第十六章B细胞对抗原的识别及应答
肿瘤细胞免疫治疗的原理
顾名思义，肿瘤细胞免疫治疗就是调动人体强大的免疫系统来对抗癌症的治疗方法。那么，人体免疫系统有何强大之处?其对抗肿瘤的原理是什么呢?本期专题将对此做一个简单的解读。 人体免疫系统的基石是细胞，而人体本身就是由各种细胞组成的名副其实的细胞王国，在这个王国里，免疫系统是最忠实的守护神。它有着庞大的防御工事和数量众多的军队，这套防御系统成功地抵御了外敌的入侵，镇压了内部的叛变分子，如果没有他们的出色工作，细胞王国将不能正常运转，感染、癌症将会使这个王国覆灭。 细胞王国的防御工事中最重要的部分是皮肤，完整的皮肤保护了王国绝大多数的边境不受外敌侵犯，而在与外界相通的各个通商口岸，我们也是层层设防。我们口腔中的唾液，含有一种溶菌酶，可以高效地分解细菌;我们的胃酸几乎可以”酸死”食物中的绝大多数微生物，当然也会有漏网之鱼和对强酸有抵抗力的致病菌，如胃中的幽门螺旋杆菌可以在胃酸中闲庭信步(这家伙据科学家说是引起胃炎的祸首);我们的鼻毛虽然不雅，却交织成一张大网，兜住了大部分的灰尘和大点的细菌;呼吸道中覆盖的恶心的黏液可以粘住绝大多数的入侵者，然后通过擤鼻涕和吐痰将它们扫地出门(当然，还通过打喷嚏将敌人吹走)。 对付普通敌人，免疫细胞大军只需派出队伍里的基层士兵 以上说的是细胞王国的强大边境防线，虽然阵地工事建得是固若金汤，拒外来之敌于千里之外，但俗话说得好，”明枪易躲，暗箭难防”，对于出现在人体内部的敌人，如细菌、病毒，这道防线可以说是形同虚设。别忘了免疫系统还有着一支庞大而高效的军队(免疫细胞)，这支军队不仅数量超卓，而且种类繁多，士兵各司其职，战争来临时紧密联系、相互配合，拳头握在一起，把敌人打得落花流水。 免疫细胞大军大部分时间呆在血液中(它们就是我们常说的白细胞)，它们和负责传送氧气的红细胞、负责止血的血小板都来源于骨髓造血干细胞。如果细胞王国安定团结，这些造血干细胞就大多会成长为红细胞，负责传送氧气，只保持一小部分的白细胞维持战斗力;如果细胞王国面临外敌入侵，那骨髓就马上开足马力大量生成造血干细胞，而且这些”儿童”大部分会成长为战士，白细胞数量在短期内大增，全国进入备战状态。 对付普通敌人(如异物、细菌)，免疫细胞大军只需派出队伍里的基层士兵即可搞定，比如中性粒细胞一般与细菌死磕，多数与细菌同归于尽，我们伤口化脓感染的脓液，其实主要就由中性粒细胞的尸体组成。巨噬细胞可将来犯之敌一口吞掉，并将敌人的情报上报上级，这样下次再看到同样的敌人就可以直接消灭。再难对付点的敌人可以由B细胞产生的抗体来消灭，这些抗体像精确制导的”导弹”一样一对一的消灭敌人，极为高效。 对付狡诈多变、凶残暴戾的癌细胞则需要出动精英部队
嵌合抗原受体(CAR)治疗的安全性
嵌合抗原受体（CAR）治疗的安全性 摘要：输注基因定向改造的嵌合抗原受体T细胞来识别并杀灭肿瘤，已经在许多I期临床试验中取得成功。由于会产生非肿瘤靶向和细胞因子释放综合征，所以需要有预防或减轻严重不良反应的对策。目前正积极研究通过药物治疗、自杀基因或其他新的办法，使其只针对恶性肿瘤有细胞毒性。在这篇综述中，我们调查总结了嵌合抗原受体改造的T细胞的毒性，并重点发布这充满前景的细胞治疗方法的安全性策略。 关键词：嵌合抗原受体，自杀基因，安全开关，过继免疫治疗，细胞治疗 1. 引言 同种异体造血干细胞移植（allo-HCT）是免疫治疗中一种有效方法，通过天然免疫系统和获得性免疫系统协同产生抗肿瘤作用。通过识别肿瘤相关抗原（TAAs）或次要组织相容性抗原（mHags），供体淋巴细胞输注（DLI）给移植后白血病复发的患者可介导抗肿瘤作用。 然而，由于大多数TAA自身蛋白表达异常，以致T细胞表达低亲和力T细胞受体（TCR），排斥反应可能比移植物抗肿瘤效应（GVT）更强。虽然用于治疗慢性粒细胞性白血病效果很好，而急性白血病异体淋巴细胞输注疗效有限，其2年生存率不到20%。 此外，并发症移植物抗宿主病（GVHD）造成病人死亡或生活质量下降占显着比例，有报道显示接受匹配供体的造血干细胞移植的患者GVHD发生率高于50%。虽然有报道称产生植物抗肿瘤效应（GVT）而没有发生移植物抗宿主病（GVHD）的情况，本文编译作者爱康得Paul认为两种机制的重叠，次要组织相容性抗原（mHags）介导了移植物抗肿瘤效应（GVT）和移植物抗宿主病（GVHD），可同时作用于造血和非造血组织。 临床试验中将次要组织相容性抗原（mHags）特异性T细胞扩增并过继输注到移植后疾病复发的患者身上，部分患者可获得暂时性完全缓解（CR），然而此方案因果规律复杂，并且T细胞在体外扩增长达12周。长期的培养可导致T 细胞衰竭，这可能是其在患者体内持续性有限的一个潜在原因。 另一个方法是利用转基因TCR或嵌合抗原受体（CAR）基因修饰的T细胞。然而TCR转导的T细胞受HLA限制，TCR和内源性TCR错配可导致亲和力降低或表达不期望的特异性。而CAR可作为免疫治疗的通用平台，因为它不受HLA 限制。在T细胞单链杀伤装置上负载特异性抗体，这种错配的风险很低。另外，HLA识别抗原的独立机制，可以防止CAR-T细胞在抗原的处理加工中出现免疫逃避机制。 通常CAR-T只在正常细胞与肿瘤细胞间非多态地识别表面分子，以提高对其安全的正当关切。事实上，输注CAR-T细胞使难治性白血病得到完全缓解的同时，也会伴有细胞因子释放综合征，在靶向肿瘤相关抗原（TAAs）的实体瘤时甚至可出现致命的非肿瘤靶向毒性。这些问题促使美国国立卫生研究院重组DNA咨询委员会提供了一些临床建议，包括实施小剂量递增方案，共表达自杀基因来阻断不可控毒性的或控制远期毒性。
第十章 抗原递呈细胞及抗原递呈
第十章抗原递呈细胞及抗原递呈 第一部分：学习习题 一、填空题 1．根据APC提呈抗原的来源不同，可将抗原分为________和________，前者来源于抗原APC之外，如吞噬的细胞、细菌或某些自身成分等；后者是APC合成的抗原，如病毒感染细胞所合成的病毒蛋白、肿瘤细胞合成的肿瘤抗原以及胞内某些自身成分等。 1．内源性抗原由广义抗原提呈细胞（靶细胞）经________途径提成，此途径又称为_________途径；提呈的抗原肽由_________T细胞识别。 2．外源性抗原由专职抗原提呈细胞经________途径提成，此途径又称为 _________途径；提呈的抗原肽由_________细胞识别。 3．专职APC包括________、________和________ 二、多选题 [A型题] 1. 能提呈外源性抗原的细胞有一个重要标记,它是 A.表达MHC-I类分子 B.表达MHC-II类分子 C.FcR D.C3bR E.抗原特异性受体 2. 淋巴结中能提呈抗原的细胞有 A.B淋巴细胞和T淋巴细胞 B.T细胞和巨噬细胞 C.巨噬细胞 D.巨噬细胞和树突状细胞 E.巨噬细胞和Th细胞 3.抗原提呈细胞所不具备的作用是： A.促进T细胞表达特异性抗原受体 B.降解抗原为小分子肽段
C.使MHC分子与抗原肽结合 D.为T细胞活化提供第二信号 E.将抗原肽-MHC复合物提呈给T细胞 4.关于DC提呈抗原的叙述，下列哪项是错误的？ A. DC是重要的专职APC B．FDC滞留抗原-抗体复合物于细胞表面，有利于B淋巴细胞摄取抗原 C. DC提呈外源性抗原能力强 D．DC提呈内源性抗原能力强 E．DC是激活初始T细胞最重要的APC 5．下列哪种物质与MHC- II 类分子抗原提呈有关 A. Ii B.LMP C.TAP1 D.泛素 E. TAP2 6．关于APC提呈抗原，下列哪项是错误的？ A. 内源性抗原经APC处理后，形成抗原肽-MHC- II 类分子复合物形式提呈给CD4+T细胞 B．内源型性原经APC处理后，形成抗原肽-MHC- I 类分子复合物形式提呈给CD8+T细胞 FDC向B淋巴细胞提呈抗原-抗体复合物 C. 脂类抗原与CD1结合，由APC提呈给CD4+T、CD8+T、CD4-CD8-和NK1.1T 细胞。 D. 记忆性B细胞将抗原肽-MHC- II 类分子复合物提呈给Th2细胞 E. TAP参与外源性和内源性抗原的处理 7．抗原提呈细胞膜上与提呈外源性抗原密切相关的表面标志是： A. MHC- I 类分子 B. MHC- II 类分子 C. BCR D. TCR E.Fc R 8. 抗原提呈细胞膜上与提呈内源性抗原密切相关的表面标志是：
肿瘤特异性抗原介绍
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 肿瘤特异性抗原介绍 导语：肿瘤这个字眼，大家一听就会非常紧张，因为人类健康的一大杀手癌症就是恶性肿瘤，那么肿瘤特异性抗原的相关知识大家了解吗？对于这种症状， 肿瘤这个字眼，大家一听就会非常紧张，因为人类健康的一大杀手癌症就是恶性肿瘤，那么肿瘤特异性抗原的相关知识大家了解吗？对于这种症状，很多朋友都回非常紧张，不知道应该怎样面对，所以这就要求大家要多去了解疾病的有关知识，这样才能多了解疾病，做出合理的有效的治疗。 肿瘤特异性抗原（tumor specific antigen）指仅表达于某种肿瘤细胞表面而不存在于正常细胞上的新抗原，故又称独特肿瘤抗原（unique tumor antigen）。 此类抗原可存在于不同个体同一组织类型的肿瘤中，如人恶性黑色素瘤基因编码的黑色素瘤特异性抗原可存在于不同个体的黑色素瘤细胞，但正常黑色素细胞不表达。TSA也可为不同组织学类型的肿瘤所共有，如突变的ras癌基因产物可见于消化道、肺癌等，但由于其氨基酸顺序与正常原癌基因ras表达产物存在差异，可被机体的免疫系统所识别，激发机体的免疫系统攻击并消除肿瘤细胞。物理或化学因素诱生的肿瘤抗原、病毒诱导的肿瘤抗原及自发性肿瘤抗原多属于此类。 TSA的发现可追溯到20世纪50年代，人们通过同系动物移植排斥实验证实，一些放射性物质或化学致癌物质可诱发肿瘤细胞表达某些肿瘤抗原分子。最早是通过近交系小鼠间进行肿瘤移植排斥实验而证实肿瘤抗原的存在。由于此类抗原是借助动物肿瘤移植排斥实验所证明，故又称为肿瘤特异性移植抗原（tumor specifictransplantation antigen，TSTA）。TSA主要诱导T细胞免疫应答。 预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏
肿瘤抗原的制备
肿瘤抗原的制备 2．1．取手术切除的无菌肿瘤组织，用%的洗必泰浸泡30分钟。 2．2．无菌生理盐水冲洗3遍。 2．3．用无菌的组织剪剪碎，加入5ml RPMI 培养基研磨，经200目网过滤后收取单细胞悬液。 2．4．后用RPMI重悬细胞（1*107/ml），装入5ml无菌冻存管，经水浴加热1小时后，60 o C水浴继续加热1小时。 2．5．将冻存管迅速浸入液氮速冻，10分钟后取出，放入室温融化；反复5次。2．6．将肿瘤细胞裂解物加入Falcon离心管，离心20分钟，收取上清。2．7．肿瘤细胞冻溶上清经0.2um的一次性无菌滤器（Pall, 4612）过滤除菌。3．外周血树突状细胞的培养 3．1．细胞来源 自愿接受经抗原冲击的自体树突状细胞瘤苗过继回输治疗的病人，且外周血白细胞在正常范围，不经药物动员即可经临床血细胞分离机分离单个核细胞。经血细胞分离机分离约4L全血，获得1-5*109单个核细胞，用以树突状细胞的体外培养。 3．2．用淋巴细胞分离液分离去除残留红细胞和粒细胞 收取的单个核细胞（约100ml） 3．3．离心后用平口巴氏滴管吸取界面细胞，收取细胞。 3．4．将经离心洗涤的单个核细胞用培养基配成4*106/ml的细胞悬液，种入750ml 无菌Falcon培养瓶，接种体积25ml。 3．5．将盛有细胞的培养瓶置5%二氧化碳，饱和湿度的培养箱中培养贴壁12
小时。 3．6．将培养瓶取出，轻轻摇晃十数次，使非贴壁细胞悬起，弃去悬浮细胞，再缓慢往瓶中加入培养基，轻轻晃动洗去残留非贴壁细胞。 3．7．往保留贴壁细胞的培养瓶中加入含特殊因子的新鲜完全培养基置5%二氧化碳，饱和湿度的培养箱中继续培养。 3．8．培养至第3天，往培养瓶中补充新鲜培养基，继续培养2-3天。3．9．培养过程中每天1次观察细胞的形态，在培养的第5，6天，可见细胞变为毛刺状，并聚集成团。 3．10．终止培养，用10ml吸管轻轻吹打培养瓶底部，使部分半贴壁的树突状细胞悬起，将培养液吸入50ml离心管，200g离心10分钟，收取细胞。 4．树突状细胞的抗原冲击 4．1．将收取的树突状细胞用含特殊因子的新鲜完全培养基配成2*106/ml的细胞悬液，以50ug/ml的浓度加入制备的肿瘤抗原，过夜培养。 4．2．用50ml离心管收取经与肿瘤抗原孵育过夜的树突状细胞悬液，200g离心10分钟，收取细胞；再加入40ml无菌生理盐水洗涤，连续3次。收集细胞即为APDC，取部分产品按检定规程检测各类指标。 4．3．肿瘤抗原冲击的树突状细胞对淋巴细胞刺激功能的检测
嵌合抗原受体T细胞免疫疗法
嵌合抗原受体T细胞免疫疗法 王晨璇 简介 CAR-T，全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。这是一个多年前被研发，但是近几年才被改良使用到临床上的新型细胞疗法。在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上有着显著的疗效，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。 技术原理 【T细胞的改造】CAR-T（嵌合抗原受体T细胞）疗法的基本原理即利用病人自身的免疫细胞来清除癌细胞。这项技术通过嵌合抗原受体(CAR)这一CAR-T的核心部件，赋予T细胞HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体TCR能够识别更广泛的目标。CAR的基础设计中包括一个肿瘤相关抗原（tumor-associated antigen，TAA）结合区（通常来源于单克隆抗体抗原结合区域的scFV段），一个胞外铰链区，一个跨膜区和一个胞内信号区。 【目标抗原的选择】理想的目标抗原是仅在肿瘤细胞表面表达的肿瘤特异性抗原。但由于肿瘤表达的大多数抗原不具备肿瘤特异，为了避免“脱靶”，应避免选择分泌型抗原。现阶段常用的靶点除CD19以外，也有相关报道以ERRB2（HER-2/neu）治疗肺部和前列腺癌，瞄定前列腺特异性抗原治疗前列腺癌，瞄定CAIX治疗肾细胞癌，瞄定Lewis Y以治疗肺癌和卵巢癌等等。 技术应用 近日，美国食品药品监督总局（FDA）批准诺华制药“CAR-T”疗法治疗复发性或
难治性儿童、青少年B-细胞急性淋巴细胞白血病。 同时，CAR-T技术治疗非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴瘤治疗白血病、胰腺间皮瘤、卵巢癌、B细胞癌症、成神经细胞瘤等技术也都在临床试验阶段。 CAR-T的治疗流程大致如下： 1、分离：从癌症病人身上分离免疫T细胞。 2、修饰：用基因工程技术给T细胞加入一个能识别肿瘤细胞并且同时激活T细胞的嵌合抗体，也即制备CAR-T细胞。 3、扩增：体外培养，大量扩增CAR-T细胞。一般一个病人需要几十亿，乃至上百亿个CAR-T细胞（体型越大，需要细胞越多）。 4、回输：把扩增好的CAR-T细胞回输到病人体内。 5、监控：严密监护病人，尤其是控制前几天身体的剧烈反应。 技术优点 CAR-T细胞治疗技术具有如下优势： 1、治疗更精准。由于CAR-T 细胞是应用基因修饰病人自体的T细胞，利用抗原抗体结合的机制，能克服肿瘤细胞通过下调MHC分子表达以及降低抗原递呈等免疫逃逸，让肿瘤细胞无所逃遁； 2、多靶向更精准。CAR既可以利用肿瘤蛋白质抗原，又可利用糖脂类非蛋白质抗原，扩大了肿瘤抗原靶点范围，CAR-T细胞作用过程不受MHC的限制； 3、杀瘤范围更广。鉴于很多肿瘤细胞表达相同的肿瘤抗原，针对某一种肿瘤抗原的CAR基因构建一旦完成，便可以被广泛利用； 4、杀瘤效果更持久。新一代CAR结构中加入了促进T细胞增殖与活化的基因序列，能保证T细胞进入体内后还可以增殖，CAR-T细胞具有免疫记忆功能，可以长期在体内存活。 技术缺点 【副作用】 1、细胞因子释放综合症：大量的细胞因子快速流入血液，进而会导致危险的高烧和血压剧降。副作用可通过标准的支持疗法(包括类固醇)进行处理。 2、IL-6水平过高：一些反应严重的患者具有特别高的IL-6水平，IL-6是由T 细胞和巨噬细胞在对抗炎症时分泌的细胞因子。 【改进与演化】
肿瘤的免疫逃避
肿瘤的免疫逃避 正常机体每天有许多细胞可能发生突变，并产生有恶性表型的瘤细胞，但一般都不会发生肿瘤。对此，Burner提出了免疫监视学说，认为机体免疫系统通过细胞免疫机制能识别并特异地杀伤突变细胞，使突变细胞在未形成肿瘤之前即被清除。但当机体免疫监视功能不能清除突变细胞时，则可形成肿瘤。 然而，尽管机体有如此多样的抗肿瘤免疫效应，但肿瘤仍可在体内发生、发展，并且随着肿瘤的增长，肿瘤细胞能产生一些细胞因子。这些因子可以诱导机体产生一些抑制免疫的细胞，并诱导机体产生体液抑制因子，从而抑制抗肿瘤的免疫功能。肿瘤细胞自身也可以分泌一些具有免疫抑制作用的产物，侵犯局部转移的淋巴结，导致机体局部乃至全身的免疫功能低下。提示肿瘤具有一系列的免疫逃避机制来对抗机体的免疫系统。 1、肿瘤抗原调变作用 在肿瘤免疫过程中，T细胞的免疫功能起着关键性的作用。可溶性肿瘤抗原经抗原提呈细胞（APC）摄入后经加工处理，然后将处理后的抗原提呈给辅助性T细胞，后者通过分泌细胞因子促进杀伤性T细胞增殖，并产生特异杀伤作用。然而许多肿瘤细胞并没有死于机体的免疫杀伤，可以通过多种机制逃逸T细胞的免疫监视作用。 大多数肿瘤抗原的免疫原性很弱，不能诱发有效的抗肿瘤免疫应答。机体对肿瘤抗原的免疫应答导致肿瘤细胞表面抗原减少或丢失，从而肿瘤细胞不被免疫系统识别，逃避了机体的免疫攻击，这种现象称为“抗原调变”（Antigen Modulation）。这一理论在小鼠白血病细胞系中得到证实，该细胞系经抗体、补体处理后，丧失了细胞表面的胸腺白细胞抗原（TL抗原）。抗TL抗原的抗体与肿瘤细胞结合后，细胞表面出现斑点样的抗原分布改变，以后该抗原逐渐消失。在其他实验中也发现抗肿瘤抗体导致肿瘤抗原消失的类似现象。将肿瘤细胞与特异抗体或者细胞毒性淋巴细胞（CTLs）共同培养，也可以迅速诱导肿瘤抗原的丢失。抗原调变这一现象在生长快速的肿瘤普遍存在，抗原调变可由于细胞自身的机制或抗原抗体复合物脱落所致。这种肿瘤细胞表面抗原丢失仅反映肿瘤细胞表型的改变，经调变的细胞再次进入原宿主，抗原将再次出现，并重新诱发抗体产生。
嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T细胞)制剂制备质量管理规范(征求意见稿)
嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T细胞）制剂制备质量管理规范（征求意见稿） 中国医药生物技术协会发布 目次 前言II 引言III 1 范围1 2 术语和定义1 3 基本要求2 3.1 基本原则2 3.2 人员的要求2 3.3 场所和设施2 3.4 物料2 4 载体制备3 4.1 质粒制备3 4.2 非病毒载体制备的基本要求3 4.3 病毒载体制备的基本要求3 5 细胞制备过程中的要求3 5.1 样本的要求3
5.2T细胞的采集和分离4 5.3 操作的要求4 5.4 细胞转导及扩增的要求4 5.5 安全性及有效性检测5 5.6CAR-T细胞制剂的质量要求5 5.7CAR-T细胞冻存、运输与复苏的要求5 6CAR-T制剂的质量控制与放行5 7 追溯5 8 保密原则6 9 附则6 参考文献7 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中国医药生物技术协会制定，由中国医药生物技术协会实施。 本标准起草单位：中国医药生物技术协会医药生物技术临床应用专业委员会。 本标准主要起草人：。 本标准为首次发布。 引言
近年来，免疫治疗经历了一系列突飞猛进的发展，以特异性过继免疫细胞疗法及免疫检查点抗体疗法为代表的新型免疫治疗技术因其在临床研究中取得的显著疗效而成为学术界和产业界共同关注的焦点。其中，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法（Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，CAR-T疗法）因其在白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤的治疗中展现出显著的治疗效果而成为国内外研究的热点。随着我国对CAR-T技术的研究不断深入，国内企业的积极布局和产业链的延伸，我国的CAR-T细胞治疗技术也在紧随国际趋势的发展。 然而，目前国内关于CAR-T细胞的制备和质量控制缺乏统一的标准和管理规范，各制备机构或应用机构之间无法进行正常的评估和交流，一定程度上不利于细胞治疗产业的专业化发展。只有确立了安全、规范、稳定、可追溯的行业规范，才能从源头保证整个CAR-T细胞治疗产业的规范性和安全性。 为了适应我国CAR-T细胞治疗产业的需要，加强CAR-T细胞治疗的管理，规范细胞制备过程，保证CAR-T细胞制品在临床应用的安全性，促进国际间同行的交流，有必要制定中国医药生物技术行业的CAR-T细胞制剂制备质量管理规范。 嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T细胞）制剂制备质量管理规范 1 范围 1.1 为协助CAR-T细胞制剂制备机构（以下简称机构）在制备过程中避免污染、交叉污染、混淆及差错，且保证CAR-T细胞制剂的安全性、生物学效应，参照《免疫细胞制剂制备质量管理自律规范》等相关规定和指导原则，制定本规范。 1.2 本规范所称的CAR-T指用于治疗的、经体外基因导入后表达嵌合型抗原受体的人源T
第十一章 淋巴细胞抗原识别受体的编码基因及多样性的产生
第十一章淋巴细胞抗原识别受体的编码基因及多样性的产 生 复习要点： 1．了解BCR、TCR基因结构和发生重排的一般特点。 2．了解BCR、TCR多样性产生的机制。 一、单项选择题 1．B淋巴细胞膜表面具有的抗原识别受体是 A．TCR B．CR2 C．FcR D．CR1 E．BCR 2．T淋巴细胞膜表面具有的抗原识别受体是 A．FcR B．mIg C．BCR D．TCR E．CR1 3．受体基因重排的重组信号序列是★ A．5核苷酸-间隔序列-9核苷酸 B．7核苷酸-间隔序列-7核苷酸 C．7核苷酸-间隔序列-9核苷酸 D．7核苷酸-间隔序列-5核苷酸 E．9核苷酸-间隔序列-9核苷酸 4．受体基因重排时，重组信号间隔序列片段结合的规则是★ A．13-23 B．12-23 C．13-25 D．23-25 E．25-12 5．BCR的V H-D H-J H基因片段组合后编码的产物是★ A．CDR1 B．CDR2 C．CDR3 D．FR1 E．FR2 二、多项选择题 1．编码人BCR重链V区的胚系基因有★ A．V基因片段B．D基因片段C．J基因片段 D．C基因片段E．L基因片段 2．编码人BCR κ链的胚系基因有★ A．V基因片段B．D基因片段C．J基因片段 D．C基因片段E．L基因片段 3．编码人BCR λ链的胚系基因有★ A．V基因片段B．D基因片段C．J基因片段 D．C基因片段E．L基因片段 4．编码人TCR α链的胚系基因有★ A．V基因片段B．D基因片段C．J基因片段 D．C基因片段E．L基因片段 5．编码人TCR β链的胚系基因有★ A．V基因片段B．D基因片段C．J基因片段 D．C基因片段E．L基因片段 6．编码人TCR γδ链的胚系基因有★ A．V基因片段B．D基因片段C．J基因片段 D．C基因片段E．L基因片段 7．编码人TCR δ链的胚系基因有★
肿瘤细胞免疫组化综述
临床病理工作中，我们常用到“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”，但是许多单位只写阳性结果，不写临床意义，其结果对临床帮助不大，因为许多医生不懂得这些结果的意义，因此建议大家在出此类报告时，把“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”的意义打印在报告中，以增加病理报告的使用价值。 1、恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gP，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67。 2、乳癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER，PR，C-erbB-2。 3、意义：标记物--作用--阳性部位--临床意义 多药耐药基因蛋白（P-Gp）--药泵作用--胞膜/胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。 谷光甘肽S转移酶（GST π）--解毒作用--胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。 拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）--靶点作用--胞核--阳性率越高，对下列药物越有效：蒽环类抗生素和鬼臼毒素类，如VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。阳性率高者对VP16尤其有效。 雌激素受体（ER）--性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。 孕激素受体(PR) --性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。 C-erbB-2--癌基因产物--胞浆--阳性率越高，肿瘤恶性程度越高。ER、PE阳性而C-erbB-2也阳性者，用三苯氧胺治疗效果不好。 Ki-67--细胞增殖标志--胞核--阳性率越高，肿瘤增殖越快，恶性程度越高。 Ki-67为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。PCNA(增埴细胞核抗原)。 CEA 多数腺癌表达CEA Rb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。 P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。野生型半衰期很短 Nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。目前已被广泛应用于乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、喉癌等多种恶性肿瘤的检测。几
6-通过免疫系统受体的信号传导
第三部分成熟淋巴细胞受体库的发育 第六章免疫系统受体介导的信号转导 跨膜信号转导的基本原理 抗原受体的结构和信号转导通路 参与淋巴细胞作用的其他信号通路 第七章淋巴细胞的发育和生存 骨髓和胸腺中淋巴细胞的产生 抗原受体基因片段的重排调控淋巴细胞的发育 与自身抗原的作用可选择一些淋巴细胞存活并清除其余的细胞周围淋巴组织中淋巴细胞的生存和成熟
第六章免疫系统受体介导的信号转导 细胞通过多种细胞表面受体与周围环境进行交流，这些细胞表面受体可识别并与胞外环境中存在的分子结合。T淋巴细胞和B淋巴细胞的主要功能是对抗原产生应答，所以抗原受体就显得尤为重要，研究得也最为透彻。抗原与这些受体结合后会产生胞信号，改变细胞的行为，其机制将是本章讨论的主要容。由于在正常淋巴细胞类群中抗原受体存在着多样性，因此我们了解的有关淋巴细胞胞信号转导的大多数信息来源于肿瘤性的淋巴样细胞系，用相应的受体抗体刺激这些细胞的抗原受体时，细胞可以活化。然而，越来越多的信息来源于对转基因动物正常细胞的研究，这些转基因动物的B细胞或T细胞上只表达单一类型的抗原受体。当成熟的初始淋巴细胞与其特异性抗原结合后，就可以活化并进行克隆扩增，进而分化为功能性效应细胞，由此我们可以推测其中的信号转导通路。此外，我们也会根据细胞发育的阶段以及配体的性质，来探究抗原受体和其他淋巴细胞受体所转导的信号是如何导致其他应答的，如细胞失活或死亡。 B淋巴细胞和T淋巴细胞的抗原受体是以多蛋白复合物的形式存在于细胞表面。它们由克隆分布的可变抗原结合链与具有信号转导功能的恒定附属链共同构成。B细胞抗原受体和T细胞抗原受体由不同的蛋白组成并具有不同的识别特性，这些已在第三章和第四章介绍过了。然而，当B细胞受体和T细胞受体与其相应配体结合后，由受体介导的胞信号转导通路却非常相似。并且这些胞信号都可传至细胞核、改变基因的表达，由此引发淋巴细胞的应答。 本章我们将首先讨论一些细胞信号转导的基本原理，并介绍涉及胞信号转导通路的共同机制，重点介绍抗原受体的信号转导通路。本章的第二部分，我们将概述从抗原受体到细胞核的信号转导通路，并讨论当这些受体同时接受来自其他受体的信号时，这些信号转导通路是如何被增强或抑制的。本章的第三部分和最后一部分将讨论在不同时间由不同受体介导的其他信号是如何影响淋巴细胞和其他免疫系统细胞的发育、生存和应答的。 所有对外界刺激可以产生应答的细胞都会面临这样的挑战：就是如何使细胞外表面受体所识别的刺激信号能够在细胞引起变化。受体蛋白作为工具可以将胞外配体结合的信号转换成胞的生化事件，从而将胞外信号转导跨过质膜。将信号从一种形式转换成另外一种形式即称为信号转导（signal transduction），在本章的这部分我们将讨论细胞信号转导的几种不同的机制。细胞表面受体可激活胞信号转导通路，由此将胞外信号转换成胞信号并继续向传递。此信号可被转换成不同的生化形式，分布于细胞的不同部位，信号抵达不同部位时可以维持不变并被放大。胞信号转导的一种结果是引起细胞骨架和具分泌功能的细胞器发生改变。这可见于效应T细胞的活化过程中，效应T细胞在其抗原受体与靶细胞抗原的结合位点处可直接释放分泌囊泡。胞信号转导的终点通常为细胞核，在核激活转录因子，启动新基因的表达，并可诱导细胞分裂。 6-1 淋巴细胞与抗原结合可导致其抗原受体聚集 所有具有信号转导功能的细胞表面受体，有些自身就是跨膜蛋白，有些也可与细胞外的蛋白相连成为复合物中的一部分。许多受体在与配体结合时可改变其蛋白构象。对某些类
第二十二章肿瘤免疫
第二十章肿瘤免疫一、选择题 A型题 1．最早发现的人类肿瘤特异性抗原是 A.MAGE-蛋白 B.T抗原 C.CEA D.E1A抗原 E.EBV蛋白 2．机体的抗肿瘤免疫效应机制中起主导作用的是 A.体液免疫 B.细胞免疫 C.巨噬细胞杀伤肿瘤 D.NK细胞杀伤肿瘤 E.细胞因子杀瘤作用 3．介导补体溶解肿瘤的主要抗体是 A.IgA B.IgM C.IgE D.IgG E.IgD 4．介导ADCC杀伤肿瘤细胞的抗体主要是 A.IgA B.IgM C.IgE D.IgG E.IgD 5．能直接杀伤肿瘤细胞的细胞因子是 A．INF-γ B．TNF-α C．TGF-β D．IL-2 E．CSF 6．在维持对肿瘤细胞免疫应答的免疫记忆中起重要作用的是 A.IgG NK细胞 B.CD4+T细胞 C.IgM巨噬细胞 D.CD8+T细胞 https://www.360docs.net/doc/a517990522.html,K 7．抗体抗肿瘤的机制不包括 A.CDC B.ADCC C.调理作用 D.增强抗体 E.封闭肿瘤细胞上的转铁蛋白受体 8．NK杀伤瘤细胞的机制不包括 A.ADCC B.释放穿孔素 C.诱导瘤细胞凋亡 D.CDC E.释放IL-1、IL-2、IFN-γ 9. 以下关于肿瘤的免疫诊断的叙述,哪项是错误的是?
A.检测血清抗AFP抗体,协助诊断原发性肝细胞癌(此项也是错的) B.检测抗EBV抗体有助于鼻咽癌诊断 C.用放射免疫显像诊断肿瘤所在部位 D.检测CEA有助于诊断直结肠癌 E.检测CA199有助于B淋巴细胞瘤诊断 10. 下列关于肿瘤免疫的叙述错误的是 A．细胞免疫是抗肿瘤免疫的主要机制 B．抗体在抗肿瘤中并不发挥主要作用 C．NK细胞是抗肿瘤的第一道防线 D．静止和活化的巨噬细胞均能杀瘤细胞 E．嗜酸性粒细胞参与抗肿瘤作用 11. 有关化学致癌剂诱导实验动物发生肿瘤的叙述,其错误的是 A.抗原具有个体特异性 B.同一宿主不同部位肿瘤具有相同抗原性 C.人类肿瘤中较少见 D.抗原性弱 E.免疫学诊断困难 12.以下对NK细胞杀瘤有关叙述，错误的是 A.无特异性 B.无需预先活化, 即可直接杀瘤 C.可依赖抗体通过ADCC方式杀瘤 D.依赖补体,通过CDC方式杀瘤 E.无MHC限制性 13．与宫颈癌发病有关的病原是： A.EBV B.HTLV-1 C.HPV D.HCV E.HIV 14．HTLV-1与下列哪种疾病有关： A．B细胞淋巴瘤 B．鼻咽癌 C．原发性肝癌 D．成人T细胞白血病 E．胰腺癌 15．.关于肿瘤逃避免疫监视的机制，下列哪项是错误的？ A.瘤细胞表面的转铁蛋白被封闭 B.增强抗体 C.瘤细胞的“漏逸” D.宿主抗原提呈细胞功能低下 E.某些细胞因子对机体免疫应答的抑制 16．由病毒编码的肿瘤抗原是： A．CEA B．E1A抗原 C．MAGE-1 D．AFP E．P53蛋白 17．肿瘤发生的主要机制是： A．免疫防御功能的障碍 B．免疫监视功能的障碍 C．免疫自稳功能的障碍
肿瘤抗原
肿瘤抗原 肿瘤抗原是指细胞恶性变过程中出现的新抗原（neoantigen）物质的总称。细胞恶性变过程中由于基因突变或正常静止基因的激活都可以产生新的蛋白分子。这些蛋白质在细胞内降解后，某些降解的短肽可与MHCⅠ类分子在内质网中结合，并共表达于细胞表面，成为被CD8+CTL识别和杀伤的肿瘤特异抗原。此外，某些细胞在恶性变后，可使正常情况下处于隐敝状态的抗原决定簇暴露出来，成为肿瘤相关抗原，可被B细胞识别产生抗肿瘤抗体。 目前已在动物自发性肿瘤和人类肿瘤细胞表面都发现了肿瘤抗原。为了叙述方便，一般将肿瘤抗原进行分类，下面介绍两种对抗肿瘤抗原分类方法。 一、根据肿瘤抗原特异性的分类法 （一）肿瘤特异抗原 肿瘤特异抗原（tumorspecificantigen TSA）是指只存在于某种肿瘤细胞表面而不存在于正常细胞的新抗原。这类抗原是通过近交系小鼠间进行肿瘤移植的方法证明的实验过程，先用化学致癌剂甲基胆蒽（methyl-cholanthrene,MCA）诱发小鼠皮肤发生内瘤，当肉瘤生长至一定大小时，予以手术切除。将此切除的肿瘤移植给正常同系小鼠后可生长出肿瘤。但是，将此肿瘤植回原来经手术切除肿瘤的小鼠，则不发生肿瘤，表明该肿瘤具有可诱导机体产生免疫排斥反应的抗原。鉴于此类抗原一般是通过动物肿瘤移植排斥实验所证实，故又称为肿瘤特异移植抗原（tymor spicific transplantation antigen,TSTA）或肿瘤排斥抗原（tumor rejection antigen,TRA）。 以往曾对人肿瘤细胞是否有特异抗原（tumor specific antigen,TSA）存在争议，但最近已在人黑色素瘤等肿瘤细胞表面证实了存在这类TSA。它是一个静止基因活化的产物，以9个氨基酸的短肽或与HLA-A1分子共表达于某些黑色素瘤细胞表面，称为MAGE-1，它是第一个证实并清楚其结构的人肿瘤特异抗原。TSA只能被CD8+CTL所识别，而不能被B 细胞识别，因此是诱发T细胞免疫应答的主要肿瘤抗原。 （二）肿瘤相关抗原 肿瘤相关抗原（tumor-associated antigen,TAA）是指一些肿瘤细胞表面糖蛋白或糖脂成分，它们在正常细胞上有微量表达，但在肿瘤细胞表达明显增高。此类抗原一般可被B细胞识别并产生相应的抗体。 二、根据肿瘤发生的分类法 （一）化学或物理因素诱发的肿瘤抗原 实验动物的研究证明，某些化学致癌剂或物理因素可诱发肿瘤，这些肿瘤抗原的特点是特异性高而抗原性较弱，常表现出明显的个体独特性。即用同一化学致癌剂或同一物理方法如紫外线、X-射线等诱发的肿瘤，在不同的宿主体内，甚至在同一宿主不同部位诱发肿瘤都具有互不相同的抗原性。由于人类很少暴露于这种强烈化学、物理的诱发环境中，因此大多数人肿瘤抗原不是这种抗原。 （二）病毒诱发的肿瘤抗原 实验动物及人肿瘤的研究证明，肿瘤可由病毒引起，例如EB病毒（EBV）与B淋巴细胞瘤和鼻咽癌的发生有关；有乳头状瘤病毒（HPV）与人宫颈癌的发生有关。EBV和HPV 均属于NDA病毒，而属于RNA病毒的人嗜T细胞病毒（HTLV-1）可导致成人T细胞白血病（ATL）。同一种病毒诱发的不同类型肿瘤（无论其组织来源或动物种类如何不同），均可表达相同的抗原且具有较强的抗原性。动物实验研究已发现了几种病毒基因编码的抗原，例如SV40病毒转化细胞表达的T抗原和人腺病毒诱发肿瘤表达的ELA抗原。 （三）自发肿瘤抗原 自发性肿瘤是指一些无明确诱发因素的肿瘤。大多数人类肿瘤属于这一类。自发肿瘤
肿瘤抗原及肿瘤免疫逃逸
肿瘤抗原及肿瘤免疫逃逸 一、肿瘤免疫研究的历史（略）。 二、肿瘤抗原 （一）肿瘤抗原的概念 细胞癌变过程中出现的新抗原(neoantigen)、肿瘤细胞异常或过度表达的抗原物质的总称。 1. 肿瘤特异性抗原(tumor specific antigen, TSA ) 指肿瘤特有或只存在于某种肿瘤细胞而不存在于正常细胞的抗原。 2. 肿瘤相关抗原(tumor associated antigen，TAA) 非肿瘤细胞所特有，在正常细胞上也表达，但细胞癌变时其含量明显增加或异位表达的抗原。 （二）肿瘤抗原的来源： * 化学或物理因素诱发的肿瘤抗原 * 病毒诱发的肿瘤抗原 * 自发性肿瘤的抗原 * 胚胎抗原或分化抗原 三、机体对肿瘤的免疫应答 * CD8+ CTL介导的细胞免疫应答起最重要的作用。 * CD4+Th细胞通过分泌各种细胞因子，辅助诱导和激活CD8+CTL。 * 其他 四、肿瘤逃避免疫攻击的机制 肿瘤的免疫逃逸机制相当的复杂，涉及到肿瘤细胞本身、肿瘤微环境和宿主免疫系统的多个方面，目前虽有多种学说，但无令人满意的解释。 （一）肿瘤细胞膜分子表达异常 1. 肿瘤细胞的抗原缺失和抗原调变（antigenic modulation） * 抗原性弱： TAA：主要被B细胞识别产生Ab，但其抗肿瘤作用具双重性，有时表现为免疫促进作用。TSA：这类抗原与正常细胞的膜分子差异很小，抗原性弱。 * 抗原调变（antigenic modulation）：肿瘤细胞表面抗原表位减少或丢失，从而使肿瘤细胞避免宿主免疫系统的杀伤。 2. MHC分子表达低下 ①多数肿瘤MHC-Ⅰ类分子表达↓：逃避CTL的攻击 ②某些肿瘤能表达非经典的Ⅰ类分子：逃避NK的攻击 ③LMP和TAP的丢失：卵巢癌TAP和LMP表达缺陷者达62.5% ④大多数肿瘤细胞不表达II类分子：不能诱导CD4+T细胞 3. 缺乏共刺激信号：如肿瘤细胞不表达B7和ICAM-1，T细胞CD40L表达降低等。
抗原,抗体,受体,配体,补体,细胞因子的概念
抗原，抗体，受体，配体，补体，细胞因子的概念 1。抗原与抗体： 抗原是一种能诱发机体产生特异性免疫反应的大分子物质，如蛋白质、多糖、核酸等，在自然界中抗原分布很广，如细菌、病毒、组织细胞、血细胞、血清蛋白、毒素、花粉等都含有抗原。通过人工方法也可以改造抗原或合成抗原。外来抗原进入机体以后能诱导机体产生特异的免疫反应（抗原的这种能力叫做抗原性），这种免疫反应是通过淋巴细胞来完成的。淋巴细胞分为T淋巴细胞和B淋巴细胞两种。T淋巴细胞受到抗原刺激就会产生排除抗原的反应。B淋巴细胞受到抗原刺激后就会分经为浆细胞，浆细胞则能产生抗体，抗体也就是免疫球蛋白（Ig）,它能够识别相对应的抗原，并且与抗原特异性结合，这样就在体内中和或者排除抗原，保护了机体不受异物的侵犯。抗原有一个最重要的特性就是它具有特异性（即专一性）和选择性。例如抗原甲诱导的免疫反应只针对抗原甲而不针对无关的抗原乙或丙。同样，抗原乙诱导的免疫反应也只针对抗原乙，而不针对无关的抗原甲或丙。因此，抗体也是特异地与某种抗原结合的，如针对感染因素的不同，就有抗细菌抗体、抗病毒抗体、抗真菌抗体、抗寄生虫抗体、抗毒素抗体等等。借助抗原体和抗体之间免疫反应的这种专一的特异性，就可以通过检验方法来鉴定抗原或抗体，用于疾病诊断。 由此看来，人体有一种自我保护的免疫功能，就是认识自身和识别异体，凡是异体的物质即可通过人体的免疫系统排出去。人的血清中也有多种针对自身抗原的抗体，属于生理性抗体，可以清
除衰老、退变的自身组织（这叫作自身免疫反应），这种自身抗体含量极低，不会破坏自身成分，但如果在病理情况下，机体针对自身的组织、血液成分产生大量自身抗体就要严重破坏自身的组织，由此产生的疾病称“自身免疫性疾病”。 2。配体： 同锚定蛋白结合的任何分子都称为配体。在受体介导的内吞中, 与细胞质膜受体蛋白结合,最后被吞入细胞的即是配体。根据配体的性质以及被细胞内吞后的作用, 将配体分为四大类:Ⅰ.营养物, 如转铁蛋白、低密度脂蛋白(LDL)等; Ⅱ.有害物质, 如某些细菌; Ⅲ.免疫物质, 如免疫球蛋白、抗原等; Ⅳ.信号物质, 如胰岛素等多种肽类激素等。 3。受体： 细胞表面或亚细胞组分中的一种分子，可以识别并特异地与有生物活性的化学信号物质（配体）结合，从而激活或启动一系列生物化学反应，最后导致该信号物质特定的生物效应。 通常受体具有两个功能： （1）识别特异的信号物质--配体，识别的表现在于两者结合。配体，是指这样一些信号物质，除了与受体结合外本身并无其他功能，它不能参加代谢产生有用产物，也不直接诱导任何细胞活性，更无酶的特点，它唯一的功能就是通知细胞在环境中存在一种特殊信号或刺激因素。配体与受体的结合是一种分子识别过程，它靠氢键、离子键与范德华力的作用，随着两种分子空间结构互不程度增加，相
肿瘤抗原的研究进展
肿瘤抗原研究的进展 院系：理学院生物系 年级：10级 班级：1班 姓名：陈菲 学号：10054127
肿瘤抗原研究的进展 摘要：自21世纪以来，得益于免疫学、分子生物学、肿瘤学等的进展肿瘤抗原的研究取得了巨大的进展，为进一步进行相关疫苗的研制工作提供了可能性，为肿瘤的免疫治疗奠定了基础。关键字：肿瘤抗原；SEREX；筛选 1.肿瘤抗原 肿瘤抗原是指细胞癌变过程中出现的新抗原、肿瘤细胞异常或过度表达的抗原物质的总称【1】。但是人们一度对肿瘤细胞是否表达抗原存有争议。1943年Gross最先通过C3H小鼠发现化学致癌剂甲基胆蒽(Meth A)诱发的肉瘤可诱发同系鼠免疫排斥,从而初步证实了肿瘤抗原的存在【2】。1989年比利时的Boon首次成功地分离出3种人肿瘤特异性抗原,一系列的肿瘤抗原(肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原)相继被发现并得到确认,如BAGE家族、GAGE家族、LAGE家族、MAGE家族、RAGE家族、DAM、MART-1、CEA、CDK-4、B-catemin和HOM-HD-21等。其中MAGE家族的MAGE-A3(又名MAGE-3)表达76%的黑色素瘤，46%肺癌、57%食道癌、43%头颈部鳞状细胞癌、39%头颈部非鳞状细胞癌和63%骨肉瘤，但在正常组织细胞(除睾丸和胎盘外)不表达,是肿瘤特异性的肿瘤共同抗原,是肿瘤特异性免疫治疗的理想免疫原【3】。 2.肿瘤抗原的鉴定及筛选 2.1肿瘤抗原的鉴定技术 CTL筛选法和多肽洗脱法是以往鉴定肿瘤抗原的主要方法，但方法本身的局限性限制了它们的应用。因此人们试图通过血清学的方法来筛选肿瘤抗原。随着单克隆抗体技术的建立和分子生物技术的发展,特别是cDNA表达文库技术的应用,SEREX技术于1995年首先由Pfreundschu小组建立和使用,标志着血清学检测肿瘤抗原新时代的开创。 2.2.1 SEREX技术工作原理及流程 SEREX技术基于大部分肿瘤患者血清中含有抗肿瘤细胞表面或胞内蛋白抗体，而人B细胞可以识别自身肿瘤抗原,且部分可以诱导产生高滴度IgG抗体;而用自体血清筛选肿瘤组织的重组cDNA表达文库可以增加抗原的浓度。其工作流程如下（见图1）：①总RNA的抽提和cDNA文库的构建。②用肿瘤病人自体或同种异体血清筛选cDNA文库。③对阳性克隆进行DNA序列分析。④逆转录PCR法检测阳性克隆cDNA在正常组织及肿瘤中的表达情况。⑤northern-blot技术分析阳性克隆mRNA的分子质量,并进一步证实阳性mRNA的存在。 2.2.2 SEREX技术筛选的肿瘤抗原的分类 目前将SEREX技术筛选的肿瘤抗原分为6类（见表1）：分化抗原；突变