金线莲组织培养几种培养基的筛选

植物组织培养的基本步骤

植物组织培养的基本步骤成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。培养基的主要成分【水分】【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂【凝固剂】琼脂【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银培养基和组织培养用具的灭菌方式【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂【超净工作台】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口

【培养瓶表面】70%乙醇擦拭【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒植物外植体的灭菌方式【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。 3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。 4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗3~5次。【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min，或0.1%升汞消毒5~10min，然后再用无菌水冲洗3~5次。【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒，无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min，再用无菌水冲洗3~5次。【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】

金线莲组织培养方法

金线莲组织培养方法一种药用金线莲组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：１）培养基准备该步骤包括配制，分装，灭菌三步，其中配制：以１／２ＭＳ为基本培养基，每升添加６－苄氨基嘌呤２ｍｇ、α－萘乙酸１．０～１．５ｍｇ、芸苔素内酯０．０５ｍｇ、香蕉１００ｇ、琼脂６．５ｇ和蔗糖２５ｇ，混合后的培养基的ｐＨ值调节至５．６；分装：将配制后的培养基加热至琼脂完全溶解，趁热均匀地分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；灭菌：将加入培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅内灭菌，灭菌条件为：１２１℃、１０５ｋＰａ下灭菌１５分钟，灭菌后及时取出培养瓶，冷却备用；２）外植体处理和接种该步骤分为两种情形，当采用自然生长的植株作为外植体时包括清洗，消毒，接种三步，其中清洗：选择自然生长、无病虫害的健壮植株，用加入少许肥皂粉的水清洗植株，后用流水冲洗２小时；消毒：在无菌条件下，去除叶片，将植株茎段在７５％的酒精中浸润１０秒后，放入１０％的次氯酸钠消毒１５分钟，用无菌水清洗６遍，沥干水分，放入无菌的培养皿中备用；接种：将消毒后备用的茎在无菌条件下切成长约１ｃｍ、含一个茎节的若干茎段，接种于准备好的培养基上，每瓶接１个茎段；当采用组培无菌苗时直接进行无菌接种，即在无菌条件下将组培无菌苗去叶，将茎切成长约１ｃｍ、含一个茎节的若干茎段，接种于准备好的培养基上，每瓶接１个茎段；３）培养该步骤将接好种的培养瓶移入培养室进行幼苗的诱导与培养，培养条件为：温度２５±２℃，光照时间每天１２小时，光照强度１５００～２０００ｌｘ，培养时间四个月左右，培养期间要勤检查，发现污染的要及时去除；４）移栽选苗高约６～８ｃｍ、具叶３张以上、茎基直径约２ｍｍ、发根２～３条的试管苗，炼苗４天后，洗净附着在植株上的培养基，并晾干洗涤水后移栽至１份菜园土＋２份粗砂＋１份木屑，或１份菜园土＋１份粗砂＋２份木屑的基质中。 2一种菌根真菌在金线莲栽培中的应用技术，采用小菇属4种真菌：石斛小菇(Mycena dendrobii)、紫萁小菇(Mycenaosmundicola)、兰小菇(Mycena orchidicola)、开唇兰小菇(Mycena anoectochila)中的任选一种或由其中任意两种或两种以上组成，其主要步骤及条件如下(所述比例均为重量百分比)：(1)菌根真菌的培养将上述的菌根真菌自低温保藏的斜面试管菌种活化后，分别转接于PDA平皿中，于25℃恒温培养12-20d，分别在菌落边缘打孔成菌片，并以小碎块接入液体培养基进行培养和发酵或接入固体培养基进行培养；(2)金线莲苗的培养芽增殖培养基：MS(Murashige and Skoog 1968)培养基，附加6-BA(6-苄基嘌呤1.2mg/L、NAA(萘乙酸)0.6mg/L；丛芽增殖培养基：MS为基本培养基，附加6-苄基嘌呤(BA)1.5mg/L，吲哚丁酸(IBA)0.6mg/L，玉米素(ZT)0.15mg/L；苗继代培养基：1/2MS，200g/L马铃薯提取液，25g/L蔗糖，琼脂9g/L，pH5.8；(3)菌根真菌与金线莲苗共生栽培(a)金线莲栽培基质蛭石∶砂子＝4∶1或森林腐殖土∶砂子＝6∶1或泥炭土∶砂子＝5∶1或泥炭土∶砂子∶蛭石＝4∶1∶2；(b)金线莲菌根共生栽培在硬质材料的托盘或盆中立体栽培，其容器的基部平铺一层金线莲栽培基质，其上按株行距栽培一株或一丛的金线莲苗，在苗根的基部放置少量粉碎的湿栎树(山毛榉科Fagaceae)树叶，其上再放以上备好的液体菌根真菌2ml或固体菌根真菌1-2g，使金线莲的根与菌接触，用栽培基质将苗覆盖2-3厘米厚，浇放置至室温的水；(c)栽培条件采用塑料薄膜温室、玻璃温室、露天栽培遮阳网遮阴，环境温度为18-25℃，光照量为正常日光量的1/3，照度2000Lx；(d)金线莲的收获收获时可剪取地上部分，也可一次性连根取出洗净栽培基质；阴干或60℃以下烘干；其中所述的菌根真菌的液体培养为：培养基的配制：葡萄糖2.5％；KH2PO4 0.15％；K2HPO4 0.1％；MgSO4 0.15％；天然物：麦麸3％(煮汁)，高压灭菌后分别接入上述真菌；培养条件：培养基pH5.6；三角瓶摇床培养瓶装

植物组培培养基的成分

植物组培培养基的成分培养基是人工配制的，满足不同材料生长，繁殖或积累代谢产物的营养物质。在离体培养条件下，不同种类植物对营养的要求不同，甚至同一种植物不同部位的组织以及不同培养阶段对营养要求也不相同。筛选合适的培养基是植物组织培养极其重要的内容，是决定成败的关键因素之一。大多数植物组织培养基的主要成分是无机营养物质（大量营养元素和微量营养元素）、碳源、有机添加物、植物生长调节剂和凝胶剂。一些组织可以生长在简单的培养基上，这些培养基只含无机盐和可利用的碳源（蔗糖），但大多数组织必须在培养基中添加维生素、氨基酸和生长物质，而且经常还将一些复合的营养物质加入到培养基中，这种由“化学定义”的化合物组成的培养基称为“合成”培养基。人们已设计了许多培养基用于特殊组织和器官的培养。怀特培养基是最早的植物组织培养基之一，最初作为根培养的培养基。为了诱导培养组织器官发生和再生植株，广泛使用含有大量无机盐成分的MS（Murashige和Skoog，1962）和LS(Linsmaier 和Skoog，1965)培养基。原本为细胞悬液或愈伤组织培养而设计的B5培养基，经过改良后，被证实有利于原生质体培养。同时，B5培养基也被用于诱导原生质体再生植株。尽管Nitshch(1969)为花药培养设计的培养基仍然使用频繁，但另一个称为N6的培养基，专门用于禾谷类花药培养和其他组织培养。类似的，N6培养基越来越多地

用于大豆、红三叶草和其他豆科植物的培养。该培养基营养成分促进胚性细胞和原生质体再生细胞快速生长。使用这些培养基成功的原因很可能是营养元素的比例和浓度基本上满足不同培养体系中细胞或组织生长和分化的最适需要。植物组织培养基中无机和有机成分的浓度用质量浓度（mg/L 或ppm，但现在习惯用mg/L）或物质的量浓度(mol/L)表示。按照国际植物生理学协会的推荐，应该用mol/L表示大量营养元素和有机营养成分浓度，用μmol/L表示微量营养元素、激素、维生素和有机成分浓度。用物质的量浓度的优点是，每一种化合物每一摩尔的分子数是常数，所以按照特定培养基配方配制培养基时，无论无机盐化合物的水分子数为多少，原物质的量浓度都可以使用。但是，用质量浓度来表示浓度的话，就不能不考虑无机盐化合物的水分子数目了。 1、水分水分是植物体的主要组成部分，也是一切代谢过程的介质和溶媒，在植物生命活动过程中不可缺少。配制培养基母液时要用蒸馏水或纯水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程中发霉变质。研究培养基配方时尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。而在大规模工厂化生产时，为了降低生产成本，常用自来水代替蒸馏水。如自来水中含有大量的钙、镁、氯和其他离子，最好将自来水煮沸，经过冷却沉淀后再使用。

植物组织培养技术

植物组织培养技术植物组织培养是指将植物体的一部分接种在合成培养基上，使其按照预定目标生长发育成新植株。近年来，花卉组织培养及快繁脱毒技术越来越多地应用于花卉种苗繁殖生产中。一、组织培养在花卉产业中的应用 1.快速、大量繁殖优良品种组织培养技术已成为种苗生产的主要技术之一。经组织培养，可增加繁殖系数，加快繁殖速度，可生产出种性纯、品质好、产花量高的生产性用苗。在花卉育种过程中，不断的杂交、选种极大地扩展了花卉的花形与颜色，使得花卉在各方面都越来越接近人们的需求。但在同时，也造成了花卉基因类型的高度异质化———子代不易有均一表现。而组培苗是在母株器官、组织或细胞的基础上发展起来的，可以保持母株的全部特性（花形、花色、株形、开花习性、抗逆性等），因而可以根据需要来选择集多种优良性状于一体的植株加以分生，从而得到大量与母株一模一样的植株。 2.培育脱毒苗木采用组织培养技术，利用植株的分生组织不易感染病毒的原理，可以对花卉植株的分生组织进行组织培养来繁殖苗木，防止亲代植株的病害传递给子代，从而达到脱毒的目的。病毒病对长期应用营养繁殖（分株、扦插等）的观赏植物及其生产的危害相当严重。由于观赏植物多采用营养繁殖，如嫁接、分株、压条等方法繁殖时，病毒（及类病毒）则通过营养体及刀具、土壤传递给后代，大大加速了病毒病的传播与积累，导致病毒病的危害越来越严重。据统计，观赏植物的病毒已多达100多种，并且逐年有新增病毒的报道。观赏植物因病毒病大大影响其观赏价值，表现在康乃馨、菊花、百合、风信子等的鳞茎、球茎与宿根类花卉及兰科植物等严重退化，花少且小，花朵畸形、变色，大大影响观赏价值，严重者甚至导致某些品种的灭绝，严重制约观赏植物生产的发展，这也是我国切花品种跨不出国门的原因之一。组培快繁技术已应用到蝴蝶兰的栽培中非洲菊也可以通过组培快繁技术进行繁殖植物组织培养脱毒的原理主要是利用茎尖分生组织不带毒或少带毒。感病植株体内的病毒分布不均匀，其数量随植株部位和年龄而异，越靠近茎尖顶端的区域，病毒的浓度也越低。分生区域无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度，因此生长点含有病毒的数量极少，几乎检测不出病毒。因此，茎尖培养时，切取茎尖的大小对脱毒效果有很大影响，茎尖越小效果越佳，但太小时不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。不同种类的植物和不同种类的病毒在茎尖

金线莲组织培养及栽培技术研究

金线莲组织培养及栽培技术研究吴艺东 (南靖国有林场,福建漳州 363600) 摘要:金线莲属名贵中草药,野生数量极少,通过人工栽培形成规模生产,才能满足市场需要。试验研究了金线莲组培育苗、大棚栽植等过程中应注意的有关影响因素。关键词:金线莲;外植体;组培;移栽;基质;消毒;温度;湿度中图分类号 S567 23+9 文献标识码 A 文章编号 1007-7731(2009)15-46-01 金线莲又称金线兰、金不换、金钱草、鸟人参等,为兰科化叶开唇属的多年生草本植物,是珍稀民间草药,全草入药,味平、甘,常用于治疗小儿惊风高热、糖尿病、高血压、肝炎、风湿性关节肿瘤及其他疑难杂症。金线莲属植物有30多种,一般分布在海拔300~ 1200m的丘陵地;我国福建、广东、广西、海南、四川、贵州、云南均有野生金丝莲。它性喜阴凉、潮湿,尤其喜欢生长在有常绿阔叶树木的沟边、石壁、土质松散的潮湿地带,要求温度18~20 ,光照约为正常日照的1/3,最忌阳光直射。其株高8~20c m,根茎细软,茎圆筒形,先端直立,基部成匍匐状,茎节明显;叶互生具柄,呈椭圆形,叶面有光泽、墨绿色中有金黄脉网,叶背淡紫红色;花为完全花,总状花序具有1~6朵松散的花,花序梗长8~13c m,被柔毛,花苞片淡紫色,卵状披针形。金线莲除药用外,还是一种极具观赏价值的室内观叶珍品。由于其对生态环境要求严格,加之近年自然环境遭受严重破坏,野生金线莲越来越少,因而商品价格居高不下,鲜草价达400元/kg以上,干草价达2000~3000元/kg。因此,国内相关部门经过研究实践,目前人工栽培技术已进入推广阶段。本文就金线莲的组织培养与人工栽植的过程进行试验分析。 1 外植体的建立 1 1 取材于2007年5~10月在南靖县山城镇和南坑镇高山坑沟采集长势良好、无病虫害的野生金线莲植体,取回后置于南靖国有林场小山城工区搭建的阴凉大棚内培养7d左右,以减少其所带的杂菌。 1 2 预处理将金线莲从大棚中取出,用流水将植株洗净后去掉根、叶,再用小刀把叶鞘及顶芽外叶削掉,整个过程不要伤及腋芽。用棉花沾肥皂水擦洗植株并浸泡10m in后用纱布包起,移至超净工作台上。 1 3 消毒用75%酒精振荡10~15s后,再用0 1%升汞水灭菌3m in,无菌水冲洗2遍。最后用12%漂白粉澄清液灭菌10m i n,无菌水冲洗5遍后即可进行接种。 1 4 接种将消毒好的材料切成带1~2个腋芽的茎段,接到诱导培养基上。诱导培养基为1/2M S(即大量元素减半,其他成分不变)+6-BA5m g/L+NAA1m g/L+琼脂粉0 65%+3%蔗糖,p H5 8。培养温度(25 3) ,诱导过程中无光照或低光照(500~600l x) 2 继代增殖培养接种15d后开始萌动。观察发现,顶芽较腋芽更容易萌动,腋芽以丛生生长为主,顶芽则以伸长生长为主。再培养30d后将诱导出的芽切成带1~2个腋芽的茎段,接到增殖培养基M S+6-BA3m g/L+KT2mg/L+NAA0 3 m g/L+0 65%琼脂+3%蔗糖。继代培养前期低光照,随后可适当增强光照(1000~1200l x)。 3 生根培养取茎段粗壮,长势好的金线莲接到生根培养基M S+ I BA1m g/L+KT0 2m g/L+NAA4m g/L+0 65%琼脂+ 3%蔗糖+0 3%活性炭,每天光照10h,光照度1500~ 1200l x。培养10d后开始生根,根不从切口处而从靠近培养基的每个节上长出1~2条,呈肉质状。根比较短且不分支,其上有细密、乳白色后径根毛。培养50d左右,植株长至8c m时可进行室外移栽。 4 大棚搭建和组培苗移栽大棚用毛竹和水管搭成,顶部先覆盖一层薄膜,再在上面用80%遮阳网覆盖,顶高大约3m左右,棚内搭3层盆架,第一层离地面10c m,上两层各离70c m,棚内地面铺15c m高的河沙(上沙下土),用于保湿。移栽一般选择在气温较低的秋冬季节,将促根后的金线莲移至室外进行适应性炼苗后,将苗从瓶中拔出、洗净,种植于阴凉大棚内。栽培基质采用A 腐殖土椰康细沙=1 1;B 松木树皮粉碎加工泥炭土=2 1(每100kg基质加0 5kg进口复合肥)。移植前基质进行日晒消毒,移植后用1 5000倍绿佳喷淋消毒,整个移栽过程要做好喷水工作。 5 移栽后管理把金线莲移至阴凉大棚内专用花盆内,每盆栽植20株左右,大棚内温度控制在20~28 ,使空气相对湿度保持在70%~80%;以后每7d喷1次1/4M S或氨基酸800倍左右喷施来补充养分,以够湿为准;如遇有猝倒病则喷施多茵灵或托布津1000倍液,3个月培养期后出苗,选择根壮叶繁的15c m高优质苗。采后用清水(下转211页) 46安徽农学通报,Anhu iAgri Sci Bu ll 2009,15(15) 作者简介:吴艺东(1971-),男,福建南靖人,林业工程师,主要从事林业资源培育和林木种苗培育工作。收稿日期:2009-06-08

金线莲调研报告

金线莲调研报告 ——,福建漳州、厦门一、金线莲组织培养 1、培养基制作配制培养基南靖本地大量培养及种植金线莲外，香蕉也是本地一个重要农业种植品种。上山下乡路途中常常可见大片香蕉种植基地。本地金线莲培养企业也在培养基配方中加入香蕉作为添加物，此外还有活性炭。其他配方为企业机密，不对外透露。分装加塞灭菌 2、接种过程：母苗→取出→去除叶片、根部，留下茎→剪成茎段→置入新培养基→ 摆好茎段→加塞→移至培养室培养4个月→留作母苗↓↘烘干出售出瓶种植茎段长1cm-3cm,每一茎段留一个茎节每瓶培养基接种25左右个茎段 3、培养培养条件：培养灯光：普通荧光灯，适宜光强为3000lux左右，但有厂家为控制电费成本低于该光强

培养温度：空调控制为25℃左右开灯时间：一般为白天关灯，夜间开灯12h。主要为夜间温度低，控制空调电费成本考虑。培养时间：从接种之日培养至出瓶一般为4个月左右，期间不转接，直至金线莲出瓶。培养目的：留作母苗：继续留在培养室，作为下一次接种的母苗。烘烤干品：冲洗根部培养基后烘烤成干品后出售。出瓶种植并洗瓶：出瓶冲洗培养基后进行种植。清洗时应特别注意不要损伤根部，不可使用毛刷，用水漂洗。 4、残次品：残次品：接种剪下的叶片、根茎及炼苗失败的瓶苗洗净培养基后，厂家也将其烘烤成干品制成茶包低价出售。有的干品在500元/斤左右。 5、典型案例：福建“嘉胜集团”系南靖县乃至福建省最大的金线莲组培集团，该公司有接种室12间，接种工作人员≥200人，金线莲组培苗月产量可达100万瓶。二、金线莲大棚种植 1、炼苗：瓶苗出培养室后一般炼苗15-30d，或者更久。炼苗一般有专用炼苗大棚，瓶苗出培养室后运至炼苗大棚摆放即可，使瓶苗逐步适应外界的光、温、湿等。 2、出瓶：开盖后适当加水于瓶内，然后摇晃，用手指轻轻勾出苗后，洗净培养基。 3、种植：

金线莲组培快繁

金线莲组培快繁技术研究【摘要】目的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体，开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究，并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好；不定芽增殖最佳培养基配方为MS（或B5）+BA3.0 mg/L +NAA0.5～1.0 mg/L，两个月增殖倍数达5.0以上；壮苗最适培养基为1/2MS＋NAA3.0 mg/L＋6-BA 0.5 mg/L＋香蕉提取物20%（或椰子汁20%）；试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份＋2～3 mm粗砂2份（或1份）＋木屑1份（或2份），3个月成活率均达100%，且生长良好。结论采用上述方法，能实现金线莲幼苗的快速繁殖。【关键词】金线莲；快速繁殖；增殖；生长；移栽金线莲Anoectochilus roxburghii（wall.）lindl为兰科开唇兰属多年生草本，别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等，是我国传统珍贵药材，素有“金草”“神药”“乌人参”等美称，在民间应用范围较广，广泛应用于风湿性关节炎、高血压病、糖尿病、肾病等疑难杂症的治疗和强身健体、病后体虚恢复等方面，在浙江、福建、台湾等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材，特别在台湾省更是备受青睐，被称为“药中之王”［1，2］。金线莲种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，自然萌发率和繁殖率低，目前市场上货源主要来自于野生采挖，产品一直处

于供不应求的状况。近年来，随着对其药效学和临床应用研究的深入，对金线莲药用价值的认识进一步提高，其市场货源紧缺的状况更为严峻，野生资源也不断遭到破坏性采挖，以致于处于濒临灭绝之地。本研究旨在采用组织培养技术，解决金线莲种苗来源，加快人工栽培，以保护金线莲野生资源、稳定市场供应。现将有关实验结果如下。 1 材料与方法 1.1 材料无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野生种源，其它实验为继代培养的不定芽及无根幼苗茎段。 1.2 无菌繁殖体系的建立取生长健壮、无病虫害的植株，去叶后放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3～5 min，然后用流水冲洗30 min。在超静工作台前，用75% 酒精湿润5～6 s，放入0.1%的HgCl 溶液灭菌12～13 min，用无菌水冲洗5～6次。将消毒好的茎按上段（具茎尖）、中段和下段（匍匐茎段）切成长约1.5～2 cm，带有1～2个节间的小段，分别接种于MS+6－BA 4.0 mg/L +NAA 0.4 mg/L 培养基上，pH5.6，蔗糖 2.5%，琼脂0.7%。培养条件为：温度(25±2）℃，光照时间12 h/d，光照强度1 500～2 000 lx。 1.3 不定芽诱导 1.3.1 基本培养基对不定芽诱导的影响采用单因素实验，培养基选用MS（Murashige-Skoog）［3］，1/2MS（大量元素减半，其他成分不变），VW(Vacin & Went)，B5（Gamborg·Miller & Ojima）和KC(Knudson C)等5种，分别添加6－BA 4.0mg/L，NAA 1.0 mg/L。 1.3.2 激素对不定芽诱导的影响以MS为基本培养基，添加不

金线莲栽培方法种植方法

金线莲栽培种植方法一、金线莲的生态习性： (1)温度生长适宜温度是20～32℃。金线莲对温度的适应性较强。在栽培过程中，在大棚覆盖下，连续30d的0～5℃的低温对金线莲还无明显伤害。15天34度以上日温，容易造成叶子卷。 (2)水分金线莲性喜湿润。水分是影响金线莲存活的最主要因子。金线莲不可能在气候干燥、土壤缺水的环境生存。金线莲自然分布于湿度大的森林环境之中及一些溪涧附近。人工栽培要让金线莲处于相对湿度在70％以上的小环境下。可以在栽种盆边经常洒水。 (3)光照金线莲属喜阴植物，其光合作用的光饱和点低，适宜光照度为3000lux左右。80%遮阳网+80%遮阳网+1层塑料膜。在自然条件下，上层乔木郁闭度70％～80％，下层植被覆盖度40％左右。 (4)土壤土壤要求疏松、透气、湿润。在自然条件下，腐殖土、黄壤、红壤类型的土壤都有金线莲分布。金线莲宜在偏酸性土壤条件下生根。推荐用优质腐殖质土。二、金线莲人工栽培技术要点金线莲的人工栽培现主要采用大棚栽培。建造大棚应根据金线莲的生长要求，选择在有林有水的山沟，以保证阴凉，有水灌溉，冬季避风保暖，减少散热，保持湿度，且交通便利。人工组培苗常年均可栽植，每平方用专用方盘栽种300棵，栽植宜浅忌深，栽后覆盖干净干燥的栽培介质，喷洒清水，棚内温度保持20～30℃，并注意保湿。田间管理的好坏，关系到金线莲的成活率和生长及产量，应着重做好： (1) 光照棚内透光度的大小与生长发育密切相关，透光以三阳七阴为宜。一般栽培时可用80％遮光网双层控制在3000lx左右。 (2)介质金线莲属兰科又是药用植物，所以必须使用清洁及适宜的栽培介质栽培，适宜的介质除了须具备良好的透气性外尚须良好的保水性。本公司瓶苗健壮，出瓶即可定植。定植时土壤以红壤与黄壤中的砂壤土为主作为栽培介质，质地疏松，偏酸性，适宜金线莲种植。推荐用泥炭土和珍珠岩.

植物组织培养MS培养基配方

植物组织培养MS培养基配方（一）母液配制与保存配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍） 1大量元素配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。表1大量元素母液（配1L20倍的母液）序号成分配方浓度/（mg.L-1）称取量/mg 配1mL培养基吸取量/mL 1 硝酸铵NH4NO3 1650 33000 50 2 硝酸钾KNO 3 1900 38000 3 磷酸二氢钾KH2PO 4 170 3400 4 七水合硫酸镁MgSO4.7H2O 370 7400 5 氯化钙无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。表2微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分配方浓度/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取量/mL 碘化钾KI 0．83 83 10 硫酸锰MnSO4.H2O 22．3 2230 硼酸H3BO3 6．2 620 硫酸锌ZnSO4.7H2O 8．6 860 钼酸钠Na2MoO4.2H2O 0．25 25 硫酸铜CuSO4.5H2O 0．025 2．5 氯化钴CoCl2.6H2O 0．025 2．5 3铁盐母液由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。

植物组织培养的培养基

植物组织培养的培养基中，需要添加糖类作为碳源物质，因此糖类是影响植物组织培养成功与否的关键之一。高中生物教材中明确指出，植物组织培养的培养基中添加的糖类是蔗糖。那么为什么不添加葡萄糖呢？很多资料上解释为蔗糖较葡萄糖便宜，易被植物细胞吸收。其实并非如此。之所以以蔗糖作为碳源，主要有三个方面的原因：（1）同样作为碳源为植物细胞提供能量来源，蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压。配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低于葡萄糖，因此若采用葡萄糖作为碳源，易使植物细胞脱水而生长不良。同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，所以蔗糖形成的渗透压可相对长期的保持稳定。（2）植物组织培养过程中，要时刻注意防止培养基受到微生物的污染。微生物生长所需的碳源最常用的是葡萄糖，一般很少利用蔗糖。因此，采用蔗糖作为培养基的碳源，可一定程度上减少微生物的污染。（3）诱导作用。在培养基成分中，增加生长素的浓度，导致木质部形成，增加蔗糖浓度则导致韧皮部形成。当生长素水平恒定时，2％蔗糖使分化出的全部是木质部，4％蔗糖使分化出的几乎全部是韧皮部，3％蔗糖则可以分化出两者。所以，生长素和蔗糖浓度决定愈伤组织中维管束的类型与数量。因此，在植物组培中要选用蔗糖而不选用葡萄糖。通过细胞膜内外的液体的浓度差来调节当细胞膜内的浓度小于细胞膜外的时候蔗糖救能进入细胞中了植物细胞培养中最常用的培养基的碳源是蔗糖，已知葡萄糖和果糖也能使某些植物生长得很好。植物细胞可以分解蔗糖，蔗糖是由一分子果糖和一分子葡萄糖组成的，蔗糖是可以直接进入细胞的，蔗糖跨质膜从质外体进入细胞是由载体介导并需要消耗能量的质子-蔗糖共运输机制进行的，另外，植物能够利用的某些其他形式的碳源有麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖等。葡萄糖更不稳定，培养基需添加葡萄糖一般都在灭菌后再兑换。实在要添加葡萄糖那么灭菌温度一般控制在108~110左右，120度灭出来的就有一定程度的碳化了。所以用蔗糖更简单动物细胞只能吸收葡萄糖，二糖蔗糖是无法吸收的。以蔗糖为植物培养基碳源有两个原因: 1.抑制杂菌生长.细菌等不能直接以蔗糖为碳源,故可起抑制其生长的作用 2.蔗糖被植物细胞利用机理目还无定论.主要有以下两个学说(1)植物细胞先以次级主动运输的方式在细胞内外形成质子梯度,然后蔗糖就会利用这个梯度被吸收进细胞. (2).植物的细胞壁中含有能分解蔗糖的相关酶,蔗糖先在细胞膜外被分解为单糖,然后这些单糖再以主动运输的方式进入细胞,从而被细胞利用.

金线莲组培快繁技术研究

金线莲组培快繁技术研究【摘要】?? 目的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体，开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究，并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好；不定芽增殖最佳培养基配方为MS（或B5）+BA3.0?mg/L?+NAA0.5～1.0?mg/L，两个月增殖倍数达5.0以上；壮苗最适培养基为1/2MS＋NAA3.0?mg/L＋6-BA?0.5?mg/L＋香蕉提取物20%（或椰子汁20%）；试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份＋2～3?mm粗砂2份（或1份）＋木屑1份（或2份），3个月成活率均达100%，且生长良好。结论采用上述方法，能实现金线莲幼苗的快速繁殖。?? 【关键词】??金线莲；?快速繁殖；?增殖；?生长；?移栽? 金线莲Anoectochilus?roxburghii（wall.）lindl为兰科开唇兰属多年生草本，别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等，是我国传统珍贵药材，素有“金草”“神药”“乌人参”等美称，在民间应用范围较广，广泛应用于风湿性关节炎、高血压病、糖尿病、肾病等疑难杂症的治疗和强身健体、病后体虚恢复等方面，在浙江、福建、台湾等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材，特别在台湾省更是备受青睐，被称为“药中之王”［1，2］。? ????? 金线莲种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，自然萌发率和繁殖率低，目前市场上货源主要来自于野生采挖，产品一直处于供不应求的状况。近年来，随着对其药效学和临床应用研究的深入，对金线莲药用价值的认识进一步提高，其市场货源紧缺的状况更为严峻，野生资源也不断遭到破坏性采挖，以致于处于濒临灭绝之地。本研究旨在采用组织培养技术，解决金线莲种苗来源，加快人工栽培，以保护金线莲野生资源、稳定市场供应。现将有关实验结果如下。? 1??材料与方法? 1.1??材料??无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野生种源，其它实验为继代培养的不定芽及无根幼苗茎段。? 1.2?? 无菌繁殖体系的建立取生长健壮、无病虫害的植株，去叶后放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3～5?min，然后用流水冲洗30?min。在超静工作台前，用75%?酒精湿润5～6?s，放入0.1%的HgCl溶液灭菌12～13?min，用无菌水冲洗5～6次。将消毒好的茎按上段（具茎尖）、中段和下段（匍匐茎段）切成长约1.5～2?cm，带有1～2个节间的小段，分别接种于MS+6－BA?4.0?mg/L?+NAA?0.4?mg/L?培养基上，pH5.6，蔗糖 2.5%，琼脂0.7%。培养条件为：温度(25±2）℃?，光照时间12?h/d，光照强度1?500～2?000?lx。? 1.3??不定芽诱导? 1.3.1??基本培养基对不定芽诱导的影响采用单因素实验，培养基选用MS （Murashige-Skoog）［3］，1/2MS（大量元素减半，其他成分不变），VW(Vacin?&?Went)，B5（Gamborg?Miller?&?Ojima）和KC(Knudson?C)等5种，分别添加6－BA?4.0mg/L，NAA?1.0?mg/L。? 1.3.2??激素对不定芽诱导的影响以MS为基本培养基，添加不同种类及浓度的细胞分裂素和生长素。? ????? 上述实验选取无菌健壮植株，切取长约1～1.5?cm，带有一个节间的茎中段，每处理接10个茎节，重复3次。培养期间定时观察不定芽生长情况，培养60?d后统计不定芽数。其它条件同实验“1.2”项。? 1.4??壮苗培养? 1.4.1??激素对幼苗生长和发根的影响以1/2MS为基本培养基，NAA设1～5?mg/L?5个处理，6－BA设0.5，1.0和1.5?mg/L?3个处理，共15个处理。?

实验一植物组织培养基母液配制的若干关键环节

实验一、植物组织培养基母液配制的若干关键环节目的与要求：熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法. 植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中. 为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1) 表1 MS培养基母液的配制成分规定用量 /mg.L-1 扩大倍数称取量/ mg 母液定溶体积/ml 配1LMS培养基吸取量 /ml 大量元素 KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O 微量元数 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 20 20 20 20 20 1000 1000 38000 33000 7400 3400 8800 22300 8600 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 50 50 50 50 50 1 1

金线莲大棚栽培技术

金线莲大棚栽培技术金线莲别名金线兰、金丝草，为兰科开唇植物花叶兰属多年生珍稀中草药。它在民间使用范围较广，素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称。金线莲别名金线兰、金丝草，为兰科开唇植物花叶兰属多年生珍稀中草药。它在民间使用范围较广，素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称。经有关部门测定发现，金丝莲中氨基酸组成、成分、含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于国产和野生西洋参。目前，我国对金线莲的药用研究仅涉及文献考证、栽培、组培及商品调查等。金线莲全草均可入药，其味平、甘，有清热凉血、祛风利湿、解毒、止痛、镇咳等功效，主治咯血、支气管炎、肾炎、膀胱炎、糖尿病、血尿、风湿性关节炎肿瘤等疑难病症。金线莲属植物有30多种，一般分布在海拔300～1200米的丘陵地；我国福建、广东、广西、海南、四川、贵州、云南均有野生金丝莲。它性喜阴凉、潮湿，尤其喜欢生长在有常绿阔叶树木的沟边、石壁、土质松散的潮湿地带，要求温度18～20℃，光照约为正常日照的1／3，最忌阳光直射。其株高8～20厘米，根茎细软，茎圆筒形，先端直立，基部成匍匐状，茎节明显；叶互生具柄，呈椭圆形，叶面有光泽、墨绿色中有金黄脉网，叶背淡紫红色；花为完全花，总状花序具有1～6朵松散的花，花序梗长8～13厘米，被柔毛，花苞片淡紫色，卵状披针形。金线莲除药用外，还是一种极具观赏价值的室内观叶珍品。由于其对生态环境要求严格，加之近年自然环境遭受严重

破坏，野生金线莲越来越少，因而商品价格居高不下，鲜草公斤价达150元以上，干草公斤价达1200～1700元。因此，国内有关单位经过研究实践，目前人工栽培技术已进入推广阶段。人工栽培金线莲主要是采用大棚栽培。建造大棚应根据金线莲的生长要求，选择在有林有水的山沟，以保证阴凉，有水灌溉，冬季避风保暖，减少散热，保持湿度，且交通便利。大棚的透光度在40％～50％，大棚结构以北高南低的斜面为宜，棚前柱高1.5米，后柱高1.2米，柱距2～5米，顶铺约5厘米厚的茅草，上盖一层塑料薄膜，棚内畦高30～50厘米，畦宽1.2米。也可在棚内搭棚梁，进行立体种植，人工组培苗常年均可栽植，每平方米500～1000株，栽植宜浅忌深，栽后覆盖干净干燥的苔藓，喷洒清水，棚内温度不超过25℃，并注意保湿、保温。云南省和广东均可供应大面积生产所需的组培苗。田间管理的好坏，关系到金线莲的成活率和生长及产量，应着重做好： 1、松土除草。 2、施肥。栽植后的生长阶段，通常施用豆饼、猪粪、牛马粪等农家肥，并在每100公斤肥液中加少量的硫酸亚铁，以促进叶色浓绿而富有光泽。在生长季节，每隔半个月还可用0.3％尿素加0.2％磷酸二氢钾溶液喷一次，连喷4次。施肥时切忌污染金线莲叶片，不慎污染，应立即喷清水。 3、适时浇水，提高土壤、空气湿度。 4、搭盖遮阴棚，调节透光度。棚内透光度的大小与生长发育密

金线莲

人工培植金线莲方式因金线连分布于海拔500-1500公尺的阔叶林床，且生长缓慢，所以在栽培中温度、湿度，是成功与否的重要因素。 1、温度金线连之发育、生长、开花与结果都有一定的温度。在金线连栽培环境中，温度的，高于影响甚巨，温度过低则生长缓慢 ( 9 ) 30℃或低于15℃则不利于生长，若低于10℃，须加设施保温，适宜的栽培温度为20 ~ 25℃，栽培场所温度过高时，可利用遮阴、浇水、加强通风或以蒸发冷却方式如喷雾或使用水墙等方法以将温度降下来。 2、湿度

空气湿度高有住于生长并提高植株鲜重，但栽培介质不能过湿，过湿易导致茎腐病，特别在高温( 28-32℃ )、高湿下，容易有镰刀菌感染进而发生猝倒病，这是平地夏天不能栽培成功的主要原因。茎腐病(stem rot ) 之病源菌为Fusarium oxysporum，基腐病(basal rot) 为Pythium ultimum ，目前以茎腐病发生最为严重，。占病害发生之 90% ( 8 ) 3、光度金线连属于阴性植物，原生于森林内树下半遮阴的地方，因此适合金线连栽培的光度，约为正常日光量的1/3，最忌夏秋中午左右之直射阳光，此将引起日灼损伤叶片，一般而言，若光度高于5000lux 则会使新生叶片白化，低于 1000lux将使植株纤细徒长，一般栽培时可利用75%遮光网双层控

制在4000lux 左右，如此除了具有遮阴效果外，也利于湿度的保存及通风。海拔1000公尺左右的地区栽培金线连，由于温度适宜，因此夏天的生产量几乎是平地的两倍，惟冬天来螳劦釭`意寒害的发生，保温设施中尤以隧道式阴棚较易保温，平地栽培场若亦须采用此方式栽培，应将阴棚架高一些，以利于通风。 4、栽培介质金线连属地生兰又是药用植物，所以必须使用清洁及适宜的栽培介质栽培，适宜的介质除了须具备有良好的透气性外尚须有良好的保水性，目前所使用的介质包括有蛇目屑、碳化稻壳、蛭石、真珠石、腐叶土及水苔等，栽培中依不同的介质混合比例，来调整介质的通气性及保水性，苗株刚由瓶苗移出时最好以2号蛭石栽植，因

植物组织培养的一些注意事项

植物组织培养的一些注意事项一、常用培养基主要特性 1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER 等培养基。其中MS 培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高, 微量元素种类齐全, 其养分数量及比例均比较合适, 广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。LS、BM、ER 培养基由MS 培养基演变而来。 2 、硝酸钾含量较高的培养基包括B5 、N6 、LH、GS 等培养基。 ①B5 培养基B5 培养基除含有较高的钾盐外, 还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫胺素, 较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。 ②N6 培养基N6 培养基( 朱至清等1975 ) 系我国学者创造, 获国家发明二等奖, 适用于单子叶植物花药培养, 柑橘花药培养也适合, 在楸树、针叶树等的组织培养中使用效果也好。 ③SH 培养基是矿盐浓度较高的一种培养基, 其中铵与磷酸是由磷酸二氢铵 ( NH4 H2 PO4 ) 提供的, 这种培养基适合于某些单子叶及双子叶植物的培养。 3 、中等无机盐含量的培养基 ①H 培养基本培养基大量元素约为MS 培养基的一半, 仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低, 微量元素种类减少, 而含量较MS 为高, 维生素种类比MS 多。适于花药培养。 ②尼奇培养基(Niotsch 1969 ) 此培养基与H 培养基成分基本相同, 仅生物素比 H 培养基高10 倍。也适合于花药培养。 ③米勒培养基(Miller 1963 ) 此培养基和Blaydes(1966) 培养基二者成分完全相同。适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。 4 、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。有以下几种: ①改良怀特培养基(White 1963 ) ②WS 培养基(Wolter & Skoog 1966) ③克诺普液( Knop 1965 ) 花卉培养上用得多。 ④贝尔什劳特液(Berthelot 1934) ⑤HB 培养基( Holley & Baker 1963) 此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎尖培养中效果良好。其成分是大量元素比1/ 2 克诺普( Knop ) 液稍多, 微量元