高效液相色谱-必备要点

第二十章高效液相色谱法

1．简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。

相同点：均为高效、高速、高选择性的色谱方法，兼具分离和分析功能，均可以在线检测不同点：

分析对象及范围流动相的选择操作条件

能气化、热稳定性好、且沸

点较低的样品，占有机物的20%

流动相为有限的几种“惰

性”气体，只起运载作用，对

组分作用小

加温常压操作

HPLC

溶解后能制成溶液的样品，

高沸点、高分子量、难气化、离

子型的稳定或不稳定化合物，占

有机物的80%

流动相为液体或各种液

体的混合。它除了起运载作用

外，还可通过溶剂来控制和改

进分离。

室温、高压下进行

2．何谓化学键合相？常用的化学键合相有哪几种类型？分别用于哪些液相色谱法中？

采用化学反应的方法将固定液键合在载体表面上，所形成的填料称为化学键合相。优点是使用过程不流失，化学性能稳定，热稳定性好，适于作梯度淋洗。

目前常用的Si-O-Si-C型键合相，按极性分为非极性，中等极性与极性三类。①非极性键合相：常见如ODS键合相，既有分配又有吸附作用，用途非常广泛，用于分析非极性或弱极性化合物；②中等圾性键合相：常见的有醚基键合相，这种键合相可作正相或反相色谱的固定相，视流动相的极性而定：③极性键合相：常用氨基、氰基键合相，用作正相色谱的固定相，氨基键合相还是分离糖类最常用的固定相。

3．什么叫正相色谱？什么叫反相色谱？各适用于分离哪些化合物？

正相色谱法：流动相极性小于固定相极性的色谱法。用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用于含有不同官能团物质的分离。

反相色谱法：流动相极性大于固定相极性的色谱法。用于分离非极性至中等极性的分子型化合物。

4．简述反相键合相色谱法的分离机制。

典型的反相键合色谱法是用非极性固定相和极性流动相组成的色谱体系。固定相，常用十八烷基（ODS或C18）键合相；流动相常用甲醇-水或乙腈-水。非典型反相色谱系统，用弱极性或中等极性的键合相和极性大于固定相的流动相组成。

反相键合相表面具有非极性烷基官能团，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性能，剩余硅醇基的多寡，视覆盖率而定。对于反相色谱的分离机制目前，保留机制还没有一致的看法，大致有两种观点，一种认为属于分配色谱，另一种认为属于吸附色谱。分配色谱的作用机制是假设混合溶剂（水十有机溶剂）中极性弱的有机溶剂吸附于非极性烷基配合基表面，组分分子在流动相中与被非极性烷基配合基所吸附的液相中进行分配。吸附色谱的作用机制可用疏溶剂理论来解释。这种理论把非极性的烷基键合相，看作是在硅胶表面上覆盖了一层键合的十八烷基的"分子毛"，这种"分子毛'有强的疏水特性。当用水与有机溶剂所组成的极性溶剂为流动相来分离有机化合物时，一方面，非极性组分分子或组分分子的非极性部分，由于疏溶剂作用，将会从水中被＂挤＂出来，与固定相上的疏水烷基之间产生缔合作用，其结果使组分分子在固定相得到保留。另一方面，被分离物的极性部分受到极性流动相的作用，使它离开固定相，减小保留值，此即解缔过程，显然，这两种作用力之差，决定了分子在色谱中的保留行为。一般说来，固定相上的烷基配合基或被分离分子中非极性部分的表面积越大，或者流动相表面张力及介电常数越大，则缔合作用越强，分配比k'也越大，保留值越大。不难理解，在反相键合相色谱中，极性大的组分先流出，极性小的组分后流出。

5．离子色谱法、反相离子对色谱法与离子抑制色谱法的原理及应用范围有何区别？

离子色谱法(Ion Chromatography) ：用离子交换树脂为固定相，电解质溶液为流动相。以电导检测器为通用检测器。试样组分在分离柱和抑制柱上的反应原理与离子交换色谱法相同。离子色谱法是溶液中阴离子分析的最佳方法，也可用于阳离子分析。

反相离子对色谱法(IPC或PIC) ：反相色谱中，在极性流动相中加入离子对试剂，使被测组分与其中的反离子形成中性离子对，增加k和t R，以改善分离。适用于较强的有机酸、碱。

反相离子抑制色谱：在反相色谱中，通过加入缓冲溶液调节流动相pH值，抑制组分解离，增加其k和t R，以达到改善分离的目的。适用于极弱酸碱物质（pH=3~7弱酸；pH=7~8弱碱；两性化合物）

6．亲和色谱的分离机制是什么？有何特点？

传统的观念认为亲和色谱是基于配基-配体亲和反应的原理，利用色谱的差速迁移理论，实现对目标分子的分离，仅仅是一种组分分离的选择性过滤法。然而，这一理论是建立在配基-配体亲和作用是均相反应和宏观平衡态热力学的基础上的。但是，实际上目标分子在两相间分配系数过大，且在固定相上的吸附等温线多不呈线性。所以，关于生物大分子在亲和色谱中的保留机制及色谱过程数学模型的研究一直是一个相对薄弱的环节，有待进一步的完善.

亲和色谱具有较高的专属性，经其分离，纯化，浓集后的生物样品具有较高的纯度，大大降低了后续测定(如HPLC)时的背景噪音，进而使得后续测定具有极高的灵敏度。7．速率理论方程式在HPLC中与在GC中有何异同？如何指导HPLC实验条件的选择？

解:液相色谱中引起色谱峰扩展的主要因素为涡流扩散、流动的流动相传质、滞留的流动相传质以及柱外效应。

在气相色谱中径向扩散往往比较显著，而液相色谱中径向扩散的影响较弱，往往可以忽略。另外，在液相色谱中还存在比较显著的滞留流动相传质及柱外效应。

在高效液相色谱中，对液液分配色谱，V an Deemter方程的完整表达形式为

由此，HPLC的实验条件应该是：①小粒度、均匀的球形化学键合相；②低粘度流动相，流速不宜过快；③柱温适当。

8．试讨论影响HPLC分离度的各种因素，如何提高分离度？

(1) 色谱填充性能

液相色谱柱分离性能的优劣，是由固定相粒度、柱长、由柱内径和填充状况决定的柱压降这三个参数度决定的。这三个参数度也决定了样品组分的保留时间，保留时间不仅与色谱过程的热力学因素k有关，还直接与决定柱效与分离度的柱性能参数及流动相的黏度有关，这些参数都是影响色谱分离过程动力学的重要因素。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般都是购买商品柱，很少自行制备。

(2) 流动相及流动相的极性

液相色谱中，改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接因素。液相色谱不可能通过增加柱温来改善传质。因此大多是恒温分析。流动相选择在液相色谱中显得特别重要，流动相可显著改变组分分离状况。

(3) 流速

流速大于0.5 cm/s时，H～u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。

9．试讨论反相HPLC的分离条件的选择。

反相HPLC法是以表面非极性载体为固定相，以比固定相极性强的溶剂为流动相的—种液相色谱分离模式。反相HPLC色谱中样品的保留值主要由固定相比表面积、键合相种类和浓度决定，保留值通常随链长增长或键合相的疏水性增强而增。溶质保留值与固定相表面积成正比，当其他条件相同时，溶质在低表面积色谱柱上的保留值短。样品的保留值也可以通过改变流动相组成或溶剂强度来调整，溶剂强度取决于有机溶剂的性质和其在流动相中的浓度。

10．在正、反相HPLC中流动相的强度是否相同？

在正相色谱中，由于固定相是极性的，所以溶剂极性越强，洗脱能力也越强，即极性强的溶剂是强溶剂。在反相色谱中，由于固定相是非极性的，所以溶剂的强度随溶剂的极性降低而增加，即极性弱的溶剂是强溶剂。

11．什么叫梯度洗脱？它与GC的程序升温有何异同？

在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的组成或浓度配比，称为梯度洗提。是改进液相色谱分离的重要手段。

梯度洗提与气相色谱中的程序升温类似，但是前者连续改变的是流动相的极性、pH或离子强度，而后者改变的温度。程序升温也是改进气相色谱分离的重要手段。

12．蒸发光散射检测器的原理及特点是什么？

蒸发光散射检测器（Evaporative Light-scattering Detector）是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。

一、ELSD原理

恒定流速的色谱仪（高效液相、逆流色谱、高效毛细管电泳等）洗脱液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室(漂移管，drift tube)，流动相及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号——色谱图。

二、特点

1．洗脱液需要雾化，所以雾化气流的纯度和压力会影响检测器的信噪比。

2．流动相要蒸发掉，所以不能使用不易挥发的物质来调节流动相的pH值。可以通过蒸发温度的调节来使比被测物质沸点低的组分蒸发。在不使被测物质蒸发的前提下，温度越高，流动相蒸发越完全，色谱图基线越好、信噪比越高。如果被测物质沸点接近或低于流动相的蒸发温度，则无法检测；不过，100%的水做流动相，蒸发室温度也才设为150摄氏度，沸点比水低的有机物质完全可以用气相色谱仪进行分离检测了。由于流动相和溶剂蒸发了，使用ELSD检测器收集的色谱图一般没有溶剂峰；而且梯度洗脱没有折光视差效应，一般不会出现基线漂移。

3.检测光散射变化，所有进入到散射池的物质都可被检测，而且响应值只与物质的量有关。

4.浓度跟峰面积不成线性，分别取自然对数后成线性。

13．常用的HPLC定量分析方法是什么？哪些方法需要用校正因子校正峰面积？哪些方法可以不用校正因子？

常用的HPLC定量分析方法有：

外标法：外标工作曲线法、外标一点法、外标二点法等

内标法：内标工作曲线法、内标一点法、内标二点法、内标对比法等

使用内标和外标标准曲线法时，可以不必测定校正因子，其它方法须要用校正因子校正峰面积

高效液相色谱习题及参考答案

一、单项选择题

1. 在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（）。

A、分配色谱法

B、排阻色谱法

C、离子交换色谱法

D、吸附色谱法2. 在高效液相色谱流程中，试样混合物在（）中被分离。

A、检测器

B、记录器

C、色谱柱

D、进样器

3. 液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？

A、0.5μm

B、0.45μm

C、0.6μm

D、0.55μm

4. 在液相色谱中，为了改变色谱柱的选择性，可以进行如下哪些操作？

A、改变流动相的种类或柱子

B、改变固定相的种类或柱长

C、改变固定相的种类和流动相的种类

D、改变填料的粒度和柱长

5. 一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为（）

A、甲醇/水（83/17）

B、甲醇/水（57/43）

C、正庚烷/异丙醇（93/7）

D、乙腈/水（1.5/98.5）

6. 下列用于高效液相色谱的检测器，（）检测器不能使用梯度洗脱。

A、紫外检测器

B、荧光检测器

C、蒸发光散射检测器

D、示差折光检测器

7. 在高效液相色谱中，色谱柱的长度一般在（）范围内。

A 、10～30cm B、20～50m C 、1～2m D、2～5m

8. 在液相色谱中, 某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力（）

A、组分与流动相

B、组分与固定相

C、组分与流动相和固定相

D、组分与组分

9. 在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行（）的操作

A、改变柱长

B、改变填料粒度

C、改变流动相或固定相种类

D、改变流动相的流速

10. 液相色谱中通用型检测器是（）

A、紫外吸收检测器

B、示差折光检测器

C、热导池检测器

D、氢焰检测器

11. 在环保分析中，常常要监测水中多环芳烃，如用高效液相色谱分析，应选用下述哪种

检波器

A、荧光检测器

B、示差折光检测器

C、电导检测器

D、紫外吸收检测器

12. 在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是（）

A、提高柱温

B、降低板高

C、降低流动相流速

D、减小填料粒度

13. 在液相色谱中，不会显著影响分离效果的是（）

A、改变固定相种类

B、改变流动相流速

C、改变流动相配比

D、改变流动相种类

14. 不是高液相色谱仪中的检测器是（）

A、紫外吸收检测器

B、红外检测器

C、差示折光检测

D、电导检测器

15. 高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了（）

A、恒温箱

B、进样装置

C、程序升温

D、梯度淋洗装置

16. 在高效液相色谱仪中保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是（）

A、贮液器

B、输液泵

C、检测器

D、温控装置

17. 高效液相色谱、原子吸收分析用标准溶液的配制一般使用（）水

A．国标规定的一级、二级去离子水B．国标规定的三级水

C．不含有机物的蒸馏水D．无铅(无重金属)水

18. 高效液相色谱仪与普通紫外－可见分光光度计完全不同的部件是（）

A、流通池

B、光源

C、分光系统

D、检测系统

19. 下列哪种是高效液相色谱仪的通用检测器

A、紫外检测器

B、荧光检测器

C、安培检测器

D、蒸发光散射检测器

20. 高效液相色谱仪中高压输液系统不包括

A、贮液器

B、高压输液泵

C、过滤器

D、梯度洗脱装置

E、进样器

二、判断题：

1. 液相色谱分析时，增大流动相流速有利于提高柱效能。

2. 高效液相色谱流动相过滤效果不好，可引起色谱柱堵塞。

3. 高效液相色谱分析的应用范围比气相色谱分析的大。

4. 反相键合相色谱柱长期不用时必须保证柱内充满甲醇流动相。

5. 高效液相色谱分析中，使用示差折光检测器时，可以进行梯度洗脱。

6. 在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是减小填料粒度。

7. 在液相色谱中，范第姆特方程中的涡流扩散项对柱效的影响可以忽略。

8. 由于高效液相色谱流动相系统的压力非常高，因此只能采取阀进样。

9. 高效液相色谱仪的色谱柱可以不用恒温箱，一般可在室温下操作。

10. 高效液相色谱中，色谱柱前面的预置柱会降低柱效。

11. 液相色谱中，化学键合固定相的分离机理是典型的液－液分配过程。

12. 高效液相色谱分析中，固定相极性大于流动相极性称为正相色谱法。

13. 高效液相色谱分析不能分析沸点高，热稳定性差，相对分子量大于400的有机物。

14. 在液相色谱法中，约70－80％的分析任务是由反相键合相色谱法来完成的。

15. 在高效液相色谱仪使用过程中，所有溶剂在使用前必须脱气。

16. 填充好的色谱柱在安装到仪器上时是没有前后方向差异的。

17. 保护柱是在安装在进样环与分析柱之间的，对分析柱起保护作用，内装有与分析柱不同

固定相。

18. 检测器、泵和色谱柱是组成高效液相色谱仪的三大关键部件。

19. 紫外－可见光检测器是利用某些溶质在受紫外光激发后，能发射可见光的性质来进行检

测的。

20. 应用光电二极管阵列检测器可以获得具有三维空间的立体色谱光谱图。

三、简答题

1. 为什么作为高效液相色谱仪的流动相在使用前必须过滤、脱气？

2. 高效液相色谱有哪几种定量方法，其中哪种是比较精确的定量方法，并简述之。

参考答案

一、选择题

D C B C A D AC C B A D BB D B AADE

二、判断题

× √ √ √ × √ × × √ √ 11.× 12.√ 13.× 14.√ 15.√ 16.× 17.× 18.√ 19.× 20.√

三、简答题

1. 高效液相色谱仪所用溶剂在放入贮液罐之前必须经过0.45μm滤膜过滤，除去溶剂中的机

械杂质，以防输液管道或进样阀产生阻塞现象。所有溶剂在上机使用前必须脱气；因为色谱住是带压力操作的，检测器是在常压下工作。若流动相中所含有的空气不除去，则流动相通过柱子时其中的气泡受到压力而压缩，流出柱子进入检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检测器噪声增大，使基线不稳，仪器不能正常工作，这在梯度洗脱时尤其突出。

2. 高效液相色谱的定量方法与气相色谱定量方法类似，主要有归一化法、外标法和内标法。

其中内标法是比较精确的定量方法。它是将已知量的内标物加到已知量的试样中，在进行色谱测定后，待测组分峰面积和内标物峰面积之比等于待测组分的质量与内标物质量之比，求出待测组分的质量，进而求出待测组分的含量。

液相色谱复习题

一、填空题

1.高效液相色谱的高压输液泵按排液性质可分为泵和泵两类。

答案:恒压恒流

2. 高效液相色谱的高压输液泵应具备、、、、、等性能。

答案:流量稳定输出压力高流量范围宽耐酸碱腐蚀压力波动小有梯度淋洗

3.高效液相色谱的淋洗梯度可分为梯度和梯度两种。

答案:低压高压

4.高效液相色谱梯度洗脱中的低压梯度又称梯度,高压梯度又称梯度。

答案:外内

5.高效液相色谱的保护柱起到的作用。

答案:保护、延长柱寿命

6.高效液相色谱进样系统包括和两个步骤。

答案:取样进样

7.高效液相色谱检测器可分为型和型两大类。

答案:通用选择

8.高效液相色谱紫外检测器属于型检测器,只能适用于那些的物质。

答案:选择能吸收紫外光

9.常用的高效液相色谱紫外单波长检测器的波长是nm。

答案:254

10.正相色谱中,固定相是性的,流动相是如一类的性溶剂。

答案:极己烷非极

11.反相色谱中,固定相是性的,流动相是如一类的性溶剂。

答案:非极性或弱极甲醇－水极

12.在正相色谱中,流动相极性变小,色谱保留时间

答案:延长

13.在反相色谱中,流动相极性增大,色谱保留时间

答案:延长

14.高效液相色谱可分为、、、、四种分离类型。

答案:吸附(正相) 分配(反相) 离子交换凝胶渗透或排阻(GPC)

15.高效液相色谱系统由、、、等部分组成。

答案:输液系统进样系统分离系统检测器

16.高效液相色谱测定多环芳烃类化合物通常采用的液相色谱柱是流动相是、检测器是检测器。

答案:十八烷基硅烷(ODS) 甲醇和水或乙腈和水荧光分光(或紫外分光)

17.高效液相色谱仪的主要部件有、、、、、和

答案:贮液罐, 高压输液泵, 进样装置, 色谱柱, 检测器, 记录仪, 数据处理装置

18.高效液相色谱法常用流动相脱气方法有、、、和

答案:吹氦脱气法, 加热回流法, 抽真空脱气法, 超声波脱气法, 在线真空脱气法

19.影响荧光强度的因素主要是和

答案:溶剂极性, 溶液温度

20.根据键合固定相与流动相相对极性的强弱,可将键合相色谱法分为

和

答案:正相键合相色谱法, 反相键合相色谱法

二、判断题

1使用多元梯度洗脱时，一般使用峰面积法定量（）答案：√

2 保留时间长的色谱峰，最好使用峰高法定量（）答案：×

3 保留时间短的色谱峰,最好使用峰高法定量( )答案: ×

4 当分离度不好，色谱峰形不好时，最好使用峰高法定量（）答案：√

5 正相键合相色谱所用键合固定相的极性大于流动相的极性（）答案：√

6 相键合相色谱法中，流动相极性愈强，溶质的保留值越小（）答案：×

7 正相键合相色谱法使用于分离油溶性或水溶性的极性和强极性化合物（）答案：√

8 在反相色谱分析中，当流动相的极性减小时，会增强对溶质的洗脱强度，使溶质的k’值减小答：√

9 荧光检测器的灵敏度较高，是痕量分析时的有力检测工具（）答案：√

10 检测器灵敏度越高，检测限越高（）答案：×

11 高效液相色谱法中塔板高度随填料粒度减小而增大（）答案：×

12 减小冲洗剂粘度或提高柱温有利于减小塔板高度（）答案：√

13 示差折光检测器是一种通用型检测器（）答案：√

14 梯度洗脱时可以使用示差折光检测器（）答案：×

15 高效液相色谱法适合于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离分析( )

答案：√

16 一定范围内，填充柱中微粒填料粒度越小，色谱柱的分离效率越低（）答案：×

17 荧光检测器不能用于梯度洗脱( )答案：×

18 荧光的波长总要比分子吸收的紫外光波长长,通常在可见光范围内( )答案：√

19 荧光强度与激发光强度成反比( )答案：×

20 安培检测器对流动相的流速、温度、pH值等因素的变化比较不敏感( )答案：×

三、名词解释

1 检测器灵敏度: 一定量的物质通过检测器时所给出的信号大小叫做该检测器对该物质的灵敏度

2 检测器噪音: 没有溶质通过检测器时,检测器输出的信号变化

3 内标法: 选择适宜的物质作为欲测组分的参比物,定量加到样品中去,依据欲测组分和参比物在检测器上的响应值.

4 标准加入法: 以欲测组分的纯物质为内标物,加入到待测样品中,然后在相同的色谱条件下,测定加入欲测组分纯物质前后欲测组分的峰面积(或峰高),从而计算欲测组分在样品中的含量的方法.

5 荧光猝灭效应: 当样品浓度较高时,荧光物质分子易与溶剂分子或其它溶质分子相互作用,引起溶液的荧光强度降低,荧光强度不再与浓度呈线性关系,这种现象称为荧光猝灭效应.

6 梯度洗脱: 梯度洗脱是使流动相中含有两种或两种以上不同极性的溶剂,在洗脱过程连续或间断改变流动相的组成,使样品中的所有组分可在最短的分析时间内,以适用的分离度获得圆满的选择性分离.

7 最小检测量: 产生的信号响应等于2倍噪声时的进样量

8保留时间（t R）:从进样开始到柱后出现样品的浓度极大值所需的时间为保留时间

9 容量因子（k’）:分配平衡时该物质在两相中绝对量之比。

10 柱外效应：指由色谱柱以外的因素,引起的色谱峰形扩展的效应.

11 死时间（t0）：不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的时间。

12 峰宽（w）：在峰拐点处所作切线与峰底相交两点间底距离。

13 基线：在正常操作条件下仅有流动相通过检测器系统时产生底响应信号底曲线。

14 色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器系统时产生的响应信号的微分曲线。

15 畸峰：形状不规则的峰，如拖尾峰、前伸峰。

16 分离度（R）：两个相邻色谱峰的分离程度，以两个组分保留值之差与其平均峰宽值之比表示

17 线性范围：检测信号与被测物质的量呈线性关系的范围。

18 化学发光: 某些物质常温下进行化学反应,能生产处于激发态的反应中间体或反应产物.这些反应中间体或反应产物从激发态返回基态时,会伴随有光子发射的现象.由于物质激发态的能量是通过化学反应,而不是通过其它途径获得的,故称这种通过化学反应产生的光辐射为化学发光.

四、问答题

1.高效液相色谱的特点是什么?

答案:(1)高效:(2)快速:(3)不受样品挥发性影响:(4)不受热稳定性限制。

2.请举出高效液相色谱检测器的名称(四种即可)。

答案:紫外检测器；荧光检测器；示差折光检测器；电化学检测器；电导、电容、放射性、红外检测器等。~

3.高效液相色谱二极管阵列检测器有哪些特点?

答案:(1)可同时得到多波长色谱图；(2)对每个色谱峰的指定位置适时记录吸收光谱图；(3)进行函点光谱扫描,可得到三维色谱光谱图。

4.高效液相色谱的紫外检测器常用AU/FS表示灵敏度,试问AU和FS各表示什么?

答案:AU为吸光度单位,FS为满程偏转。

5.高效液相色谱在环境监测中,适用于什么性质的有机污染物的分析,请举出几类化合物的例子。

答案:适用于分子量大、挥发性低、热稳定性差、水溶性的有机污染物的分析,如多环芳烃、酚类、多氯联苯、邻苯二甲酸酯类、联苯胺类、阴离子和非离子表面活性剂、有机农药等。

6.在进行高效液相色谱分析时,保留时间不恒定的主要原因有哪些?

答案:泵室内有气泡,流速不稳定；管路漏液；流动相浓度或pH值变化；柱温不稳定。

7.在高效液相色谱法梯度洗脱中,影响梯度洗脱的因素有哪些?

答案:1 溶剂纯度要高,2 梯度混合的溶剂互溶性要好 3 梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器.

8.高效液相色谱法中,作为流动相的溶剂应具备哪些要求?

答案:1 纯度高2 用作流动相的溶剂应与固定相不互溶,并能保持色谱柱的稳定性3选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配 4 对样品有足够的溶解能力 5 选用的溶剂应具有低的粘度和适当低的沸点 6 低毒性.

9.检测系统造成峰展宽的主要来源?

答案: 1柱外死体积,包括样品池体积和连接管体积2时间常数,包括放大器及记录仪的时间常数

10.紫外-可见光检测器的工作原理是什么?

答案:光的吸收定律郎伯-比耳定律,即当一束单色光辐射通过物质溶液时,如果溶剂不吸收光,则溶液的吸光度与吸光物质的浓度和光经过溶液的距离成正比.(A=abc a为吸光系数b为吸收池厚度c为吸光物质溶液的浓度)

11.影响定量分析结果准确性的因素?

答案:1样品制备,2进样技术3色谱条件选择4检测器特性5分离度

12.在高效液相色谱定量分析中标准曲线法的优缺点?

答案:优点::适合大量样品分析缺点：每次样品分析的色谱条件很难完全相同,容易出现较大误差,且无法补偿样品前处理过程中欲测组分的变化。

13.高效液相色谱法的应用范围?

答案:可分析低分子量低沸点样品；高沸点、中分子、高分子有机化合物；离子型无机化合物；热不稳定，具有生物活性的生物分子。14.示差折光检测器对色谱系统的要求?

答案:1 流动相组成恒定2 温度恒定3 压力恒定

答案:流动相在使用前必须进行脱气处理,以除去其中溶解的气体,以防在脱气过程中当流动相由色谱柱流至检测器时,因压力降低而产生气泡.若在低死体积检测池中,存在气泡会增加基线噪音,严重时会造成分析灵敏度下降,且溶解在流动相中的氧气,会造成荧光猝灭,影响荧光检测器的检测,还会导致样品中某些组成被氧化或会使柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能

16.高压梯度洗脱与低压梯度洗脱的区别以及各自的特点?

答案: 低压梯度是在常压下将两种溶剂输至混合器中混合,然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中, 其优点是仅需使用一个高压输液泵; 高压梯度是用两台高压输液泵将两种不同的溶剂输入混合室,进行混合后再进入色谱柱. 其优点是两台高压输液泵的流量皆可独立控制,可获得任何形式的梯度程序,且易于实现自动化.

17.要形成化学键合固定相需要什么必要条件?

答案:1是所用的基质材料应有某些化学反应活性,2是有机液相分子应含有能与基质表面发生反应的官能团.

18.高效液相色谱法中所用的定性方法有哪些?

答案:1利用已知标准样定性2利用检测器的选择性定性3利用紫外检测器全波长扫描功能定性4利用改变流动相组成时被测组分的保留值变化规律定性.

19.高效液相色谱所用的检测器要满足哪些要求?

答案:1 灵敏度高.2 线性范围宽3 相应快 4 稳定性好5 可靠性高 6 噪音低,漂移小7 不破坏溶质.8 不引起很大的柱外谱带扩张效应

20 引起压力改变的因素有哪些?

答案:1流动相流速2 流动相组成和温度3 柱长、柱内径和填料粒度4 柱突然阻塞或泄漏

高效液相色谱仪使用注意事项[1]全解

岛津液相色谱仪使用注意事项 1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。 2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。 4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。 5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。 8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。 9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。 11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 1、样品的前处理： a、最好使用流动相溶解样品。 b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。流动相的配制液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点： a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。 b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。

高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯

实验七高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯一.实验目的 1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。 2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。 3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。二.实验原理高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R）的计算公式为： R＝ 2[t (R2)-t (R1) ] /1.7*(W 1 ＋W 2 ) 式中 t (R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间； t (R1) 为相邻两峰中前一峰的保留时间； W 1及W 2 为此相邻两峰的半峰宽。除另外有规定外，分离度应大于1.5。本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE，常被用作塑料增塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。待测物性质见表1。表1色谱柱测试条件如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC分离检测。

三.仪器与试剂 1、仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul微量注射器。 2、试剂甲醇（色谱专用），高纯水四.实验步骤 1、色谱条件色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶（C8）柱温：室温流动相：初始为高纯水：30％，甲醇：70％检测器：DAD检测器; 检测波长：220nm；进样体积：100μl定量环，实际注射每次可控制在200μl。 2、待测溶液的配制首先用甲醇做溶剂配制储备液：邻苯二甲酸二甲酯（0.3880g/L），邻苯二甲酸二乙酯（0.2770g/L），邻苯二甲酸二丁酯（0.3776g/L）。然后各取1mL储备液用水和甲醇（20：80）稀释至10mL，作为待测溶液。 3、色谱测定 (1) 按操作规程开启电脑，开启脱气机、泵、检测器等的电源，启动Agilent 1100在线工作软件，设定操作条件。流量为1.000ml/min。 (2) 待仪器稳定后，开始进样。将进样阀柄置于“LOAD”位置，用微量注射器吸取混合物溶液50ul，注入仪器进样口，顺时针方向扳动进样阀至“INJECT”位置，此时显示屏显示进样标志。 (3) 记下各组分色谱峰的保留时间及峰面积及分离比。 (4) 实验完毕，清洗系统及色谱柱。依次用甲醇-水（60：40）、甲醇-水（70：30）……直到纯甲醇作流动相清洗，每次清洗至基线走稳，至少清洗15min。五.实验结果

初中政治知识点背诵口诀

初中政治知识点背诵口诀七年级生命可贵，珍爱生命，人与自然，和谐相处；(1课) 了解情绪，调控情绪，克服消极，保持乐观；(3课) 全面客观，评价自己，不断完善，发展自己；(4课) 个人国家，命运相连，未成年人，四大保护；(12课) 人口现状，计划生育，资源环境，持续发展；(13课) 民族团结，国家稳定，平等团结，三个尊重；(14课) 传统美德，民族文化，培养弘扬，民族精神。(15课) 八年级诚信负责，对人对事，维护诚信，保护消费；(5课) 人格法律，人人平等，真诚友善，尊重人格；(6课) 尊重宽容，和谐相处，对外交往，平等友好；(7课) 权利义务，二者统一，保护生命，尊重隐私；(8课) 接受教育，权利义务，经济权利，财产继承；(12课) 伟大变化，党的领导，和平统一，一国两制；(13课) 指导思想，马毛邓三，基本国情，基本路线；(14课) 政治制度，经济制度，共同富裕，全面小康。(15课) 九年级

挫折难免，两种作用，开拓进取，战胜挫折；(1课) 正视压力，调控焦虑，树立正确，学习观念；(2课) 做事负责，避免犯罪，违法犯罪，区别联系；(3课) 善待生命，实现价值，为了社会，做出贡献；(4课) 爱是力量，奉献爱心，服务人民，服务社会；(5课) 每一角色，都应负责，责任意识，从小培养；(6课) 良好社会，需要合作，树立公平，合作意识；(7课) 社会需要，正义制度，维护正义，两大要求；(8课) 依法治国，监督制约，守法护法，从我做起；(9课) 总体达到，小康水平，新的目标，全面小康；(10课) 世界主题，和平发展，抓住机遇，迎接挑战；(11课) 科技关键，教育基础，必然选择，科教兴国；(12课) 实现理想，艰苦奋斗，肩负使命，立志成才。(13课) 中考政治学习及应考口诀学好政治并不难，课本内容要记全。知识框架记心间，前因后果穿根线。重点考点心有数，主干知识最关键。死记硬背不可取，理论实际紧相连。解题要领

高效液相色谱法简介

高效液相色谱法简介 “色谱”一词是由俄国科学家斯威特提出的。色谱法是基于补充物质在相对运动物的两相之间分布时，物理或物理化学性质的微小的差异而使混合物相互分离的一类分离或分析方法。发展与上世纪初，飞速发展于五十年代，有超过30位科学家家因为它而获得诺贝尔奖，其有自己的理论和研究方法，同时也有众多的应用领域。色谱法常见的方法有：柱色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。柱色谱：柱色谱法是最原始的色谱方法，这种方法将固定相注入下端塞有棉花或滤纸的玻璃管中，将被样品饱和的固定相粉末摊铺在玻璃管顶端，以流动相洗脱。常见的洗脱方式有两种，一种是自上而下依靠溶剂本身的重力洗脱，一种是自下而上依靠毛细作用洗脱。收集分离后的纯净组分也有两种不同的方法，一种方法是在柱尾直接接受流出的溶液，另一种方法是烘干固定相后用机械方法分开各个色带，以合适的溶剂浸泡固定相提取组分分子。柱色谱法被广泛应用于混合物的分离，包括对有机合成产物、天然提取物以及生物大分子的分离。薄层色谱：薄层色谱法是应用非常广泛的色谱方法，这种色谱方法将固定相图布在金属或玻璃薄板上形成薄层，用毛细管、钢笔或者其他工具将样品点染于薄板一端，之后将点样端浸入流动相中，依靠毛细作用令流动相溶剂沿薄板上行展开样品。薄层色谱法成本低廉操作简单，被用于对样品的粗测、对有机合成反应进程的检测等用途。

气相色谱：GC主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离。待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体（即载气，也叫流动相）带入色谱柱，柱内含有液体或固体流动相，由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同，每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。但由于载气是流动的，这种平衡实际上很难建立起来。也正是由于载气的流动，使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解吸附，结果是在载气中浓度大的组分先流出色谱柱，而在固定相中分配浓度大的组分后流出。当组分流出色谱柱后，立即进入检测器。检测器能够将样品组分的与否转变为电信号，而电信号的大小与被测组分的量或浓度成正比。当将这些信号放大并记录下来时，就是气相色谱图了。气相色谱被广泛应用于小分子量复杂组分物质的定量分析。高效液相色谱：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9-107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。高效液相色谱（HPLC）是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效

Waters_2695_型高效液相色谱仪操作方法

Waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法 1 仪器组成及开机 1.1 仪器组成本仪器由Waters 2695 分离单元、2996型二极管阵列检测器、2420蒸发光散射检测器、色谱管理工作站和打印机组成。 2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机（或氦气脱气机），可容纳120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。 1.2 开机依次接通2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接通2695 分离单元后，约20s 仪器开始自检，约1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“Idle ”时，仪器进入待命状态。 2 溶剂管理系统的准备 2.1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【Menu/Status 】，进入“Status （1 ）”屏幕，光标选“Degasser ”，按【Enter 】，显示选项屏幕，光标下移选“Continuous ”，按【Enter 】。 2.2 启动溶剂管理系统 2.2.1 干启动，当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status （1 ）”屏幕下，按【Direct Function 】，光标选“Dry Prime ”，按【Enter 】，显示“Dry Prime ”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如【OpenA 】，光标选“Duration ”，按数字键输入5min ，按【Continue 】，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。 2.2.2 湿启动在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Compomtion ”中欲使用的流动相，输入10 0％，按【Direct Function 】，光标选“Wet Prime ”，按【Enter 】，显示“Wet Prime ”屏幕，输入7.5Ml/min 和6min ，按【OK 】，待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。 2.2.3 平衡真空脱气机在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Composition ”，输入流动相的组成，按【Enter 】再用光标选“Degasser ”中的“Normal ”，按【Enter 】，按【Direct Function 】，光标选“Wet Prime ”，输入0.000mL/min 和10min. ，按【OK 】。待限定时间结束后，按【Abort Prime 】。 3 样品管理系统的准备 3.1 冲洗自动进样器在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Composition ”，输入流动相的组成。按【Direct Function 】，光标选“PurgeInjector ”，按【Enter 】，显示“Purge Injector ”屏幕，输入“Sample Loop Volumes 6.0 ”，光标下移“Compression Check ”，按任意数字键，按【OK 】。 3.2 冲洗进样针在主屏幕下，按【Diag 】，显示“Diagnositcs ”屏幕，按【Prime Ndl Wash 】，显示“Prime Needle Wash ”屏幕，按【Start 】，30s 内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit 】。 3.3 冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下，按【Diag 】，显示“Diagnosities ”屏幕，按Prime Seal Wash ，显示“Prime Seal Wash ”屏幕，按【Start 】，待排放口有水流出，按【Halt 】、【Close】、【Exit 】。 3.4 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“Door is Open ”屏幕，装入样品盘，按【Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。 4 编辑分析方法及执行样品分析表在主屏幕下，按【Develop Methods 】，显示“Methods ”屏幕。 4.1 编辑分析方法 4.1.1 建立新的分离方法在“Method ”屏幕下，按【New 】、【Separation Methods 】，输入方法名，按【Enter 】，显示分离方法屏幕，该屏幕共有6 页，通过按【Next 】或【Prev 】切换。如需设定梯度，在第（ 1 ）页按【Gradient 】，输入后按【Exit 】；如需设定色谱柱的温度，在第（ 4 ）页输入后按【Exit 】；在第（6 ）页设定检测器的种类，光标选“Absorbance Detector ”，按【Enter 】，光标选“48 6﹨2487 ”，按Abs （1 ）图标，设定检测波长，按【OK 】、【Exit 】、【Save 】。 4.1.2 编辑已建立的分离方法在“Methods ”屏幕下，光标选欲编辑﹨修改的分离方法的图标，按【Edit 】，编辑\ 改各种分析参数，按【Exit 】、【Save 】。 4.2 编辑执行样品分析表 4.2.1 建立新的样品组在“Methods ”屏幕下，按【New 】、【Sample Set 】，输入样品组名，按【Enter 】，显示方法组屏幕，在样品组表中输入待分析样品的信息。在“Vial ”中输入样品放置的位

高效液相色谱方法的验证

高效液相色谱方法的验证 ?方法验证的目的 ?方法验证的内容 ?方法验证的项目及测定方法

方法验证的目的目的：证明采用的方法适合相应检测的要求。方法验证是实验室针对特定方法的研究过程，通过设计方案，有步骤、系统地收集、处理实验数据，最终形成文件，以证明所用试验方法准确、灵敏、专属并重现。同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。

方法验证的内容 ?准确度 ?精密度 ?专属性 ?检测限 ?定量限 ?线性和范围 ?耐用性

准确度定义：方法测定结果与真实值或参考值的接近程度。一般用回收率%表示。 1. 主成分含量测定原料药：对照品或方法比对 2. 制剂、中药：标准加样回收杂质定量测定：加样回收（n 3 9）杂质对照品方法比对回收率 C-A %=′ B 100% 杂质与主成分的相对含量 A:试验供试品中被测成分的量（通常为含量测定量的50%） B: 试验供试品中加入的对照品的量（通常为±20%） C:试验测定值

精密度定义：在规定测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般用偏差，相对偏差和相对标准偏差 1. 重复性（n 9） 3 2. 中间精密度 3. 重复性测定：HPLC方法的精密度测试，应从样品制备开始，设计3个浓度，分别平行制备3份，以测定含量计算相对标准偏差；或同一样品平行制备6份供试品，分别进样，以峰面积计算相对标准偏差。同一份供试品连续进样6次，计算得到的相对标准偏差只能表征进样精密度，不能作为方法精密度。

专属性定义：在其它成分可能存在下，方法能正确测定出被测物的特性。 1. 鉴别反应 2. 含量测定杂质测定测定：限量检查空白制剂，模拟复方加速破坏试样测试 DAD峰纯度检查

高效液相色谱法测定含量示例的方法再确证

高效液相色谱法测定含量示例的方法再确证作者：张建芝冯顺来源：《维吾尔医药》2013年第07期摘要：目的：确证用反相高效液相色谱法测定头孢氨苄含量的方法有效性和准确性。方法：以Diamonsil CLC-ODS（150mm x 6mm，10 lm）为色谱柱，水-甲醇- 3.89% 醋酸钠溶液- 4% 醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相，检测波长为254 nm，外标法定量。结果：头孢氨苄浓度线性范围为0.02～0.20mg / ml，相关系数r= 0.9991，方法重复性试验 RSD为 1.42%。结论：该方法可简单高效地完成，结果准确性好、稳定可靠，确证高效液相色谱依然为头孢氨苄制剂的质量控制中有效可靠的方法。关键词：头孢氨苄高效液相色谱法头孢氨芐（Cefalexin，又译先锋霉素Ⅳ、头孢力新等）是一种半合成的第一代口服头孢霉素类类抗生素药物，化学名（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸，化学式C16H17N3O4S，在临床上广为使用。其含量测定在旧版的中国药典（ 1995年版）采用碘量法○1。但此法不仅操作步骤繁多，费工费时，干扰因素多；然后人们发明采用高效液相色谱法内标法测定的方法，但内标物保留时间过长，依然存在问题。最后人们又发现采用高效液相色谱法，用外标法测定其含量，方法操作简单方便、数据准确可靠，灵敏度较高，重复性好，最终获得了较为满意的结果○2。现在本文对这个方法进行确证，以确定该方法的有效性和准确性。 1.仪器与试药分析天平（precisa instrument ltd switzer land xs 225a precisa ），高效液相色谱柱（diamonsic C18 250 * 46mm），检测器（UVD 170v），泵（P680 HPLC pump），头孢氨苄胶囊（广州白云山制药总厂批号：2110102） 2. 色谱条件用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂：水-甲醇- 3.89% 醋酸钠溶液 - 4% 醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500。 3. 实验试剂制备 3.1 对照品储备液的制备：对照品储备液的制备：取头孢氨苄对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，为对照品储备液。 3.2 供试品溶液的制备：去装量差异项下的内容物，混合均匀，精密量取适量（约相当于头孢氨苄0.1g），置于 100ml 容量瓶里，加流动相适量，充分振摇使溶解，再加流动相稀释至

高效液相色谱仪操作步骤

高效液相色谱仪操作步骤： 1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。 2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。 4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7)．设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。 8)．进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。 9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。 10)．填写登记本，由负责人签字。注意事项： 1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。 2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。

高效液相色谱法测定手册

高效液相色谱法测定手册一目的：制定高效液相色谱法，规范高效液相色谱法的测定操作。二适用范围：适用于高效液相色谱法的测定。三责任者：品控部。四正文 1 简述高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需在色谱分离前或后经过衍生化反应方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱；离子交换填料，用于离子交换色谱；具一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。高效液相色谱仪基本由泵，进样器，色谱柱，检测器和色谱数据处理系统组成。检测器最常用的为可变波长紫外可见光检测器，其他检测器有如示差折光检测器和蒸发光散射检测器等。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2 高效液相色谱仪的使用要求 2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705—90）”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。

顺口溜知识点速记口诀-高考数学高频考点

顺口溜+知识点速记口诀，高考数学高频考点手到擒来！函数学习口诀正比例函数是直线，图象一定过原点， k的正负是关键，决定直线的象限，负k经过二四限，x增大y在减，上下平移k不变，由引得到一次线，向上加b向下减，图象经过三个限，两点决定一条线，选定系数是关键。反比例函数双曲线，待定只需一个点，正k落在一三限，x增大y在减，图象上面任意点，矩形面积都不变，对称轴是角分线，x、y的顺序可交换。二次函数抛物线，选定需要三个点， a的正负开口判，c的大小y轴看， △的符号最简便，x轴上数交点， a、b同号轴左边，抛物线平移a不变，顶点牵着图象转，三种形式可变换，配方法作用最关键。正多边形诀窍歌份相等分割圆，n值必须大于三，依次连接各分点，内接正n边形在眼前。经过分点做切线，切线相交n个点。 n个交点做顶点，外切正n边形便出现。正n边形很美观，它有内接、外切圆，内接、外切都唯一，两圆还是同心圆，它的图形轴对称，n条对称轴都过圆心点，如果n值为偶数，中心对称很方便。正n边形做计算，边心距、半径是关键，内切、外接圆半径，边心距、半径分别换，分成直角三角形2n个整，依此计算便简单。圆中比例线段遇等积，改等比，横找竖找定相似；不相似，别生气，等线等比来代替，遇等比，改等积，引用射影和圆幂，平行线，转比例，两端各自找联系。函数与数列

数列函数子母胎，等差等比自成排。数列求和几多法？通项递推思路开；变量分离无好坏，函数复合有内外。同增异减定单调，区间挖隐最值来。二项式定理二项乘方知多少，万里源头通项找；展开三定项指系，组合系数杨辉角。整除证明底变妙，二项求和特值巧；两端对称谁最大？主峰一览众山小。立体几何多点共线两面交，多线共面一法巧；空间三垂优弦大，球面两点劣弧小。线线关系线面找，面面成角线线表；等积转化连射影，能割善补架通桥。方程与不等式函数方程不等根，常使参数范围生；一正二定三相等，均值定理最值成。参数不定比大小，两式不同三法证；等与不等无绝对，变量分离方有恒。根据多年的实践，总结规律繁化简；概括知识难变易，高中数学巧记忆。言简意赅易上口，结合课本胜一筹。始生之物形必丑，抛砖引得白玉出。速记口诀一、《集合与函数》内容子交并补集，还有幂指对函数。性质奇偶与增减，观察图象最明显。复合函数式出现，性质乘法法则辨，若要详细证明它，还须将那定义抓。指数与对数函数，两者互为反函数。底数非１的正数，１两边增减变故。函数定义域好求。分母不能等于０，偶次方根须非负，零和负数无对数；正切函数角不直，余切函数角不平；其余函数实数集，多种情况求交集。两个互为反函数，单调性质都相同；图象互为轴对称，Ｙ＝Ｘ是对称轴；求解非常有规律，反解换元定义域；反函数的定义域，原来函数的值域。幂函数性质易记，指数化既约分数；函数性质看指数，奇母奇子奇函数，奇母偶子偶函数，偶母非奇偶函数；图象第一象限内，函数增减看正负。二、《三角函数》

高效液相色谱测定法标准操作规程

标准操作规程 1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。 2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。 3责任：QC人员对本SOP实施负责。 4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分

离物质的性质来选择合适的色谱柱。温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2?8之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。 4.1.2.检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与被测物质的量有关，还与其结构有关；蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用检测器，对所有物质均有响应。结构相似的物质在蒸发光散射检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器和示差折光检测器的响应值与被测物质的量在一定围呈线性关系，但蒸发光散射检测器的响应值与被测物质的量通常呈指数关系，一般需经对数转换。不同的检测器，对流动相的要求不同。紫外-可见分光检测器所用流动相应符合紫外-可见分光光度法（通则0401）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器不得使用含不挥发性盐的流动相。 4.1.3.流动相反相色谱系统的流动相常用甲醇-水系统和乙腈-水系统，用紫外末端波长检测时，宜选用乙腈-水系统。流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需用时，应尽可能使用低浓度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动相中有机溶剂一般不低于5％，否则易导致柱效下降、色谱系统不稳定。正相色谱系统的流动相常用两种或两种以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己烷等。品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X小于等于33%时，允许改变围为0.7X?1.3X；当X大于33%时，允许改变围为X—10%?X+10% 。

高考英语重点知识口诀巧计

顺口溜篇 1. 巧记定冠词的用法 A. 名词前不用定冠词的情况：抽象、物质、独一专有名，已有代词定语前面行，节日①、月份、季节与星期，球类、游戏、呼语与餐名，新闻标题，专加普②，一般省冠是常情。说明：①节日：指阳历节。 ②专加普：由“专有名词+ 普通名词”构成的专有名词。如Benjing University , Hyde Park 。 B. 名词前需加定冠词的情况：江、河、湖、海、洋、群山，沙漠、列岛、海峡与海湾，天体、国家、组织和机关，方位、朝代、普变专，乐器、语言①、一家人，通常情况冠先行。说明：①语言：指专用名词+ language , 如the hinese language 。 2. 巧记基数词变序数词第一二三是难题，词尾分别t d d ，th 后缀第四起，ve 改用f 替，八减t ，九减 e ，ty 变为tie ，留心注意几十几，只变尾数就可以。 3. 巧记sometime , sometimes , some time , some times 分开为时段，相连是某时，分开s 为倍次，相连s 为有时。 4. 巧记十个常用虚拟语气的动词虚拟语气小心用，一个坚持两命令，三个建议四要求， i- 和s- 双重性。说明：一个坚持：insist；两命令：order , command ；三个建议：advise , suggest , propose；四要求：demand , desire , request , reqire ；i- 或s- 双重性：指insist 表“坚持认为”时用陈述语气，“坚决要求”用虚拟语气；suggest 表“说明、表明”时用陈述语气，表“建议”时用虚拟语气。 ◇句子篇 1. 巧记以“o”结尾的名词变复数 A. 加-es 的情况：一些以西红柿和土豆为食的黑奴成了英雄。 A few Negroes who live on tomatoes and potatoes have become heroes . B. 直接加-s 的情况：在一个长满了烟草(tobacco) 和竹子(bamboo) 的动物园(zoo) 的工作室(studio) 里，一架50千克 (kilo) 的钢琴(piano) 上摆放着一张收音机(radio) 的照片(photo) 。注：volcano (火山) 复数形式可加 -s ，也可加-es 。 2. 巧记f(e) 结尾的名词变复数 A. 变f(e) 为v 再加-es 的情况：约翰和他的妻子过着俭朴的生活。一天，当他们将半个面包和一梱喂小牛的树叶放到架子上时，突然一个小偷手拿刀子，像狼一样地独自闯了进来。(12 个) John and his wife live a simple life . One day , they were putting onto the shelf a half loaf and a sheaf of leaves (leaf) for the calf when a thief by himself (oneself) with a knife broke into like a wolf . B. 直接加-s 的情况：是信念鼓励海湾的农奴首领，从峭壁跳到屋顶，到保险柜里寻找证据。(8个) The belief encouraged the chief of the serfs from the gulf to jump from the cliff onto the roof to search for the proof in the safe . 3. 巧记动名词作宾语的动词(组) “Keep Marc(h) Gifts (保存三月礼物)” 这个句子是由加动名词作宾语的动词(组) 的首字母构成的。它们是： k ：keep ；ee ：enjoy / escape / excuse ；p ：practise / put off ； m ：mind / miss ；a ：admit / appreciate / avoid ：r ：risk ；c ： cinsider ；g ：give up ；i ：include / insist on / imagine ；f ：finish / forgive ；t ：think of ；s ：suggest 4. 巧记带复合宾语，但宾语补足语为不加to 的使役动词 “六看二听一感觉外加 make , have heave 和 l et” 六看：see / watch / notice / look at / find / discover 二听：hear / listen to 一感觉：feel 一、冠词基本用法【速记口诀】名词是秃子，常要戴帽子，可数名词单，须用a或an，辅音前用a，an在元音前，若为特指时，则须用定冠，复数不可数，泛指the不见，碰到代词时，冠词均不现。【妙语诠释】冠词是中考必考的语法知识之一，也是中考考查的主要对象。以上口诀包括的意思有：① 名词在一般情况下不单用，常常要和冠词连用；②表示不确指的可数名词单数前要用不定冠词a或an，确指时要用定冠词the；③如复数名词表示泛指，名词前有this，these，my，some 等时就不用冠词。二、名词单数变复数规则【速记口诀】单数变复数，规则要记住，一般加s，特殊有几处： /t?蘩/、/?蘩/、/s/结尾，es不离，末尾字母o，大多加s，两人有两菜，es不离口，词尾f、fe，s前有v和e；没有规则词，必须单独记。【妙语诠释】①大部分单数可数名词变为复数要加s，但如果单词以/t?蘩/、/?蘩/、/s/发音结尾(也就是单词如果以ch，sh，s，x等结尾)，则一般加es；②以o结尾的单词除了两人(negro，hero)两菜(tomato，potato) 加es外，其余一般加s；③以f或fe 结尾的单词一般是把f，fe变为ve再加s；④英语中还有些单词没有规则，需要特殊记忆，如child—children， mouse—mice，deer—deer， sheep—sheep，Chinese—Chinese，

高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项

高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项一、操作步骤： 1.开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）注：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。 2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。 3.排气结束后，关闭所有排气阀。先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。（不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同） 4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。二、使用中常见的问题及注意事项 1.过滤时有时会出现流动相漏液。可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。注意：操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。 2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。

游离色氨酸的测定(高效液相色谱测定方法)

八．饮料中游离色氨酸的测定(高效液相色谱测定方法) 本方法适合饮料中游离色氨酸的测定本方法检测限：饮料中游离色氨酸为30μg/100ml。（一）方法提要试样的游离色氨酸经处理后，在高效反相色谱C18柱上分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量游离色氨酸的含量。（二）仪器 1. 高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器。 2. 超声清洗仪（溶剂脱气用）。 3. 天平（精确到0.0001g）。 4. 微孔滤膜（HF 0.45 μm）。（三）试剂 1. 1.0mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠（分析纯），加适量去离子水并稀释到100ml。 2. 甲醇（色谱纯）。 3. 0.1%(m/V)磷酸溶液：1.0g磷酸（分析纯）加水至1000mL，溶解混匀，过微孔滤膜0.45μm，待用。 4. 色氨酸对照品，Fluka公司(纯度≥99.5%)。 5. 色氨酸标准溶液：精密称取色氨酸对照品约0.0300g，移入100ml容量瓶中，加入少许水，再加入50μL1.0mol/L氢氧化钠溶液，超声溶解并用水定容到100mL，成浓度为300μg/mL的标准储备液。取标准储备液5.0mL用去离子水定容到50mL，成为浓度为30μg/mL的标准溶液。（四）测定步骤 1. 样品处理： ①汽水、可乐型饮料：取均匀试样置于小烧杯中，微温除去二氧化碳（或超声脱气10min），经0.45μm微孔滤膜过滤后供进样用。 ②果汁类：取均匀试样置于离心管中，5000rpm/min离心20min，上清液经0.45μm微孔滤膜过滤后供进样用。 2. 标准工作曲线制作。精密吸取色氨酸标准溶液1.0，5.0，10.0ml，分别置于100mL容量瓶中，用水定容到100mL，摇匀。分别取10μL标准工作系列溶液进样

知识点速记口诀心法

心理学开头来一段：巴甫洛夫的狗，桑代克的猫。斯金那的老鼠，班杜拉的宝宝。苛勒的猩猩抓香蕉，托尔曼的白鼠走迷宫。布鲁那：“我发现！”奥苏泊尔：“我接受！”加涅：“我把信息加工一下。”建构主义者：“你和我建构的不一样！” 裴斯论教学方法，首提“教育心理学化”；卡普捷教育心理学，首部以教心学命名。乌申斯基，人是教育的对象，俄国教心奠基人。心理发展的主要理论：高尔顿遗传决定论，霍尔的复演理论，发生认知皮亚杰，认知发展维果斯。认知风格的差异：场独立与场依存，认知差异威特金；辐合型与发散型，三维智力吉尔福。认知学习理论：格式顿悟完形说，托尔认知目的论，信息加工论加涅，海德韦纳归因论。现代认知布鲁纳，有意义学习奥苏泊。学习迁移理论：学习迁移理论多，形成训练沃尔夫，相同要素桑代克，经验类比有贾德，关系转化格式塔，认知结构奥苏泊。遗忘的理论：痕迹衰退遗忘论，里士多德桑代克；同化遗忘奥苏泊，动机压抑弗洛伊。行为演练的基本方法：全身松弛雅各布，系统脱敏沃尔帕，理性情绪治疗法，艾里斯步骤ABCDE。学习动机理论：需要层次马洛斯，成就动机阿特金，成败归因是韦纳，自我效能班杜拉。教师领导方式类，行动研究属勒温。教师成长三阶段，都源自福勒布朗。波斯教师成长式，特韦尔训练教学，巴奇教学四反思，伯利教展五阶段。教育学科举制度始隋唐，科举考试依四书。生物起源利托尔，心理起源有孟禄。精神分析弗洛伊，还有动机压抑论。埃拉斯首用班级，斯宾课程倡导者。绅士教育白板说，教育漫话属洛克。教育心理教育学，教育心理桑代克，杜威专长教育学，赫尔巴特教心学。桑代克尝试错误说，共同要素迁移论，痕迹衰退遗忘论，现代教心奠基人。