福建金线莲总黄酮提取工艺的研究

金线莲组织培养方法

金线莲组织培养方法 一种药用金线莲组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：１）培养基准备该步骤包括配制，分装，灭菌三步，其中配制：以１／２ＭＳ为基本培养基，每升添加６－苄氨基嘌呤２ｍｇ、α－萘乙酸１．０～１．５ｍｇ、芸苔素内酯０．０５ｍｇ、香蕉１００ｇ、琼脂６．５ｇ和蔗糖２５ｇ，混合后的培养基的ｐＨ值调节至５．６；分装：将配制后的培养基加热至琼脂完全溶解，趁热均匀地分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；灭菌：将加入培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅内灭菌，灭菌条件为：１２１℃、１０５ｋＰａ下灭菌１５分钟，灭菌后及时取出培养瓶，冷却备用；２）外植体处理和接种该步骤分为两种情形，当采用自然生长的植株作为外植体时包括清洗，消毒，接种三步，其中清洗：选择自然生长、无病虫害的健壮植株，用加入少许肥皂粉的水清洗植株，后用流水冲洗２小时；消毒：在无菌条件下，去除叶片，将植株茎段在７５％的酒精中浸润１０秒后，放入１０％的次氯酸钠消毒１５分钟，用无菌水清洗６遍，沥干水分，放入无菌的培养皿中备用；接种：将消毒后备用的茎在无菌条件下切成长约１ｃｍ、含一个茎节的若干茎段，接种于准备好的培养基上，每瓶接１个茎段；当采用组培无菌苗时直接进行无菌接种，即在无菌条件下将组培无菌苗去叶，将茎切成长约１ｃｍ、含一个茎节的若干茎段，接种于准备好的培养基上，每瓶接１个茎段；３）培养该步骤将接好种的培养瓶移入培养室进行幼苗的诱导与培养，培养条件为：温度２５±２℃，光照时间每天１２小时，光照强度１５００～２０００ｌｘ，培养时间四个月左右，培养期间要勤检查，发现污染的要及时去除；４）移栽选苗高约６～８ｃｍ、具叶３张以上、茎基直径约２ｍｍ、发根２～３条的试管苗，炼苗４天后，洗净附着在植株上的培养基，并晾干洗涤水后移栽至１份菜园土＋２份粗砂＋１份木屑，或１份菜园土＋１份粗砂＋２份木屑的基质中。 2一种菌根真菌在金线莲栽培中的应用技术，采用小菇属4种真菌：石斛小菇(Mycena dendrobii)、紫萁小菇(Mycenaosmundicola)、兰小菇(Mycena orchidicola)、开唇兰小菇(Mycena anoectochila)中的任选一种或由其中任意两种或两种以上组成，其主要步骤及条件如下(所述比例均为重量百分比)：(1)菌根真菌的培养将上述的菌根真菌自低温保藏的斜面试管菌种活化后，分别转接于PDA平皿中，于25℃恒温培养12-20d，分别在菌落边缘打孔成菌片，并以小碎块接入液体培养基进行培养和发酵或接入固体培养基进行培养；(2)金线莲苗的培养芽增殖培养基：MS(Murashige and Skoog 1968)培养基，附加6-BA(6-苄基嘌呤1.2mg/L、NAA(萘乙酸)0.6mg/L；丛芽增殖培养基：MS为基本培养基，附加6-苄基嘌呤(BA)1.5mg/L，吲哚丁酸(IBA)0.6mg/L，玉米素(ZT)0.15mg/L；苗继代培养基：1/2MS，200g/L马铃薯提取液，25g/L蔗糖，琼脂9g/L，pH5.8；(3)菌根真菌与金线莲苗共生栽培(a)金线莲栽培基质蛭石∶砂子＝4∶1或森林腐殖土∶砂子＝6∶1或泥炭土∶砂子＝5∶1或泥炭土∶砂子∶蛭石＝4∶1∶2；(b)金线莲菌根共生栽培在硬质材料的托盘或盆中立体栽培，其容器的基部平铺一层金线莲栽培基质，其上按株行距栽培一株或一丛的金线莲苗，在苗根的基部放置少量粉碎的湿栎树(山毛榉科Fagaceae)树叶，其上再放以上备好的液体菌根真菌2ml或固体菌根真菌1-2g，使金线莲的根与菌接触，用栽培基质将苗覆盖2-3厘米厚，浇放置至室温的水；(c)栽培条件采用塑料薄膜温室、玻璃温室、露天栽培遮阳网遮阴，环境温度为18-25℃，光照量为正常日光量的1/3，照度2000Lx；(d)金线莲的收获收获时可剪取地上部分，也可一次性连根取出洗净栽培基质；阴干或60℃以下烘干；其中所述的菌根真菌的液体培养为：培养基的配制：葡萄糖2.5％；KH2PO4 0.15％；K2HPO4 0.1％；MgSO4 0.15％；天然物：麦麸3％(煮汁)，高压灭菌后分别接入上述真菌；培养条件：培养基pH5.6；三角瓶摇床培养瓶装

中草药叶下花总黄酮提取方法

中草药叶下花总黄酮提取方法 作者：杨发忠，杨斌，杨德强，陈厚琴，代红娟，张丽，李东海 【摘要】目的对叶下花总黄酮的种类与提取方法进行初步研究。方法采用定性检测、光谱分析、单因素测定、正交实验等，研究黄酮种类，考察乙醇体积分数、温度、固液比、时间对提取率的影响。结果叶下花含黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇等多种黄酮类化合物；所考察的影响因素中，对总黄酮提取率影响程度大小顺序为乙醇体积分数＞温度＞时间＞固液比。结论最佳提取条件为A1B2C3D3 (乙醇体积分数30%、温度65℃，提取时间180 min，固液比1∶80)，在此提取条件下，提取量高达5.233%。 【关键词】叶下花总黄酮提取方法正交实验 Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction conditions for the total flavonoids from Ainsliaea pertyoides Franch and to study the categories of the total flavonoids. MethodsThe methods of the chemical qualitative detection, the spectral analysis, single factor determination, orthogonal test were adopted to study the categories of the total flavonoids, and the effect of four factors, i.e. the volume fraction of ethanol, the temperature, the ratio of solid to liquid, the

黄酮的提取实施方案

黄酮提取实验方案 1材料与仪器 1.1材料 1.2试剂 芦丁，无水乙醇，氢氧化钠，石油醚，硝酸铝，三氯化铁，三氯化铝，浓氨水，浓盐酸，镁粉，亚硝酸钠(以上均为国产分析纯)，实验所用水均为蒸馏水。 1.3实验仪器 电热恒温水浴锅 电子天平(感量0.0001g) 722型光栅分光光度计 索氏提取器 量筒(100ml,10ml)25ml比色管移液管小试管白瓷板圆底烧瓶100m 容量瓶 锥形瓶 2实验原理 2.1提取原理 溶剂提取原理游离黄酮黄酮昔备注 乙辱溶解范围广+ + (甲醇)著■甘元均可溶(90-95%) (6M)甲醇毒性大 沸水多糖昔易于水+ 成本低、安全, 水溶性杂质多 臓性水或稀氢氧化钠溶出能力强 碱性乙醇酚强基的酸性 + +石灰水除杂质效果好

分离依据 之间的极性（分配系数K ）差异 分离工艺 回收 回收 单糖瞽 多糖昔 誓元 爸游离黄酮的乙瞇液 2 黄酮与杂质 昔与昔元 昔元与昔元 ）溶剂萃取法 2.2分离方法及原理 （二）pH 梯度萃取法 分离依据： 游离黄酮类化合物的酸性差异（见黄酮酸性规律） 分离工艺： 依次以 5%NiiH0h . 5%Na2C0 0. 2%N SL OH. 4%NaOH^取 5%NaHCO3< 5%Na2CO3液 0. 2KNaOH 液 4%NaOH 液 母液 （脂溶性杂石油駆液 乙豔液 乙酸乙酯 （脂溶性杂质）| | 丄酸化 水饱和正丁醇 母液 （水溶性杂质） 减压回收 原料的提取苹缩液（水溶液） 依次以石油耿、乙馳、 乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取

3 实验部分 3.1 原料的预处理 金星科厥类叶T除杂T水洗T晾干T粉碎 3.2 芦丁—标准溶液的配制 将芦丁在干燥箱里用120C条件下恒重1.5h,然后精确称取芦丁标准品O.OIg用85%勺乙醇溶液配制成100.00mL 的溶液，备用。 3.3 测定波长勺选择 精确移取芦丁标准溶液0.50mL, 置于25.00mL 勺比色管中，用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL 处，加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL, 混匀，放置10min; 加入10%硝酸铝溶液0.80mL , 混匀，放置10min, 再加入4%勺氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀，放置10min, 加入85%勺乙醇溶液至刻度，摇匀，10min后在460?560nm处测定吸光度，⑷（以试剂样品做空白）选择最大吸收波长。 3.4 芦丁标准曲线勺绘制 精确吸取芦丁标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于6支25.00mL的比色管中，用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL 处，加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL, 混匀，放置10min; 加入1 0%硝酸铝溶液0.80mL , 混匀，放置10min, 再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀，放置10min，加入85%的乙醇溶液至刻度，摇匀，10min后于波长500nm处测定吸光度，（以第一瓶为空白溶液）然后以吸光度和芦丁溶液浓度做图，绘制标准曲线。 3.5 黄酮类化合物的特征性实验[5]-[6] 在一定条件下对提取的黄酮类化合物进行特征性实验，具体内容如 下： （1）盐酸一镁粉反应：取 1.00mL提取液于试管中加适量镁粉摇匀，再加入浓盐酸数滴（1次加入），观察其泡沫颜色。（2）三氯化铝反应：取提取液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液， 吹干，观察颜色变化。（3）三氯化铁反应：取几滴提取液于白瓷板上，滴加1%三氯化铁乙醇溶液， 观察其颜色。（4）浓氨水反应：取乙醇提取液点在滤纸上，将滤纸在浓氨水上方熏0.5min ，观察 其颜色变化。 3.6 单因素实验 2.6.1 较佳提取剂质量分数的确定 准确称取3g 处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用无水乙醇、95%、85% 80%、 75%的乙醇60mL对3g金星厥科叶样品在水浴温度为80C下回流提取3h.提取完毕，用与提取剂的 质量分数相同的乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包，将其定容于100:00mL 容量瓶中，然后精确吸取 0.50mL提取液置于25.00mL的比色管中，用与提取剂质量分数相同的乙醇稀释到10.00mL处，加人5%的亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL ,混匀，放置10min,再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀，放置10min, 加入85%的乙醇溶液至刻度，摇匀，10min 后 于波长500nm处测定其吸光度，同时做三组平行实验。

金线莲组织培养及栽培技术研究

金线莲组织培养及栽培技术研究 吴艺东 (南靖国有林场,福建漳州 363600) 摘 要:金线莲属名贵中草药,野生数量极少,通过人工栽培形成规模生产,才能满足市场需要。试验研究了金线莲组培育苗、大棚栽植等过程中应注意的有关影响因素。 关键词:金线莲;外植体;组培;移栽;基质;消毒;温度;湿度 中图分类号 S567 23+9 文献标识码 A 文章编号 1007-7731(2009)15-46-01 金线莲又称金线兰、金不换、金钱草、鸟人参等,为兰科化叶开唇属的多年生草本植物,是珍稀民间草药,全草入药,味平、甘,常用于治疗小儿惊风高热、糖尿病、高血压、肝炎、风湿性关节肿瘤及其他疑难杂症。 金线莲属植物有30多种,一般分布在海拔300~ 1200m的丘陵地;我国福建、广东、广西、海南、四川、贵州、云南均有野生金丝莲。它性喜阴凉、潮湿,尤其喜欢生长在有常绿阔叶树木的沟边、石壁、土质松散的潮湿地带,要求温度18~20 ,光照约为正常日照的1/3,最忌阳光直射。其株高8~20c m,根茎细软,茎圆筒形,先端直立,基部成匍匐状,茎节明显;叶互生具柄,呈椭圆形,叶面有光泽、墨绿色中有金黄脉网,叶背淡紫红色;花为完全花,总状花序具有1~6朵松散的花,花序梗长8~13c m,被柔毛,花苞片淡紫色,卵状披针形。金线莲除药用外,还是一种极具观赏价值的室内观叶珍品。由于其对生态环境要求严格,加之近年自然环境遭受严重破坏,野生金线莲越来越少,因而商品价格居高不下,鲜草价达400元/kg以上,干草价达2000~3000元/kg。因此,国内相关部门经过研究实践,目前人工栽培技术已进入推广阶段。本文就金线莲的组织培养与人工栽植的过程进行试验分析。 1 外植体的建立 1 1 取材 于2007年5~10月在南靖县山城镇和南坑镇高山坑沟采集长势良好、无病虫害的野生金线莲植体,取回后置于南靖国有林场小山城工区搭建的阴凉大棚内培养7d左右,以减少其所带的杂菌。 1 2 预处理 将金线莲从大棚中取出,用流水将植株洗净后去掉根、叶,再用小刀把叶鞘及顶芽外叶削掉,整个过程不要伤及腋芽。用棉花沾肥皂水擦洗植株并浸泡10m in后用纱布包起,移至超净工作台上。 1 3 消毒 用75%酒精振荡10~15s后,再用0 1%升汞水灭菌3m in,无菌水冲洗2遍。最后用12%漂白粉澄清液灭菌10m i n,无菌水冲洗5遍后即可进行接种。 1 4 接种 将消毒好的材料切成带1~2个腋芽的茎段,接到诱导培养基上。诱导培养基为1/2M S(即大量元素减半,其他成分不变)+6-BA5m g/L+NAA1m g/L+琼脂粉0 65%+3%蔗糖,p H5 8。培养温度(25 3) ,诱导过程中无光照或低光照(500~600l x) 2 继代增殖培养 接种15d后开始萌动。观察发现,顶芽较腋芽更容易萌动,腋芽以丛生生长为主,顶芽则以伸长生长为主。再培养30d后将诱导出的芽切成带1~2个腋芽的茎段,接到增殖培养基M S+6-BA3m g/L+KT2mg/L+NAA0 3 m g/L+0 65%琼脂+3%蔗糖。继代培养前期低光照,随后可适当增强光照(1000~1200l x)。 3 生根培养 取茎段粗壮,长势好的金线莲接到生根培养基M S+ I BA1m g/L+KT0 2m g/L+NAA4m g/L+0 65%琼脂+ 3%蔗糖+0 3%活性炭,每天光照10h,光照度1500~ 1200l x。培养10d后开始生根,根不从切口处而从靠近培养基的每个节上长出1~2条,呈肉质状。根比较短且不分支,其上有细密、乳白色后径根毛。培养50d左右,植株长至8c m时可进行室外移栽。 4 大棚搭建和组培苗移栽 大棚用毛竹和水管搭成,顶部先覆盖一层薄膜,再在上面用80%遮阳网覆盖,顶高大约3m左右,棚内搭3层盆架,第一层离地面10c m,上两层各离70c m,棚内地面铺15c m高的河沙(上沙下土),用于保湿。移栽一般选择在气温较低的秋冬季节,将促根后的金线莲移至室外进行适应性炼苗后,将苗从瓶中拔出、洗净,种植于阴凉大棚内。栽培基质采用A 腐殖土 椰康 细沙=1 1;B 松木树皮粉碎加工 泥炭土=2 1(每100kg基质加0 5kg进口复合肥)。移植前基质进行日晒消毒,移植后用1 5000倍绿佳喷淋消毒,整个移栽过程要做好喷水工作。 5 移栽后管理 把金线莲移至阴凉大棚内专用花盆内,每盆栽植20株左右,大棚内温度控制在20~28 ,使空气相对湿度保持在70%~80%;以后每7d喷1次1/4M S或氨基酸800倍左右喷施来补充养分,以够湿为准;如遇有猝倒病则喷施多茵灵或托布津1000倍液,3个月培养期后出苗,选择根壮叶繁的15c m高优质苗。采后用清水(下转211页) 46安徽农学通报,Anhu iAgri Sci Bu ll 2009,15(15) 作者简介:吴艺东(1971-),男,福建南靖人,林业工程师,主要从事林业资源培育和林木种苗培育工作。 收稿日期:2009-06-08

总黄酮的提取方法

总黄酮的提取方法 1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法 2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单 3、超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。 4、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。 5、酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。黄剑波等[22]采用纤维素酶辅助法从甜茶中提取黄酮类化合物，黄酮类物质的提取率为91%，提取纯度为54%。王悦等[23]对桔皮细胞进行游离酶、固定化酶和常规法提取，黄酮得率分别是%，% 和%，和传统的方法相比，游离酶法的总黄酮得率提高了81%。

黄酮提取工艺

黄酮提取工艺 2-1 微波辅助提取金银花总黄酮工艺流程图 3.实验方法 3.1 标准曲线的制备 3.1.1最大吸收波长的选择方法 以亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠为显色剂，分别作各样品提取液以及芦丁标准品的吸收曲线，在510nm处均有1个强吸收峰，因此选择510nm为测定波长。 3.1.2对照品溶液的制备方法 精密称取芦丁对照品10.2mg置50mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀备用。 3.1.3 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0，1，2，3，4，5mL，分别置10mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL，振荡摇匀，放置6min；再加入10%硝酸铝0.3mL，振荡摇匀，放置6min；最后加入4%氢氧化钠试液4mL，加甲醇定容至刻度，摇匀，放置15min。采用分光光度法，在510nm处测定吸光度，以对照品量（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3.2 微波提取单因素实验方法 分别考察不同的微波辐射功率,辐射时间,乙醇浓度,固液比对提取效果的影响 3.3 提取工艺正交试验设计方法 系统考察微波提取法的工艺参数，根据已有的资料及实际情况，选用微波辐射功率（A），辐射时间（B），乙醇浓度（C），固液比（D）作为考察因素，以测得的浸提取样品中总黄酮含量为考察指标，选用L9（34）正交表设计，得到供试液。 3.4微波辅助提取法与乙醇回流法比较 比较两种提取方法的处理时间和液固比对总黄酮提取量的影响。传统乙醇回流法提取总黄酮的所需时间比微波辅助提取法提取长得多，且金银花总黄酮提取量比较低;而微波辅助提取的总黄酮较乙醇回流法高。比较此两种方法在最佳条件下的总黄酮含量。 3.5总黄酮含量测定方法 取0.5mL液，加入5%亚硝酸溶液0.3mL荡摇匀，放置6min加入10%硝酸铝0.3mL荡摇匀，放置6min入4%氢氧化钠试液4mL，30%（V/V）乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min分光光度法，在510nm定吸光度值由标准曲线计算得总黄酮含量。 4. 结果 4.1 标准曲线绘制 表4-1 标准曲线表 编号 0 1 2 3 4 5 芦丁浓度 0 0.02 0.03 0.05 0.07 0.09 （mg/mL） 吸光度 0 0.206 0.381 0.548 0.738 0.911 （OD）

金线莲组培快繁

金线莲组培快繁技术研究 【摘要】目的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体，开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究，并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好；不定芽增殖最佳培养基配方为MS（或B5）+BA3.0 mg/L +NAA0.5～1.0 mg/L，两个月增殖倍数达5.0以上；壮苗最适培养基为1/2MS＋NAA3.0 mg/L＋6-BA 0.5 mg/L＋香蕉提取物20%（或椰子汁20%）；试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份＋2～3 mm粗砂2份（或1份）＋木屑1份（或2份），3个月成活率均达100%，且生长良好。结论采用上述方法，能实现金线莲幼苗的快速繁殖。 【关键词】金线莲；快速繁殖；增殖；生长；移栽金线莲Anoectochilus roxburghii（wall.）lindl为兰科开唇兰属多年生草本，别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等，是我国传统珍贵药材，素有“金草”“神药”“乌人参”等美称，在民间应用范围较广，广泛应用于风湿性关节炎、高血压病、糖尿病、肾病等疑难杂症的治疗和强身健体、病后体虚恢复等方面，在浙江、福建、台湾等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材，特别在台湾省更是备受青睐，被称为“药中之王”［1，2］。 金线莲种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，自然萌发率和繁殖率低，目前市场上货源主要来自于野生采挖，产品一直处

于供不应求的状况。近年来，随着对其药效学和临床应用研究的深入，对金线莲药用价值的认识进一步提高，其市场货源紧缺的状况更为严峻，野生资源也不断遭到破坏性采挖，以致于处于濒临灭绝之地。本研究旨在采用组织培养技术，解决金线莲种苗来源，加快人工栽培，以保护金线莲野生资源、稳定市场供应。现将有关实验结果如下。 1 材料与方法 1.1 材料无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野生种源，其它实验为继代培养的不定芽及无根幼苗茎段。 1.2 无菌繁殖体系的建立取生长健壮、无病虫害的植株，去叶后放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3～5 min，然后用流水冲洗30 min。在超静工作台前，用75% 酒精湿润5～6 s，放入0.1%的HgCl 溶液灭菌12～13 min，用无菌水冲洗5～6次。将消毒好的茎按上段（具茎尖）、中段和下段（匍匐茎段）切成长约1.5～2 cm，带有1～2个节间的小段，分别接种于MS+6－BA 4.0 mg/L +NAA 0.4 mg/L 培养基上，pH5.6，蔗糖 2.5%，琼脂0.7%。培养条件为：温度(25±2）℃，光照时间12 h/d，光照强度1 500～2 000 lx。 1.3 不定芽诱导 1.3.1 基本培养基对不定芽诱导的影响采用单因素实验，培养基选用MS（Murashige-Skoog）［3］，1/2MS（大量元素减半，其他成分不变），VW(Vacin & Went)，B5（Gamborg·Miller & Ojima）和KC(Knudson C)等5种，分别添加6－BA 4.0mg/L，NAA 1.0 mg/L。 1.3.2 激素对不定芽诱导的影响以MS为基本培养基，添加不

举例说明黄酮的提取分离方法

举例说明黄酮的提取分离方法 组长：崔宁 组员：翟雪王璐璐冯子涵赵子惠罗春雨刘红成 1.提取方法 1.1热水提取法 热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。 实例 桑叶：采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量，发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。 甘草：过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80～95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。 1.2有机溶剂萃取法 其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。高浓度的乙醇(如90 %～95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。提取次数一般为2～4 次,提取方法有热 回流提取和冷浸提取两种方式。 实例 桑叶：使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最佳工艺条件为：乙醇的浓度为70%，料液比为1:15，在80℃的条件下浸泡3h。使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最佳提取溶剂是60%丙酮。 西芹：使用无水乙醇为提取剂，按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2～4h ,制备西芹总黄酮。 银杏叶：从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 故选用70% 的乙醇作浸提剂最佳。 生姜：生姜黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃条件下提取2 h的提取效果最好。 1.3碱性水或碱性稀醇提取法 黄酮类化合物大多具有酚羟基, 易溶于碱水, 酸化后又可沉淀析出。其原因一是由于黄酮酚羟基的酸性, 二是由于黄酮母核在碱性条件下开环, 形成2′-羟基查耳酮, 极性增大而溶解。因此可用碱性水( 碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液) 或碱性稀醇( 50 %乙醇) 浸出, 浸出液经酸化后析出黄酮类化合物。 实例 菊花：各取5g干菊花4份, ，在80℃恒温水浴分别以pH为8,9,10,11的NaOH溶液分两次温浸1h和0.5h。pH降低时.由于提取不完全.含量较低；pH为11时,虽然黄酮

银杏叶中黄酮的提取原理及方法

银杏叶中黄酮提取及含量测定 一、实验目的 提取银杏叶中的总黄酮并测定其含量。 二、实验原理 银杏系银杏科银杏属落叶乔木，银杏叶中含有多种生理活性成分，其中黄酮类化合物是重要的生理活性物质，具有保肝护肝、预防治疗心血管疾病、抗氧化、抗衰老等作用。因此，将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用，这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。银杏叶黄酮类化合物的提取方法目前研究的有水浸取法，成本低但浸取率低；有机溶剂浸取法中，乙醇浸取的效率高且无毒，是目前采用较多的方法；韩玉谦等采用超临界流体萃取法，在70%乙醇溶液中加热回流法和CO2 超临界流体萃取法提取银杏叶中的活性成分，银杏黄酮回收率为84 . 4 % ，是常规萃取法回收率的2倍多；乙醇超声波浸取法, 黄酮提取率可达到8 6 . 7 %。银杏黄酮含量的测定常用分光光度法和高效液相色谱法。分光光度法自20世纪9 0年代以来一直是用来测定银杏黄酮的一种重要方法, 由于其成本低、便于操作等特点, 是一种快捷有效的方法[1]。本实验采用乙醇作溶剂进行索氏提取，建立了用Al(NO3)3显色法对芦丁标准品和银杏叶提取液进行光谱扫描测定银杏叶总黄酮含量的方法[2]。 三、实验仪器和试剂 材料：银杏叶粉末50g 试剂：标准芦丁样品，无水乙醇（600ml），50mlAl(NO3)3（0.1mol/L），乙醚，5%NaNO2溶液，10%AL(NO3)3，4%NaOH溶液。

仪器：紫外分光光度计、电子分析天平、水浴锅、烘箱、烧杯、容量瓶（100ml1个、50ml1个、10ml6个）、索氏提取器、减压蒸馏装置、锥形瓶、沸石等。 四、实验步骤 1.1提取银杏叶中总黄酮 （1）将银杏叶洗净, 在103℃下烘干至恒重,用研钵捣碎制得银杏叶粉（2）准确称取10.0g，置于索氏提取器中，按下列条件加热回流提取：乙醇浓度80％，料液比1：20(g／ml)，回流温度85℃，回流时间2 h，平行进行1~3次实验。 （3）将圆底烧瓶中提取液倒入烧杯，加入一倍蒸馏水，再加入相同量的乙醚，混合均匀，倒入分液漏斗中，静置20min，分层后，收集下层液体。 （4）减压蒸馏，回收乙醇，得到淡黄色黏液，干燥得到银杏叶中总黄酮提取物。 1.2银杏叶中总黄酮含量测定 （1）芦丁标准溶液的配置：称取0．0100g芦丁标准品，放入烧杯中，加入80%的乙醇溶液使其溶解，置于100ml的容量瓶中，制成0.1g/L的芦丁标准溶液。定容，摇匀备用。 （2）绘制芦丁标准曲线：分别移取0，0.4 ，0.8，1.2，1.6，2.0 ml 芦丁对照品溶液，于6个10ml 容量瓶中，标记1~6，分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0ml的80%乙醇溶液，加入5%NaNO2溶液0.5ml，摇匀，放置6min，加入0.5ml10%AL(NO3)3，摇匀，放置6min，加入4%NaOH 溶液4.0ml，加入80%乙醇定容，摇匀，放置20min。在波长510nm处分

黄酮类化合物的提取纯化方法

黄酮类化合物的提取、药用价值和产品开发应用前景 任红丽2009090141 摘要：对黄酮类化合物的药用价值、提取工艺、分离方法等方面进行综述。在 药用价值方面,讨论了其抗抑郁作用、抗氧化与自由基消除活性作用、对化学性肝损伤的保护作用、抗肿瘤作用、抗骨质疏松作用、抗心肌缺血作用;在提取工艺方面,讨论了溶剂提取法、超声提取法、酶法、微波法等;及其开发应用，为今后黄酮类化合物的深入研究提供理论基础。 关键词：黄酮类化合物提取工艺药用价值 黄酮类物质是一类低分子天然植物成分，是自然界中存在的酚类物质[14]，又称生物黄酮或植物黄酮，属植物次级代谢产物，广泛存在于各种植物的各个部位，尤其是花、叶，主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中。迄今，已有数百种不同类型的黄酮类化合物在植物中被发现，人工合成的黄酮类化合物也不断问世。最初这类物质仅用于染料方面，自20世纪20年代，槲皮素、芦丁等黄酮类物质用于临床后，才开始引起人们的关注，研究发现其中相当一部分具有显著的生理及药理活性，例如抗氧化、抗病毒、抗炎、调节血管渗透性，改善记忆，抗抑郁、抗焦虑、中枢抑制、神经保护等功能[2,12]诸多生理和药理特性使其广泛应用于食品、医药等领域。 1.提取纯化方法 1．1 传统提取方法 1．1．1 热水提取法 水是最廉价的提取溶剂，是地球最丰富的物质，无色无味无毒，对人体和环境无害，挥发性不大，具有真正的绿色环保意义。但用水作为提取溶剂时，从中药材中提取的黄酮类化合物中杂质含量较多，往往因泡沫或粘液很多，给进一步分离带来许多麻烦，而且浓缩也会很困难。此外，水提取物容易发霉发酵[22]。1．1．2 碱性水、碱性稀醇浸提法 中草药中黄酮类成分多为多酚类化合物，因其结构中具有酚羟基[7]，故可用碱性水或碱性稀醇液来提取中草药中的黄酮类化合物。黄酮母核的多样性主要是由黄酮本身骨架、环系的变化、氧化程度和数量而定，当碱的浓度过高，加热时便破坏黄酮类化合物的母核。 1．1．3 有机溶剂热回流及冷浸提取法 根据杂质极性不同，可选用不同的有机溶剂(如石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮等)，一般采取乙醇为提取溶剂[15]。

黄酮提取工艺设计思路

黄酮提取工艺设计思路 1、黄酮类化合物含量测定的原理 在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成螯合物，加入氢氧化钠溶液后显红橙色。黄酮类化合物能与金属离子络合产生有色反应，于波长510nm附近有吸收，可用分光光度法进行测定。实验采用在碱性条件下，亚硝酸盐存在时，硝酸铝与黄酮形成红色络合物，在波长510nm附近有吸收可进行比色分析。 在中性或弱碱性及硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成鳌合物，加入氢氧化钠溶液后显红橙色，硝酸钠还原黄酮，加硝酸铝络合，加氢氧化钠使黄酮类化合物开环，生成2’-OH查耳酮而显色。 利用黄酮类化合物中的3－羟基、4－羟基、5－羟基、4－羰基或邻二位酚羟基，与Al3＋进行络合反应，在碱性条件下生成红色络合物的原理测定其含量 2、测定波长的确定 取样品溶液和标准溶液2mL，加70 %的乙醇至5 mL, 然后加入5 %的NaNO2 溶液1 mL, 室温放置6min, 再加入10 %的Al(NO3)3 1mL, 混匀, 室温放置6 min, 加入4%的NaOH 10mL, 用水稀释至25 mL,混匀, 放置15 min, 在分光光度计上扫描波长从400 nm～600 nm 之间的吸收度, 结果在510nm 波长处有最大吸收值。 配合物在Kmax1= 354nm 及Kmax2= 510nm有两个吸收峰, 经实验后得出Kmax1= 354nm波长处得到的工作曲线线性关系及精密度数据均不佳, 故本实验选取Kmax2= 510 nm为测定波长。 3、标准溶液的配制 精确称取105℃干燥恒重芦丁对照品50mg, 加乙醇适量, 使之充分溶解, 用乙醇定容到100mL, 摇匀, 制得芦丁溶液。精确量取芦丁溶液20mL, 置于50mL容量瓶中, 用水稀释至刻度, 摇匀, 即得对照品溶液。每1mL溶液含芦丁对照品0.2mg。或精密称取干燥至恒重的芦丁标准品10mg, 置50mL容量瓶中, 加无水乙醇20mL, 轻摇使充分溶解,定容, 摇匀, 得0. 2mg /mL芦丁标准液。 精确称取芦丁标准品5mg，用70%乙醇溶解，于50 mL容量瓶中定容，即得每1mL溶液含芦丁对照品0.1mg芦丁标准品溶液。 称取约20mg芦丁标准品于称量瓶中置105℃烘箱下烘干至恒重,干燥器中冷却，精确称

金线莲组培快繁技术研究

金线莲组培快繁技术研究 【摘要】?? 目的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体，开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究，并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好；不定芽增殖最佳培养基配方为MS（或B5）+BA3.0?mg/L?+NAA0.5～1.0?mg/L，两个月增殖倍数达5.0以上；壮苗最适培养基为1/2MS＋NAA3.0?mg/L＋6-BA?0.5?mg/L＋香蕉提取物20%（或椰子汁20%）；试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份＋2～3?mm粗砂2份（或1份）＋木屑1份（或2份），3个月成活率均达100%，且生长良好。结论采用上述方法，能实现金线莲幼苗的快速繁殖。?? 【关键词】??金线莲；?快速繁殖；?增殖；?生长；?移栽? 金线莲Anoectochilus?roxburghii（wall.）lindl为兰科开唇兰属多年生草本，别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等，是我国传统珍贵药材，素有“金草”“神药”“乌人参”等美称，在民间应用范围较广，广泛应用于风湿性关节炎、高血压病、糖尿病、肾病等疑难杂症的治疗和强身健体、病后体虚恢复等方面，在浙江、福建、台湾等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材，特别在台湾省更是备受青睐，被称为“药中之王”［1，2］。? ????? 金线莲种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，自然萌发率和繁殖率低，目前市场上货源主要来自于野生采挖，产品一直处于供不应求的状况。近年来，随着对其药效学和临床应用研究的深入，对金线莲药用价值的认识进一步提高，其市场货源紧缺的状况更为严峻，野生资源也不断遭到破坏性采挖，以致于处于濒临灭绝之地。本研究旨在采用组织培养技术，解决金线莲种苗来源，加快人工栽培，以保护金线莲野生资源、稳定市场供应。现将有关实验结果如下。? 1??材料与方法? 1.1??材料??无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野生种源，其它实验为继代培养的不定芽及无根幼苗茎段。? 1.2?? 无菌繁殖体系的建立取生长健壮、无病虫害的植株，去叶后放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3～5?min，然后用流水冲洗30?min。在超静工作台前，用75%?酒精湿润5～6?s，放入0.1%的HgCl溶液灭菌12～13?min，用无菌水冲洗5～6次。将消毒好的茎按上段（具茎尖）、中段和下段（匍匐茎段）切成长约1.5～2?cm，带有1～2个节间的小段，分别接种于MS+6－BA?4.0?mg/L?+NAA?0.4?mg/L?培养基上，pH5.6，蔗糖 2.5%，琼脂0.7%。培养条件为：温度(25±2）℃?，光照时间12?h/d，光照强度1?500～2?000?lx。? 1.3??不定芽诱导? 1.3.1??基本培养基对不定芽诱导的影响采用单因素实验，培养基选用MS （Murashige-Skoog）［3］，1/2MS（大量元素减半，其他成分不变），VW(Vacin?&?Went)，B5（Gamborg?Miller?&?Ojima）和KC(Knudson?C)等5种，分别添加6－BA?4.0mg/L，NAA?1.0?mg/L。? 1.3.2??激素对不定芽诱导的影响以MS为基本培养基，添加不同种类及浓度的细胞分裂素和生长素。? ????? 上述实验选取无菌健壮植株，切取长约1～1.5?cm，带有一个节间的茎中段，每处理接10个茎节，重复3次。培养期间定时观察不定芽生长情况，培养60?d后统计不定芽数。其它条件同实验“1.2”项。? 1.4??壮苗培养? 1.4.1??激素对幼苗生长和发根的影响以1/2MS为基本培养基，NAA设1～5?mg/L?5个处理，6－BA设0.5，1.0和1.5?mg/L?3个处理，共15个处理。?

银杏叶中黄酮提取方法

银杏叶黄酮的提取 一、溶剂提取法：国内外使用最广泛的方法，步骤多、周期长、产率低、产品中有机溶剂易残留。溶剂系统主要有乙醇，水溶液、丙酮-水溶液、NaOH-水溶液、NaOH-乙醇等。精提物常在粗提物制备基础上精制，常用液-液提取法、沉淀法和吸附．洗脱法。 以60％丙酮为起始溶剂粗提取，再脱脂、去银杏酚酸等15道工艺制成提取物。NaOH-水溶液提取效果最好，NaOH-乙醇溶液次之，正丁醇萃取水溶液中银杏黄酮苷，获得最佳萃取条件为萃取5 min温度60℃4次，萃取物中黄酮苷含量为57％。V水：V正丙醇=1:25最佳。银杏叶精提物树脂吸附纯化法以石油醚回流提取，再以80％乙醇回流提取，减压浓缩，新型澄清剂沉降，树脂分级吸附，pH值为3—4酸水和酸性25％乙醇洗涤，75％乙醇洗脱，喷雾干燥 将银杏叶洗净，于60℃烘干至恒重，粉碎，过50目筛。称取粉末25 g，置于索氏提取器中恒重，粉碎，过50目筛。称取粉末25 g，置于索氏提取器中加入60％乙醇至250．0 ml，80℃下回流提取3．0 h，蒸馏回收乙醇，并用活性炭脱色，得银杏叶黄酮提取物。乙醇浓度为50％一70％时,提取率随浓度增加提高，当浓度70％时提取率达最大。随水浴温度升高总黄酮提取率快速增加。当温度80℃时提取率达最大。提取时间为三小时为佳。 二、超临界流体萃取法(SFE法)：利用临界或超临界状态的流体及被萃取的物质在不同蒸汽压力下所具有的不同化学亲和力和溶解能力进行分离纯化的操作。最佳萃取实验工艺条件为萃取压力15 MPa、乙醇浓度90％、萃取温度55℃，此时，黄酮类化合物萃取得率较理想. 三、高速逆流色谱技术提取法：是一种不用任何固定载体的液一液分配色谱技术W=70%的乙醇连续循环喷淋逆流6级萃取，m乙醇：m银杏叶=5:1，总萃取时间240min,萃取温度50~55度，萃取率99%以上。 四、微波提取法：微波提取法能对萃取体系中的不同组分进行选择性加热，受溶剂亲和力的限制较小，可供选择的溶剂较多及热效率较高，升温快速均匀，大大缩短了提取时间，提高了萃取效率。以水为介质的条件下，对银杏叶进行微波处理。 工艺流程银杏叶一干燥一粉碎一加入适量氢氧化钙溶液一微波预处理一加入适量碱水一调节pH和硼砂含量→恒温水浴浸提—过滤一定容 通过对提取温度、提取时间、液料比、微波功率、微波时间、解析剂比6个因素进行正交实验，优选得到最佳的萃取工艺条件为：提取温度80℃，提取时间60min，液料比．50：1，微波功率700W，微波时问180s，解析剂比7：l。 五、超声提取法：超声技术应用于天然活性产物的提取，具有速度快、提取率高、节省溶剂、节约能耗、不破坏有效成分的特点。最佳操作条件为超声波频率40kHz处理时间10min、静置时间12 h。以水为介质，在较低温度下 六、酶提取法: 加入淀粉部分水解产物及对葡糖基有转移作用的葡糖苷酶或转糖苷酶，使油溶性或难溶于水或不溶于水的有效成分转移到水溶性苷糖中，既提高了有效成分的提取率，又促进难溶于水或不溶于水的有效成分在体内的吸收. 在常规的醇一水浸提之前用纤维素酶对原料进行酶预处理(酶解时间为2h) 七、分子烙印技术:在极性溶剂中，以丙烯酞胺作功能单体，以强极性化合物槲皮素为模板，

金线莲

人工培植金线莲方式 因金线连分布于海拔500-1500公尺的阔叶林床，且生长缓慢，所以在栽培中温度、湿度，是成功与否的重要因素。 1、温度 金线连之发育、生长、开花与结果都有一定的温度。在金线连栽培环境中，温度的 ，高于影响甚巨，温度过低则生长缓慢 ( 9 ) 30℃或低于15℃则不利于生长，若低于10℃，须加设施保温，适宜的栽培温度为20 ~ 25℃，栽培场所温度过高时，可利用遮阴、浇水、加强通风或以蒸发冷却方式如喷雾或使用水墙等方法以将温度降下来。 2、湿度

空气湿度高有住于生长并提高植株鲜重，但栽培介质不能过湿，过湿易导致茎腐病，特别在高温( 28-32℃ )、高湿下，容易有镰刀菌感染进而发生猝倒病，这是平地夏天不能栽培成功的主要原因。茎腐病(stem rot ) 之病源菌为Fusarium oxysporum，基腐病(basal rot) 为Pythium ultimum ，目前以茎腐病发生最为严重， 。 占病害发生之 90% ( 8 ) 3、光度 金线连属于阴性植物，原生于森林内树下半遮阴的地方，因此适合金线连栽培的光度，约为正常日光量的1/3，最忌夏秋中午左右之直射阳光，此将引起日灼损伤叶片，一般而言，若光度高于5000lux 则会使新生叶片白化，低于 1000lux将使植株纤细徒长，一般栽培时可利用75%遮光网双层控

制在4000lux 左右，如此除了具有遮阴效果外，也利于湿度的保存及通风。海拔1000公尺左右的地区栽培金线连，由于温度适宜，因此夏天的生产量几乎是平地的两倍，惟冬天来螳劦釭`意寒害的发生，保温设施中尤以隧道式阴棚较易保温，平地栽培场若亦须采用此方式栽培，应将阴棚架高一些，以利于通风。 4、栽培介质 金线连属地生兰又是药用植物，所以必须使用清洁及适宜的栽培介质栽培，适宜的介质除了须具备有良好的透气性外尚须有良好的保水性，目前所使用的介质包括有蛇目屑、碳化稻壳、蛭石、真珠石、腐叶土及水苔等，栽培中依不同的介质混合比例，来调整介质的通气性及保水性，苗株刚由瓶苗移出时最好以2号蛭石栽植，因

黄酮类化合物的提取分离方法

一.黄酮类化合物的提取分离方法 按所用溶剂不同分类 (1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取 (2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸 (3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取. 2.按提取条件不同分类 (1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素 (2)索式提取法----------柑橘属类黄酮 (3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物 (4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质 (5)超滤法----------黄岑甙 (6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率 (7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油 PH 梯度萃取法：石榴果皮褐变产物、葛花总异黄酮 高效液相色谱分析法：五味子、葛根 高速逆流色谱分离法：甘草、分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位 柱色谱法 （1）硅胶柱色谱：姜黄素 （2）聚酰胺柱色谱：紫锥菊 （3）葡聚糖凝胶柱色谱：回心草、茵陈蒿 （4）大孔吸附树脂分离法：川草乌、三七总皂甙 二. 槐米中芸香苷（芦丁）的提取方法有哪些（设计） 方法：渗漉法、煎煮法、回流提取法 （1） 槐米粗粉20g 加约120ml 的%硼砂水溶液， 搅拌下加入石灰乳至pH8-9， 并保持该pH 值煮沸20分钟，四层纱布 趁热滤过，反复2次 提取液 药渣 浓盐酸调pH2~3 搅拌，静置放冷，滤过。 滤液 沉淀 热水或乙醇重结晶 芸香苷结晶 碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图 （2）取30g 槐花米，置于250mL 烧杯中，加入%硼砂沸水200ml ，在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8～9，在此pH 下保持微沸20～30min ，趁热用棉花滤过，残渣再加水，同上法再煎一次，趁热抽滤。合并滤液，在60～70℃下用浓盐酸调至pH=4—5，静置。 提 碱 取 溶 分 酸 离 沉