N-YPYDVPDYA-C，recovery with an HA antibody 4.MYC tag： an epitope derived from the human proto-oncoprotein MYC，e.g. N-ILKKATAYIL-C, N-EQKLISEEDL-C，recovery with an MYC antibody 5.SBP tag：Streptavidin Binding Peptide，链霉亲合素结合肽，38 amino acid tag (MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP)， 更多参考在Sigma 6.CBP tag：钙调蛋白结合肽（CBP; 26aa）钙调蛋白结合肽与钙调素结合 是Ca2+依赖的，这种结合不受标签所处的位置影响（N端和C端均 可），在中性pH条件下使用2mM EGTA可以很方便的将目标蛋白洗 脱下来。这一系统有如下优点：1 特异性很高，因为大肠杆菌没有可以 和钙调素结合的蛋白；2 与His标签相比可以在强还原性条件下纯化。 7.纤维素结合肽（CBD）：能与纤维素介质特异性的结合，可以在温和的 条件下洗脱（乙二醇或低盐条件），pET CBD 载体含有纤维素结合肽 （CBD）的序列，可方便构建。 二、蛋白质标签 Rather than adding only a few amino acids a whole protein is fused to the protein to be purified or detected. The affinity of the attached protein enables the recovery of the artificial fusion protein. As for the peptides, the protein tag is added to either end of the target protein. 1.GST tag： the small glutathione-S-transferase (GST; 26 kDa)，recovery by affinity to substrate glutathione bound to a column, e.g. glutathione sepharose 2.MBP tag：麦芽糖结合蛋白（MBP; 40kDa）载体：pMAL
常见蛋白质标签
常见蛋白质标签总结 2008-12-08 22:06 Protein tags are peptide sequences genetically grafted onto a recombinant protein. Often these tags are removable by chemical agents or by enzymatic means, such as proteolysis or intein splicing. Tags are attached to proteins for various purposes. 一、氨基酸标签（含小肽标签） A stretch of amino acids is added to the protein and enables the recovery of the labelled protein by its unique affinity. Usually its easiest to add the tag to either end of the protein to ensure its accessibility and not to disturb the protein folding. 组氨酸标签（His tag）一般为6个组氨酸，用Ni2+ （Cu2+）亲和层析纯化 FLAG tag ：N-DYKDDDDK-C ，recovered with specific antibody HA tag：an epitope derived from the Influenza protein haemagglutinin (HA，禽流感病毒血凝素)，e.g. N-YPYDVP-C，recovery with an HA antibody MYC tag：an epitope derived from the human proto-oncoprotein MYC，e.g. N-ILKKATAYIL-C, N-EQKLISEEDL-C，recovery with an MYC antibody SBP tag：Streptavidin Binding Peptide，链霉亲合素结合肽，38 amino acid tag (MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP)，更多参考在Sigma CBP tag：钙调蛋白结合肽（CBP; 26aa）钙调蛋白结合肽与钙调素结合是Ca2+依赖的，这种结合不受标签所处的位置影响（N端和C端均可），在中性pH条件下使用2mM EGTA可以很方便的将目标蛋白洗脱下来。这一系统有如下优点：1 特异性很高，因为大肠杆菌没有可以和钙调素结合的蛋白；2 与His标签相比可以在强还原性条件下纯化。 纤维素结合肽（CBD）：能与纤维素介质特异性的结合，可以在温和的条件下洗脱（乙二醇或低盐条件），pET CBD 载体含有纤维素结合肽（CBD）的序列，可方便构建。 二、蛋白质标签 Rather than adding only a few amino acids a whole protein is fused to the protein to be purified or detected. The affinity of the attached protein enables the recovery of the artificial fusion protein. As for the peptides, the protein tag is added to either end of the target protein. GST tag：the small glutathione-S-transferase (GST; 26 kDa)，recovery by affinity to substrate glutathione bound to a column, e.g. glutathione sepharose MBP tag：麦芽糖结合蛋白（MBP; 40kDa）载体：pMAL IMPACT：Intein-Mediated Purification with an affinity Chitin-binding Tag（几丁质结合肽） 硫氧还蛋白：Thioredoxins are proteins that act as antioxidants by facilitating the reduction of other proteins by cysteine thiol-disulfide exchange. Protein A：a 40-60 kDa MSCRAMM surface protein originally found in the cell wall of the bacteria Staphylococcus aureus. It has found use in biochemical research because of its ability to bind immunoglobulins. It binds proteins from many of
常用的几种蛋白标签
重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。 美国GeneCopoeia的蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类，分别为表达宿主为大肠杆菌，哺乳动物细胞的，以及慢病毒载体，宿主可以为哺乳动物细胞和原代细胞。 除了必要的复制和筛选的元件，协助表达和翻译的元件外，本文将各类载体分别按照功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下： His6： His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。 使用His-tag有下面优点： 1.标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能； 2.His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性； 3.His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究； 4.His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体； 5.可应用于多种表达系统，纯化的条件温和； 6.可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。 Flag: Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点： 1.FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。 2.融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。 3.FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。 4.融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。 MBP: MBP（麦芽糖结合蛋白）标签蛋白大小为40kDa，由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBP 标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。 纯化：融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。结合的融合蛋白可用10mM
各种蛋白标签汇总
各种蛋白标签汇总 蛋白标签 蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。 TrxHIS His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。使用His-tag有下面优点： ?标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能； ?His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性； ?His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究； ?His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。 ?可应用于多种表达系统，纯化的条件温和； ?可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。 Flag标签蛋白 Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点： ?FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。 ?融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
蛋白标签-基因克隆载体上的蛋白标签-齐全的各种常用标签
蛋白标签-基因克隆载体上的蛋白标签-齐全的各种常用标签 蛋白标签蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。 蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类，分别为表达宿主为大肠杆菌，哺乳动物细胞的，以及慢病毒载体。除了必要的复制和筛选的元件，协助表达和翻译的元件外，本文将各类载体分别按照功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下： His6： His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。 使用His-tag有下面优点： 1.标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能； 2.His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性； 3.His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究； 4.His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体； 5.可应用于多种表达系统，纯化的条件温和； 6.可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。 Flag: Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点： 1.FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。 2.融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。 3.FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA 等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。 4.融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。 MBP: MBP（麦芽糖结合蛋白）标签蛋白大小为40kDa，由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBP标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。 纯化：融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在
各种蛋白标签汇总
各种蛋白标签汇总 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】
各种蛋白标签汇总 蛋白标签 蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。 ?标签的分子量小，只有~，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能； ?His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性； ?His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究； ?His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。 ?可应用于多种表达系统，纯化的条件温和； ?可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。 Flag标签蛋白 Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点： ?FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。 ?融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。 ?FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。