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基因工程复习题

一、名词解释：（10～20%）

基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶的Star活性PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统

原位杂交：将细胞或组织的核酸固定保持在原来的位置上，然后用探针与之杂交的一种核酸分子杂交技术，该方法可较好地反映目的基因在细胞或组织中的分布和表达变化。

粘性末端：双链DNA被限制性内切酶切割后，形成的两条链错开几个碱基，而不是平齐的末端。

Northern印迹杂交：将RNA进行变性电泳后，再转移到固相支持物上与探针杂交的一种核酸分子杂交技术，可用于检测目的基因的转录水平。

转位：一个或一组基因片段从基因组的一个位置转移到另一个位置的现象。

基因工程：在体外，用酶学方法将各种来源的DNA与载体DNA连接成为重组DNA，继而通过转化和筛选得到含有目的基因的宿主细胞，最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子的过程称为基因工程，又称基因克隆、DNA克隆和重组DNA等。

目的基因：基因工程中，那些被感兴趣的、被选作研究对象的基因就叫作目的基因。

连接器：人工合成的一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段，连接到目的基因的两端，便于基因重组中的切割和连接。

转化：受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变的过程。

停滞效应：PCR中后期，随着目的DNA扩展产物逐渐积累，酶的催化反应趋于饱和，DNA 扩增产物的增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。

逆转录PCR：以mRNA为原始模板进行的PCR反应。

PCR: 即聚合酶链式反应。在模板，引物，4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间的DNA区段地酶促合成反应。

α-互补（α-complementation）：指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中，插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸的核苷酸序列（又称α-肽），该序列不能产生有活性的β-半乳糖苷酶。

感染（infection）特指以λ噬菌体、粘粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。其中，由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转移过程又称为转导（transduction）。

47、转染（transformation）指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。

二、填空题（20%）

1、DNA片段重组连接的方法主要有平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接。

2、感受态细胞是指具有摄取外源DNA分子能力的细胞。

3、λ噬菌体蛋白对重组DNA体外包装时，包装长度为野生型λDNA的75~105%。

5、PCR反应体系含有耐热的TaqDNA聚合酶，化学合成的寡核苷酸引物，四种dNTP，合适的缓冲液体系。

6、核酸探针包括：cDNA探针；基因组DNA探针；寡核苷酸探针和RNA探针。

7、部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积

8、DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)____________；(2)________________的活性。枯草杆菌蛋白酶；(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶

9、为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团

10、基因工程中有3种主要类型的载体：_______________、_____________、______________。质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体

11、pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于，它的四环素抗性基因来自于，它的氨苄青霉素抗性基因来自于。pMBl；pSCl01；pSF2124(R质粒)

13、DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)_________________(2)_______________ (3) _____________(4)_ ______________________。(1)黏性末端连接；(2)平末端连接；(3)同聚物接尾连接；(4)接头连接法

14、差示杂交(differential hybridization)技术需要__________________________。两种不同的

细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因

16、将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_________________。基因组DNA克隆；基因组DNA文库17、根据Northern杂交的结果可以说明：_____________________________。外源基因是否进行了转录

18、在________________技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。Southern印迹

19、可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。5’→3’合成酶；3’ →5’外切核酸酶

20、根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：(1)_______________ (2)__________________(3)_________________。(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子

21、放射免疫筛选的原理基于以下三点：

(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合；(3)抗体能够被标记

22、黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS位点序列来自，最大的克隆片段达到kb。质粒；λ噬菌体；45

23、限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名

24、第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。EcoK；EcoRl

25、切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。DNA聚合酶I：5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶

26、就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。

复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入

27、pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过

和两种质粒改造而来。它的复制子来自，Amp 抗性基因则是来自。pBR322和M13；pMBl；转座子

28、噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是；二是。它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如λ噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽

29、Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：

(1)__________________________________________________________________

(2)_________________________________________________________________。

(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性

条件，后者是非变性条件

30、限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰来实现的。

31、II型限制酶既具有识别位点的专一性，也具有切割位点的专一性。它作用时需要Mg2+ 离子作辅助因子。

32、个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（RFLP）。

33、人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA, ___________时摄人DNA。0?C；42?C

34、野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1)

(2) (3) 。(1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记

35、形成平末端的方法有：用产生平末端的限制酶切，用S1核酸酶切除粘末端，用DNA 聚合酶填平粘末端。

36、回收DNA片段时，在确定DNA条带位置时，应使用长波长紫外灯，以最大限度减少对DNA的照射损伤。

37、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-, r-表示限制缺陷型，m-表示修饰缺陷型，rec-表示重组缺陷型。

38、CaCl2法制备感受态细胞转化DNA时，DNA以DNA-Ca2+ 复合物形式吸附于细胞表面。

39、TaqDNA聚合酶具有，缺乏因此无。5‘→3‘聚合酶活性，3’→5‘外切酶活性，校正功能

40、PCR循环次数一般设定为，过多的循环次数会导致的出现。25－30次，PCR 反应“平台效应”。

41、如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端，则可以用__________

进行3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用__________________进行3’末端标记。Klenow酶填补的方法；T4DNA聚合酶

42、限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链DNA。

43、需要部分酶切时可采取的方法有：减少酶的用量；缩短反应时间；增大反应体积。45、重组DNA技术的基本过程：①目的基因的制备；②载体的选择和制备；③DNA分子的体外连接；④将重组DNA导入宿主细胞；⑤重组体的筛选和鉴定；⑥重组体的扩增、表达和其他研究。

46、在分离质粒DNA的菌体培养过程中，加入氯霉素有两个好处：可以扩增质粒DNA；抑制了菌体的数量，有利于裂解。

48、II型限制酶既具有识别位点的专一性，也具有切割位点的专一性。它作用时需要Mg2+离子作辅助因子。

50、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-, r-表示限制缺陷型，m-表示修饰缺陷型，rec-表示重组缺陷型。

52、核酸的体外标记法分为和。化学法；酶法

53、核酸的体外标记法中的酶法最常用的是和标记。125I；光敏生物素标记。

54、影响核酸分子杂交的因素有：（1）核酸分子的浓度与长度；（2）温度；（3）离子强度；（4）

甲酰胺；（5）核酸分子的复杂性；（6）非特异性杂交反应等。

三、选择题（20%）

1、下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（）C

A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体

B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列

C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快

D．只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达

2、下列不属于获取目的基因的方法是（）B

A．“鸟枪法”B．转录法C．反转录法D．根据已知氨基酸序列合成法

3、以下说法正确的是（） A

A. 在真核细胞的基因结构中，编码区也含有不能编码蛋白质的序列

B. 终止子是转录终止的信号，因此它的DNA序列与终止密码TAA相同

C. 基因的非编码区通常不起什么作用

D. 启动子的作用是阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来

4、Ⅱ型限制性内切核酸酶：( ) B

(A)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列

(B)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供

(C)限制性识别非甲基化的核苷酸序列(D)有外切核酸酶和甲基化酶活性

(E)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供

5、关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。B

(A)由作用于同一DNA序列的两种酶构成

(B)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶

(C)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰

(D)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统

6．在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( ) B

(A)反应时间(B)酶量(C)反应体积(D)酶反应的温度

7、限制性内切核酸酶可以特异性地识别：( ) B

(A)双链DNA的特定碱基对(B)双链DNA的特定碱基序列

(C)特定的三联密码(D)以上都正确

8、在基因工程中，可用碱性磷酸酶( ) A

(A)防止DNA的自身环化(B)同多核苷酸激酶一起进行DNA的5′末端标记

(C)制备突出的3′末端(D)上述说法都正确

9、下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的 C

(A)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，

因而有较多的拷贝数

(B)可以在氯霉素作用下进行扩增(C)通常带有抗药性标记

(D)同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子

10、下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?( ) C

(A)质粒(B)黏粒(C)酵母人工染色体(Y AC)

(D) 噬菌体(E) cDNA表达载体

11、Col El是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒：( ) ACD

(A)是松弛复制型（B)具有四环素抗性

(C)能被氯霉素扩增(D)能产生肠杆菌素

12、同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：( )B

(a)OCDNA>SCDNA>LDNA (b)SCDNA>LDNA>OCDNA

(c)LDNA>OCDNA>SCDNA (d)SCDNA>OCDNA>LDNA

13、能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是( ) A

(A)charomid (B)plasmid (C)cosmid (D)phagemid

14、双脱氧末端终止法测序体系与PCR反应体系的主要区别是前者含有( ) D

(A) 模板(B) 引物

(C) DNA聚合酶(D) ddNTP (E) 缓冲液

15、PCR实验的特异性主要取决于（） C

(A) DNA聚合酶的种类(B)反应体系中模板DNA的量

(C)引物序列的结构和长度(D)四种dNTP的浓度

(E)循环周期的次数

16、常用的Southern转膜方法有哪几种（）。BCD

(A) 硝酸纤维素膜法(B) 毛细管虹吸印迹法

(C) 电转印法(D) 真空转移法

17、原位杂交可以用来检测（）ABCD

(A) DNA (B) RNA (C) cDNA ( D) RNA和DNA

18、核酸酶S1能降解（）AC

(A) DNA 单链(B) DNA双链

(C) RNA单链(D) DNA/RNA杂交双链

19、构建载体时，使用双酶切相对于单酶切的优点在于（A、B、C、D）

(A)避免载体自身环化(B) 提高连接效率(C)控制外源基因的插入方向

(D) 便于转化后的筛选(E) 便于修改阅读框

20、获得DNA重组体后，还需进一步鉴定，可采用的方法有：（A B C D）

(A) DNA序列测定(B) PCR鉴定

(C) 酶切鉴定(D) 表达产物的鉴定

(E) 进行定点突变

21、外源基因与载体的连接方式有：（A B C D E）

(A) 粘端连接(B) 平端连接

(C) 加同聚尾连接(D)加人工接头连接

(E) 用T载体连接

22、关于多克隆位点，下列叙述正确的是：（A B D）

(A) 是外源基因的插入部位(B) 由许多酶切位点组成

(C) 是宿主细胞上的一段特殊序列(D)是人工合成的一段DNA序列

(E) 含有药物抗性基因

23、用蓝白斑筛选重组子时，IPTG的作用是：（A）

(A)诱导载体上的Lac Z基因表达(B) 作为显色反应的指示剂

(C) 作为酶的作用底物(D) 诱导载体上的抗性基因表达

E. 诱导宿主上的Lac Z基因表达

24、PUC系列载体的抗性筛选标记为：（C）

(A)卡那霉素(B)四环素

(C) 氨苄青霉素(D)G418

(E)氯霉素

25、．免疫印迹法筛选重组体的原理是：（E）

(A) 根据载体抗性基因的表达(B)根据载体报告基因的表达

(C) 根据DNA与DNA的杂交(D) 根据DNA与mRNA的杂交

(E) 根据外源基因的表达

26、Ti质粒：( ) ACDE

(A)可从农杆菌转到植物细胞中(B)作为双链DNA被转移

(C)在植物中导致肿瘤(D)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素(E)需要细菌的vir基因帮助转移(F)在植物细胞中作为染色体外质粒

28、关于cDNA的最正确的说法是：( )C

(A)同mRNA互补的单链DNA (B)同mRNA互补的双链DNA

(C) 以mRNA为模板合成的双链DNA (D) 以上都正确

29、用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：( )C

(A)染色体DNA断成了碎片(B)染色体DNA分子量大，而不能释放

(C)染色体变性后来不及复性(D)染色体未同蛋白质分开而沉淀

30、关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确?( )D

(A)溶液I的作用是悬浮菌体(B)溶液Ⅱ的作用是使DNA变性

(C)溶液Ⅲ的作用是使DNA复性

(D)质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性

31、在下列表型中，( )是基因工程上理想的受体菌表型B

(A)r+m+rec*(B)r-m-rec-(C)r-m-rec+(D)r+m+rec-

32、cDNA文库包括该种生物的( )A

A某些蛋白质的结构基因B所有蛋白质的结构基因

C所有结构基因D内含子和调控区

33、Southem印迹的DNA探针( )杂交。C

A只与完全相同的片段B可与任何含有相同序列的DNA片段C可与任何含有互补序列的DNA片段

D可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段E以上都是34、用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。C

ASouthem印迹杂交BNorthem印迹杂交

CWestern印迹D原位菌落杂交

35、报告基因( ) ACD

A以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列

B以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区

C能用于检测启动子的活性D能用于确定启动子何时何处有活性36、在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( )A

A诱导宿主的α肽的合成B诱导宿主的ω肽的合成

C作为酶的作用底物D作为显色反应的指示剂

37、切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。B

A DNA聚合酶I，RNA

B DNA聚合酶I，DNA

C DNA聚合酶Ⅲ，RNA

D DNA聚合酶Ⅲ，DNA

38、用免疫化学法筛选重组体的原理是( )A

A根据外源基因的表达B根据载体基因的表达

C根据mRNA同DNA的杂交D根据DNA同DNA的杂交

39、分离质粒DNA时，用蔗糖的目的是：( )B

A. 抑制核酸酶的活性

B. 保护DNA，防止断裂

C. 加速蛋白质变性

D. 有利于细胞破碎

40、CsCl-EB密度梯度离心法纯化质粒DNA的原理是：( )C

A 氯化铯可以较多地插入到线状DNA中去

B 氯化铯可以较多地插入到S

C DNA中去

C EB可以较多地插入到线状DNA中去

D EB可以较多地插入到SC DNA中去

41、用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：( )C

A 染色体DNA断成了碎片

B 染色体DNA分子量大，而不能释放

C 染色体变性后来不及复性

D 染色体未同蛋白质分开而沉淀

42、切口平移法标记DNA探针时，需用的酶是：（B）

A 限制酶

B DNase I

C RNase

D DNA连接酶

E 拓扑异构酶

43、重组DNA分子导入受体细胞的方法有：（A B C）

A. 转化

B. 转染

C. 转导

D. 转位

E. 转录

44、关于菌落杂交法筛选重组体，下列叙述正确的是：（B D）

A. 需要外源基因的表达

B. 需要探针与外源基因有同源性

C. 需要IPTG诱导

D. 不需要外源基因的表达

E. 不需要探针与外源基因有同源性

45、核酸分子杂交时，用于标记的探针可以是：（A B）

A. DNA

B. RNA

C. 抗原

D. 抗体

E. DNA连接酶

46、限制性内切酶可特异性识别( B )

A. 双链DNA的特定碱基对

B. 双链DNA的特定碱基序列

C. 单链RNA的特定碱基序列

D. 单链DNA的特定碱基序列

E 双链RNA的特定碱基对

47、下列因素中影响限制酶切割的有( A,B,C,D,E)

A. EDTA浓度

B. 甘油浓度

C. DNA纯度

D. 酶的自身活性

E. 盐浓度

48、重组连接时，反应体系必须的组分有（A、C）

A．Mg2+ B. BSA C. A TP D. PO43- E . EDTA

49、PCR产物具有特异性是因为( )C

A. Taq DNA酶保证了产物的特异性

B. 合适的变性,退火,延伸温度

C. 选择特异性的引物

D. 引物的Tm值不同.

50、要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是（）A

①限制酶②连接酶③解旋酶④还原酶

A．①②B．③④C．①④D．②③

51、用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：C

A. 染色体DNA断成了碎片

B. 染色体DNA分子量大，而不能释放

C. 染色体变性后来不及复性

D. 染色体未同蛋白质分开而沉淀

52、同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：B

A. OC DNA>SC DNA>L DNA

B. SC DNA>L DNA>OC DNA

C. L DNA>OC DNA.SC DNA

D. SC DNA>OC DNA>L DNA

53、在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ）

A．I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶

E. RNAase

54、下列关于同裂酶的叙述错误的是( B )

A.是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。

B.它们的识别序列完全相同。

C.它们的切割方式可以相同，也可以不同。

D.有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。

E.两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。

55、需进行DNA部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（ D ）

A. 反应时间

B. 反应体积

C. PH

D. 限制酶量

E.反应温度

56、在回收DNA片段时，观察电泳结果为尽量减少对DNA的照射损伤应使用（A）A．长波长紫外 B. 短波长紫外 C . 长波长红外 D. 短波长红外 E. ABCD 都不可

57、DNA回收时，如要除去EB（溴化乙锭）可用下列那种试剂（A ）

A．正丁醇 B. 苯酚 C. 氯仿 D. 异戊醇 E. 乙醇

58、大肠杆菌出现感受态的生理期是（B ）

A．潜伏期 B. 对数期 C. 对数后期 D. 平衡期 E. 衰亡期

59、PCR实验的特异性主要取决于（C）