ABO血型鉴定操作规程
ABO血型定型编号：□□□□/J 04-2016
操作规程版号；2016-A版第0次修改
1.目的；为确保实验结果的准确，特别订本规程。
2.范围；适合进行ABO血型鉴定相关科室的全体工作人员。
3.职责；
3.1科主任负责本规程的培训，考核及督促实施。
3.2科室工作人员按文件进行操作并建立相关记录，为实验结果的准确性负责。
3.3全科人员熟练掌握原理及操作。
4.原理
根据红细胞表面有无A抗原和B抗原，将血分为A型、B型、O 型和AB型四种。可利用红细胞凝集试验、通过正、反定型准确鉴定ABO血型。正定型是用已知抗A和B分型血清来测定红细胞表面有无相应的A抗原或B抗原；反定型是用已知的A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B。反定型中使用O细胞是为了检测抗A、抗B以外的不规则抗体。
5,试剂
5.1抗-A、抗B分型血清。
5.2～5%、B、O、试剂红细胞。
6试剂的质量控制；
6.1每个工作日在实验开始前，对试剂进行外观检查，包括；有效期、有无渗漏等，试剂红细胞无明显溶血。
6.2每个工作日在实验开始前，对所有的抗-A、抗-B、试剂红细胞按《血型试剂确认操作规程》进行特异性验证。
6.3将试剂的厂家、批号及检测结果记录到《血型试剂质量控制记录?中。
7.工作程序：
7.1正定型：取洁净小试管2支，分别标记“抗A”、“抗B”，分别滴加抗A、抗B试剂1滴于试管底部，再分别加入受检者2%~5%红细胞1滴，混合。
7.2反定型：另取洁净小试管3支，分别标记“A C”、“B C”、“O C”，各加入受检者血清2滴于试管底部，再分别加入A、B和O型2%~5%试剂红细胞1滴，混合。
7.3以3400转/15秒（或1000转/1分钟）离心将试管轻轻摇动，仔细观察细胞扣有无凝集或溶血现象。观察结果时既要看有无凝集，也要注意凝集强度，这将有助于亚型等的发现。
8.结果判定:凝集强度的判断依据《红细胞凝集强度判读标准》进行。
血型
正定型反定型
抗A 抗B A C B C O C
A + - - + -
B - + + - - O - - + + - AB + + - - -
9正反定型不一致的原因；有技术问题或红细胞和血清本身问题，常见者有以下情况；
分型血清效价太低，亲和力不强。
红细胞悬液浓度过高或过低，抗原抗体比例不适当（出现前带或后带现象），使反应不明显误判为阴性反应。
受检者红细胞表面抗原位过少或抗原性减弱等。
受检者血清蛋白紊乱，常引起红细胞呈缗钱状排列。
受检者血清中减弱或缺乏应有的抗A或抗B.
各种原因引起的红细胞溶血，误判为不凝集。
由细菌污染或遗传因素引起，多凝集和全凝集，往往是正反定型不符的原因。
血清中有ABO血型系统以外抗体，如Ｉ（冷抗体）等，常干扰定型。观察细胞扣时手法不当，未发现弱凝集。
如发现ABO正反定型不一致，首先要重复做实验一次（必须用试管法），严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解读实验结果，就可以解决问题，对一些疑难问题必须进一步鉴定。
10 相关文件
10.1 ?中国输血技术操作规程?
10.2 ?临床输血技术更规范?
10.3 ?青海省医疗机构输血科（血库）标准化建设验收评审细则?10.4 ?血型试剂确认操作规程?
11 记录
11.1 血型试剂质量控制记录。
11.2 血型检定及结果登记。
2016.4.5
Rh血型鉴定编号：□□□□/J 04-2016
操作规程版号；2016-A版第0次修改
1.目的；为确保实验结果的准确，特制订本规程。
2.范围；适合进行Rh血型鉴定相关科室的全体工作人员。
3.职责
3.1科主任负责本规程的培训、考核及督促实施。
3.2科室工作人员按文件进行操作并建立相关记录，为实施结果的准确性负责。
3.3全科人员熟练掌握原理及操作。
4.原理
Rh血型系统主要有五种抗血清，即抗D，抗C，抗c，抗E，抗e。用五种抗Rh分型血清来检查红细胞抗原。在临床输血中，一般只做D 抗原的鉴定，凡被检红细胞和抗-D血清凝集着为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。
5试剂，抗-D血清。
6.试剂的质量控制：每个工作日在实验开始前，对试剂进行外观检查，包括：有效期、有无渗漏等；对所有的抗-D血清按《血型试剂确认操作规程》进行特异性验证。
将试剂的厂家、批号及检测结果记录到《血型试剂质量控制记录?中。
7.工作程序：
7.1取洁净小试管1支标识“抗-D”，加抗-D试剂 1滴于试管底部，再加受检者2%~5%红细胞悬液1滴，混合。
7.2以3400转/15秒（或1000转/1分钟）离心，肉眼观察细胞扣，根据凝集情况判断结果。
8.1结果判断：凝集者为Rh（D）阳性，不凝集者再次检测，再次检测不凝集者为Rh（D）阴性。
8.2凝集强度的判断依据《血型试剂确认操作规程》
9.注意事项：
9.1红细胞悬液浓度不能过高或过低，抗原抗体比列不当会出现前或后带现象，出现假阴性结果。
9.2试剂或被检血清和红细胞的比例要适当，否则会漏检阳性结果。
9.3 观察细胞扣时手法要得当，防止用力混匀而漏检弱阳性。
10. 相关文件
10.1 ?中国输血技术操作规程?
10.2 ?临床输血技术规范?
10.3 ?青海省医疗机构输血科（血库）标准化建设验收评审细则?
11. 血型检定及结果登记。
不规则抗体筛选实验编号：□□□□/J 04-2016操作规程版号；2016-A版第0次修改
1. 目的：为确保实验结果的准确，特制订本规程。
2. 范围：适合输血科（血库）全体工作人员。
3. 职责
3.1 科主任负责本规程的培训、考核及督促实施。
3.2 科室工作人员熟练掌握原理及操作。
4.原理
红细胞血型抗体除了抗A，抗B外，可能含有潜在的其他不规则抗体，而导致输血反应等问题。血型抗体分子的物理特性与血清学的反应性之间有着直接的关系。抗体主要分为IgM和IgG抗体，IgM抗体长度大于35.7nm，在盐水介质中能直接相连相应的红细胞，使之发生肉眼可见的凝集反应，IgG抗体长度大于24nm，在盐水介质中不凝集，而只能致敏相应抗原的红细胞，所以用3人份基本含盖常见抗原的O型红细胞，在不同的介质中检测，（盐水介质、凝聚胺介质或抗人球蛋白介质等）只要血清中存在常见的IgM和IgG不规则抗体，在不同的介质中就会和筛选细胞发生凝集。
5.仪器、材料与试剂
5.1 凝聚胺试剂
5.2 筛选细胞
6. 试剂的质量控制：
每个工作日在实验开始前，对筛选细胞的外观质量进行检查，无明显溶血，在有效期内；同时记录试剂厂家和批号。
7. 工作程序及结果判断：
7.1 取试管3支，分别标记“1”、“2”、“3”、各管加患者血清2滴，分别加入1、2、3号筛选细胞各1滴，混匀。以3400转∕离心15秒或（1000转∕离心1分钟）。
7.2 观察结果，3号管中有1管以上阳性者，为抗体筛选实验阳性，说明被检血清中存在IgM类抗体，要送血站进行抗体鉴定。
7.3 3管均为阴性，表示在盐水介质中抗体筛选阴性，说明被检血清中不存在1gM类抗体。再将3管继续做聚凝胺实验。
7.4在聚凝按介质中，3管中有1管以上阳性者，为抗体筛选试验阳性，说明被检血清中存在1gG类抗体，要送血站进行抗体鉴定，
7.5 3管均为阴性，表示在2种介质中抗体筛选均为阴性，说明被检血清中不存在不规则抗体。
8 相关文件。
9.1《中国输血技术操作规范》
9.2《临床输血技术规范》
9.3《青海省医疗机构输血科（血库）标准化建设验收评审细则》记9记录
10.1交叉配血实验记录报告单起草人；
交叉配血实验编号：□□□□/J 04-2016
操作规程版号；2016-A版第0次修改
1。目的；为确保实验结果的准确，保证安全输血，特制订本规程。
2. 范围：适合输血科（血库）全体工作人员。
3. 职责：
3.1 科主任负责本规程的培训、考核及督促实施。
3.2 科室工作人员按文件进行操作并建立相关记录，为实验结果的准确性负责。
3.3 科室工作人员熟练掌握原理及操作。
4 原理
4.1 交叉配血实验分“主侧”即病人血清与献血者红细胞相容性实验；“次侧”即献血者血清与病人红细胞的相容性实验。分别用盐水介质法检测IgM类不规则血型抗体引起的交叉配血实验不合，用凝聚胺介质法检测IgG类不规则血型抗体引起的交叉配血实验不合。
4.2 凝聚胺介质法中低离子介质可以促进红细胞和相应抗体的反应，在加入凝聚胺后，带正电荷的凝聚胺可以中和红细胞表面的负电荷，促进红细胞之间互相接近，引起的红细胞产生非特异性的凝集反应。如果是由特异性抗原抗体反应引起的凝集，则会在加入再悬液时散开。
5.材料与试剂
聚凝按试剂盒。
5.2抗A.抗B分型血清。
5.3 2-5%A.B.O试剂红细胞。
5.4 抗-D血清。
6.试剂的质量控制；
聚凝胺实验过程中，加入重悬液之前如无凝集时，将阳性对照血清代替待检血清按7.3操作进行质量实验，结果出现凝集，证实实试剂有效。
7工作程序；
7.1查看输血申请单，核对申请单与血样管上姓名。科室，床号，住院号，血型等内容无误，方可进行配血。
7.2依据《ABO血型定型操作规程》，《Rh血型定型操作规程》进行献血者的受血者的ABO血型（正反定型）和Rh血型的复查。
7.3盐水介质配血
7.3.1取试管2支，分别标记“主侧”、“次侧”，“主测”管加患者血清2滴，献血者2-5%红细胞悬液1滴；“次侧”管加献血者血清2滴，患者2-5%红细胞悬液1滴，以3400转/离心15秒或（1500转/离心1分钟），以肉眼观察细胞扣，有无凝集或溶血现象。
7.3.2 主次管凝集或溶血的要查找原因。
7.3.3 主侧和次侧均无凝集及溶血现象，为盐水介质配血结果阴性，再将原主次管继续进行凝聚胺介质法配血。
7.4 凝聚胺介质配血
7.41 各管加LIM液0.7ml(14滴)，混匀，加凝聚胺试剂2滴，混匀
后3400rpm离心15秒，弃取上清液，不要沥干，轻摇观察由凝聚胺引起的红细胞凝集。
7.42 有凝集时各加入2滴垂悬液轻摇看结果：由凝聚胺引起的非特异性红细胞凝集应在1分钟内完全散开，若是由免疫性抗体引起的凝集，反应则不会完全散开。
7.4.3 凝聚胺介质配血阳性者，疑似由IgG抗体造成，需进一步抗体鉴定。
8注意事项
8.1若红细胞中含有较多血清或血浆则需用盐水洗涤细胞一次。
8.2若加凝聚按试剂后未见红细胞凝集需重做，可能是患者使用肝素类药物中和聚凝胺所致，需多加1滴poiybrene（凝聚胺）试剂以中和肝素。
8.3观察盐水介质配血结果后，在阴性情况下再进行凝聚胺介质配血，如盐水介质配血结果为阳性，则勿需进行凝聚胺配血。
8.4患者血清中纤维蛋白没完全析出时，要放置到37水浴箱中15分钟，然后再离心。以防未完全析出的纤维蛋白影响判断结果。
9 结果判断：凝集强度的判断依据?血型试剂确认操作规程?
10. 相关文件
10.1 ?中国输血技术操作规程?
10.2 ?临床输血技术范围?
10.3 ?青海省医疗机构输血科（血库）标准化建设验收评审细则?10.4 ?台湾贝索公司凝聚胺介质试剂盒说明书
11 记录
11.1 交叉配血实验记录报告单
血液入库、管理编号：□□□□/J 04-2016
操作规程版号；2016-A版第0次修改一、血液领取、接收、入库、核对、账目登记
（一）医院临床用血均须由所在行政区域卫生行政部门指定的血站提供，不得自行采集异体血液。
（二）到血站取血时，医务人员须持单位盖章的取血介绍信（须注明血型、血液品种、数量、规格及取血人姓名）前往、专车运送、专人保管、用冷链设施贮存。
（三）输血科（血库）接到血站血液入库前要认真核对验收，仔细检查每袋血液是否有溶血、重度乳糜、破损、污染等情况。核对项目包括：规格、数量、运输条件、物理外观、血袋密闭及包装是否合格、标签填写是否清楚齐全（供血机构名称及其许可证号、献血编号或条形码、血型、血液品种、容量、采血日期和时间或制备日期和时间，失效日期及时间、储存条件）。
（四）记录交接时间和运输温度或状态，红细胞2~10℃、血小板20~24℃，血浆和冷沉淀凝血因子观察血袋的外观保持冰冻状态即符合要求。
（五）对符合质量要求的血液进行登记入账，登记的内容包括：每袋血液的血型、品种、规格、数量及完整的献血编号。
二、血液的储存及库存管理
（一）血液储存间应具有防火、防盗和防鼠等措施，未经授权
人员不得进入。
（二）血液的保存设备应运行可靠，温度均衡，有报警装置。
（三）对保存状态进行监控，包括持续的温度及其它保存条件的监测，确保血液始终在正确的条件下保存，每天至少2次检查并记录血液储存的温度。
（四）按A、B、O、AB血型将全血、血液成分分别储存于血库专用冰箱不同层内或不同专用冰箱内，并有明显的标识。
（五）存放血液时须按采血日期的先后、血型、品种的不同分别竖直放置，不得混放，以利观察血液外观，并与冰箱内壁保持一定的距离。
（六）全血和红细胞须储存在2℃~6℃之间，血浆和冷沉淀凝血因子应储存在≤-18℃。血小板原则上在最短时间内进行发放输注，如需保存需放在合格的20~24℃专用血小板振荡保存箱。
（七）应根据临床需求制定用血计划，保证一定血液的库存，既能满足临床常规用量的供应，又能最大限度控制血液的过期报废。
（八）发血时，应执行先进先出的原则，避免血液超过保存有效期，以防止不必要的浪费。
（九）血液一经出库不能退回输血科（血库）。过期的血液及成分不能使用。
（十）每日上班时间值班人员之间交接以下内容并建立交接记录：
1.盘点血液的实际库存和账目库存，做到帐物相符；
2.当日的发血情况；
3.设备的运行状况；
（十一）每月与血站进行所有血液品种的出、入库账目核对，核对无误后，上报科主任、院领导、财务科。
（十二）当储血冰箱的温度自动控制记录和报警装置发出报警信号时，要立即检查原因，及时解决并记录。
（十三）储血冰箱内严禁存放其它物品。
血型相关试剂质量控制编号：□□□□/J 04-2016操作规程版号；2016-A版第0次修改抗-A、抗-B、抗-D试剂、ABO试剂红细胞、抗体筛选细胞、聚凝胺介质试剂盒在领入输血科（血库）的使用前进行试剂质量控制,若相关实验过程中试剂存在疑似效价降低等质量问题时需再次进行质量控制。
一、外观检查：每次领入的血型相关试剂都须进行外观检查，包括：有效期、有无渗漏等，试剂红细胞无明显溶血。
二、抗-A、抗-B、抗-D试剂：
（一）特异性鉴定：对所用的抗-A、抗-B、抗-D分别用ABO试剂红细胞和Rh（D）阴性和阳性红细胞，按如下模式依据《ABO血型鉴定》和《Rh（D）血型鉴定》进行检测，预期凝集强度达到“4+”为合格。
（二）效价测定：
1、抗-A取10支试管分别标记“1、
2、3……10”，每管加生理盐水50ul，第1管中各加入抗-A 50ul，混匀，移取50ul至第2管中，依次稀释至10管，取出50ul弃去；
2、各管加入50ul 2%~5% A细胞混匀，3400转/15秒离心；
3、抗-B、抗-D同法。
4、结果判定:肉眼观察凝集为1+的最高稀释度，出现凝集的最高稀释度的效价是实验的结果。
红细胞凝集强度判读标准
（三）抗-A、抗-B试剂亲和力实验：取血型鉴定卡，分别滴加抗-A、抗-B试剂50ul，再吸取10%相应红细胞悬液50ul，置于血清滴旁边，用竹签将血清与红细胞混合，手持鉴定卡慢慢转动，同时计时，记录开始出现凝集的时间，≤15秒，3分钟内凝块＞2 mm2者为合格。
三、ABO试剂红细胞的质量控制依据《试剂红细胞的制备》进行。
四、聚凝胺介质试剂盒:用已知IgG抗-D和已知Rh（D）阳性O 型红细胞依据《交叉配血试验》聚凝胺介质操作方法进行实验，结果阳性为合格。
输血反应实验室检测编号：□□□□/J 04-2016
操作规程版号；2016-A版第0次修改首先核对《临床输血申请单》、血样标签、血袋标签、交叉配血试验记录和报告单，核对受血者及供血者ABO血型、Rh（D）血型。
一、对临床科室抽取加肝素抗凝剂的受血者血液离心，观察
血浆颜色。
二、对用于交叉配血的受血者与供血者血样、新采集的受血
者血样、血袋中血样，重测ABO血型、Rh（D）血型、交叉配血试验（包括盐水介质和聚凝胺介质），并进行抗体筛选实验，如发现特殊抗体，做进一步鉴定。
三、对新采集的受血者血样进行直接抗人球蛋白试验。
四、同时测定血浆游离血红蛋白含量、血清胆红素含量、血
浆游离血红蛋白含量、血浆结合珠蛋白。
五、尽早检测血常规、尿常规及尿血红蛋白。
六、必要时，溶血反应发生后5~7小时测血清胆红素含量。
七、如怀疑细菌污染性输血反应，无菌操作抽取血袋中血液
做细菌学检验。
血样采集与送检、编号：□□□□/J 04-2016
交接核对操作规程版号；2016-A版第0次修改
一、血样采集与送检
（一）确定输血后，医护人员尽早持《临床输血申请单》和贴好标签的试管到病房当面核对“患者科室、床号、姓名、性别、年龄、住院号、血型和诊断等”项目，无菌操作采集血样。（血样标签的内容至少包括“受血者姓名、科室、床号、住院号及采样日期和时间”）。
采集的血样应满足以下要求：
1、采集的血样要能够恰当地反映受血者当前的免疫学状态。受血者配血试验的血标本必须是输血前3天之内的。如果24小时后受血者需要继续输注红细胞，再次申请输血时，应该重新采集一份血样进行交叉配合试验。
2、若受血者已用肝素治疗，应在《临床输血申请单》“须注明的其它事项”一栏中注明；
3、右旋醣酐等中高分子药物可干扰配血，应在药物输注前采集血样备用。
（二）血样采集后，医护人员及时将受血者血样与《临床输血申请单》于预定输血日期前送交输血科（血库）备血。
（三）接收人与送检人双方逐项核对血样标识和《临床输血申请单》内容，如发现存在“血样八不收”之一者应退回，由采样护士
血型鉴定
ABO、Rh及MNSs血型鉴定用抗体研究进展 来源：本站原创作者：陈琦1张嘉敏2李厚达1朱自严2（1．扬州大学医学院生理教研室，江苏扬 州 225001； 2．上…发布时间：2009-12-2 红细胞血型系统非常复杂，ABO血型之后，目前已发现了29个血型系统，700余种血型抗原。血型抗原的正确鉴别在保证输血安全、调查人种分布、建立稀有血型库及许多疾病的诊断、分型甚至治疗方面都有极其重要的作用［1］。抗原的鉴别有赖于相应抗体的获得。血型鉴定用抗体的制备也经历了多克隆、单克隆及基因工程抗体3个发展阶段。现将ABO、Rh及MNSs血型鉴定用抗体研究进展综述如下。 1 ABO血型鉴定用抗体 1.1ABO抗血清人源抗血清即多克隆抗体是人体内天然存在的或免疫反应检测到的抗体，ABO血型抗血清属于天然抗体，于出生后2—8个月开始产生，8—10岁达高峰。将通过全血制备的抗血清用于ABO血型的鉴定，方法简单、血凝明显、特异性强，长期以来一直是国内外血型检测机构及医院使用的ABO定型试剂。但它们存在的突出问题是：需耗费大量血液、不能做到标准化、难以规模化生产［2］。基于以上原因，科学家们一直希望找到可代替人抗血清用于ABO血型鉴定的理想试剂。杂交瘤技术问世，使这一愿望成为现实。 1.2ABO mAbs 1975年杂交瘤技术发明以后，Voak(1980)和Sachs (1981)等先后建立了能分泌抗 A和抗 B mAbs的杂交瘤细胞株，并将其成功用于ABO系统的血型鉴定。此后，其发展十分迅速，各国均建成了多株能稳定分泌抗 A、抗 B mAbs的瘤株细胞，为保证不同来源的ABO血型mAbs定型试剂质量的稳定性、结果判断的统一性及使用有效性，1987年，国际输血协会(ISBT)在第一届“红细胞及相关抗原单克隆抗体国际专题会议”中，对ABO 血型mAbs制品的生产、使用提出了明确的质量标准和规范［3］。2000年，我国也出台了相应的政策法规，加强了质量管理与监督。目前高效价、质量稳定的ABO血型mAbs定型试剂，已完全取代抗血清，广泛用于ABO血型的临床鉴定［4］。值得注意的是：用mAbs 进行ABO血型鉴定时会有漏检、假阳性、假阴性现象的发生，对此，国内外文献均有报道。1996年，Garatty等［5］报道了1例使用mAbs定型试剂，误将含获得性B抗原的A型患者错定为AB型，导致患者因错输AB型血死亡的病例；国内孙爱农等［6］也有类似发现。究其原因，主要是因为不同个体的红细胞A、B抗原，尤其是亚型决定簇的结构和数量存在不均一性，1个mAb只识别1个抗原结合位点，因此用单一mAb制品进行复杂血型鉴定时，可能导致误判。因此专家建议：可将抗原结合部位不同的mAbs混合组成检测试剂盒，进行复杂血型的鉴定，以确保输血治疗的安全性。 1.3基因工程抗体近年来，基因工程抗体的制备成为抗体工程的重要发展方向。Siegel 等［7］用噬菌体抗体库技术获得了针对ABO血型抗原的Fab和ScFv抗体，国内王长军等［8］也制备出A抗原的ScFv抗体。与mAbs相比，这些基因工程抗 A、抗 B在反应亲合力和效价等方面均未达到临床使用的要求，因此，有关这方面的研究进展不大。 2 Rh血型鉴定用抗体 在Rh血型系统中，常见的有D、C、E、c、e5种抗原，其中D抗原性最强，因此，一般制备的Rh抗体以抗 D为主。 2.1Rh抗血清与ABO血型系统不同，Rh阴性个体血清中没有天然的Rh抗体。只有在接受了Rh阳性血后，Rh抗体才能产生。传统的Rh抗体以Rh阴性志愿者为主要来源，即
ABO 血型鉴定操作规程
1.0 原理 ABO 血型鉴定操作规程 2.0 3.0 4.0 5.0 5.1 5.2 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 7.0 7.1 根据红细胞上和血清（或血浆）中有无 A 抗原和（或）B 抗原及其抗体，将血型分为 A 型、 B 型、AB 型及 O 型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定 ABO 血 型。正定型正定是指用已知抗-A、抗-B 血清来检测受检红细胞上有无相应的 A 抗原和（或） B 抗原；反定型反定是指用已知 A1型、B 型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相 应的抗-A 和（或）抗-B。 原始样品要求 5 mL 静脉全血。 样品容器和添加剂 真空试管，EDTA.K2抗凝/普通试管，不抗凝。 检测环境要求 温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。 所需材料和设备 设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。 材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水 （NS）、干净空试管。 检测操作过程 将受检标本以 1000g 离心 5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用 NS 洗涤三次后，配成 3%～5%红细胞悬液。 取 6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。 在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各 50 L ，其余管加入受检血浆/血清各100 L 。 在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者 3%～5%红细胞悬液各 50 L ，摇匀。 在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入 A1、B、O 红细胞试剂各 50 L ，摇匀。 1000g 离心 15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。 根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在 4℃、37℃下观察结果。 结果判断 凝集强度判断标准见表 1。 表1 凝集强度判断标准表
血型鉴定
ABO血型试验(正反定型) 一原理 利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。 二试剂和材料 1．抗-A（B型血），抗-B（A型血）及抗-A+B（O型血）分型血清。2．5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。 3．受检者血清。 4．受检者5%红细胞盐水悬液。 三操作（玻片法） 1．取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格内，再加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。 2．另取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。 3．将玻片轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集反应。也可用低倍镜观察结果。 四结果判定：见表1 表1 ABO血型正反定型结果 五注意事项 1．试管、滴管和玻片必需清洁干燥，防止溶血。 2．操作中应先加血清后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。 3．为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温内进行试验。
4．标准抗血清必须符合标准，不要长期放在室温，以免污染和孳长细菌，等渗生理盐水必须等渗、新鲜、无微生物孳生。 5．观察结果要仔细，微弱凝集、或肉眼观察未凝集的标本，要用显微镜观察。 注意特异性凝集与继发性血液凝固、串钱状形成和异物的区别。 六血型鉴定中常见的假阳性反应 1．红细胞串钱形成：红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，称为串钱形成，又称假凝集。可见于血浆蛋白紊乱、血沉加快的各种病例或实验中温度过高，作用时间过长，致水分蒸发，血清浓缩。可在观察结果前，再加等渗盐水1滴，彻底混匀，串钱状红细胞因血液稀释而散开。也可用高倍镜仔细观察凝集块的形态和用洗涤后和红细胞配制悬液。 2．寒冷凝集：在较低温度出现的凝集称为寒冷凝集。多数正常人的血清在0~2oC 时能凝集本人的红细胞，又称自家凝集。这种凝集是可逆的，在0-2oC时作用最强，20oC时可消失。但在支原体肺炎、自免溶贫、肝硬化、系统性红斑狼疮等患者血清中，可以出现高效价的病理性自身冷凝集抗体，能与本人及其它各型人的红细胞发生凝集。其最适反应温度是低温，一般在25-30oC凝集作用即减弱。克服方法：被检红细胞在配制悬液前，先用37oC等渗生理盐水洗涤，必要时试验操作可在37oC条件下进行，或在37oC水浴中反复观察几次，报告时要注明有寒冷凝集现象。 七血型鉴定中常见的假阴性反应 1.标准血清效价太低亲和力不强: 抗血清保存方法不当或贮藏时间过长而致 效价减弱是最常见原因。 2.被检红细胞敏感度过低: 如新生儿红细胞抗原形成不足,老年人红细胞敏 感性下降,或红细胞标本贮藏时间过久(红细胞敏感性在血块中下降相对较快),易将A亚型错定为O型。 3.红细胞悬液过浓或过淡: 抗原抗体比例适当时反应最明显。如红细胞悬液 液过浓时,标准血清中的抗体全部被吸收,呈后带现象,以致凝集不明显或不凝集。红细胞浓度太淡,抗体浓度相对增高,呈前带现象而不易凝集,或凝集很弱,未被发现。克服方法: 按规定配制红细胞悬液,悬液太浓时可多加1滴血清,转动玻片,增加红细胞接触的机会.微弱凝集必须用显微镜观察。 4.溶血反应: 红细胞抗原与相对应的免疫抗体相遇,在补体存在时就可发生 溶血。溶血反应与凝集反应在血型鉴定上意义相同,都是抗原抗体反应。克服方法: 玻片法看结果时,片底最好衬以白纸,溶血时液滴边缘呈透明红色,试验前后两次镜下观察,可发现红细胞减少或消失。作血型发现溶血,要换好的等渗盐水和洗涤后红细胞重新配制悬液来作血型鉴定。
血型鉴定操作规程
血型鉴定操作规程 一．玻片法（仅适用于正定型） 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 5.1用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域； 5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试
剂； 5.3再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬 液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）； 5.4用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物 均匀涂开，使其覆盖大约直径20mm的面积； 5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。 6. 结果判定： 6.1凝集或发生溶血为阳性结果； 6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果； 6.3对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 二、纸板法 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。
微柱凝胶法血型鉴定操作规程精选版
微柱凝胶法血型鉴定操 作规程 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】
微柱凝胶法 1标本：EDTA-K2 抗凝血2.0ml 2原理： 2.1人红细胞抗原与相应抗体发生特异性免疫反应（其本质为血凝反应）； 2.2检测系统是在微柱中（载体）装有的介质凝胶； 2.3凝胶间隙具有分子筛作用。凝集的红细胞（结合的）被留在微柱上面成带状或凝集颗粒散布凝胶中间。未凝集的红细胞（即未结合、游离的）通过离心后沉入微柱的底部； 2.4微柱凝胶中所含的特异性单克隆抗A、抗B试剂检测红细胞上相应的血型抗原，从而鉴定红细胞的血型。 3操作： 3.1在A1孔悬空加入50ul标准A1红细胞，在B孔悬空加入50ul标准B红细胞，再在两孔中各加入50ul样品血浆。 3.2在A、B、D、C、E、Ctrl六个孔内分别悬空加入5%病人红细胞悬液10ul 3.3将卡放到戴安娜专用离心机中离心9分钟 3.4离心结束后在白色背景前观察结果 4结果判断： A孔阳性B孔阴性为A型;A孔阴性B孔阳性为B型;
5.注意事项 5.1严格按操作规程操作，认真核对标本并作好标记。 5.2应先加红细胞悬液，然后再加血浆。 5.3为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。 5.4严格控制离心速度和时间，防止假阳性或假阴性结果。 5.5未用的微柱凝胶免疫检测卡应入室温保存，用完后放4℃冰箱保存1周。 5.6判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。 6.方法评价 卡式法定型使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好，但费用昂贵，需要特殊的仪器设备。
1.ABO血型鉴定操作规程复习课程
ABO血型鉴定操作规程 1.目的:定性鉴定患者ABO血型 2.适用范围:适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测 3.方法及原理: 根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A 型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。可用已知的抗A、抗B试剂血清鉴定红细胞上有无对应的A抗原/B抗原（正定型），采用已知A型红细胞和B行红细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/ 和抗-B抗体（反定型），必须从正定型和反定型两项试验来确定样本的ABO血型。 4.试剂与设备 4.1试剂抗-A、抗-B定型试剂（单克隆抗体）；0.9%生理盐水；2%—5%A、B和O型试剂红细胞悬液 4.2试剂组成 试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、 B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。 红细胞悬液的配制 悬液浓度（％）压积红细胞（滴）盐水（滴） 2 5 10 20 1 1 1 1 2ml（40） 0.8ml（16） 0.4ml（8） 0.2ml（4） 为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。 4.3设备透明光洁试管、显微镜、血清学专用水平离心机 5.样本采集与处理: 5.1标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。 5.2标本要求：
ABO血型鉴定操作规程-9页文档资料
ABO血型鉴定操作规程 111.01.0.0.0 原理原理原理原理 根据红细胞上和血清（或血浆）中有无A 抗原和（或）B 抗原及其抗体，将血型分为 A 型、 B 型、AB 型及 O 型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定 ABO 血 型。正定型正定型正定型是指用已知抗正定型 -A、抗-B血清来检测受检红细胞上有无相应的A 抗原和（或） B 抗原；反定型反定型是指用已知反定型反定型 A1 型、B 型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相 应的抗-A和（或）抗-B。 222.02.0.0.0 原始样品要求原始样品要求原始样品要求原始样品要求 5 mL静脉全血。 333.03.0.0.0 样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂 真空试管，EDTA.K2 抗凝/普通试管，不抗凝。 444.04.0.0.0 检测环境要求检测环境要求检测环境要求检测环境要求 温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。 555.05.0.0.0 所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备
5.1 设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。 5.2 材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水 （NS）、干净空试管。 666.06.0.0.0 检测操作过程检测操作过程检测操作过程检测操作过程 6.1 将受检标本以 1000g离心5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用 NS 洗涤三次后，配成 3%～5%红细胞悬液。 6.2 取 6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。 6.3 在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各 50μL ，其余管加入受检血浆/血清各 100μL 。 6.4 在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者 3%～5%红细胞悬液各 50μL ，摇匀。 6.5 在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入A1、B、O红细胞试剂各 50μL ，摇匀。 6.6 1000g离心15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。 6.7 根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在4℃、37℃下观察结果。
ABO血型鉴定操作规程
ABO血型鉴定操作规程 1.目的： 为准确鉴定ABO血型 2.要求： 要求全科人员熟练掌握原理及操作，对有疑问的结果能够做出解释及妥善解决。 3.原理： 根据红细胞上有无A抗原和/或B抗原，将血型分为A型、B型、O型和AB型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO 血型。正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原和/或B抗原；反定型是用已知的A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A和/或抗B。反定型中使用O细胞是为了检测抗A、抗B以外的不规则抗体。 4.试剂和材料 4.1 A、抗B分型血清，效价1：128以上 4.2 2%~5%A、B、O标准红细胞。 4.3 受检者血样 5.方法．（试管法） 5.1 取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，分别滴加抗A、抗B分型血清1滴于试管底部，再分别加入受检者2%~5%红细胞1滴，混合。 5.2 另取洁净小试管3支，标明A C、B C、O C，各加入受检者血清2滴
于试管底部，再分别加入A、B和O型2%~5%标准红细胞1滴，混匀。 5.3 以1000g离心15秒，将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，以肉眼观察有无凝集或溶血现象。观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，这将有助于A、B亚型、类B、或CisAB的发现。★ 6.结果判断： 血型抗A血 清 抗B血 清 A细 胞 B细 胞 O细胞 A + - - + - B - + + - - O - - + + - AB + + - - - 7.正反定型不一致的原因： 有技术问题或红细胞和血清本身问题，常见者有以下数种： 7 1 分型血清效价太低，亲和力不强。 7.2 红细胞悬液浓度过高或过低，抗原抗体比例不适当（出现前带或 后带现象），使反应不明显误判为阴性反应 7.3 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于 白血病或恶性肿瘤）以及类B或CisAB等。 7.4 受检者血清蛋白紊乱（高球蛋白血病）或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。 7.5 受检者血清中缺乏应有的抗A或抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏
Rh血型鉴定操作规程
抗D血型鉴定操作规程 1.目的： 定性鉴定患者Rh（D）血型 2.适用范围： 适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测。 3.方法及原理; 该系统主要有五种抗血清，即抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。.用五种抗Rh标准血清来检查红细胞抗原，有18种表现型。在临床输血中，一般只做D抗原的鉴定，凡被鉴红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。其它Rh抗原鉴定和D抗原一样只是加相应的抗血清既可。其鉴定方法，由抗血清的性质而定。如盐水抗体用盐水法，lgG抗体用聚凝胺，抗人球蛋白等方法。 4.试剂及设备: 4.1 RhD血型定型试剂、0.9%氯化钠 4.2 离心机、显微镜、恒温水浴箱 5.样本的采集与处理: 5.1标本种类：新抽取的EDTA-K2抗凝血2ml。 5.2标本储存： 2℃-8℃保存。 5.3标本运输： 室温运输 5.4.标本拒收标准： 细菌污染、溶血标本不能作测定。 6.操作步骤： 6.1试管法 6.1.1取1支标记的干净试管，加入2滴抗D定型试剂。6.1.2再加1滴3-5%的被检红细胞悬液于试管中，摇匀。6.1.3离心，3000-3400r/min15秒。 6.1.4检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，也可能是细菌污染），然后轻轻摇晃使细胞再悬浮起来。 6.1.5观察凝集状况，并立即记录，必要时可借助显微镜。 6.1.6若是阴性结果，需37℃孵育15分钟，然后再离心观察结果，结果若呈阴性需进一步确认是否为弱D。
6.2玻片法 6.2.1取一标记的干净玻片，在其表面滴加1滴抗D血型定型试剂，在滴加1滴35-50%的待测红细胞悬液。 6.2.2持续地、轻柔地上下倾斜载玻片，使待测红细胞悬液与该试剂在约2cm直径范围内充分混匀2分钟。 6.2.3肉眼观察载玻片上是否出现红细胞凝集。 6.2.4记录结果 6.2.5若是阴性结果，需用室温盐水试管法复核。 8.干扰因素: 8.1假阳性因素 8.1.1试剂中存在具有其他特异性抗体（指不完全D抗体），因此对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验。因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验人员意识到有进一步试验的必要。 8.1.2多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。 8.1.3当用未经洗涤的红细胞做试验时，标本中的自由凝集素和异常蛋白质可能引起假阳性结果。 8.1.4试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染. 8.2假阴性因素
ABO血型鉴定操作规程
主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23 第页共5页 1 目的 指导工作人员进行ABO血型实验。 2 适用范围 血型检验岗位工作人员 3 职责 负责送检标本ABO血型的检测工作。 4 【原理】 ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。 【标本】 1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。 【器材】 载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。 【试剂】 1.1 抗-A、抗-B试剂 1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液 1.3 受检者血清 1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液 1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管 【操作步骤】 2.1 试管法 2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A 和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。 2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。 2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。 2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项 一.原理 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。 二.试剂和材料 1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注） 2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清； 4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三.方法 1．试管法 (1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。 (2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。 (3)立即以1000r／min离心1min。
(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 （1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程(1)(1)
疑难血型鉴定及交叉配血处 理流程(1)(1) -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程 一、正反定型不一致 1、重复试验（严格正规操作）。 2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。 3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原 抗体活降低引起。） 1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。 2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。 3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型： ①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+ 以上）； ②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。 ③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。 4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。） 5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。 6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。 4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。 二、交叉配血不合 （一）主侧端不相合 1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。 2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。 3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。 4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚 合物的血浆扩容剂引起假阳性。 5、试验系统被污染。 （二）次侧端不相合 1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。 2、病人与供血者的ABO血型不相合。 3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。 4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可 输血）。 （三）配血不合的主要因素 1、血型是否正确。 2、是否有自身抗体。 3、是否有同种异体抗体。
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程 一、正反定型不一致 1、重复试验（严格正规操作）。 2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。 3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。） 1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。 2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。 3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型： ①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）； ②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。 ③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。 4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。） 5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。 6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。 4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。 二、交叉配血不合 （一）主侧端不相合 1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。 2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。 3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。 4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂 引起假阳性。 5、试验系统被污染。 （二）次侧端不相合 1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。 2、病人与供血者的ABO血型不相合。 3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。 4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。 （三）配血不合的主要因素 1、血型是否正确。 2、是否有自身抗体。 3、是否有同种异体抗体。
疑难血型鉴定及配性
疑难血型鉴定及配型
在ABO血型系统内，几乎所有缺乏抗原的人体，在其血清内必具有所缺乏抗原的抗体，若在红细胞上具有抗原时，则其血清内必缺乏对应的抗体，但这种规则偶然也有例外，血清中的抗体和细胞上的抗原不互补，正反定型相互不支持，出现血型难以确定。 另外会遇到即使ABO和RH血型相同，但由于患者血清中存在意外抗体或红细胞上致敏有意外抗体及其它原因造成交叉配血不能相合。
在ABO分型实验中，技术上的错误与各种临床情况或疾病，都能造成正反定型之间的矛盾，当预期的正反定型不能产生ABO抗原与抗体的互补结果时，首先需要排除在技术上可能发生的错误，如果细心而反复的实行对照试验产生相同形式的凝集反应，则需要考虑到细胞和血清的变异情况：
（一）、实验者技术问题 有时造成正反定型不符，并不是红细胞或血清本身的问题，而是由于操作不当造成。主要原因有： 1. 标本或试剂搞错 2.红细胞悬液过浓或过 3.标本混乱 4.未加试剂
5.试剂受到污染 6.温度在离心过程中增高 7.忽略观察溶血现象 8.细胞与血清间比例不适当，未发现弱凝集 9.如果使用血清来悬浮细胞，血清中的高浓度血型物质中和了抗体试剂，使其不能再与红细胞抗原发生反应，出现了假的阴性反应 10.在反定型试验时没有加血清，误认为是阴性结果； 11 结果判断错误
（二）如何解决技术原因造成的正反定型不符为解决ABO血型不一致而开始做深入试验之前，首先要排除技术上可能发生的错误，首先要重复作正反定性试验．使用质量合格的试剂，严格地执行正规的操作，再者则重新抽取标本。如果先前试验中红细胞悬浮在血清或血浆中，改为用盐水洗涤红细胞后配成悬液，以及细心观察和解释试验结果就可解决许多明显的问题．如果细心而反复的实行对照实验还是与先前一样的结果。就要根据情况从细胞和血清中寻找原因。
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
一.原理 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。 二.试剂和材料 1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注） 2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清； 4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三.方法 1．试管法 (1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。 (2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。 (3)立即以1000r／min离心1min。 (4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有
无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 （1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。
疑难血型鉴定和疑难交叉配血
疑难血型鉴定和疑难交叉配血 1.疑难血型鉴定 疑难血型是一种血型难以检定或判定（正反定型不一致）的现象，多由血型抗原减弱形成亚型、疾病原因引起抗体减弱或部分血型系统罕见表型等原因引起。因此，疑难血型鉴定主要从弱抗原、弱抗体和特殊抗原或抗体检测角度出发，结合血型血清学和分子生物学研究方法对患者样本进行检测。而对于不规则抗体筛查和鉴定，主要是对抗体种类和特性进行研究，尤其是利用吸收/放散试验对同时存在多种同种抗体或自身抗体进行分离鉴定，从而较为准确的分析患者血清抗体的特异性。在工作中遇到此类情况时，应按照以下步骤进行分析和处理：（1）分析可能存在的原因先排除人为操作因素，再通过了解患者临床资料分析可能的原因，主要包括抗原类影响因素和抗体类影响因素，抗原类影响因素一般包括ABO亚型、血液病、骨髓移植等，抗体类影响因素一般包括不规则抗体、药物抗体、先天抗体缺失、丙种球蛋白过低、冷凝集素等。 （2）设计实验进行验证疑难血型鉴定流程见流程图1。 流程图1 疑难血型鉴定流程
2014年1月，在工作中发现正反定型结果不符样本一例，经一系列血清学试验确证该患者为P1Pk血型系统的p表型，经分子生物学基因测序，初步推断A4GALT 基因第3外显子的903C＞G突变是患者p表型形成的分子生物学基础，该研究成果从不同角度和深度撰写论文，先后发表《临床军医杂志》和《中国输血杂志》论文各一篇，并由此逐步展开疑难血型鉴定。在此之后的工作中，通过阅读文献自修学习，鉴定出Am、Bm、B3等血型亚型，形成了一套相对完整的疑难血型鉴定思路和流程。 2014年2月和2015年10月，在工作中分别遇到一例反复进行输血治疗的患者，经一系列血清学试验，确证此两例患者均因多次输血治疗而产生多种不规则抗体，该研究成果先后以论文形式发表于《临床军医杂志》。在后期工作中，通过对解放军174医院住院患者不规则抗体筛查和鉴定结果进行分析，对厦门地区住院患者不规则抗体的分布特征有了较为清晰的了解，该研究成果以论文形式发表于《国际医药卫生导报》，并形成了一套相对完整的不规则抗体筛查和鉴定流程。 2.疑难交叉配血 交叉配血是确保安全有效输血的最重要环节，只有交叉配血真正相合（相容）才能保障临床输血治疗的安全性。现一般进行供者和受者ABO、RhD同型配血，只有配血相合时才能输血（特殊情况例外），当出现配血不相合时，则视为“疑难配血”。目前，输血科常用的交叉配血的方法主要包括聚凝胺法、卡式法和抗球蛋白法。当遇到异常的配血实验结果时，应以抗人球蛋白法为准，但任何一种实验方法都存在假阳性或假阴性的可能。因此，需在不同的情况采取不同的检测技术，建立适合本实验室的血液免疫学检测流程。在工作中遇到疑难配血时，可按照以下步骤进行分析和处理： （1）分析可能存在的原因先排除人为操作因素，再通过了解患者临床资料分析可能的原因，交叉配血不合包括主侧配血不合和次侧配血不合，其产生原因主要如下：①主侧配血不合：患者血清中存在同种抗体、自身抗体、冷凝集素、药物抗体、血浆蛋白紊乱等因素；供着红细胞直抗阳性（相对少见）。②次侧配血不合：患者红细胞黏附免疫球蛋白或抗体，直抗阳性，全凝集或多凝集；供着血清中存在同种抗体、自身抗体、冷凝集素、药物抗体、血浆蛋白紊乱等因素（相对少见）。 （2）设计实验进行配血疑难配血流程见流程图2。
ABO血型鉴定操作规程
成都市青白江区人民医院 对象：全院职工 医疗药事制度文件名称：ABO血型鉴定（4.19.2.1） 编写日期：2014.1 修订日期：2017.4 执行日期：2017.4 注：①本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印②本文件最终解释权归输血科 ABO血型鉴定 【原理】人类ABO血型系统包括四种主要的表现型：A、B、O和AB。ABO血型由红细胞上A 和B抗原的有或无决定，ABO系统还以血清中存在自然发生的规则抗体为特点，即血清中含有针 对自身红细胞所缺的A或B 抗原产生的同种凝集素（也称为“天然抗体”）。人类红细胞上A和B 抗原的有或无与血浆中抗A和抗B抗体的产生存在着相反的互补关系。例如O型个体红细胞上缺 少A和B抗原，其血清中含有抗A和抗B抗体。 利用红细胞凝集试验，通过正反定型可以准确鉴定ABO血型。所谓正定型，也称红细胞定型试验，是指用标准抗A和抗B试剂来测定红细胞上的A抗原和B抗原；所谓反定型，也称血清定型试验，是指用标准A型和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A和抗B抗体。“天然抗体”的免疫原可 能是肠道及环境中的细菌，例如在大肠埃希菌的脂多糖外壳中含有ABO类似结构。 1.试管法试管法是ABO定型试验的经典方法。 【样本】抗凝或不抗凝的样本均可用于ABO鉴定试验。红细胞可悬浮在自身血清、血浆或盐水中，也可以洗涤后悬浮于盐水中。通常情况下，试管法正定型被检样本与反定型中试剂红细胞悬液浓度 皆为2%～5%。 【试剂】（1）抗A血清 （2）抗B血清 （3）2%～5%的A型、B型红细胞盐水悬液 1（4）如果需要，可增加抗A,B试剂和A血型红细胞. 2【操作】
（1）正定型：检测红细胞上的A或B 抗原。①加1滴抗A到一支洁净试管中并标记；②加1滴抗 B到一支洁净试管中并标记；③如果需要，可选做加1滴抗A,B在第3支试管，并标记；④向每一支试管滴加1滴2%～5%的待检红细胞悬液；⑤轻轻混匀，按照校准速度和时间离心，通常 （900～1000）×g离心15秒；⑥轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与血清（血浆）试验结果对照（2）反定型：检测血清或血浆中的抗体。①取2支洁净试管，分 别标记A和B，分别向其中滴加2～13滴血清或血浆；②加1滴A试剂红细胞到标记A的试管； ③加1滴B型试剂红细胞到标记B的试管；11④如果需要，加1滴A试剂红细胞到一支已加入2～3滴血清或血浆的试管中，并做好标记；⑤轻轻混匀，2按照校准速度和时间离心，通常（900～1000）×g离心15秒；⑥检测是否有溶血现象，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与红细胞试验结果对照。成都市青白江区人民医院 【结果判定】 （1）细胞试验中的凝集以及血清或血浆试验中的溶血或凝集均为阳性结果 （2）细胞扣重悬后表现为均匀的细胞悬液是阴性结果 （3）凝集强度判断标准参见表1-5-1 （4）ABO定型的血清或血浆试验以及红细胞试验的解释见表1-5-2 （5）如果红细胞定型试验与血清定型试验结果不一致，应通过进一步试验解决，然后才给出ABO 血型结果 （6）混合视野凝集的情况，应进一步找出原因：例如是否混合血样标本，近期有无输血史，是否 白血病急性期或者ABO亚型等 表1-5-1凝集强度判读 4 + = 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3 + = 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。 2 + = 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。 1 + = 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。
rh血型鉴定阳性是什么意思
rh血型鉴定阳性是什么意思 rh血型鉴定阳性是什么意思？凡人体血液红细胞含D抗 原（又称Rh抗原）为Rh阳性，否则为阴性。这样就使已发现的红细胞A、B、O及AB四种主要血型的人，又都分别一分为二地 被划分为Rh阳性和阴性两种。RH阴性血型只占千分之三属于稀有血型。让我们通过下文来了解一下rh血型鉴定阳性是什么意 思吧。 Rh血型系统，其中含有6种抗原，即C、c、D、d、E、e。凡人体血液红细胞含D抗原（又称Rh抗原）为Rh阳性，否则为阴性。这样就使已发现的红细胞A、B、O及AB四种主要血型的人，又都分别一分为二地被划分为Rh阳性和阴性两种。Rh血型无天然抗体，其抗体多由输血（Rh阴性者被输入Rh阳性血液）或妊娠（Rh阴性母亲孕育着Rh阳性胎儿）免疫生成，具有重要临床意义。一旦形成抗体，如再输入Rh阳性血液，可发生严重 输血反应。再孕育Rh阳性胎儿可发生新生儿溶血症。 凡是人体血液红细胞上有Rh抗原（又称D抗原）的，称 为Rh阳性。Rh阳性血型在我国汉族及大多数民族人中约占99.7%，个别少数民族约为90%。RH阴性者不能接受RH阳性者血液，因 为RH阳性血液中的抗原将刺激RH阴性人体产生RH抗体。如果
再次输入RH阳性血液，即可导致溶血性输血反应。但是，RH阳性者可以接受RH阴性者的血液 rh血型鉴定阳性是什么意思？看了上文，想必你已经知道答案了吧。rh血型鉴定阳性是多人数群体，这就不用担心会像rh血型鉴定阴性的人群，RH(D)血型鉴定阳性是有别于ABO血型系统的一种血型，血型的系统是很多的，并不只有ABO一种的，RH血型也是比较常见的一种，有阳性与阴性两类。
ABO血型鉴定操作规程
ABO血型鉴定操作规程 1. 原理 根据红细胞上和血清（或血浆）中有无A 抗原和（或）B 抗原及其抗体，将血型分为 A 型、B 型、AB 型及O 型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABO 血 型。正定型是指用已知抗正定型-A、抗-B血清来检测受检红细胞上有无相应的A 抗原和（或）B 抗原；反定型是指用已知反定型A1 型、B 型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相应的抗-A和（或）抗-B。 2. 原始样品要求 5 mL静脉全血。 3. 样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂真空试管，EDTA.K2 抗凝/普通试管，不抗凝。 4. 检测环境要求检测环境要求检测环境要求检测环境要求 温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。 5. 所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备 5.1 设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。 5.2 材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水 （NS）、干净空试管。
6. 检测操作过程检测操作过程检测操作过程检测操作过程 6.1 将受检标本以1000g离心5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用NS洗涤三次后，配成3%～5%红细胞悬液。 6.2 取6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。 6.3 在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各50μL ，其余管加入受检血浆/血清各 100μL 。 6.4 在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者3%～5%红细胞悬液各50μL ，摇匀。 6.5 在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入A1、B、O红细胞试剂各50μL ，摇匀。 6.6 1000g离心15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。6.7 根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在4℃、37℃下观察结果。 7. 结果判断结果判断结果判断结果判断 7.1 凝集强度判断标准见表1。 凝集强度判断标准 4+ 红细胞凝集成一大块，液体背景透明，无游离红细胞 3+ 数个大凝集块，液体背景透明，无游离红细胞 2+ 有很多小凝集块，液体背景透明，无游离红细胞