常规实验所用溶液配方大全
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1.0.5mol/LEDTA 配制
组分浓度:0.5mol/l EDTA,PH=8
配制量:500ml
配制方法(1)称取93.06克EDTA.Na2.2H2O,置于500 ml烧杯中
(2)加入约400ml dd H2O.用热磁力搅拌器充分搅拌
(3)用NaOH调节PH值到8,约用10克固体NaOH
(4)在溶液冷却后,再用NaOH调节至PH=8
(5)加dd H2O将溶液定容到500 ml
(6)高温高压灭菌后,室温保存
2.NaOH溶液的配制
组分浓度:5 mol/l NaOH
配制量:100 ml
配制方法(1)称取固体NaOH20克于容器中
(2)加入dd H2O定容到100 ml
3.100 mmol/l Tris-HCl的配制
组分浓度:mmol/l Tris-HCl,PH=6.4
配制量:250 ml
配制方法(1)称取3.025克Tris于250 ml烧杯中.
(2)加入约200ml dd H2O充分搅拌溶解.
(3)用浓盐酸调节PH值到6.4.所用浓盐酸约3 ml
(4)将溶液定容至250ml
(5)用棕色瓶分装于4度冰箱中
(6)如使用,用水浴加热溶解.
4.氯仿-异戊醇的配制:
配制方法(1)简单的体积混合,既要求比例为24:1即可
(2)储存于棕色玻璃瓶子中
(3)置于4度冰箱以便日后使用
5.去污剂:
CTAB:可将细胞膜裂解,使DNA释放到提取液中,同时也使组织匀浆中的蛋白质变性.
EDTA:能与DNase的辅助因子Mg2+结合,使DNase失去活性,不能降解从细胞中释放的DNA.
6.还原剂巯基乙醇:它抑制从细胞中释放的多酚氧仿.防止植物组织发黄变褐.
7.氯仿—异戊醇:它可把组织匀浆中变性的蛋白质除去,将DNA与细胞中的蛋白质、碳
水化合物等分开除去.
8.RNase:它可去除核酸中的RNA,只留下DNA.
9.硅珠悬浮液的配制
(1)称取1.2g硅珠粉,溶解于10ml无菌水中.
(2)放入4℃冰箱备用.
(3)使用时先涡旋使其混合均匀
10. 10×TE,500ml配制如下:
将100mM Tris-Hcl(PH=8.0)6.057g与10mM EDTA(PH=8.0)1.8612g溶于400ddH2O中,调PH=8.0,定容到500ml。
11. 1×TE Buffer
组成浓度:10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0
配制量:500ml
配制方法:量取下列溶液于500ml烧杯中
1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml
0.5M EDTA PH=8.0 1ml
向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合;将溶液定容到500ml后,高温高压灭菌;室温保存.
12. 聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE
PAGE操作流程及注意事项:
1、涂胶
1)将有耳玻片(耳朝下)泡于反硅化剂中,新液25分钟,旧液30分钟.
2)涂无耳正面玻片硅化剂.均匀点四滴,轻而匀的沿一个方向涂三次,静10分钟.
3)到时间取出.打开通风橱风干30分钟.
2、封胶
1)将两玻片对贴于橡胶框中,放平,用力拧死,夹住橡胶管.
2)溶废琼脂胶,分两次:第一次50秒,第二次10-20秒,防止沸出.
3)用小细长枪头通透加胶枪头,便于加样通畅,少起气泡.
4)吸2500-3000ul液胶加速沿玻片边缘快速顺下滴,将两面玻片充分封死,防止漏胶.以水平底线面水平高于底为佳,静止凝胶15分钟.(有时可先在封口加一点TBE以润滑玻片,利于胶流下)
3、灌胶
1) 用长细枪头透开加胶枪头
2) 从中间加入,每次不要全部打完,留一点在枪头.防止断流而导致胶中含有气泡.
3) 插梳子时两端平整,梳子紧贴玻板,梳齿头部不可有气泡.
4) 拔梳子时先加一倍TBE液将梳子泡透,然后平行用力拔出.
5) 在插梳子15分钟跟踪观察,适当下按,保证孔的深度.
6) 等待2小时,以便胶充分凝固.
4、吹孔
1)向中间槽加入1倍粗制TBE,要淹没过玻片约1厘米.
2)拔梳子,小心平稳,均匀平衡.
3)调1000p枪到300-600ul,进行吹孔,将小孔沉淀物吹打干净,加样中再视时吹5、加样
1)用细长专用枪加入DNA 0.5ul.
2)一手托另一臂的肘,以保证加样手不抖.
3)一定垂直加到孔中去,不脱尾,不吸水,不靠壁,干净利落.
4)加完一次.在放于桌旁的吸纸上,将细枪头上余液吸干.
5)首、中、尾各留1到2个孔,两面胶孔的Marker不完全一样,以便区分.
6)加Marker 0.15ul 一般取0.3ul每孔注如一半,可用两个孔.
6、跑胶
1) 向两侧槽中加入粗制TBE,至U管线处.
2) 打开电源,稳压到120V
3) 电泳2h左右
4) 当样品跑到底部2cm处,关闭电源.
7、撬玻片
1)刀片不伸入过深.刀片平行于玻片,稍用力.
2)将没有硅化剂的无耳玻片放于水盘中,还有梳子.
3)清理琼脂胶,放于烧杯中.
4)胶玻片放于盘中,银染.
13. 2、TBE电泳母液(10×)的配制
1)分别称取54克Tris碱,27.5克硼酸,20ml 0.5mol/EDTA(PH=8.0)
2)将各组分别加入1升烧杯中,用ddH2O定容到1升.
3)在电泳时使用1倍工作液,按1:4与水混合.
4)1倍液是为了增加电泳工作液的电流的电流量.
5)盛于玻璃瓶,在室温保存.
14. AgNO3的配制
量取AgNO3原液2500ul;将250ml dd H2O和2500ul AgNO3加入胶玻片上. (AgNO3原液的配制:50ml 中含AgNO3 7.5g 浓度为0.15g/ml)
15溴化乙锭(10mg/ml)
﹡组分浓度10mg/ml 溴化乙锭
﹡配制量100ml
1.称取1.0g溴化乙锭,加入到200ml容器中。
2.加入去离子水100ml,充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。
3.将溶液转入棕色瓶,室温避光保存。
4.溴化乙锭最终工作浓度为0.5μg/ml。
15. 20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
17.10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA 酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)
16. 5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)
2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml
的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃
17. DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水
加100ul DEPC 于100ml 水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15 psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
18. TE(用于悬浮和贮存DNA)
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris-HCl
1mmol/L EDTA
水1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)
200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
98.8ml
19. 5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐
10 mmol/L EDTA
水54g
27.5g 硼酸
20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
补足1L
一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫糖醇(DTT):在二硫糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA 酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)
5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。
10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)
2%聚蔗糖(Ficoll ,400型) 2%
聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)
2%BSA (组分V ) 水 2g 2g 2g 加水至总体积为
100ml
依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮0.5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2
100mmol/L DTT 2mmol/L ATP
5mmol/L 盐酸亚精胺(可选)
0.5mg/ml BSA (组分V )(可选) 水 5ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 200ul 100 mmol/L 贮液 50ul
1 mmol/L 贮液 0.5ml 10 mg/mL
贮液 2.25ml
10mmol/L
dATP 10mmol/L
dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水
2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP
贮液 2ul 100 mmol/L dTTP 贮液 12ul