大鼠肠静脉内皮细胞使用说明
大鼠肠静脉内皮细胞
编号名称规格
北京派瑞金GK1030大鼠肠静脉内皮细胞5×105cells/瓶
大鼠肠静脉内皮细胞简介：
为能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的大鼠肠静脉内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的大鼠肠静脉内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
大鼠肠静脉内皮细胞注意事项：
1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3.请用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4.建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5.该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
大鼠肠静脉内皮细胞相关的大鼠原代细胞：
大鼠子宫平滑肌细胞大鼠脑静脉血管内皮细胞
大鼠子宫内膜上皮细胞大鼠脑动脉血管平滑肌细胞
大鼠子宫颈上皮细胞大鼠脑动脉血管内皮细胞
大鼠子宫成纤维细胞大鼠脑成纤维细胞
大鼠椎间盘髓核细胞大鼠脉络膜血管细胞
大鼠主动脉平滑肌细胞大鼠卵巢上皮细胞
大鼠主动脉内皮细胞大鼠卵巢颗粒细胞
大鼠直肠平滑肌细胞大鼠卵巢成纤维细胞
大鼠支气管上皮细胞大鼠淋巴管内皮细胞
大鼠支气管成纤维细胞大鼠淋巴成纤维细胞
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大鼠胰腺星状细胞大鼠结肠平滑肌细胞
大鼠胰腺上皮细胞大鼠角膜上皮细胞
大鼠胰腺导管上皮细胞大鼠角膜成纤维细胞
大鼠胰岛细胞大鼠甲状腺上皮细胞
大鼠牙乳头细胞大鼠滑膜细胞
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大鼠小肠平滑肌细胞大鼠骨骼肌细胞
大鼠胃粘膜上皮细胞大鼠骨骼肌细胞
大鼠外周血白细胞大鼠肝星形细胞
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大鼠输尿管上皮细胞大鼠肝内胆管上皮细胞大鼠视网膜微血管内皮细胞大鼠肝窦内皮细胞
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大鼠视网膜muller细胞大鼠肝Kupffer细胞
大鼠食管上皮细胞大鼠肺血管平滑肌细胞大鼠食管平滑肌细胞大鼠肺微血管内皮细胞大鼠肾足突细胞大鼠肺动脉成纤维细胞大鼠肾脏巨噬细胞大鼠肺大静脉平滑肌细胞大鼠肾小球内皮细胞大鼠肺大静脉内皮细胞大鼠肾小管上皮细胞大鼠肺大动脉平滑肌细胞大鼠肾小管平滑肌细胞大鼠肺大动脉内皮细胞大鼠肾系膜细胞大鼠肺成纤维细胞
大鼠肾实质细胞大鼠大隐静脉平滑肌细胞大鼠肾上皮细胞大鼠大隐静脉内皮细胞大鼠肾管状上皮细胞大鼠成骨细胞
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大鼠胰岛细胞原代培养
大鼠戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,无菌取出胰腺,置于4℃Ｈａｎｋｓ液中,用眼科小剪刀将胰腺剪成1ｍｍ3大小的组织块,加入0.5ｇ·Ｌ-1胶原酶,37℃恒温水浴振荡消化15ｍｉｎ,将已消化至细颗粒状组织吸出,并用大量4℃Ｈａｎｋｓ液终止消化,余下未消化完全的组织加入少量37℃Ｈａｎｋｓ液,用粗口径吸管轻轻吹打,直至大部分组织被消化成细颗粒状,用大量4℃Ｈａｎｋｓ液终止消化。混合前后两部分的消化产物,用Ｈａｎｋｓ液低速离心洗涤3次后,将组织置于含100Ｕ·ｍｌ-1青霉素,100ｍｇ·Ｌ-1链霉素,11.1ｍｍｏｌ·Ｌ-1葡萄糖,10ｍｍｏｌ·Ｌ-1Ｈｅｐｅｓ和7%的胎牛血清的完全ＲＰＭＩ1640培养液中,用150目(108μｍ)尼龙筛网过滤,以除去未被消化的组织和结缔组织。将已分离好的胰岛细胞和细胞团,置于含上述培养液内的培养瓶内培养。24ｈ后,吸出未贴壁的细胞悬液,低速离心以收集细胞,显微镜下计数后,以每孔一定数量胰岛细胞团接种于24孔细胞培养板内,继续培养48ｈ后用于实验。 我分离胰岛细胞后,用DTZ染色,发现溶液中含有许多小颗粒,放入温箱中也未发生变化,镜下观察没有看到文献中所说的红染细胞。我是将100mg双硫腙粉末溶于10mlDMSO中，用滤纸过滤，用时用KRBB缓冲液稀释100倍。胰岛细胞分离是将成年大鼠胰腺用胶原Ⅴ酶消化后，过150目网取滤过液，再过400目网取网上细胞，加入L-DMEM培养。方法是我根据文献稍作改动后实施的。胰岛细胞分离和染色对于我都是第一次做，请高手指点一下。 溶液中如果有紫黑色小颗粒，那就是DTZ，过滤除的不净。没有红染的细胞就是没有胰岛啊。还有，我总觉得150目太密了，很多胰岛都滤不过去吧 大鼠胰岛细胞原代培养 一周龄Wistar大鼠，断颈处死，于75%乙醇浸泡15分钟，无菌取出胰脏，于冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌消化酶液[胰蛋白酶-胶原酶消化液：0.05g胰蛋白酶(Sigma)，0.025g Ⅴ型胶原酶(Sigma，663U/mg)，0.05g葡萄糖，溶于100 mL无Ca2+、Mg2+的0.01mol/LPBS（pH值为7.4）溶液，用0.22μm微孔滤膜滤菌]，38℃±1℃消化，消化过程中不断震荡，10分钟后吸出上面酶液弃去，用无菌D-Hanks液将组织块清洗2~3次，加入新鲜酶液继续消化，重复上述步骤。此时组织块边缘模糊，再将组织块浸入消化酶液中，38℃±1℃消化10分钟，将消化酶液与组织块分开，组织块重新加入新鲜消化酶液进行消化；而原消化酶液1500rpm离心10分钟，取沉淀即为消化下的细胞，重新用无菌D-Hanks 悬浮，离心，重复1~2次，再用培养基洗2~3次，用培养基悬浮即得细胞悬液；将消化过的组织块重复消化5~6次至组织块消化完全，重复以上操作，合并几次所得细胞悬液，计数，调整细胞浓度为2×105个细胞/mL，将细胞悬液接种于24孔塑料培养板中，每孔1mL，置于37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养。由于成纤维细胞贴壁要比胰岛细胞迅速，接种15小时后，轻轻振荡培养板，将上面未贴壁的细胞接入新的培养板中，可除去部分成纤维细胞。将新培养板中细胞培养48小时后，换新鲜配置的含有2.5ng/mL 的碘乙酸的培养基培养5小时，可除去绝大部分成纤维细胞，而胰岛细胞不受伤害，换不含碘乙酸的培养基洗2次，并换不含碘乙酸的培养基在37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养，每隔3天换培养液，获得单层胰岛细胞， 胰岛细胞移植的研究进展 人类至今已有100多年用移植方法治疗糖尿病的历史，胰岛细胞移植治疗糖尿病存在两个障碍：组织来源不足和免疫排斥反应。 一．胰岛细胞的来源
小鼠脑动脉血管平滑肌细胞使用说明
小鼠脑动脉血管平滑肌细胞 小鼠脑动脉血管平滑肌细胞产品说明： 为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠脑动脉血管平滑肌细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠脑动脉血管平滑肌细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 小鼠脑动脉血管平滑肌细胞注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 小鼠脑动脉血管平滑肌细胞其他相关小鼠原代细胞： 小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞 小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞 小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞 小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞 小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞 小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞 小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞 小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞 小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞 小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞
小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良解读
小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良 [ 08-10-30 13:48:00 ] 作者：吴建芳编辑：studa20 【摘要】目的建立一种简单方便但高效的血管平滑肌细胞原代培养方法。方法改良酶消化法。结果用该法培养细胞传代生长快，细胞纯度达98% 以上，足以满足各种细胞试验需求。结论与传统方法相比该法简单经济，试验成功率高，节省材料和时间，而且可获得更多纯度较高的细胞。吴建芳（1972～），女，汉族，青海籍，副教授，硕士 【关键词】小鼠动脉血管平滑肌细胞原代培养 Abstract Objective To create a simple and effective primary culture methods for mouse vascular smooth muscle cells (VSMC). Methods Reformed enzymatic digestion. Results VSMC was grown well and fast, the purity is more than 98% which can meet various cell tests. Conclusion Comparing with traditional methods , this approaches can save much time and more materials, also have better cell quantities and purity. Key words Mouse Aorta VSMC Primary cult 在心血管疾病的基础研究中，对血管平滑肌细胞生物特性的研究是极其重要的一部分，其对揭示血管病变机理至为关键。体外培养平滑肌细胞是常用试验模型，近年来随着细胞培养技术的发展，原代培养的成功率有所提高，但仍然存在许多问题，经验不足者往往要花费大量时间、精力去摸索，不但影响试验进程而且浪费材料，而有些组织材料是极为昂贵且很难获得的，所以为了提高平滑肌细胞原代培养的成功率，并在有限的材料下获得好的结果，我们大胆采用了酶消化法（常规采用组织块培养法），从取材方法及消化步骤等方面进行了改良，试验结果证实该法简单经济，成功率高，细胞生长快，纯度高，现介绍如下。 1 材料与试剂 1．1 组织来源：C57BL/6J小鼠(鼠龄8周以后)主动脉。 1．2 试剂：鼠抗SMC-α -actin ,Cy2 conjugated affinity purified anti-mouse IgG［H/L］，戊巴比妥钠注射液。 1．3 培养基：在DMEM 培养基中添加１５％胎牛血清、１％青霉素、链霉素、１％谷氨酰胺，过滤除菌备用（不要超过四4周）。 1．4 酶消化液：Collagenase TypeⅡ 7 mg 溶于5 ml DMEM 培养基中(无血清)，过滤除菌即用。
大鼠二型糖尿病造模方法
大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020
大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两
人脑血管平滑肌细胞培养
1100 Human Brain Vascular Smooth Muscle Cells 人脑血管平滑肌细胞 血管平滑肌细胞是许多动脉疾病的细胞水平的根源。血管平滑肌细胞的加速生长潜能是血管疾病进展的关键因素。最新研究表明血管平滑肌细胞表达的ICAM-1 和VCAM-1能促进血管壁的炎症反应，并且与血管疾病的发展及稳定性有关.人血管平滑肌细胞的体外培养是血管研究中的重要模型，并将对血管疾病的药理学和治疗研究提供大量信息. 细胞培养说明 注意：冷冻保存的细胞非常脆弱。将小瓶置于37°C水浴，然后尽快移入培养物中，尽量减少操作。 经过以下步骤后开始培养细胞 1.准备多聚赖氨酸包被的培养瓶(2μg/cm2，推荐用T-75的培养瓶)。向T-75瓶内加入10ml 无菌水，然后加入15μl多聚赖氨酸原液(10mg/ml,ScienCell cat. no. 0413).将培养瓶放入培养箱中过夜(至少在37°C中过一小时) 2.准备完全培养基：用70%的酒精为培养基和添加物的外表面消毒，然后放到无菌的地方。在无菌环境下打开每一个添加物小管并用吸管加入到基本培养基中。用培养基冲洗每一个小管以保证添加物全部加入基本培养基中。 3.用无菌水冲洗多聚赖氨酸包被的培养瓶两次并向瓶内加入20 ml完全培养基。将培养瓶放入超净台中，然后融化细胞。 4. .将小瓶放入37°C水浴中，轻轻地握住并旋转小瓶直到完全融化。将小瓶立刻移出水浴，擦干，用70%的酒精冲洗小瓶，然后放到无菌环境中。小心地打开盖子，注意手指不要碰到里面。用1ml eppendorf吸管轻轻重悬管内容物。 5.将管中内含物放入均匀的，多聚赖氨酸包被的培养瓶中。推荐接种密度为5,000 cells/cm2。注意：细胞融化后不推荐稀释和离心，因为这些操作比培养基中DMSO残留物对细胞的伤害大。血管平滑肌细胞接种在多聚赖氨酸包被的培养瓶中能促进细胞帖壁。 6.盖好盖子，轻轻地摇晃培养瓶以使细胞分布均匀，如需气体交换则打开瓶盖。 7.将培养容器放入培养箱中。 8.为了得到良好的结果，在培养开始后至少16个小时内不要动培养物。第天天更换培养基以去除残留的DMSO和未贴壁的细胞，然后每隔一天进行如上操作。培养良好的细胞将呈现纺锤体形，通常细胞呈均匀的丛状或板状而不是单个分散的细胞，并且细胞数量在培养2-3天后会加倍。 维持培养
大鼠胰岛细胞原代培养方法的改良
大鼠胰岛细胞原代培养方法的改良 中国医科大学附属第一医院内分泌科(沈阳110001) 吴志香* 王玉霞△ 刘国良 摘 要 目的:探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法,获取尽可能多的高质量胰岛,并寻找进行体外实验研究的最佳时间和条件。方法:运用胶原酶 原位灌注法分离胰腺, F ico ll400纯化胰岛细胞,双硫腙(D T Z)染色鉴定胰岛,运用倒置显微镜观察细胞生活状态, 放免法检测胰岛素分泌考察胰岛功能。结果:每只大鼠可分离438±27个胰岛 胰腺,细胞存活率为92.3±2.3%,GS IS实验中胰岛素释放指数S I为3.25±0.26。结论:本分离纯化方法可获得数量多,质量高的胰岛细胞,为原代胰岛细胞的体外研究提供实验条件。 主题词 细胞培养 胰岛 生理学 胰岛 分离和提纯 大鼠 An i m provem en t m ethod of pr i m ary culture of w istar ra t pancrea tic islets D ep artm en t of Endocrino logy,the F irst A ffiliated Ho sp ital,Ch ina M edical U n iversity (Shenyang 110001)W u Zh ix iang W ang Yux ia L iu Guo liang ABSTRACT O b jective:To study the effects of iso lating and cu ltu ring the rat pancreatic islets in vitro.M ethods:A fter in traductal infu si on of8210m l co ld H ank’s balanced so lu ti on con tain ing1m g m l of type co llagenase,pancreas w ere su rgically p rocu red and digested at37℃fo r15220m in,and stopped digesti on by co ld H ank’s so lu ti on w hen the em u lsi on appeared.T he islets w ere pu rified by discon tinou s F ico ll den sity gradien t(25%,23%,20.5%and11%)cen trifugati on,and the degree of pu rity w as defined as dith izone stain ing.A n i m ati on of islets w as ob served and in su lin secreti on w as detected. R esu lts:438±27islets w ere p rocu red from one rat,and su rvival rate w as92.3±2.3%,Gluco se sti m u lated in su lin secreti on in vitro show ed the m ean value of in su lin in the low2gluco se m edium w as39.74±2.73mM ,w h ile that of h igh2gluco se m edium w as128.94±8.72mM,the S I w as3.25±0.26.Conclu si on:T h is m ethod cou ld ob tain large quan tities and h igh quality islets,w h ich offered better experi m en tal conditi on s fo r cell study. KEY WORD S Cell cu ltu re Istets of langerham s physi o logy Istets of langerham s iso lati on pu rificati on R ats 近年来许多有关糖尿病方面的研究均利用体外培养的胰岛细胞株作为研究对象,然而源自肿瘤细胞系的细胞株毕竟在基因表达功能上与正常细胞有差别,因此,本研究采用了培养的大鼠原代胰岛细胞作为研究对象,以期更接近在体研究的结果,同时又可避免在体研究很难避免的混杂因素。 材料与方法 1 实验材料 实验动物选择两月龄的健康W istar大鼠,体重250±23g,购自中国医科大学实验动物中心。主要试剂有 型胶原酶(co llagenase typ e ,Sigm a);R PM I1640及 *辽宁中医药大学附属第一医院 △中国医科大学附属第四医院DM E M培养基(G I BCO)、胎牛血清(FB S, H yclone)、青霉素、链霉素(华北制药厂)、F ico ll 400(Pharm acia)、H ank’s液,40目不锈钢网, H EPES(Sigm a)、D T Z(Sigm a)、(OA,北京华美)。胰岛素放免药盒(北京原子高科技核技术应用股份有限公司灵敏度:1.5m I U L;精密度:批内Cvv5%,批间Cvb10%) 2 实验方法 2.1胰岛细胞的分离纯化:胰腺的原位灌注:W istar大鼠禁食16h后,10%水合氯醛腹腔麻醉,常规消毒后经腹中线开腹。暴露胆管,寻找胆管穿过胰腺进入十二指肠处,320丝线穿过(暂不结扎),充分暴露胰尾,在肝门胆管分叉处逆行胆管插管,少量推入含冷却的胶原酶(1m g m l)
罗梅：糖尿病大鼠胰岛α细胞胰岛素受体分布及含量的研究
罗梅：糖尿病大鼠胰岛α细胞胰岛素受体分布及含量的研究 背景动物实验和临床研究均发现代谢综合征包括糖耐量异常以及 2型糖尿病时胰岛素升高，但是对胰高血糖素的抑制效应减弱或消失。同时，有证据表明胰高血糖素分泌和胰岛素敏感性呈负相关，对胰岛素越不敏感的个体其胰高血糖素水平越高，这提示除了骨骼肌、脂肪和肝脏等胰岛素经典靶组织的外周胰岛素抵抗以外，还可能存在胰岛α细胞对胰岛素的抵抗。我们最近的研究发现S TZ糖尿病大鼠胰岛α细胞分泌的N P Y含量增加，予以胰岛素治疗不能令其下降，也提示胰岛α细胞对胰岛素的抵抗。迄今对胰岛素的外周抵抗已有大量研究，但对胰岛α细胞的胰岛素抵抗国内外未见报道。 目的明确糖尿病时是否存在α细胞对胰岛素的抵抗并探讨α细胞的胰岛素抵抗是否与α细胞上胰岛素受体的改变有关。 方法本研究采用免疫组织化学的双重荧光标记法对正常Wis tar大鼠和大剂量STZ诱导的1型糖尿病大鼠以及高脂饮食加小剂量STZ诱导的肥胖2型糖尿病大鼠胰岛的胰高血糖素、N P Y和胰岛素蛋白质含量进行了测定，同时对α细胞上胰岛素受体的分布和含量进行了初步观察。
结果1.2型糖尿病大鼠胰岛内胰高血糖素、N P Y及胰岛素蛋白含量均显著高于对照组，提示胰岛α细胞存在胰岛素抵抗；1型糖尿病大鼠胰岛内胰高血糖素和 NP Y蛋白含量也显著升高，但胰岛素蛋白含量明显低于正常。2.在正常Wistar大鼠和1型糖尿病大鼠、2型糖尿病大鼠胰岛α细胞均有胰岛素受体蛋白表达。 3.大剂量STZ诱发的1型糖尿病大鼠胰岛α细胞上胰岛素受体的含量比正常Wister大鼠明显减少（下图），受体减少的原因尚不清楚，有待进一步研究。4 .与正常Wister大鼠比较，高脂饮食和小剂量 STZ诱发的2型糖尿病大鼠胰岛α细胞上胰岛素受体的含量也有下降趋势，但无统计学意义，分布无明显变化。 解释1.本研究结果显示 2型糖尿病大鼠胰岛内胰岛素蛋白表达增高的同时，伴有胰高血糖素及 N P Y蛋白和N P Y m R N A表达增高，即高胰岛素不能抑制α细胞胰高血糖素及N P Y的表达，提示胰岛α细胞对胰岛素的抵抗。 2.2型糖尿病大鼠α细胞上胰岛素受体呈减少趋势。 3.α细胞胰岛素抵抗似与α细胞胰岛素受体数目变化无明显关系，是否与胰岛素受体结合能力降低、酪氨酸激酶活性降低或受体后其它环节抵抗有关值得进一步研究。 正常大鼠胰岛α细胞胰岛素受体×400 1型糖尿病大鼠胰岛α细胞胰岛素受体×400
小鼠肺血管平滑肌细胞使用说明
小鼠肺血管平滑肌细胞 小鼠肺血管平滑肌细胞产品说明： 为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠肺血管平滑肌细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 小鼠肺血管平滑肌细胞注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 小鼠肺血管平滑肌细胞其他相关小鼠原代细胞： 小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞 小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞 小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞 小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞 小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞 小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞 小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞 小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞 小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞 小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞
血管平滑肌细胞及内皮细胞的体外培养
高尿酸血症对内皮细胞损伤及血管平滑肌细胞增殖的影响（体外培养部分） 背景：关于高尿酸血症致肾脏损害的机制，既往的研究认为：当体内pH＜5.5或脱水时，可引起尿酸盐结晶沉积在肾小管间质部位，通过经典途径或替代途径激活补体、血小板、炎性细胞和巨噬细胞，引起细胞因子、转化生长因子（TGF-β）和活性氧的表达增多，刺激纤维母细胞向肌纤维细胞转化，激活胶原交联，最终导致纤维化或肾功能衰竭。新近国外的研究发现高尿酸血症导致肾脏损伤的原因有：①内皮细胞的损伤作用：Sanchez-Lozada等发现，尿酸可通过抑制NO（一氧化氮）产生和刺激内皮细胞增殖而导致内皮细胞损伤。中度的高尿酸血症就可以抑制NO的产生。②高尿酸血症诱导产生严重的肾小球血管病变，并且这种病变并非继发于高血压。高尿酸血症能直接刺激血小板衍生因子（PDGF）的表达和血管平滑肌的增殖，诱导产生严重的肾小球血管病变，而且这种病变并非继发于高血压，即在血压控制良好的情况下，高尿酸血症大鼠出现肾小球入球小动脉增厚，肾皮质血管收缩，肾小球内高压和肾小球肥大，最终导致肾小球硬化。因可溶性尿酸刺激单核细胞产生IL-2β、IL-6、IL-18及TNFa，因此推测尿酸对血管平滑肌的损伤作用可能是通过炎症样反应完成的。尿酸诱导大鼠平滑肌细胞炎症途径是经由有机离子转运系统进入血管平滑肌细胞，增加单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和环氧化酶2（COX2）的表达而实现的。MCP-1是一种非常重要的血管疾病和粥样硬化的化学趋化因子，而COX2是可导致炎症反应的重要蛋白之一。上述两种物质加重肾小球纤维化，肾小球肥厚，导致高血压、蛋白尿和肾功能恶化。目的：通过细胞体外培养，从
孜亚比提片(HZT)对大鼠胰岛细胞功能的影响
孜亚比提片(HZT)对大鼠胰岛细胞功能的影响 发表时间：2011-08-29T11:11:44.513Z 来源：《中外健康文摘》2011年第19期供稿作者：张晓春周燕萍 [导读] 降糖孜亚比提片能显著促进胰岛细胞生长和胰岛素分泌，并具有一定保护胰岛细胞功能的作用。 张晓春周燕萍（宜宾市第二人民医院药剂科四川宜宾 644000） 【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）19-0031-03 【摘要】目的通过胶原酶消化法对大鼠胰腺组织经过短时消化，以获得大量纯度高和功能良好的大鼠胰岛单层细胞，以此为材料研究了孜亚比提片对大鼠胰岛细胞生长和胰岛素释放的影响。方法胰岛细胞分为正常对照组、不同浓度HZT组（20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml）、高糖组、高糖+不同浓度HZT组（20g/ml，40g/ml，80g/ml）、棕榈酸组、棕榈酸+HZT组（80g/ml）、油酸组、油酸+HZT组（80g/ml）。将正常对照组，高糖组（33.3mmol/L），高糖+HZT组（80g/ml）；棕榈酸组(0.25mmol/L)，棕榈酸+HZT组（80g/ml），油酸组 (0.25mmol/L)，油酸+HZT组（80g/ml）分别在37℃,5%CO2分别培养72h和36h，进行葡萄糖负荷试验，放射免疫法检测培养液中胰岛素水平。结果高糖+HZT组（80g/ml），棕榈酸+HZT组（80g/ml）和油酸+HZT组（80g/ml）胰岛素分泌量分别显著高于高糖组，棕榈酸组和油酸组（P<0.01），但均低于正常对照组(P<0.01)。结论降糖孜亚比提片能显著促进胰岛细胞生长和胰岛素分泌，并具有一定保护胰岛细胞功能的作用。 【关键词】胰岛胰岛素细胞培养脂肪酸葡萄糖 本实验对新疆地方中药孜亚比提片模拟在高浓度葡萄糖和高浓度游离脂肪酸环境下对体外原代培养大鼠胰岛细胞分泌胰岛素作用，研究孜亚比提片对胰岛细胞功能的影响，从而为新型抗糖尿病药物研发进行初步探索。 1 材料与方法 1.1材料、试剂及仪器 1.1.1材料一周龄健康Wistar大鼠，购于新疆医科大学动物试验中心。合格证：SCXK（新2010－0001）。 1.1.2主要试剂孜亚比提片（HZT，由新疆医科大学药理教研室提供）、胶原酶Ⅱ型（Collagenase Ⅱ，Gibco公司）、DMEM完全培养基（Gibco公司）、胰岛素放射免疫试剂盒（北京科美东雅）。 1.1.3主要仪器 CO2培养箱、酶标仪、放射免疫γ-计数器等。 1.2方法 1.2.1大鼠胰岛细胞的制备及培养[1] 将一周龄Wistar大鼠, 于75%乙醇浸泡5min，无菌剖腹取出胰脏，于冰冷D-Hank’s液中漂洗，转入青霉素小瓶中，剪成0.1～0.5mm3大小的碎片，用无菌D-Hank’s液反复清洗8～10遍，加入5～10倍体积的无菌Ⅱ型胶原酶消化酶液，37℃水浴振荡消化30min后，将消化液取出移入预先准备好的离心管中，1500转10min离心，取沉淀即为消化下的细胞，加入2mlDMEM培养基，混匀即得细胞悬液，计数,调整细胞浓度为2×105个细胞/ml。 将细胞悬液接种于24孔塑料培养板中，接种18h后，轻轻振荡培养板，利用细胞生长差速法，将上面未贴壁的细胞接入新的培养板中，将新培养板中的细胞继续培养48h后，用不含碘乙酸的培养基洗2次，加入培养液继续培养，每隔3d换培养液，获得单层胰岛细胞，备用。 1.2.2孜亚比提片在高浓度葡萄糖环境下对胰岛细胞胰岛素分泌量的影响[2] 将原代分离细胞在低糖DMEM培养基(培养液中含 5.6mmol/L葡萄糖)中培养7d－11d后形成良好单层胰岛细胞，加入胰蛋白酶短时消化，收集细胞，计数，胎盼蓝染色鉴定胰岛细胞活率，将胰岛细胞调整为2－5×105个/ml细胞悬液并分为正常对照组(培养液中含5.6mmol/L葡萄糖)，高糖组(培养液中含33.3mmol/L葡萄糖)，高糖+孜亚比提片组(20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml)，37℃，5%CO2饱和湿度培养箱中培养72h后做胰岛素释放实验。 1.2.3孜亚比提片在高浓度游离脂肪酸环境下对胰岛细胞分泌胰岛素量的影响将原代分离细胞在低糖DMEM培养基(培养液中含 5.6mmol/L葡萄糖)中培养7d－11d后形成良好单层胰岛细胞，将胰岛细胞调整为2－5×105个/ml细胞悬液，并分为正常对照组(培养液中含5.6mmol/L葡萄糖)，棕榈酸组(培养液中含0.25mmol/L棕榈酸)，棕榈酸+孜亚比提片组（80μg/ml），油酸组（培养液中含0.25mmol/L油酸），油酸+孜亚比提片组（培养液中含80μg/ml孜亚比提片），37℃,5%CO2 饱和湿度培养箱中培养36h后做胰岛素释放实验。 1.3统计学处理各项数据以x-±s表示，采用ANOVA中LSD-t检验行多组间均数比较，显著性水平为0.05，使用SPSS13.0统计软件包分析。 2 实验结果 2.1孜亚比提片在高浓度葡萄糖（3 3.3mmol/L）环境下对胰岛细胞胰岛素分泌量的影响在胰岛细胞分为正常对照组，高糖组，以及高糖+三种浓度浓度的HZT组培养基中进行72h培养后，葡萄糖负荷实验测定胰岛素释放量，数据经方差齐性levene检验，低糖刺激时，levene统计量为1.104，sig.=0.384, P>0.05，可认为方差齐。F＝395.642，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别有显著性意义，高糖+HZT(80μg/ml)组与高糖组相比差异显著（P<0.01）。高糖刺激时，levene统计量为1.913，sig.=0.129, P>0.05，可认为方差齐。F＝1056.999，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别有显著性意义。这表明，在高浓度葡萄糖环境中，HZT具有保护胰岛细胞免受高糖损伤作用，对胰岛功能具有一定保护作用。 2.2孜亚比提片在高浓度游离脂肪酸(FFAs)环境下对胰岛细胞分泌胰岛素量的影响在胰岛细胞分为正常对照组，棕榈酸组，油酸组以及棕榈酸+HZT组（80μg/ml）和油酸+HZT组（80μg/ml）培养基中进行36h培养后，葡萄糖负荷实验测定胰岛素释放量，低糖刺激时，levene统计量为1.370，sig.=0.261, P>0.05，可认为方差齐。F＝72.182，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别有显著性意义。高糖刺激时，levene统计量为1.067，sig.=0.406,P>0.05，可认为方差齐。F＝128.782，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别，在高糖刺激下棕榈酸+HZT组（80μg/ml）和油酸+HZT组（80μg/ml），胰岛素释放量都分别高于棕榈酸组和油酸组，差异显著（P<0.01），但各试验组胰岛素释放量均小于正常对照组（P<0.01）,这表明，在高浓度游离脂肪酸环境下，HZT仍然具有一定保护胰岛细胞免受游离脂肪酸损伤的作用，对胰岛功能具有一定保护作用。 3 讨论 本实验从新疆地方传统治疗糖尿病药有效成分中选取了孜亚比提片作为试验药物，研究了孜亚比提片对体外原代培养大鼠胰岛细胞胰
脐动脉血管平滑肌细胞的分离与培养
脐动脉血管平滑肌细胞的分离与培养 材料 1) 培养基和维持平滑肌细胞生长的溶液 a) 培养基: DMEM /F12 b) 基本培养基的添加剂(final concentrations): 100 U/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin 10% (v/v) FBS. 通常消毒冷冻储备。完全培养基4°C可达1 个月，常规细胞培养使用前预温到37°C。分离过程用无FBS 的培养基。 c) Hanks’平衡盐溶液(HBSS, Sigma)：用于组织标本的收集培养基。下面的添加剂在使用之前加入储备液 中(final concentrations): 100 μg/mL Gentamicin 0.025 M HEPES 20 mM bicarbonate 0.001% phenol red HBSS 可分装储存于4°C最多2周。 d) Bicarbonate (4.4%, 0.52 M)-Phenol red (0.03%) solution: 44 g NaHCO3 +30 mg phenol red in 1000 mL组织培养级的去离子水, 高压灭菌消毒10 min at 115°C. 15 mL分装4°C储存可达6 mo，2 aliquots used in 400 mL of medium. 2)Penicillin and streptomycin stock solution (80X concentrate): 480 mg penicillin+1.5g streptomycin sulfate in 200 mL组织培养级的去离子水 0.5 μm滤膜预过滤，0.22 μm滤膜过滤消毒。 5 mL分装，–20°C储存，1 aliquot used in 400 mL of medium. 3)Gentamicin solution (80X concentrate): 750 mg gentamicin sulfate in 100 mL组织培养级的去离子水 0.22 μm滤膜过滤消毒。 5 mL分装，–20°C储存，1 aliquot used in 400 mL of HBSS. 4)HEPES solution (1 M): 47.6 g of HEPES in 200 mL组织培养级的去离子水 0.22 μm滤膜过滤消毒。 5 mL分装，–20°C储存，2 aliquots used in 400 mL of HBSS. 5)胰蛋白酶溶液(2.5 %): Trypsin from porcine pancreas (Sigma) is dissolved (2.5 g/100 ml) in PBS-A 0.22 μm滤膜过滤消毒。 10 mL分装，–20°C储存 6)乙二胺四乙酸(EDTA) solution (1%): EDTA disodium salt is dissolved (500mg/ 50 mL) in 组织培养级的去离子水
小鼠胰岛细胞使用说明
小鼠胰岛细胞 小鼠胰岛细胞产品说明： 为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠胰岛细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠胰岛细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 小鼠胰岛细胞产品简介： 1、产品名称：小鼠胰岛细胞（Mouse pancreatic islet cells） 2、组织来源：小鼠胰岛 3、产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶 小鼠胰岛细胞简介： 胰岛细胞作为糖尿病新药的细胞筛选模型需保持其结构完整、生理功能稳定和足够长的存活时间。本公司生产的大鼠胰岛细胞采用混合酶消化而来，胰岛素分泌实验证明获得较高纯度和活力的胰岛细胞，细胞总量约为5×105cells/瓶，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 小鼠胰岛细胞培养基信息： 1）培养基类型：DMEM高糖
大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养与鉴定
大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养与鉴定徐索文肖平喜陈健文乐康沈晓燕黄河清刘培庆 【摘要】目的建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养模型，为体外研究动脉粥样硬化的发病机制提供重要的实验手段。方法采用改良的植块贴壁法，成功建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养模型;分别用倒置显微镜和SABC试剂盒对培养细胞进行形态学观察、免疫组织化学和免疫荧光鉴定(平滑肌细胞特异性的α- SM - actin)。结果原代培养的血管平滑肌细胞在接种后3天开始从组织块周围游出，光镜下培养细胞呈梭形，放射状生长和典型的“峰谷”状生长;免疫组化和荧光染色显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达，证实培养的细胞为血管平滑肌细胞。结论本法简便、可靠、经济、短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞，可作为研究动脉粥样硬化和移植血管再狭窄机制的有效模型。 【关键词】大鼠;胸主动脉;植块法;血管平滑肌细胞 [Abstract]ObjectiveTo establish the culture model of rat aorta vascular smooth muscle cells (VSMCs) to provide important experimental method for the pathogenesis research of atherosclerosis in vitro. MethodsEmploying the explants technique, the primary and sub-culture were completed by
modified tissue-piece inoculation and trypsin digestion respectively. The cultured cells were identified by phase contrast microscopy and immunohistochemical and immunofluorescent staining.ResultsAfter 3 days of inoculation of tissue-pieces, VSMCs migrated from the vessel pieces. The cultured cells showed the typical “hills and valleys”morphological features under the microscope. Immunohistochemical and immunofluorescent staining with monoclonal antibody against mouse α-SM- actin demonstrated these cells were positive. ConculsionIt is a simple and reliable method for obtaining highly purified and satisfactory VSMCs in short term, providing a favorable experimental platform for research into the mechanism of vascular proliferous diseases such as atherosclerosis and restenosis. [Key words]rat;thoracic aorta;explants method;vascular smooth muscle cells 血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)的异常增殖、迁移、泡沫化及凋亡与冠状动脉旁路移植术(CABG)和经皮冠脉腔内血管成形术(PTCA)术后血管再狭窄、颈动脉球囊损伤术致新生内膜形成(neointima formation)及动脉粥样硬化
平滑肌细胞培养实验步骤
原代平滑肌细胞培养Protocol 实验准备： 器材：注射器（10mL），玻璃吸管，胶头（用于细脚吸管，吹匀组织块用），枪头（蓝色、黄色），移液器（1000μL，100μL），电动移液器，玻璃培养皿（2-3个），小烧杯（10 mL或5 mL），青霉素瓶（配鼠尾胶原），剪刀（大，小，弯）多把，镊子（大，小，弯）多把，纱布，六孔板（真空包装），托盘（放老鼠），酒精棉球，乳胶手套 试剂：平滑肌细胞专用培养基，生理盐水，D-hank’s 液，鼠尾胶原，戊巴比妥钠（麻醉用），75%酒精 步骤： 1. 高压灭菌实验所需器材，超净台紫外照射30mins，吹风； 2. 配制鼠尾胶原应用液，一般1:15-1:19稀释，六孔板中每孔加入1mL稀释液待用（可省去）； 3. 大鼠（200g左右，一百五六十克较好）腹腔注射一定体积戊巴比妥钠（0.5mL/100g）麻醉，麻醉好后将大鼠全身（尤其是胸腹部）用酒精棉球擦拭干净，放入托盘置于超净台中紫外照射15mins左右，开始试验； 4. 用已消毒的剪刀将大鼠腹部表皮剪开，充分暴露出整个胸部，再换用干净的剪刀打开胸腔。将肝脏及肺脏等组织拨开（小心操作以避免伤到血管）。用小弯镊及小直镊分离胸主动脉外壁贴附的结缔组织及外膜等。分离干净后，用眼科剪小心剪断血管，去除血管中的血，置于干净玻璃培养皿中； 5. 用生理盐水多次冲洗分离出来的血管。冲洗干净后，将血管剪开，小心刮除血管内膜，去掉内皮细胞； 6. 将处理好的血管放入平滑肌细胞专用培养基（约200μL）中，用眼科剪将组织尽量剪碎成1mm3大小的小块，用细脚吸管吹匀后，均匀种入加了鼠尾胶原的六孔板中； 7. 用黄枪头小心吸弃多余的液体（避免将组织块吸起来），然后将六孔板盖好颠倒放在培养箱中约2h（待组织块粘牢培养板底）后，再加入培养基； 8. 过3-4d后拿出细胞在显微镜下观察，看其是否已长出。