药敏试验结果分析
6种抗生素类药物对大肠杆菌的体外抑菌试验
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（山东农业大学）
摘要:研究6种抗生素药物对大肠杆菌体外抑菌的作用。通过在琼脂平皿上贴药敏片，测量抑菌圈的直径来确定抑菌作用。结果表明大肠杆菌对青霉素、头孢他啶表现中度敏感，其他表现为高度敏感
关键词:抗生素；大肠杆菌；抑菌
文献综述：
大肠杆菌是肠杆菌科埃希菌属中具有代表性的菌种，主要寄居在人和动物肠道中，其特性为革兰氏阴性，对营养要求不高，在普通培养基上就能很好的生长，并广泛分布于水、土壤或腐败物中。禽大肠杆菌病是由埃希氏大肠杆菌引起的多种病的总称，包括大肠杆菌性肉芽肿、腹膜炎、输卵管炎、脐炎、滑膜炎、气囊炎、眼炎、卵黄性腹膜炎等疾病，对养禽业危害严重。大肠杆菌病的发生，常与许多不利的外界条件密切相关。发生时具备如下特点：发病率高，死亡率高，复发率高；各日龄均易感染，症状典型；混合感染严重；传播途径较多：呼吸道、消化道（包括滥用药物引起的肠道菌群失调）、垂直传播；治疗困难。多年来，随着抗生素的大量应用致使大肠杆菌病的耐药菌株越来越多，耐药谱也越来越广。本实验通过6种临床常用抗生素对大肠杆菌的药敏试验，检测临床常用的六种抗生素对大肠杆菌的敏感性以便准确有效的利用药物进行治疗。
1 药敏实验简介
抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。常用最低抑菌浓度（MIC）表示，即体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度。通常根据MIC结合常用剂量时体内该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗生素敏感或耐药的界限，给出S（敏感）、I（中介）、R（耐药）等定性的结果来分别表示实验菌对抗菌药物的敏感性。高度敏感（s ）表示用某种药物治疗某种细菌引起的感染常用剂量就有效，或者说常规剂量达到的平均血药浓度超过该药对细菌的MIC 的5 倍以上；中度敏感（I ）表示用某种药物治疗某种细菌引起的感染仅在高剂量时才有效，或者说常规剂量达到的血药浓度相当于或略高于对细菌的MIC ; 耐药（R ）表示药物对某一细菌的MIC（最
低抑菌浓度）高于治疗量的药物在血液或体液内可能达到的浓度，或细菌能产生灭活抗菌药的酶，无论其MIC 值大小都要判定为耐药。
2 药敏试验的目的
2.1 检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。
2.2用于流行病学调查及院内感染的监控，控制和预防耐药菌株的流行。
2.3 为经验用药提供参考依据。
3 药敏试验的应用
药物敏感实验后，应选择高敏药物进行治疗，也可选用两种药物协助使用，以减少耐药菌株。在选择高敏药物时应考虑药物的吸收途径，因为我们药敏实验是药液直接和细菌接触，而在给禽用药的时候，必须通过机体的吸收才能使药物达到一定的效果，所以在给禽用药时，高敏药物一定要配合适宜的给药方法，这样才会达到好的治疗效果。
4 抗菌药物的选择原则
4.1针对不同类别的细菌，应该有选择的进行抗菌药物敏感试验。不同细菌需要测试的药物可能有所不同。如红霉素用于葡萄球菌的测试而不用于肠杆菌的测试。
4.2不需要对每种抗生素均进行测试。选择的药物应该为各类抗生素的代表性药物。
4.3 NCCLS（美国临床实验室标准委员会）将测试药物根据不同细菌分为4组。A组为首选药物必须常规报告；B组为与A组平行的药物，但可以选择性报告；C组为补充药物，当对A组、B组药物呈现多重耐药时必须报告；D组为用于尿路感染测试的药物。
4.4 每种药物需要测试的药物浓度各不相同，对应的敏感或耐药的MIC值也不相同，NCCLS在经过认真地验证后给出了相应的判断标准。
5 药敏试验分类
5.1 纸片扩散法
该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，
二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
5.2 稀释法
稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.
5.3 琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。再接种待测菌株，然后是结果判读。
5.4 肉汤稀释法
5.5 抗生素浓度梯度法
5.6 自动化仪器法
实验步骤
1 材料
1.1 材料
1.1.1 试验药物青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶1.1.2 试验菌种大肠杆菌
1.1.3 试验时间2012年6月17日～2012年6月18日
1.1.4 试剂与仪器试剂：氯化钠、氢氧化钠、琼
脂、牛肉膏、蛋白胨、纯化水。
仪器：电热恒温培养箱、压力蒸汽器、电子天平、微量加样器、EP管、锥形烧瓶、平皿、曲玻棒、接种棒、滤纸。
2.2 方法
2.2.1肉汤的制备：
用料牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20—30g、蒸馏水1000mL。
2.2.1.1称量：依次称取各种成分，牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水融化后到入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。
2.2.1.2溶解：在烧杯中加入少于所需的水量，加热，逐一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。溶好后，补足所需水分。
2.2.1.3调pH值：若PH值不适宜，可用1mol/L NaOH或1mol/LHCl把pH值调至所需范围。
2.2.1.4过滤：趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。
2.2.1.5分装：按照实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角瓶内，分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。
2.2.1.6加棉塞：分装完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉花，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。
2.2.1.7包扎：棉塞上包一层牛皮纸，扎紧，即可进行灭菌。
2.2.1.8灭菌：将上述培养基以0.1Mpa，121℃，高压蒸汽灭菌20min。
2.2.1.9搁置斜面：将灭菌的试管培养基管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。
2.2.1.10无菌检验：灭菌后的培养基放入37℃恒温箱中培养24h，以检验灭菌效果，无污染方可
2.2.2琼脂培养基的制备：
将灭菌好的琼脂倾倒到培养皿中，每只灭菌培养皿倒入10~15ml,将皿盖盖好。2.2.3 细菌的培养：
2.2.
3.1接种：将菌种试管与待接种的试管培养基依次排列，挟于左手的拇指与食指之间，用右手的中指与食指或食指与小指拔出棉塞并挟出。置试管口于酒精火焰附近；将接种环垂直插入酒精火焰中烧红，再横过火焰三次，然后再放入有大肠杆菌试管壁内，于无菌的培养基表面待其冷却。用接种工具取少许菌种置于另一支试管中，按一定的接种方式把菌种接种到新的培养基上。取出接种工具，试管口和棉塞进行火焰灭菌。重新塞上棉塞。烧死接种工具上残留余菌，把试管和接种工具放回原处。
2.2.
3.2分离:在无菌的条件下，分别取一接种大肠杆菌放入盛有无无菌水的试管中，制混合菌液。在近火焰处，左手拿平板稍抬皿盖，右手持接种环蘸取一环混
合液伸入皿内划线。
2.2.
3.3培养：将接种的细菌培养基放在32～37℃恒温箱内培养24h后观察。将接种分离后的大肠杆菌放在25～28℃的恒温箱内，大肠杆菌培养24h
2.2.4琼脂扩散纸片法
2.2.4.1在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密，直接悬液法要把菌液浓度用生理盐水或PBS调到0.5个麦氏标准再涂布均匀。）
2.2.4.2将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。
2.2.4.3将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。
结果分析与讨论
1 结果：
药敏试验发现，氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松、头孢噻肟对大肠杆菌敏感性较好，在测定的6种药物中有青霉素、头孢他啶对大肠杆菌中度敏感。
判定标准标准参照《抗菌药物药效试验判定标准》。
抑菌圈直径小于10mm为低度敏感；
抑菌圈直径在10～18mm之间为中度敏感；
抑菌圈直径大于18 mm为高度敏感。
S（敏感）、I（中介）、R（耐药）
2 讨论
头孢菌素与青霉素相比具有抗菌谱较广，耐青霉素酶，疗效高、毒性低，过敏反应少等优点，在抗感染治疗中占有十分重要的地位。头孢菌素已从第一代发展到第四代，其抗菌范围和抗菌活性也不断扩大和增强。需要指出的是，代的划分主要是根据产品问世年代的先后和药理性能的不同。这种分类并不意味着第四代产品就比三代产品好，一、二代产品就属于淘汰产品，各有不同用途。
影响抗菌作用的主要因素有：
①药物透过革兰阳性菌细胞壁或阴性菌脂蛋白外膜（即第一道穿透屏障）的难易；
②对β-内酰胺酶（第二道酶水解屏障）的稳定性；
③对抗菌作用靶位PBPs的亲和性。
根据这些因素，目前临床应用的β-内酰胺类对革兰阳性与阴性菌的抗菌作用可以分为
青霉素，易透过革兰阳性菌胞壁粘肽层，但它们不能透过革兰阴性菌糖蛋白磷脂外膜，因而属窄谱的仅对革兰阳性菌有效。
头孢类抗生素能适度透过革兰阳性菌的胞壁粘肽层，对革兰阴性菌的外膜透过性则很好，因而是广谱抗菌药物。但第三代头孢菌素对革兰氏阴性菌大肠杆菌的敏感性明显强于前两代
参考文献
吴艳《药理学实验指导》北京人民军医出版社2004
章元沛《药理学实验》第二版人民卫生出版社1995
徐海花,常维山,秦爱建,等.鸡源致病性大肠杆菌药物耐受性与药物剂量相关性的研究 [J]. 家禽生态学报,2007,28(6):83 ～85.
倪语星，王金良，徐英春《抗微生物药物敏感性试验规范》上海科学技术出版社，2002.
教学实习论文
——药敏实验
CLSIMS药敏试验解读
表1A.美国临床微生物学实验室在非苛养菌常规试验和报告中应考虑的具有FDA临床适应证的抗菌药物建议分组总注释： A.对四环素敏感的菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。然而，某些对四环素中介或耐药的 菌株可能对多西环素、米诺环素或二者敏感。 B.利福平不能单独用于抗菌治疗。 C.分离于泌尿道菌株不被常规报告。 D.头孢噻吩仅被用于预报口服药物结果，包括头孢氨苄、头孢泊肟、头孢氨苄和氯碳头孢。以前 关于头孢噻吩结果可预报其他头孢菌素敏感性建议仍然正确，但近年来还没有数据证实此建议。 E.当测试粪便中分离的沙门菌和志贺菌株时，只有氨苄西林、一种氟喹诺酮类和复方新诺明可用 于常规报告。另外，对肠道外感染沙门菌粉分离株，应测试并报告一种三代头孢菌素，假如需要，也可测试和报告氯霉素。分离于肠道内和肠道外伤寒样沙门菌（伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌A-C）需进行药敏试验。分离于肠道内非伤寒样沙门菌不需进行常规药敏试验。 F.从CSF中分离菌株，试验和报告头孢噻肟和头孢曲松，以取代头孢唑林。 G.其他非肠杆菌科细菌包括假单胞菌和其他非苛养、非发酵葡萄球菌的革兰阴性杆菌，但不包括 铜绿假单胞菌、不动杆菌、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌，因为对这些菌种的建议试验和报告药物表格已分开。 鼻疽伯克霍尔德菌和假鼻疽伯克霍尔德菌试验和报告药物建议请参阅CLSIM45文件。 H.仅对金黄色葡萄球菌包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA） I.青霉素敏感的葡萄球菌对葡萄球菌感染具有临床疗效的其他β-内酰胺类药物也敏感。青霉素耐 药葡萄球菌对青霉素酶不稳定青霉素类耐药。除具有抗-MRSA活性新的头孢菌素外，苯唑西林耐药葡萄球菌对当前所有使用的β-内酰胺类药物均耐药。因此，仅测试青霉素和头孢西丁或苯唑西林二者中任一种，则可推测对各种β-内酰胺类药物的敏感或耐药性。除具有抗-MRSA 活性药物外，不建议常规测试其他β-内酰胺类药物。 J.分离于呼吸道菌株不报告达托霉素结果。 K.头孢西丁纸片扩散法或MIC试验结果可用于预报金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌分离株是否存在mecA介导的苯唑西林耐药。对凝固酶阴性葡萄球菌(除路登葡萄球菌外)，检测mecA介
细菌鉴定及药敏分析系统产品技术要求珠海迪尔生物
2. 性能指标 2.1 外观与结构 a）外观应端正、清洁，表面涂、镀层应无明显剥落、擦伤、露底及污垢； b）铭牌及标志应清晰、准确、牢固，所有紧固件不得松动；控制器件操作应灵活、可靠。 2.2 功能要求 2.2.1 系统功能要求 a) 细菌鉴定及药敏分析系统（以下称：“系统”）可以自动读取试剂板细菌生化鉴定和抗菌药物MIC半定量测定的阴、阳性结果； b) 应用程序经分析应可得出被鉴定菌株的名称和抗菌药物MIC结果； c) 应能生成检验报告单； d) 应能打印检验报告单。 2.2.2 软件临床功能纲要 2.2.2.1 检测功能 2.2.2.1.1标本资料录入 提供输入或选择的方式录入标本的姓名、类型及来源等资料。 2.2.2.1.2 出具细菌检测报告 在软件的指引下，用户可选择出具无菌报告或者有菌报告，出具有菌报告时，软件支持自动对试剂板进行检测并生成相应的判读结果，也支持手工录入细菌检测结果，用户可根据实际情况选择。 2.2.2.2 查询功能 根据不同的查询条件，用户可对历史报告单及其相关信息进行查询。 2.2.2.3 设置功能 软件提供各种类型的参数设置，用户可根据实际情况进行预设。 2.2.2.4 统计功能 根据不同的统计条件，用户可对历史数据进行统计分析。 2.2.2.5 WHONET功能 根据不同的WHONET数据要求，用户可将历史数据按要求导出。 2.3细菌鉴定及药敏分析系统性能要求
2.3.1准确性 2.3.1.1 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株鉴定准确性的符合率应≥95%；2.3.1.2 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株抗菌药物MIC半定量测定准确性 的符合性应≥95%。 2.3.2重复性 2.3.2.1 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株鉴定重复性的符合率应≥95%；2.3.2.2 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株抗菌药物MIC半定量测定重复性 的符合率应≥95%。 2.4 温育系统性能要求（适用96A，不适用于D2Mini/D2Plus） 温度准确度及波动 a) 细菌鉴定及药敏分析系统温度稳定后，准确度偏差应不超过±1.5℃； b) 细菌鉴定及药敏分析系统温度波动应不超过3.0℃。 2.5 环境试验要求 细菌鉴定及药敏分析系统应符合GB/T14710-2009中气候环境试验I组，机械环境试验I组及表2的要求。系统的运输试验、电源电压适应能力试验应分别符合GB/T14710-2009中第4章、第5章的要求。 2.6 安全要求 应符合GB4793.1-2007、GB4793.9-2013和YY 0648-2008的要求。 2.7电磁兼容性要求 应符合GB/T 18268.1-2010和GB/T 18268.26-2010的要求 2.8网络安全要求 2.8.1数据接口：应有通用的标准有线网络接口，使用标准TCP/IP协议； 2.8.2用户访问控制：用户应输入与用户名相匹配的密码才能登录使用系统； 用户类型：分为管理员，普通用户两种； 用户身份鉴别方法及权限：系统根据登录的用户名匹配权限； 管理员有检验操作、数据查询、系统管理权限； 普通用户有检验操作、数据查询权限。
人民医院关于全自动微生物鉴定及药敏分析系统的采购文件招投标书范本
千里马招标网https://www.360docs.net/doc/a218043995.html, 政府采购谈判 文件 采购编号：SZWK-XC-T-号 采购项目：全自动微生物鉴定及药敏分析系统采购单位：苏州市相城区第三人民医院 项目类别：医疗设备 苏州市卫康招投标咨询服务有限公司 二〇一八年八月
谈判邀请函 ： 受苏州市相城区第三人民医院的委托，苏州市卫康招投标咨询服务有限公司对其所需采购的全自动微生物鉴定及药敏分析系统在国内组织竞争性谈判采购。欢迎符合采购文件资格要求的供应商前来报名参加谈判。 一、采购编号：SZWK-XC-T-号 二、采购内容及数量：全自动微生物鉴定及药敏分析系统一套 三、采购预算：.元整 四、参加谈判的供应商资格要求： A、供应商的一般资格要求 、具有独立承担民事责任的能力； 、具有良好的商业信誉和健全的财务会计制度； 、具有履行合同所必需的设备和专业技术能力； 、有依法缴纳税收和社会保障资金的良好记录； 、参加招标活动前三年内，在经营活动中没有重大违法记录； 、法律、行政法规规定的其他条件。 B、供应商的特殊资格要求 、具有医疗器械生产（经营）企业许可证； 、具有所投产品的合法代理资格。 五、参加谈判报名及领取谈判采购文件时间：自公告发布之日起至月日每日：～：，：～：（节假日除外）； 参加谈判报名及领取谈判采购文件地点：苏州市干将西路号号楼四楼苏州市卫康招投标咨询服务有限公司； 领取谈判文件时请提供以下材料并加盖公章（复印件需提供原件现场核查）： 、企业法人营业执照副本复印件（三证合一）； 、法人授权委托书（报名经办人必须为投标单位正式员工，提供社保缴纳证明及劳动合同等材料）； 、医疗器械生产（经营）企业许可证复印件； 、所投产品的合法代理资格证明材料。 六、谈判时间、地点： 、递交谈判响应文件的时间：年月日：~：（北京时间） 地点：苏州市相城区庆元路号相城区市民服务中心三楼会议室 、递交谈判响应文件的截止时间：年月日：：（北京时间）
VITEK2 COMPACT全自动鉴定药敏分析标准操作规程
VITEK2 COMPACT全自动鉴定药敏分析标准操作规程 1.目的 规范VITEK2 COMPACT全自动鉴定药敏分析仪的操作规程，确保微生物鉴定药敏分析的准确性。 2.授权操作人 经培训并通过考核的检验科微生物检验实验室工作人员。 3.工作原理 细菌理化性质不同，分解底物导致PH改变而产生不同颜色。经光电比色法测定来判断反应结果，不同种类的鉴定卡上有不同数量和类别的生化反应，采用连续检测法，每隔一段时间仪器会自动判读结果，最后结合仪器内部微生物数据库得出鉴定及药敏结果。 4.工作环境 相对湿度:20%-80%无凝集水;室温:15-30度，避免日光直射。 5.操作程序 5.1卡片选择 5.1.1鉴定卡 GN 革兰阴性杆菌鉴定卡 GP 革兰阳性菌鉴定卡
NH 奈瑟菌嗜血杆菌鉴定卡 YST 酵母菌鉴定卡 ANC 厌氧菌鉴定卡 5.1.2 药敏卡 AST-GN 革兰阴性菌药敏卡 AST-GP 革兰阳性菌药敏卡 AST-YST 真菌药敏卡 5.2菌悬液配置及稀释 5.2.1悬浮液：0.45% NaCL液，PH 4.5-7.2 5.2.2.菌悬液浓度： 鉴定卡GN 0.5 - 0.63 麦氏单位 GP 0.5 - 0.63 麦氏单位 NH 2.7 - 3.3 麦氏单位 YST 1.8 - 2.2 麦氏单位 ANC 2.7-3.3 麦氏单位 药敏卡AST-GN 3.0ml 盐水+ 145μl 0.5 –0.63 麦氏单位菌悬液 AST-GP 3.0ml 盐水+ 280μl 0.5 –0.63 麦氏单位菌悬液 AST-YST 3.0ml 盐水+ 280μl 1.8 –2.2 麦氏单位菌悬液 5.2.3药敏卡稀释方法
药敏试验方法
一、纸片扩散法 该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。 二、稀释法 稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC. 2.1 琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。再接种待测菌株，然后是结果判读。 2.2 肉汤稀释法 三、抗生素浓度梯度法 四、自动化仪器法 一、实验材料 普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）
细菌：待做药敏试验的细菌 仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 二、实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。 2.2 药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。此稀释液即为用于做药敏试验的药液。 三、实验操作方法 3.1 药敏片法 3.1.1 在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密） 3.1.2 将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。 3.1.3 将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。 3.2 牛津杯法 3.2.1 在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，
药敏试验实验报告
药敏试验： 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。 简介： 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参
考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 实验步骤： 实验材料 普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 药敏试纸：购买或自制（详见实验准备） 细菌：待做药敏试验的细菌 仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
细菌培养、细菌鉴定药敏分析仪
全自动细菌培养鉴定药敏系统主要由两部分构成，即：血培养仪（BACTEC9050）和细菌鉴定/药敏仪。 全自动血培养仪是一种专门设计用于快速培养和检测血液中细菌和真菌的仪器，BACTEC9050血培养仪采用的培养瓶主要有需氧和厌氧标准瓶，加有树脂的需氧和厌氧Plus 瓶以及儿童瓶等。其树脂瓶经现场实验证明能较快地发现瓶中细菌并有较高的检出率。目前此系统在世界上特别是在欧美应用十分广泛。 BD PHOENIXTMM System凤凰全自动微生物鉴定/药敏系统是专业设计应用于临床微生物实验室进行快速细菌鉴定及药物敏感试验的全自动设备。仪器原理为先进的荧光增强与传统方法的结晶。系统连续监测，试验完成后可立即得出结果;革兰阳性菌和阴性菌准确度为95%；细菌的药敏时间较手工方法也大为缩短。从接收标本到出具报告时间仅为48h左右，准确度为95%。全自动细菌培养鉴定的投入使用，将在以下四个方面大大提高工作效率：一是提高培养基营养条件利于苛养菌生长。二是加强细菌耐药性监控。鉴于目前耐药性的问题日趋严重，该系统能较准确地做好常规的抗生素敏感试验，并保存有关的菌种和数据以便进一步分析，包括耐药趋势的统计分析、耐药机制的检测和研究，重点耐药菌株如MR-SA、VRE 和ESBL等的监测和耐药基因的检测等。三是帮助临床合理应用抗生素，检测病原微生物对抗生素的敏感性是临床微生物实验室最重要的工作之一。 抗生素敏感性检测的主要目的是预测抗生素的治疗效果，并帮助临床医生针对某一特定的临床感染问题选择最合适的药物，该系统不仅能正确、迅速检出病原体，而且给临床提供可能存在的耐药机制，帮助临床合理应用抗生素。四是提供临床（咨询）服务，目前备受人类重视的难治的耐药菌有：①耐青霉素肺炎链球菌（PRP）；②耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）；③耐万古霉素肠球菌（VRE）；④耐万古霉素葡萄球菌（VRSA）；⑤耐多种药物的结核分枝杆菌（MDR-TB）；⑥真菌感染日益增多；⑦产超广谱β-内酰胺酶的革兰阴性杆菌（ESBL）；⑧持续高产染色体I型β-内酰胺酶（AmpC）的阴沟肠杆菌、产气肠杆菌，弗劳地枸橼酸杆菌；⑨多重耐药的铜绿假单胞菌，不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌。随着该系统的投入使用以及与临床的及时沟通，对协助临床医生解决治疗感染性疾病的困难也有一定的帮助。
支原体感染与药敏分析
来自：杨传松,胡雪飞,廖晚珍. 2379例女性患者支原体感染情况与药敏分析[J]. 实验与检验 医学,2010,01:77-78. 2379例女性支原体感染情况与药敏分析 杨传松⒈胡雪飞⒉廖晚珍⒉ 【摘要】目的了解女性生殖道支原体（Mycoplasma）感染（主要为南昌地区）与药物敏感试验情况，为临床治疗提供依据。方法采用支原体试剂盒对2379例疑诊为生殖道感染女性患者的宫颈分泌物进行支原体培养、鉴定及药敏试验。结果2379份标本中，支原体检测阳性1503例，阳性率63.2%，其中解脲支原体（UU）46.0%（1094/2379），UU+ MH（人型支原体）混合感染及MH分别为15.4% (367/2379)、1.8%（42/2379）。药敏结果：支原体对强力霉素（Dox）、交沙霉素（Jos）、美满霉素（Min）的敏感率均在70%以上,另外,UU对克拉霉素（Cla）、四环素（Tet）也较敏感，分别为92.3%、84.7%，但Cla在MH及UU+ MH混合感染时，敏感率较低,仅为2.4%和7.4%；耐药率较高的是环丙沙星（Cip）、壮观霉素（Spe）等。结论本地区女性生殖道支原体感染以UU 为主，其次是UU+ MH混合感染，较敏感的抗菌药为：Dox、Jos、Min，仅UU 感染时还可选用Cla。为减低支原体的耐药率，建议临床根据药敏结果用药。 【关键词】支原体感染药敏非淋球菌尿道炎 支原体（Mycoplasma）是一类无细胞壁、形态上呈高度多形性，能通过除菌滤器，在无生命培养基中能生长繁殖的最小原核细胞微生物，由于它们能形成有分枝的长丝，故称之为支原体［1］。感染人类的支原体有十余种，女性生殖道以人型支原体(MH)及解脲支原体（UU）最常见。MH感染多引起阴道炎、宫颈炎和输卵管炎，UU多引起非淋球菌性尿道（non-gonococcal urithritis,NGU）。支原体多与宿主共存，不表现感染症状，仅在某些条件下引起机会性感染，且常和其他致病菌共同致病［2］。大量的研究证明UU与自然流产、先天缺陷、死胎和不孕症有关［3］。支原体感染还是一种性传播疾病，近年来其发病率日趋上升且耐药株增多，受到医务工作者的关注。为了解本地区女性生殖道支原体感染与耐药情况，为临床用药提供参考，作者对来我院就诊的2379位女性患者宫颈分泌物做支原体检测，现将结果报告如下： ----------------------------------------------------- 作者单位：1. 南昌大学公共卫生学院2005级医学检验系 2. 南昌大学第一附属医院检验科 作者简介: 杨传松(1984.04.21),男, 南昌大学公共卫生学院2005级医学检验系学生. 通讯作者: 胡雪飞,E-mail:hxf123666@https://www.360docs.net/doc/a218043995.html, 1资料与方法 1.1一般资料选自2009年1月~6月来我院妇产科门诊及住院的2379例女性 患者，进行宫颈分泌物检测。
细菌药物敏感试验实验报告
细菌药物敏感试验实验报告 药物敏感性试验的基本原则 1药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2药敏试验测试的前提条件： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。 错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3测试结果应准确： 实验室应遵照CLSI文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理
体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 具体的专业要求 1标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。在规范临床送检的前提下，实验室进行药敏试验和报告药敏结果时，应首先考虑标本的特殊性。实际工作中需重点考虑的标本如下。 1．脑脊髓液： 正常和疾病状态不能穿透血脑屏障的药物，常规不应报告。报告审核时，对于分离自脑脊髓液的菌，下列药物不能报告：仅有口服剂型的抗菌药物、一、二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、头霉素类、克林霉素、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类。
药敏结果的准确判读
药敏结果的准确判读 A.对临床感染相关及可疑的致病菌做药敏试验 B.只对与临床感染相关及可疑的致病菌做药敏试验 C.只对可疑的致病菌做药敏试验 D.只对无菌标本的致病菌做药敏试验 A.标本来源 B.患者年龄 C.独特的宿主因素 D.患者性别 3.关于无需做药敏试验的情况的说法中，错误的是： C.不能预测治疗用药的敏 感性时无需常规做药敏 A.对于临床少见菌不必常规做药敏实验 B.腐生葡萄球菌引起的尿路感染无需常规做药敏 C.不能预测治疗用药的敏感性时无需常规做药敏 D.天然耐药的细菌或抗菌药物组合无需做药敏试验 4.检测mecA-介导的苯唑西林耐药的最好的方法是：B.头孢西丁纸片法 A.MIC方法 B.头孢西丁纸片法
C.MIC方法+头孢西丁纸片法 D.其他方法 5.开始对某种抗菌药物敏感的菌株在治疗多久后可发展为中介或耐药： A.3-4天 A.3-4天 B.1-2周 C.5-8天 D.10-12天 准确判读细菌药敏试验的结果 A.苯唑西林：仅MIC B.头孢西丁：纸片法、MIC（仅对金葡菌） C.青霉素：纸片法或MIC D.苯唑西林：纸片法、MIC 2.有关碳青霉烯的耐药特点的说法中错误的是： C.碳青霉烯类药物耐药的肠杆菌科 菌通常为单一耐药 A.产碳青霉烯酶 B.头孢菌素酶合并通道缺失，例如某些头孢菌素酶 (如 AmpC ?--内酰胺酶或 ESBLs) 有低水平的碳青霉烯酶活性和通道蛋白的缺失减少了碳青霉烯类药物进入 细菌菌体 C.碳青霉烯类药物耐药的肠杆菌科菌通常为单一耐药 D.目前在我国大家比较关注碳青霉烯酶为A类酶KPC和B类酶ND M-1
B.氨苄西林 C.阿莫西林 D.以上都是 4.产前筛查克林霉素诱导试验，如果结果为阴性（即没有诱导耐药），用于预防分娩期链球菌感染的抗生素应为：A.克林霉素 A.克林霉素 B.头孢他啶针 C.万古霉素 D.青霉素 5.制备菌液，要挑选的菌落数至少为： A.3个 A.3个 B.1-2个 C.5个 D.10个 抗菌药物敏感性试验的标准化 1.不属于，临床实验室常用的抗菌药物敏感性试验的是: C.肉汤稀释法 A.纸片扩散法 B.Etest法 C.肉汤稀释法
常见细菌药物敏感性试验报告规范
常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识 微生物学检验为感染性疾病的诊断、治疗和控制提供了必不可少的证据。因此微生物学检验报告是临床和实验室等多方共同关注的焦点。国内临床微生物学检验发展较为薄弱，报告存在着种种不足。同时，临床与实验室的沟通存在一定不足，密切协作非常必要。基于实际存在的问题，为规范国内临床微生物学检验药物敏感性试验报告，加强临床与实验室合作，发挥检验医师作用，特制订本共识，以期指导相关报告的规范化，减少错误，增加专业信息，提高服务质量，为临床医学诊、治、控提供坚实的科学依据。本共识限于常见细菌的药物敏感性报告。 一、药物敏感性试验的意义和基本原则 (一)意义 药物敏感性试验可以检测细菌对于抗细菌药物的敏感性，为临床用药、新药研究、监测耐药变迁、发现耐药机制等提供客观证据[1]。对于经验治疗，依据一方面来自医生自身的经验，一方面是实验室长期不断提供的数据积累。临床需要考虑不同感染的病原谱和常见病原对不同药物的敏感性；对于靶向治疗，特定分离株的具体药敏试验结果可以用于判断经验治疗选药合理性、经验治疗效果分析、调整治疗选药依据等。 (二)基本原则 1．药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药[2]。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献[3,4]。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2．药敏试验测试的前提条件[5]： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3．测试结果应准确： 实验室应遵照C L S I文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 二、具体的专业要求 (一)标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。
进口全自动细菌鉴定药敏分析系统1套(允许原装进口产品 …
进口全自动细菌鉴定药敏分析系统1套（允许原装进口产品投标）参数要求： （一）主机技术参数 1.系统可同时处理≥30张卡片，系统具有扩容功能，至少可以两台联机。 2.分析组件可自动进行革兰阴性菌、革兰阳性球菌、革兰氏阳性杆菌、酵母样真菌、苛养菌、厌氧菌、嗜血杆菌及棒状杆菌等的鉴定，检测过程中无需额外添加试剂。 3.快速全自动进行临床病原菌的鉴定，平均鉴定时间不大于6小时。 4.分析组件可自动进行革兰阴性菌、革兰阳性菌、酵母样真菌、肺炎链球菌等药敏试验，以上所有药敏试验均得到美国FDA批准用于临床应用（提供FDA资料）。 5.快速全自动进行临床病原菌的药敏实验，平均药敏实验时间不大于6小时。 6.系统的自动化程度高，有条码识别系统，能自动填充悬浮液至试剂卡、自动密封拭卡，并自动将拭卡装载于光学读数系统/孵育系统；测试结束时可自动丢弃拭卡。 7.卡片为封闭式，两面都覆盖了塑料薄膜以避免底物的污染，加样时由仪器自动真空充填。不采用开放式卡片以避免污染和潜在的生物安全隐患。 8.采用分开的鉴定卡和药敏卡，不使用鉴定药敏复合板以避免成本上的浪费。（提供SFDA注册证）。
9.具有专家系统，药敏试验符合美国CLSI、欧洲CASFM两种检测标准。专家软件提供自动确认结果功能，并根据对MIC的结果分析提供治疗的解释和治疗的建议。可推导未检测抗生素的敏感性结果并提供2000种耐药表型分析。 10.能进行流行病学统计（不需另外配置）。 11.测试完成后，经分析软件分析后得出结果并可自动打印报告，并保存结果 12.具备中文报告软件系统。 13.双向联网软件，可传输报告结果。 14.具有三重售后服务保证体系（国内有分支机构、本地有生产厂家办事处、销售商有专职工程师），必须提供终身售后服务支持。15.售后服务时效：有仪器故障，厂方能在4小时作出响应。 （二）附件技术参数 培养箱技术参数 1.电子控制式APT.Line内腔预热技术。 2.温度范围：从环境温度以上5度到100度。 3.DS控制器，带0到99小时整体式计时器。 4.数字式温度设定，精度为0.1度。 5.独立的可调温度安全装置，3.1级（DIN12880）,带有可视温度报 警器。 6.通过背后带有通风瓣的排气管和前面的通风滑板，调节通风量。 7.用于通讯软件APT-COM数据控制系统RS422接口。
MicroScan○R AutoScan-4细菌鉴定及药敏分析系统临床应用
MicroScan○R AutoScan-4细菌鉴定及药敏分析系统临床应用 发表时间：2010-12-01T09:06:02.560Z 来源：《中外健康文摘》2010年第31期供稿作者：韩文静 [导读] 再将测试板放入35℃培养箱孵育16-24小时后，进行测试板判读，并将药敏结果输入，保存。 韩文静（新疆乌鲁木齐市米东区人民医院新疆乌鲁木齐 831400） 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)31-0017-02 【关键词】细菌鉴定药敏分析临床检验简捷适用 MicroScan○R AutoScan-4（简称AS-4）细菌鉴定及药敏分析仪和DMS能够简单、高效地采集、储存、编辑和检索病人样品结果。通过革兰氏阳性/革兰氏阴性复合测试板，最快能在2天内报告微生物鉴定及药敏各种抗生素的最低抑菌浓度（MIC）。此外，根据操作员的实验判读，可以对多个报告进行比较并生成报告。 1 性能结构及组成 该仪器主要由主机(包括前面板和抽屉及测试板处理系统)、LabPro软件组成。 2 适用范围 该仪器用于鉴定微生物的种类及确定临床样本中分离出的微生物的体外抗生素敏感性测试的结果，并与包含连续稀释抗生素和选定生化试剂的MicroScan 测试板一起使用。 3 MicroScan○R AutoScan-4细菌鉴定及药敏分析仪特点 3.1 MicroScan为基层检验工作中提供专利的Prompt快速接种系统，极大提高临床微生物实验室处理微生物标本的能力。 3.2 鉴定菌种包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、厌氧菌、酵母菌、嗜血杆菌、奈瑟氏菌——自动鉴定菌种达500种之多，是同类产品中最全的。 3.3 药敏测定每一种菌株至少可提供18~32种以上抗生素定量药敏（MIC）结果。 3.4 提供单独鉴定板条、单独药敏板条、药敏/鉴定复合板条，所以药敏测试可同时提供MIC和S.I.R报告。 3.5 AutoScan-4具有革兰氏阴性杆菌、尿道感染的肠杆菌科细菌、链球菌、葡萄球菌等确认的标准药敏板。 4 用于对临床标本分离细菌的鉴定和体外抗生素敏感性进行检测的诊断工具 4.1 可同时自动处理鉴定与药敏（MIC）的检查（革兰氏阳性/ 阴性复合板）比色法及比色浊法对鉴定及药敏（MIC）进行测定，仪器自动判读结果。使用测试板及快速接种系统，最快2天可同时报告鉴定及药敏结果。人工判读，将编码输入电脑，由电脑软件评定反应结果。 4.2 操作简单，菌液浓度精确，菌落必须要纯。 5 AS-4微生物实验室操作及临床应用 5.1 将培养皿上优势菌落进行革兰氏染色，按操作程序挑选1－3个菌落，去帽，放入接种瓶中，混匀，倒入接种槽中，用加样定量吸入菌液加至革兰氏阳性/ 阴性复合板中，在相应测试孔中加入专用液体石蜡3滴，盖上专用盖板，放入35℃培养箱中16-24小时，取出进行判断。符合要求，加入生化试剂后，放入AS-4仪器中，按要求进行测试，几秒钟即可判读鉴定及药敏结果，保存判读结果。同时进行触酶及氧化酶实验，记录结果。 5.2 我们应用AS－4参加了5次自治区室间质评，鉴定及┟艚峁 下蚀?00%。室内质控的标准菌株定期鉴定，结果完全一致。 5.3 按AS－4标准进行操作，鉴定率达86%以上为可信结果。低于86%应查找原因，重新操作，提高鉴定率。我们经过2年临床样本中分离出的微生物实验室操作，平均鉴定率达96%以上。科学可靠的实验结果，为临床合理使用抗生素提供依据。 6 AS-4微生物实验室操作注意事项 6.1 AS－4应该放置在清洁、平整的台面上，环境尽量无尘，温度低于28℃，避免震动或电磁干扰，保证仪器的性能。同时还要确保仪器电源、电压在规定标准范围内。电源打开时，不要打开AS－4的顶部。在关闭AS－4或者DMS以后打开它。关闭元件后等待10-15秒再打开元件。如果发生电源故障，应立即关闭所有元件并等待电源恢复后再打开元件。如果光源在操作中发生故障且需要更换，则先将其冷却约10分钟，然后再尝试更换。否则会导致严重燃烧。在更换灯泡以前确保关闭电源。为保证最优性能，更换灯以后，请联系售后服务，以安排调整仪器电气校准的时间。仪器打开时，抽屉自动打开。在打开AS－4之前确保抽屉的运动路径没有阻碍。 6.2 按下READ按钮使抽屉在判读测试板时自动关闭。按下READ按钮之前确保抽屉的运动路径没有阻碍。按下
药敏试验方法1
药敏试验方法： K-B法： 1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。 2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。 3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。 6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidexpneumo-kit)于室温。 3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。 4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。 5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。 药敏纸片的选择 1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科） 头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ） 氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN） 头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM） 庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA） 头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB） 奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ） 亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC） 2、铜绿假单孢菌/不动杆菌 妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT） 头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟 头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ） 左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦 3、金黄色葡萄球菌 苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN） 红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP） 万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦 头孢噻吩（CF） 4 、肠球菌 氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP） 庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL） 5、除肺炎链球菌外链球菌 氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素
临床常见念珠菌的分布及其药敏分析
临床常见念珠菌的分布及其药敏分析 随着抗菌药物的不断应用及免疫缺陷的病人的不断增加，真菌感染不断增加，尤其是念珠菌 的感染。抗真菌药物可有多种选择，而致病性真菌容易出现耐药性，抗真菌药物敏感实验显 得日趋重要，并成为指导临床医师用药手段之一。为了解我院从临床标本中分离的常见念珠 菌的分布及其对常用抗真菌药物的敏感情况，为临床正确选择抗真菌药物，回顾性分析了我 院临床标本中分离的念珠菌306株的临床分布及其常见四种念珠菌对五种抗真菌药物的敏感性。 1材料方法 1.1一般资料2011年1月—2011年12月门诊及住院患者送检的痰液、尿液、胸水、腹水、粪便、分泌物、脑脊液、等标本3052份。检出真菌306株，剔除重复菌株。 1.2培养基：沙保弱培养基（自制）按全国临床检验操作规程第三版配方进行配制。 1.3质控菌株：近平滑念珠菌A7CC22019.克柔念珠菌A7CC6258。 1.4菌种鉴定及其药敏实验。鉴定及药敏实验用珠海迪尔生物有限公司提供的真菌测定系统 及随机体外诊断鉴定及药敏试剂反应板进行检测。 2结果 2.1真菌分布306株真菌中，痰液标本检出最多，为184株，检出率为60.1%。见表1。 2.2真菌种类 306株真菌中，分布最多的是白色念珠菌，热带念珠菌，近平滑念珠菌，光滑 念珠菌。真菌种类分布构成比见表2。 2.3药敏分析念珠菌对两性霉素和5-氟胞嘧啶的敏感性最高，达100%。对伊曲康唑，伏立 康唑，氟康唑的敏感性不一。四种常见念珠菌对抗菌药物的敏感率见表3。 3讨论 经统计，最常见的念珠菌依然为白色念珠菌，所占比例最高，达63.1%，与朱向葵等[1]报道 的基本一致。在我院送检的真菌感染标本中，痰标本占居首位。占60.1%，这说明院内的真 菌感染还是以下呼吸道感染为主，其中以念珠菌肺部感染最为常见。这主要与下呼吸道感染 以老年人为主，他们常期使用抗生素，导致菌群失调，再加上免疫力下降。另外呼吸系统的 解剖特点决定了呼吸道粘膜的温度，湿度，酸碱度菌宜于真菌的生长。[2] 念珠菌有黏附粘膜组织的特性，其中白色念珠菌对组织的黏附力尤强，故致病力较其他念珠 菌更为严重。近年来，非白念珠菌有增高的趋势，[3]这就需要我们也要加强对非白念珠菌耐 药性的监测。 从体外药物敏感性实验结果可以看出，念珠菌对两性霉素，5-氟胞嘧啶的敏感性最好，抗菌 效果达100%。与徐洪绪等[4]报道的一致。念珠菌对氟康唑，伏立康唑的敏感性在71.9%-72.5%之间，低于窦红涛报道的97.79-100%，可能与地区差异和实验方法有关。对伊曲康唑的敏感 率在73.5%-85%，高于李华信等[5]报道的57.1%-50%。 随着肿瘤，血液病，老年呼吸道疾病，艾滋病等病人的不断增加，以及器官移植，各中介入 性诊治手段的应用，由此而伴发的真菌感染呈不断增长趋势。所以临床微生物实验室应不断 提高真菌培养与药敏的检测技术，为临床正确选择抗真菌药物提供依据。 表1 真菌感染标本分布构成比（%）
临床微生物检验报告单的解读
首先，准确鉴定病原菌、报告药敏试验结果，给临床选择用药提供科学的参考依据，是我们微生物实验室不可推卸的责任，但在药物的选择和实际应用过程中多了解一些微生物及药理方面的知识，可能会对临床治疗起到事半功倍的效果。特别是在痰及咽拭子的培养鉴定中，由于多种条件致病菌的存在，是否引起感染、是否需要抗菌治疗，都需要临床医生综合分析后判断，以下几点是临床工作中可能会遇到的问题： 1、有些临床常用药物药敏试验中没有 例：头孢哌酮/舒巴坦为广谱抗菌药物，主要用于治疗革兰氏阴性杆菌，如大肠埃希菌等。CLSI 规定其对肠杆菌科细菌的判定折点为≤15 耐药，≥21 敏感，所以我们将其加入到肠杆菌科细菌药敏谱中，但由于头孢哌酮/舒巴坦对葡萄球菌等革兰氏阳性球菌CLSI 没有判定折点，所以无法判定其对于葡萄球菌敏感或是耐药，也不应该加入葡萄球菌药敏试验中。 2、有些新药没有列入药敏谱 首先，新药由于刚刚推广，还没有列入CLSI 的监测范畴，没有依据加以判断。其次，药敏谱中各类各代抗生素都具有一定代表性，不能面面俱到，如喹诺酮类二代抗菌药物环丙沙星在药敏试验中敏感，那么对于三代超光谱抗生素左氧氟沙星、司帕沙星等临床医生可根据需要加以选择。 3、细菌的天然耐药有些菌属或菌种对某些抗菌药物天然耐药或固有耐药，该耐药性具有种属特异性。 ⑴肠球菌：对除青霉素、氨苄西林以外的所有青霉素类、头孢菌素类抗生素天然耐药。 ⑵嗜麦芽窄食单胞菌：对亚胺培南（泰能）、美罗培南天然耐药。 ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药。 ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然耐药。 ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、复方新诺明、头孢 1 代、头孢2 代天然耐药。 更为特殊的是，铜绿假单胞菌对三代的头孢噻肟和头孢曲松即使药敏试验敏感，在实际临床治疗中也需要超大剂量才会取得疗效，但人体对超大剂量的三代头孢不具有长时间的耐药性。铜绿假单胞菌有对很多药物的诱导耐药性，在初期可能没有表现出来，一旦接触某种抗生素，沉睡的基因被激活，耐药性表现出来，这种特性在β-内酰胺类抗生素中尤为明显，可能在体外试验敏感，在实际治疗中却无效，所以采用头孢噻肟和头孢曲松进行治疗时就要冒险，这在临床上是首先要规避的。 充分了解抗菌药物体内疗效与体外药敏试验的差异和药敏试验的局限性，意在找到一定的原因和规律性，在使用广谱抗菌药物之前，应先采集标本送检，再根据药敏试验结果和临床疗效调整给药方案，使临床应用抗菌药物趋向合理，减少用药的盲目性和随意性，提高疑难危重病人的救治成功率。 合理使用抗菌药物需要综合考虑多方面因素，绝不是一份药敏试验报告所能完全概括的，其中的临床思维和临床操作都十分复杂，要想使我们的抗生素应用更加科学、合理、有效，这需要微生物实验室和临床科室的共同努力，我们也将不断学习、更新微生物检测、试验及药理方面的知识，力争为临床科室提供更有价值的参考依据。