革兰氏染色说明

革兰氏染色

【操作步骤】

1、操作前准备：戴口罩、帽子、手套，穿工作服，准备并清点本

试验所需器材。

2、制作涂片：细菌涂片的制作包括涂片、干燥、固定3个步骤。

(1)涂片：取洁净载玻片1张，用铅笔标记，并在玻片正中间位置滴

加一滴生理盐水。用灭菌环挑取菌落少许，均匀涂布于生理盐水中，并研磨成直径1~1.5cm的菌膜。若取菌悬液标本涂片，则不需加生理盐水，直接用灭菌的接种环取菌液1~2环，直接均匀涂抹成菌膜。

(2)干燥：涂片最好置室温下自然干燥，也可将菌膜面向上，在酒精

灯火焰上方约10cm处的热空气中微微加热烘干。

(3)固定：用手或玻片夹夹住载玻片一端，干燥的涂片面朝上，在酒

精灯火焰的外焰上尽快对来回通过2~3次，以玻片反面接触皮肤热而不烫手为宜。

3.染色

（1）初染：在制好的涂片上滴加结晶紫染液数滴（以刚好覆盖菌膜为宜），染色一分钟，倾斜载玻片，水洗。甩去积水。

（2）媒染：滴加卢戈碘液数滴，染色1分钟，倾斜载玻片。水洗，甩去积水。

（3）脱色：滴加95％乙醇数滴，轻轻摇动载玻片，使其脱色。需10~30s 至无紫色脱出为准。

（4）复染：滴加稀释复红染液数滴，复染0.5min。倾斜载玻片，水洗，甩去积水。用滤纸吸干或者自然干燥。

4、油镜检查：待标本涂片自然干燥或用吸水纸吸干后，在菌膜上滴加香柏油，置油镜下检查。表皮葡萄球菌染成紫色，为革兰阳性菌，呈葡萄球状排列；大肠埃希菌染成红色，为革兰阴性菌，呈散在的杆状。

5、其他：操作后正确处理医疗垃圾，实验器材归回原位。

【注意事项】

1、整个操作过程须注意无菌操作。

2、因不同菌龄的细菌，革兰染色的结果也有差异，故一般以

18~24h的培养物染色效果最好。

3、涂片若太厚或太薄，固定时菌体过分受热及脱色时间长短，都

会影响染色结果，要严格按要求操作。

4、涂片最好在室温下自然干燥，若置酒精灯上微加热烘干时，切

勿靠火焰太近，以免标本烤枯变形。

5、染色时，染液以覆盖标本为宜，不宜过多。

6、染色各环节均要严格掌握好时间，尤其是乙醇脱色环节，应根

据菌膜厚度、室温等因素掌握适当时间，否则会影响染色结果。

7、应防止所有染液因液体蒸发而改变浓度，特别是卢戈碘液久存

或受光作用后易失去媒染作用；涂片积水过多会改变染液浓度，影响染色效果。

8、染液最好新鲜配制使用，防止污染，勿使用陈旧染液，以免影

响结果。

9、水洗时，将载玻片倾斜，以细小水流缓缓冲玻片上端，使水流

沿玻片斜面流过菌膜，切勿将水流直冲菌膜部位，以免菌膜脱落。

【技能要点】

1、涂片菌膜薄厚适中，自然干燥。

2、染色各环节准确无误，严格掌握好时间和顺序。

3、熟练使用油镜镜检。

4、正确识别革兰阳性菌或革兰阴性菌。

检验方法：

1、加龙胆紫液染色10秒，之后水洗，甩干；

2、加碘溶液染色10秒，之后水洗，甩干；

3、加脱色液脱色10~20秒，之后水洗，甩干；

4、最后加沙黄溶液复染10秒，之后水洗。

5、以滤纸吸干或在空气中干后，镜检。

检验结果的解释：

革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。