农药残留量测定法
农药残留量测定法
本方法系用气相色谱法（附录9 )和质谱法（附录51)测定药材、饮片及制剂中部分农药残留量。除另有规定外，按下列方法测定。
第一法、有机氯类农药残留量测定法-色谱法
1、9种有机氯类农药残留量测定法
色谱条件与系统适用性试验以（14%-氰丙基-苯基）甲基聚硅氧烷或（5%苯基）甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30m×0.32mm×0.25um) ,63Ni-ECD 电子捕获检测器。进样口温度230℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序升温:初始1 0 0 ℃，每分钟10℃升至220℃, 每分钟8℃：升至250℃ ,保持1 0分钟。理论板数按α-BHC峰计算应不低于1X 106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
对照品储备液的制备精密称取六六六（BHC）（α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC）、滴滴涕（DDT）（PP′-DDE，PP′-DDD，OP′-DDT，PP′-DDT）及五氯硝基苯（PCNB）农药对照品适量，用石油醚（60～90℃）分别制成每1ml约含4≈5μg的溶液，即得。
混合对照品储备液的制备精密量取上述各对照品储备液0.5ml，置10ml 量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀释至刻度，摇匀，即得。
混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液，用石油醚（60～90℃）制成每1L分别含0μg、1μg、5μg、10μg、50μg、100μg、250μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备药材和饮片取供试品于60℃干燥4小时，粉碎成细粉，取约2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加水20ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6g，精密加二氯甲烷30ml，称定重量，超声处理15分
钟，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置（使分层），将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml，于40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚（60～90℃）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚（60～90℃）溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚（60～90℃）精密稀释至5ml，小心加入硫酸1ml，振摇1分钟，离心（3000转／分）10分钟，精密量取上清液2ml，置具刻度的浓缩瓶中(见图)，连接旋转蒸发器，40℃下（或用氮气）将溶液浓缩至适量，精密稀释至1ml，即得。
制剂取供试品，研成细粉（蜜丸切碎，液体直接量取），精密称取适量（相当于药材2g），以下按上述供试品溶液制备法制备，即得供试品溶液。
测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1μl，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中9种有机氯农药残留量。
2、22种有机氯类农药残留量测定法
色谱条件与系统适用性试验分析柱：以50% 苯基50%二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30mX0.32mmX 0.25μm ) ,验证柱：以100% 二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30mX0. 32mmX0. 25μm) ，63Ni-ECD 电子捕获检测器。进样口温度240℃, 检测器温度300℃ ,不分流进样，流速为恒压模式（初始流速为1.3ml/min )。程序升温：初始70℃，保持1 分钟，每分钟10℃升至180℃,保持5分钟，再以每分钟5℃升至220℃,最后以每分钟100℃升至280℃,保持8 分钟。理论板数按α-BHC计算应不低于IX106, 两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
对照品储备溶液的制备精密称取表1 中农药对照品适量，用异辛烷分别制成如表1中浓度，即得。
混合对照品储备溶液的制备精密量取上述对照品贮备溶液各lm l ,置100ml量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，即得。
混合对照品溶液的制备分别精密量取上述混合对照品贮备溶液，用异辛烷制成每1L分别含10μg、20μg、50μg、100μg、200μg、500μg的溶液，即得（其中β-六六六、异狄氏剂、p,p’-滴滴滴、o,p’-滴滴涕每1L分别含20μg、4 0μg、100μg、200μg、400μg、l000μg)。
供试品溶液的制备取供试品，粉碎成粉末（过三号筛），取约1.5g，精密称定，置于50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入水10 ml,混匀，放置2 小时，精密加人乙腈15ml，剧烈振摇提取1分钟，再加入预先称好的无水硫酸镁4 g与氯化钠l g 的混合粉末，再次剧烈振摇1 分钟后，离心(4000转/分钟）1 分钟。精密吸取上清液10ml，40℃减压浓缩至近干，用环己烷-乙酸乙酯（1 : 1)混合溶液分次转移至10ml量瓶中，加环己烷-乙酸乙酯（1 : 1 )混合溶液至刻度，摇匀，转移至预先加入l g 无水硫酸钠的离心管中，振摇，放置1小时，离心（必要时滤过），取上清液5ml过凝胶渗透色谱柱（400mmX 25mm ,内装BIO Beads S-X3填料；以环己烷-乙酸乙酯（1 : 1 )混合溶液为流动相；流速为每分钟5.0ml)净化，收集18～3 0分钟的洗脱液，于40°C水浴减压浓缩至近干，加少量正己烷替换两次，加正己烷lm l使溶解，转移至弗罗里硅土固相萃取小柱[1000mg/6ml, 用正己烷-丙酮（95:5 )混合溶液10ml和正己烷10ml预洗] 上，残渣用正己烷洗涤3次，每次lml，洗液转移至同一弗罗里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷-丙酮（95:5) 混合溶液10ml洗脱，收集全部洗脱液，置氮吹仪上吹至近干，加异辛烷定容至lml，涡旋使溶解，即得。
测定法别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各lul，注入气相色谱仪，按外标标准曲线法计算供试品中22种有机氣农药残留量。
限度除另有规定外，每lkg 中药材或饮片中含总六六六（α-BHC，β-BHC，
γ-BHC ,δ-BHC之和）不得过0.2mg；总滴滴涕（p，p'-DDE，p，p'-DDD，o，p'-DDT , p ,p'-DDT之和）不得过0. 2mg；五氯硝基苯（Quintozene)不得过0.1mg；六氯苯（Hexachlorobenzene) 不得过0.1mg；七氯（Heptachlor)、顺式环氧七氯（Heptachlor-exo-epoxide) 和反式环氧七氯（Heptachlor-endo-epoxide) 之和不得过0.05mg;艾氏剂（Aldin）和狄氏剂（Dieldrin) 之和不得过0.05mg；异狄氏剂（Endrin)不得过0.05mg;顺式氯丹(Chlordane)、反式氯丹（trans-Chlordane)和氧化氣丹（oxy-Chlordane)之和不得过0.05mg; α-硫丹（α-Endosulfan)、β-硫丹(β-Endosulfan)和硫丹硫酸盐（Endosulfan sulfate) 之和不得过3mg。
【附注】
( 1 )当供试品中有农药检出时，可在验证柱中确认检出的结果，再进行定量。必要时，可用气相色谱一质谱法进行确证。
(2 )加样回收率应在70%～120%之间。
表1 22种有机氯类农药对照品贮备液浓度、相对保留时间及检出限参考值
序号中文名英文名对照品
储备液
(ug/ml)
相对保
留时间
（分析
柱）
检出限
（mg/kg
）
1 六氯苯Hexachlorobenzene 100 0.574 0.001
2 α-六六六α-BHC 100 0.601 0.004
3 五氯硝基苯Quintozene 100 0.645 0.007
4 γ-六六六γ-BHC 100 0.667 0.003
5 β-六六六β-BHC 200 0.705 0.008
6 七氯Heptachlor 100 0.713 0.007
7 δ-六六六δ-BHC 100 0.750 0.003
8 艾氏剂Aldrin 100 0.760 0.006
9 氧化氯丹Oxy-Chlordane 100 0.816 0.007
10
顺式环氧七
氯Heptachlor-exo-epoxi
de
100 0.833 0.006
11
反式环氧七
氯Heptachlor-endo-epox
ide
100 0.844 0.005
12 反式氯丹trans-Chlordane 100 0.854 0.005
13 顺式氯丹cis-Chlordane 100 0.867 0.008
14 α-硫丹α-Endosulfan 100 0.872 0.01
15 p,p’-滴滴伊p,p’-DDE 100 0.892 0.006
16 狄氏剂Dieldrin 100 0.901 0.005
17 异狄氏剂Endrin 200 0.932 0.009
18 o,p’-滴滴涕o,p’-DDT 200 0.938 0.018
19 p,p’-滴滴滴p,p’-DDD 100 0.944 0.008
20 β-硫丹β-Endosulfan 100 0.956 0.003
21 p,p’-滴滴涕p,p’-DDT 100 0.970 0.005
22 硫丹硫酸盐Endosulfan sulfate 100 1.000 0.004 注：各对照品的相对保留时间以硫丹硫酸盐为参照峰计算。
3、2种有机氯类农药残留量测定法
色谱条件与系统适用性试验分析柱：以键合交联14%氰丙基苯基二甲基硅氧烷为固定液（DM1701或同类型）的毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，验证柱：以键合交联5%苯基甲基硅氧烷为固定液（DB5或同类型）的毛细管柱（30m×0.32mm×0.25μm）；63Ni-ECD电子捕获检测器；进样口温度230℃，检
测器温度300℃，不分流进样。程序升温：初始温度60℃，保持0.3分钟，以每分钟60℃升至170℃，再以每分钟10℃升至220℃，保持10分钟，再以每分钟1℃升至240℃，每分钟15℃升至280℃，保持5分钟。理论板数按α-BHC峰计算应不低于1×105，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
混合对照品储备液的制备分别精密称取六六六（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、滴滴涕（pp’-DDE、pp’-DDD、op’-DDT、pp’-DDT）、五氯硝基苯、六氯苯、七氯（七氯、环氧七氯）、艾氏剂、氯丹（顺式氯丹、反式氯丹、氧化氯丹）农药对照品适量，用正己烷溶解分别制成每1ml约含100μg的溶液。精密量取上述对照品溶液各1ml，置同一100ml量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀；或精密量取有机氯农药混和对照品溶液1ml，置10ml量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，即得（每1ml含各农药对照品1μg）。
混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液，用正己烷制成每1ml分别含1ng、2ng、5ng、10ng、20ng、50ng、100ng的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品，粉碎成细粉（过二号筛），取约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水30ml，振摇10分钟，精密加丙酮50ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约8g，精密加二氯甲烷25ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）15分钟，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，振摇使氯化钠充分溶解，静置，转移至离心管中，离心（每分钟3000转）3分钟，使完全分层，将有机相转移至装有适量无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟。精密量取15ml，置40℃水浴中减压浓缩至约1ml，加正己烷约5ml，减压浓缩至近干，用正己烷溶解并转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，转移至离心管中，缓缓加入硫酸溶液（9→10）1ml，振摇1分钟，离心（每分钟3000转）10分钟，分取上清液，加水1ml，振摇，取上清液，即得。
测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相应浓度的混合对照品溶液各1μl，注入气相色谱仪，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算，即得。
本品中含总六六六（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC之和）不得过0.2mg/kg；总滴滴涕（pp’-DDE、pp’-DDD、op’-DDT、pp’-DDT之和）不得过0.2mg/kg；五氯硝基苯不得过0.1mg/kg ；六氯苯不得过0.1mg/kg；七氯（七氯、环氧七氯之和）不得过0.05mg/kg；艾氏剂不得过0.05mg/kg；氯丹（顺式氯丹、反式氯丹、氧化氯丹之和）不得过0.1mg/kg。
第二法有机磷类农药残留量测定法-色谱法
色谱条件与系统适用性试验以50%苯基50%二甲基聚硅氧烷或（5%苯基）甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30mX 0. 25mm X0.25um )，氮磷检测器（NPD)或火焰光度检测器（FPD)。进样口温度220℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序升温：初始120℃,每分钟10℃，升至200℃，每分钟5℃升至240℃；，保持2 分钟，每分钟20℃：升至270℃，保持0.5分钟。理论板数按敌敢畏峰计算应不低于6000，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
对照品储备液的制备精密称取对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪磷、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷农药对照品适量，用乙酸乙酯分别制成每lml约含l00μg的溶液，即得。
混合对照品储备液的制备精密量取上述各对照品储备液1ml，置20ml棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。。
混合对照品储备溶液的制备精密量取上述混合对照品贮备溶液，用乙酸乙酯制成每lm l含0.1μg、0.5μg、lμg、2μg、5μg 的浓度系列，即得。
供试品溶液的制备药材和饮片取供试品，粉碎成粉末（过三号筛），取约5g，精密称定，加无水硫酸钠5g，加入乙酸乙酯50～100ml，冰浴超声处理
3分钟，放置，取上层液滤过，药渣加入乙酸乙酯30～50ml，冰浴超声处理2分钟，放置，滤过，合并两次滤液，用少量乙酸乙酿洗涤滤纸及残渣，与上述滤液合并。取滤液于40℃以下减压浓缩至近干，用乙酸乙酯转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度；精密吸取上述溶液1ml，置石墨化炭小柱（250mg/3ml用乙酸乙酯5ml预洗）上，用正己烷-乙酸乙酯（1 : 1)混合溶液5ml洗脱，收集洗脱液，置氮吹仪上浓缩至近干，加乙酸乙酯定容至lml ,涡旋使溶解，即得。
测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各lμ，注人气相色谱仪，按外标法计算供试品中12种有机磷农药残留量。
第三法拟除虫菊酯类农药残留量测定法-色谱法
色谱条件与系统适用性试验以（5%苯基）甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30m×0.32mm×0.25μm），63Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度270℃，检测器温度330℃。不分流进样（或根据仪器设置最佳的分流比）。程序升温：初始160℃，保持1 分钟，每分钟10℃升至278℃,保持0.5分钟，每分钟1℃升至290℃，保持5分钟。理论板数按溴氰菊酯峰计算应不低于105，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
对照品储备溶液的制备精密称取氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯农药对照品适量，用石油醚（60～90℃）分别制成每1ml约含20～25μg的溶液，即得。
混合对照品储备溶液的制备精密量取上述各对照品储备液1ml，置10ml 量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀释至刻度，摇匀，即得。
混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液，用石油醚（60～90℃）制成每1L分别含0μg、2μg、8μg、40μg、200μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备药材和饮片取供试品，粉碎成细粉（过五号筛），取约1～2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加石油醚（60～90℃）-丙酮（4:1）混合溶液30ml，超声处理15分钟，滤过，药渣再重复上述操作2次后，合并滤
液。滤液加入适量无水硫酸钠脱水后，于40～45℃减压浓缩至尽干，用少量石油醚（60～90℃）反复操作至丙酮除净，残渣加适量石油醚（60～90℃）溶解，置混合小柱〔从下至上依次为无水硫酸钠2g、弗罗里硅土4g、微晶纤维素1g、氧化铝1g、无水硫酸钠2g、用石油醚（60～90℃）-乙醚（4:1）混合溶液20ml 预洗〕上，用石油醚（60～90℃）-乙醚（4:1）混合溶液90ml洗脱，收集洗脱液，于40～45℃减压浓缩至尽干，再用石油醚（60～90℃）3～4ml,重复操作至乙醚除净，用石油醚（60～90℃）溶解转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，即得。
测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1μl，注入气相色谱仪，按外标法计算供试品中3种拟除虫菊酯农药残留量。