DNS法测定还原糖
DNS法测还原糖方法
一原理
DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下,二硝基水杨酸(DNS)与还原糖发生氧化还原反应,生成3-氨基-5-硝基水杨酸,该产物在煮沸条件下显棕红色,540nm处有吸收,且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理,用比色法测定还原糖含量的。
二试剂及方法
2.1 试剂
1. 1 mg/ml的葡萄糖溶液
2. 3,5-二硝基水杨酸
用400mL 蒸馏水溶解6.3g3,5—二硝基水杨酸,逐步加入21g 氢氧化钠,再加入182g 四水合酒石酸钾钠、5.0g 苯酚、5.0g 无水亚硫酸钠,温水浴(不超过48℃),不断搅拌,直至溶液清澈透明。用蒸馏水定容至1000mL,保存在棕色瓶中,与二氧化碳隔绝,静置5~7 天后使用,贮存期为6 个月。
2.2 葡萄糖标曲的绘制
表1 葡萄糖标曲的绘制方法
试剂
试管
0 1 2 3 4 5
葡萄糖标准液(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水(ml) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0
3,5-二硝基水杨酸(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 糖含量(mg)0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
混合均匀,沸水浴5min,冷却后加入4mL蒸馏水,混匀,在540nm下测OD值
2.3 发酵液样品测定
将发酵液稀释一定倍数后,取3只比色管标号1,2,3,加入稀释和的发酵液0.5 ml,加入DNS
试剂0.5 ml 混匀,沸水浴5min,冷却后加入4 ml蒸馏水混匀,测OD540
表 2 样品的测定方法
管号
0 1 2 还原糖待测样品 (mL ) 0.0 0.5 0.5 蒸馏水 (mL ) 0.5 0.0 0.0 DNS 试剂 ( mL ) 0.5 0.5 0.5 蒸馏水 (mL ) 4 4 4 A 540 nm
计算所得还原糖含量 (mg )
三 结果计算 3.1 标曲
3.2样品的还原糖含量
稀释倍数)
加人样品的体积()计算得到的还原糖量()还原糖含量(?=ml 5.0mg /g L