真菌作业指导
目的：
通过无菌检验建立起产品无菌的直接数据，以评估灭菌效果是否符合要求。
2、适用范围：
适用于所有经过灭菌后的产品的检查。
3、作业条件：
3．1无菌检测在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。3．2超净台及工作台面，必须进行洁净度验证。
4、作业方法与步骤
4．1制作或选择培养基（参见《培养基制作作业指导书》）
4．1．1好氧——厌氧菌检测时用硫乙醇酸盐按一定比例制作；
4．1．2真菌检测时用改良马丁培养基按一定比例制作。
4．1．3培养基需按要求培养16-18H后，检查无菌生长方可使用。
4．2制作阳性对照
4．2．1好氧——厌氧菌检测时用枯草芽孢杆菌制作；
4．2．2真菌检测时用自然界分离的霉菌制作。
4．2．3取对照用菌一环用0.9%无菌生理盐水按1:1000 稀释，制成对照供试液。4．2．4取1ml对照供试液加入到一个装有15ml培养基试管中，作成阳性对照管，进行培养。
4．3制作产品供试液
4．3．1取待测试产品1~2PCS，根据产品物性的大小，分别采用直接浸入法或棉拭子擦洗法或冲洗法收集洗脱液，装在相应的容器中。
4．4制作培养用试管
4．4．1取1ml产品供试液，加入到装好10~15ml培养基的试管中，按同样的方法共制作十个试管进行培养；
4．5培养与判定
4．5．1将上述两种制备完成的试管放在恒温箱中进行培养。
4．5．2需气菌、厌气菌培养温度30～35℃、真菌培养温度20～25℃，培养14日。4．5．3在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。阳性对照管在24小时内应有菌生长，否则为本检测无效；
4．5．4经过培养后，若出现浑浊，可以外观判断有明显长菌的可以判定有菌，若不能明显判定的，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或斜面培养基上继续培养，细菌培养2日，真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长，或用接种环取培养液涂片，染色，用显微镜观察是否有菌。
4．6将整个过程进行记录并形成报表
无菌检验作业指导书
1目的
通过无菌检验，确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。
2 适用范围
适用于灭菌后医疗器械产品电凝镊的无菌检验。
3 检验依据
3.1、产品注册标准
3.2、《中国药典》（2010年版）
3.3、GB14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分：生物试验方法
3.4、GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准
4 仪器、设备
百级层流超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、PH计、冰箱、酒精灯、三角烧瓶，接种环、无菌棉签、镊子，试管架，大试管若干等。
无菌检验室的环境要求
5.1 无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。
5.2 缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa。无菌检验室的室温应保持18～26℃，相对湿度：45～65%。
5.3 无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。每年至少检测一次。
5.4 无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板，暴露30min，于30～35℃培养48小时，菌落数平均应不超过1cfu/平板。
6 无菌检验前的准备 6.1 器具灭菌、消毒
6.1.1 灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。可经电热干燥箱160℃以上干烤2小时，或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用（根据灭菌效果验证决定灭菌参数）。所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否则应重新灭菌。
6.1.2 消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理如无菌检验室的
试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。可采用消毒剂浸泡或擦拭。消毒剂应每月更换，以防止产生耐药菌株。
6.1.3 标识：器具的灭菌、消毒后必须做好标识，标明灭菌、消毒时间和使用有效期。
6.2 人员、物料进入无菌检验室
6.2.1 开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理，消毒时间不得少于30min。
6.2.2 物料进入无菌检验室流程
6.2.2.1 脱包：进入无菌检验室的物品若有双重包装的，需将外包装在传递窗/缓冲间拆除后，传入试验室。
6.2.2.2 消毒：进入无菌操作室的所有培养基、供试品等的外表都应采用适用的方法进行消毒处理，以避免将外包装污染的微生物带入无菌检验室。
6.2.2.3 传递：查看所有进入无菌检验室的器具上的灭菌、消毒标识，是否在有效期内。符合要求的经传递窗传入无菌检验室。
6.2.3 人员进入无菌检验室流程
6.2.3.1 更鞋脱衣：在一更区脱去一般区工作鞋，穿上无菌检验室工作鞋；脱去一般区工作服
洗手：首先用肥皂或洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水连续冲洗20秒，洗净泡沫。
6.2.3.3 更衣：在二更区按照从上到下的顺序穿戴无菌工作服（包括衣、帽、口罩等），要求裤子掖在上衣里，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有头发。
6.2.3.4 手消毒：用消毒液浸泡双手5秒以上或用浸过消毒液的棉球擦拭双手。消毒液可用洗必泰、新洁尔灭、碘伏、75%酒精等。
6.2.3.5 人员进入：经缓冲间进入无菌检验室。
6.2.4 人员进入无菌检验室后，进一步用消毒液擦拭工作台面，戴无菌手套。
7 无菌检验操作要求
7.1 全过程必须严格执行无菌操作，防止微生物污染。
7.2 使用玻璃器皿应轻取轻放，避免破损，以防培养物扩散。
7.3 所有操作均应在近火焰区进行，且不得有大幅度或快速动作，以免搅动空气中的尘埃微粒。
7.4 使用金属接种器具时，用前、用后均需灼烧灭菌。
7.5 在接种培养物时，动作应轻、准，防止培养物溅出，产生汽溶胶，造成污染。
7.6 操作过程中所有的带菌物品，用后均应作消毒、灭菌处理。可在检验过程
中随用随时放入消毒液缸内浸泡或消毒桶内，或在检验完成后经传递窗传至一般区，立即用压力蒸汽灭菌锅121℃灭菌30分钟。 8对照菌液制备
8.1 无菌检验所用的菌株传代次数不得超过5代。
8.2取金黄色葡萄球的普通琼脂斜面培养物，接种一白金耳至营养肉汤或者营养琼脂培养基内，在30～35℃培养18～24h后备用，同时制备0.9%氯化钠溶液加入在6支小试
管内，每支试管内加9.0ml的0.9%氯化钠溶液，在压力锅内经121℃灭菌30min备用。将已配好的金黄色葡萄球菌培养菌液取1.0ml加入第一支小试管内，稀释成浓度1:10的菌液；取第一支试管内1.0m l菌液加入第二支小试管内，稀释成浓度1:100的菌液，同法稀释成浓度1:106（每ml含菌量≤100CFU）即可。
8.3 采用平皿计数法测定活菌数。
9无菌检验培养温度
硫乙醇酸盐流体培养基，置30～35℃培养。改良马丁培养基，置23～28℃培养。
无菌检验
10.1 抽样
根据各自的产品注册标准和相应产品出厂检验规程的规定，对成品库内的产品进行抽样。一般同一个灭菌批产品检验3个单位供试品。
10.2供试液准备
优先采用将供试品或其有代表性的各部分直接投放入培养基内培养的方法，如供试品不适宜直接投放，可按下列方法制备供试液，应使浸提介质充分洗提供试品的浸提表面，供试液制备应按无菌操作法进行，在制备后2小时内使用。根据供试品具体特性选择下列方法：a) 管类器具：按管内表面积每10cm2流过管内腔1ml浸提介质，流量约为10ml/min，收集到无菌的容器内。
b) 容器类器具：按容器内表面积每10cm2加入浸提介质1ml的比例，振摇数次。
c) 实体类器具：实体类器具按表面及每10cm2加入浸提介质1ml，振摇数次。收集上述冲洗液或浸提介质于无菌容器中。 10.3 接种
薄膜过滤法：优先采用封闭式薄膜过滤器（集菌器），也可使用开放式薄膜过滤器。滤膜孔经不大于0.45μｍ。滤器和滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌，或直接采用无菌集菌器。如采用封闭式薄膜过滤器，取一副三联式集菌器，将供试液通过集菌仪过滤，使通过每只培养管的量基本均匀。然后通过集菌仪一只加120ml改良马丁培养基，另两只分别加入120ml硫乙醇酸盐培养基（其中一只做阳性对照，内加金黄色葡萄球菌液1ml）。另取一副二联集菌器，用同批的冲洗液或浸提介质120ml通过集菌仪过滤（每只约50ml），同法一只加硫乙醇酸盐培养基120ml，另一只加改良马丁培养基120ml分别作阴性对照。
b、如用一般薄膜过滤器，将供试液过滤后取出滤膜，将其剪成3等份，分别置于含50ml 硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中两份作检验，一份作阳性对照。
10.4培养、观察
上述含培养基的容器分别置规定温度的恒温培养箱中，除阳性对照管培养48～72小时外，
其余管培养14天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后、或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生产，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或划线接种于斜面培养基上，细菌培养2天，真菌培养3天，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长；或取培养液涂片，染色，镜检判断是否有菌
结果判断
培养结束后，阳性对照管应有菌生长，阴性对管应澄清。否则，就判结果无效。
所有供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。若供试品管中任何1管显浑浊并确证有菌生长判供试品不符合规定。以一次检出为准，不得复试。
当符合下列至少一个条件时，可判试验结果无效；
1）无菌检验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检验法的要求；
2）回顾无菌实验过程，发现有可能引起微生物污染的因素；
3）阴性对照管有菌生长；
4）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌检验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的；
11 相关表单
无菌检验原始记录
菌种外购、转种记录
培养基制备记录
实验中废弃的带菌物品灭菌处理记录
实验用稀释液、冲洗液、缓冲液制备记录
腹部查体操作技能
腹部查体操作技能 （一）腹部视诊 1.腹部的体表标志及分区 （1）体表标志：包括肋弓下缘、腹上角、髂前上棘、腹直肌外缘、腹中线、腹股沟韧带和脊肋角等。 （2）腹部分区：包括四区法、九区法和七区法。 1）九分区法：由两条水平线和两条垂直线将腹部分为井字形九区，上水平线为两侧肋弓下缘连线，下水平线为两侧髂前上棘连线，两条垂直线通过左右髂前上棘至腹中线连线的中点。四线相交将腹部分为左右上腹部（季肋部）、左右侧腹部（腰部）、左右下腹部（髂窝部）及上腹部、中腹部和下腹部9 个区域。 2）四分区法：通过其画一水平线与垂直线，两线相交，将腹部分为四区，即右上腹、右下腹、左上腹和左下腹。 3）七分区法：根据九分区法的两条水平线将腹部分为上中下区，上下腹部再由腹正中线分为左、右上腹部和左、右下腹部。中腹部则按照九分区法的两条垂直线分为左右中腹部和中腹部。 2.腹部外形、腹围 （1）外形：健康人平卧时前腹面大致处于肋缘至耻骨联合连线水平或略低，称为腹部平坦。明显高于该水平称为腹部膨隆，明显低于该水平称为腹部凹陷。全腹膨隆见于腹腔积液、积气、胃肠胀气、腹腔巨大包块。局部膨隆见于脏器肿大、肿瘤／炎性包块、腹壁肿物、疝等。全腹凹陷见于消瘦、脱水、恶病质。 （2）腹围测量：排尿后平卧，软尺绕脐一周。在同样条件下动态测量。 3.呼吸运动腹式呼吸减弱见于腹膜炎症、腹水、急性腹痛、腹腔内巨大肿物和妊娠；腹式呼吸消失见于胃肠穿孔致急性腹膜炎或膈肌麻痹。 4.腹壁静脉一般不可见，但在消瘦、老人或皮肤白皙者可见静脉显露。病理状态下可见腹壁静脉曲张。判断曲张静脉的血流方向对病因诊断很有帮助，方法为：选择一段没有分支的腹壁静脉，用一手示指和中指指腹压在静脉上，然后一指紧压不动，另一指紧压静脉向外滑动，挤出该段静脉内血液，至一定距离后抬起该手指，看静脉是否迅速充盈，帮助判断血流方向。门脉高压：血流方向以脐为中心向四周伸展，俗称“海蛇头”；上腔静脉阻塞时上腹壁和胸壁静脉血流方向向下；下腔静脉阻塞时静脉血流方向向上。 5.胃肠型和蠕动波正常人不出现。胃肠道梗阻时，梗阻近端的胃或肠段扩张而隆起，可呈现胃肠的轮廓，同时伴有该部位的蠕动增强，可以看到蠕动波。
真菌的常规检验法
真菌的常规检验法 实验室检查： ?标本采集分离培养 ?直接镜检生化反应 ?染色镜检免疫学试验 一、临床标本的采集 ?1．皮肤的角质性物质：毛发、指(趾)甲、头屑、皮屑等。 2．各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。 ?3．血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。 4．脓汁及渗出物。 二、检验方法 （一）标本直接检查法
不染色标本检查 染色标本检查 （二）培养检查 （三）鉴定 ①KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如毛发、指甲、鳞屑等）。 ②墨汁：主要用于检查有荚膜的真菌（如新型隐球菌等） ③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。 ④生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替氢氧化钾溶液。 微生物学检查步骤： 取患部标本
（毛发、皮屑等）__置载玻片__加10%NaOH（或10%KOH）→微加温消化 →镜检（观察菌丝和孢子） 直接镜检的意义 ①有诊断意义，如浅部真菌病等； ②通过真菌的形态，可确定某些致病性真菌的属或种, 如假丝酵母菌的厚膜孢子等； ③判断某些真菌种的致病性等,如皮肤癣菌、曲霉等。 直接镜检的局限性： ①阴性结果不能排除真菌感染； ②有假阳性结果。 因此，对直接镜检可疑结果应作复查或用其他检验方法鉴定。 2. 染色标本检查 ?（1）革兰染色：各种真菌均染成革兰阳性。 ?（2）乳酸酚棉蓝染色
?（3）糖原染色： ?又称过碘Schiff（简称PAS或PASH）。真菌细胞壁由纤维素和几丁质组成，含有多糖。过碘酸使糖氧化成醛，再与品红－亚硫酸结合，成为红色，故菌体均染成红色。为真菌染色最常用的方法之一。 ?（4）嗜银染色（GMS）：染成黑色 ?（5）粘蛋白卡红染色法（MCS）：主要用于新生隐球菌荚膜的染色。隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核呈黑色。 ?（6）荧光染色：主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组织切片。 （二）培养检查法 ?本法可确定菌种，辅助直接检查的不足。 ①菌落性质：酵母菌还是霉菌； ②菌落大小：致病性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大； ③菌落颜色：病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；
真菌感染的诊断标准与治疗原则(草案)
侵袭性肺部真菌感染的诊断标准与治疗原则 中华内科杂志编辑委员会 近年来由于造血干细胞移植(HSCT)、实体器官移植的广泛开展、高度免疫抑制剂和大剂量化疗药物的应用以及各种导管的体内介入、留置等，临床上侵袭性肺部真菌感染（invasive pulmonary fungal infections,IPFI）的发病率明显上升。IPFI也日益成为导致器官移植受者、恶性血液病和恶性肿瘤患者以及其他危重患者的死亡原因之一。IPFI的诊断标准与治疗原则至今尚未统一。为了规范我国IPFI的诊断与治疗，中国侵袭性肺部真菌感染工作组经反复讨论，参照欧美国家的相关诊断与治疗指南，结合中国国情，制定出我国IPFI的诊断标准和治疗原则（草案），供国内同道在临床实践中借鉴。 诊断标准 一、定义 IPFI是不包括真菌寄生和过敏所致的支气管肺部真菌感染，分为原发性和继发性2种类型。引起IPFI常见的真菌主要是念珠菌属、曲霉属、隐球菌属、接合菌（主要指毛霉）和肺孢子菌等。IPFI 的诊断由宿主因素、临床特征、微生物学检查和组织病理学四部分组成。临床诊断IPFI时要充分结合宿主因素，除外其他病原体所致的肺部感染或非感染性疾病。诊断IPFI分确诊、临床诊断及拟诊3个级别。 二、确诊IPFI 至少符合1项宿主因素（附录1），肺部感染的1项主要或2项次要临床特征（附录2）及下列1项微生物学或组织病理学依据。 1.霉菌：肺组织标本用组织化学或细胞化学方法检出菌丝或球形体（非酵母菌的丝状真菌），并发现伴有相应的肺组织损害。肺组织标本、胸液或血液霉菌培养阳性，但血液中的曲霉菌属和青霉属（除外马尼菲青霉）真菌培养阳性时需结合临床，要排除标本污染。 表1 IPFI的诊断标准 注：★原发性者无宿主因素，▲肺组织、胸液、血液真菌培养阳性（除外肺孢子菌） 2.酵母菌：肺组织标本用组织化学或细胞化学方法检出酵母菌细胞和（或）假菌丝。肺组织标本、胸液或血液酵母菌培养阳性，或经镜检发现隐球菌。 3.肺孢子菌：肺组织标本染色、支气管肺泡灌洗液或痰液中发现肺孢子菌包囊、滋养体或囊内小体。 三、临床诊断IPFI
腹部体格检查操作方法与流程
腹部体格检查操作方法与流程 一、视诊： 1、准备：排空膀胱，低枕仰卧位，双手置两侧，暴露上自剑突，下至耻骨联合。光线充足柔和，从前侧方射入视野。 2、方法：医生站右侧，按顺序自上而下观察，必要时将视线降至腹平面，从侧面切线方向进行观察。 3、内容：（1）外形（2）呼吸运动（3）腹壁静脉（4）胃肠型及蠕动波（5）皮肤（皮疹、色素、腹纹、瘢痕、体毛）（6）疝、（7）上腹部搏动。 二、触诊： 1、准备：排空膀胱，低枕仰卧位，两腿屈曲稍分开，张口缓慢腹式呼吸。 2、方法：医生站右侧，前臂与腹部表面同一水平，手温暖，指甲短，先全手掌置于腹部上部，适应片刻，用掌指关节和腕关节协同以旋转或滑动触诊。 （1）腹壁紧张度（浅触）：左下腹开始；逆时针方向；或先健侧后患侧。腹壁下陷约1厘米。 （2）腹壁肿块（深部触诊）：左下腹开始；逆时针方向；或先健侧后患侧。腹壁下陷＞2厘米，共4-5厘米。 （3）压痛及反跳痛：浅压或深压，以深压为主。压痛点：麦氏点、胆囊压痛点、上中输尿管点、季肋点、肋骨点、肋腰点。反跳痛：压痛点用2-3个手指并拢压于原处稍停片刻，迅速将手指抬起。 （4）脏器触诊：仰卧，两肘关节屈曲，较深腹式呼吸配合。 ①、肝脏（单手）：右手四指并拢，掌指关节伸直，与肋缘大致平行放在右上腹（或脐右缘），估计肝下缘下方，随患者呼气时，手指压向腹壁深部，吸气时，手指缓慢被动上台，朝肋缘向上迎触下移的肝缘，如此反复。应在右锁骨中线及前正中线分别触诊。 ②脾脏： 仰卧，两腿稍微屈，左手经腹前方置左胸下部9-11肋处，将脾从后向前托起，限制胸廓活动，右手掌平放于脐，于肋弓大致垂直，自脐平面与呼吸配合（同肝脏触诊）。右侧卧位时，双下肢屈曲。 ③胆囊：（钩指触诊） 以左掌平放被检查者右胸下部，以拇指拇指指腹勾压于右肋下胆囊点处，嘱被检查者缓慢深呼吸配合。 ④肾脏：(双手触诊) 卧位，被检查者两腿屈曲，检查者在右侧以左手掌托起右腰部，右手掌平放在右上腹，手指方向与右肋缘大致平行，，被检查者较深腹式呼吸配合，检查右肾。在被检查者深呼吸时夹触肾脏。触诊左肾时，左手越过脐前部，从后托起右腰部，右手搭置于左上腹部，依前法双手触诊左肾。 ⑤膀胱触诊：（单手触诊发） 仰卧屈膝，检查者以右手自脐开始向耻骨方向滑动触诊。液皮震颤：被检查者平卧，检查者以一手掌贴于一侧腹壁，另一手四指并拢屈曲，用指端叩击对侧腹壁，也可以让另一人将手掌尺侧缘压于脐腹中线上。振水音：检查者可以用耳或听诊器膜件置于上腹部，以冲击触诊法震动胃部进行听诊。 三、叩诊 1、腹部叩诊音：左下肢逆时针方向→右下腹→脐。
浅谈常见病原性真菌感染及实验室检查方法
浅谈常见病原性真菌感染及实验室检查方法 发表时间：2019-08-14T13:28:12.163Z 来源：《健康世界》2019年7期作者：王祥 [导读] 真菌是一类具有完整细胞结构和内含物（如典型的细胞核和完整的细胞器），不含叶绿素，没有根、茎、叶的真核细胞型微生物。王祥 达州市宣汉县第三人民医院 636150 真菌是一类具有完整细胞结构和内含物（如典型的细胞核和完整的细胞器），不含叶绿素，没有根、茎、叶的真核细胞型微生物。真菌在自然界中种类繁多，分布广泛。多数真菌对人体无害，甚至有利，如食用、发酵、酿酒及生产抗生素等，仅有少数真菌可引起人类感染性、中毒性及变态性疾病，特别是本来属于人体正常菌群的某些真菌，当机体免疫力低下或长期使用免疫抑制剂、广谱抗生素、激素及化、放疗药物时，导致真菌机会性感染的几率明显增加。真菌感染严重时，可累及全身组织器官，在ICU重症患者、气管插管患者、全静脉营养患者、白血病或其他恶性肿瘤患者的治疗过程中，真菌是医院感染病例中的重要病原菌。由于真菌感染具有治愈率低、治疗周期长、死亡率高等特点，因此越来越受到临床医生的关注和重视。 在真菌的分类方面，临床多根据真菌侵袭肌肤组织程度的不同而分为肌肤浅表感染性真菌和深部感染性真菌。深部感染性真菌主要包括白假丝酵母菌又称白色念珠菌、曲霉菌、隐球菌、耶氏肺孢子菌、马尔尼菲青霉、毛霉目真菌、组织胞浆菌病及镰刀菌8个菌属，主要侵犯人体深部组织、粘膜及脏器，引起深部真菌感染，甚至全身播散性感染。其中以白色念珠菌感染最为常见，当各种原因导致机体菌群失调或抵抗力降低时，可侵犯人体组织器官，引起多部位的念珠菌机会性感染，常见的有女性外阴炎、念珠菌性阴道炎，男性包皮炎、念珠菌性龟头炎、膀胱炎、肺炎、肠炎、心内膜炎、肾盂肾炎及婴幼儿体质虚弱时易患的鹅口疮口角糜烂等，白色念珠菌侵犯中枢神经系统时，还可引起脑膜脑炎、脑膜炎、脑脓肿等。 肌肤浅表感染性真菌主要包括皮肤癣菌、暗色真菌、角层癣菌及孢子丝菌4个菌属。皮肤癣菌有称之为皮肤丝状菌，主要侵犯人体和动物的皮肤、毛发及指（趾）甲，一般不侵犯皮下等深部组织及内脏，常可引起手癣、头癣、甲癣及足癣等多种皮肤癣病；暗色真菌常在患者外伤后感染，高发于四肢暴露部位，暗色真菌感染可引起丘疹、红斑等多种皮损，继发感染时，皮损结痂、反复发作，感染经久不愈，严重时可引起象皮肿，甚至致畸、致残或癌变，机体免疫功能低下时可侵犯中枢神经系统或经血流扩散，对机体造成严重损害；角层癣菌主要寄居于人体毛发、皮肤的最表层，很少引起宿主细胞的炎症反应或较轻微的炎症反应；孢子丝菌感染可导致皮肤、皮下组织及其附近淋巴系统发生慢性感染，引起孢子丝菌病。 感染性真菌的病原学检查是确证真菌感染的重要措施，实验室检查方法有直接镜检、染色镜检、真菌分离培养、组织病理学检查、免疫血清学检查及分子生物学检查等，其中直接镜检和分离培养是真菌病原学检查中最为常见的两种检查手段。 直接镜检是临床真菌检验最快捷、有效的常用方法。10%KOH溶液（可促进角质蛋白的溶解及杀菌作用）涂片镜检，主要适用于毛发、指甲、鳞屑等致密的难以透明的材料检查，显微镜下查见特征性菌丝及孢子体，是初步诊断皮肤癣菌感染的重要依据；用生理盐水替代KOH溶液涂片镜检，可观察真菌的出芽现象，也可用于尿液、胆汁及粪便标本的直接镜检查；无颗粒或杂质的优质墨汁（如印度墨汁）涂片镜检，主要用于新生隐球菌等有荚膜真菌的检查；水合氯醛-石碳酸-乳酸溶液的穿透力较强，仅限于不透明标本的检查。 染色标本镜检具有能够更清楚观察到真菌形态和结构的优点，有助于提高标本阳性检出率。革兰染色是最为常用的染色方法，革兰染色后各种真菌均呈深紫色，常用于假丝酵母菌、孢子丝菌、组织胞浆菌及酵母菌等染色；乳酸酚棉蓝染色适用于各种真菌的培养物涂片检查、直接涂片检查及小培养标本等，该法染色后，真菌呈现蓝色；糖原染色是真菌染色最常用的方法之一，又称过碘酸Schiff染色（简称PAS或PASH），PAS染色后的真菌菌体为红色，细胞核为蓝色，背景为淡绿色，可用于标本直接涂片及组织病理切片的染色检查；嗜银染色（GMS）的原理与糖原染色原理相似，主要区别在于嗜银染色是用铬酸代替过碘酸，GMS染色后真菌呈现黑色，菌丝呈现旧玫瑰红色，背景为淡绿色，可用于组织病理切片检查和标本直接涂片；黏蛋白卡红染色（MCS）主要适用于新生隐球菌的荚膜染色，MCS染色后细胞壁和荚膜呈红色，细胞核为黑色，背景为黄色；荧光染色法是利用荧光染液对直接涂片、培养涂片及组织切片标本染色后，借助荧光显微镜观察荧光反应结果，其区别在于直接涂片标本阳性只表示有真菌存在，不能确定菌种，而培养涂片和组织切片标本则可以根据荧光反应颜色的不同而确定菌种，如白假丝酵母菌为黄绿色，新生隐球菌为红色等。 分离培养检查法是根据绝大多数真菌可以人工培养的特性和真菌对营养要求的差异及培养目的性不同，选择不同的常用培养基（如沙保培养基、马铃薯葡萄糖琼脂及尿素琼脂等）接种培养出真菌，从而为真菌的鉴定及临床确定诊断提供重要依据。 组织病理检查是将疑似真菌感染组织经封蜡、切片、脱水、染色及镜检等一系列复杂过程，观察机体器官、组织中是否存在真菌感染的病理形态学改变或特征，能为病原性真菌感染提供确切的诊断依据。免疫血清学检查主要利用生化、免疫学手段检测真菌的抗原抗体及代谢产物，目前常通过糖（醇）如葡萄糖、甘露醇等发酵试验，免疫学手段检测隐球菌荚膜多糖抗原、Cand-Tec抗原等，可用于多种真菌的鉴别。分子生物学检查方法的原理是借助靶基因（即适当的特异性基因片段），利用PCR扩增技术扩增痰液、血清（浆）、尿液、脓液、支气管肺泡灌洗液等中的真菌成分，从而确定病原性真菌的有无及种类的一种检查方法。 随着现代医疗水平的提高和真菌感染研究的不断深入，将会促使我们对病原性真菌及感染有更多、更新的认知和掌握，相信会有更多先进、快捷的检查方法不断成熟、完善和应用，为病原性真菌感染疾病的早期诊断、治疗提供更加科学、有效的辅助依据。
腹部检查操作规范
腹部检查操作规范 一、操作方法 （一）腹部视诊 1.被检查者取仰卧位，充分暴露全腹，双腿屈曲，嘱被检查者放松腹肌，检查者在其右侧。 2.检查者保持视线与被检查者腹平面同水平，自侧面切线方向观察。 3.提高视线自上而下视诊全腹。 (1)骨性标志：肋弓下缘、剑突、腹上角、髂前上棘、腹股沟韧带、耻骨联合、脐、腹中线、腹直肌外缘、肋脊角）。 (2)外形、呼吸运动、腹壁静脉、胃肠型和蠕动波。 （二）腹部触诊 1.浅部触诊 (1)检查者将手温暖，前臂应在被检查者腹部表面同一水平，先以全手掌放于腹壁上，使被检查者适应片刻，并感受腹壁紧张程度，然后以轻柔动作触诊。 (2)从左下腹开始看，逆时针方向进行触诊，触诊时手指必须并拢，应避免用指尖猛戳腹壁。 (3)检查每个区域后，检查者的手应提起并离开腹壁，不能停留在整个腹壁上移动。 2.下列项目触诊中，操作方法： (1)腹部异常包块触诊：触及异常包块时应注意：位置、大小、形态、质地、压痛、移动度。(2)液波震颤——腹腔有大量游离液体时，如用手指叩击腹部，可感到液波震颤，被检查者平卧，双腿屈曲，放松腹壁，检查者以一手掌面贴于被检查者一侧腹壁，另一只手四指并拢屈曲，用指端叩击对侧腹壁或指端冲击腹壁。为防止腹壁本身的震动传至对侧，可让另一个人手掌侧缘压于脐部腹中线上。 (3)压痛及反跳痛：检查者用手触诊被检查者腹部出现压痛后，手指可于原处稍停片刻，使压痛感觉趋于稳定，然后迅速将手抬起，离开腹壁，被检查者感觉腹痛骤然加重。 3.肝脏触诊： （1）单手触诊：检查者将右手四指并拢，掌指关节伸直，与肋缘大致平行地方在被检查者右上腹部或脐右侧，估计肝下缘的下方。随被检查者呼气时，手指压向腹深部，再次吸气时，手指向前上迎触下移的肝缘。如此反复进行中手指
真菌学实验报告
真菌学实验报告 一.实验目的： 1.1了解真菌形态的基本特征。 1.2掌握丝状真菌制片方法。 1.3掌握内生真菌的分离方法 1.4掌握真菌的鉴定方法。 二.前言： 真菌广泛分布于地球表面,从高山、湖泊到田野、森林，从海洋、高空到赤道、两极，到处都有真菌。真菌虽然不在空气中生长繁殖，但它的孢子却成群的漂浮在天空，只要稍微注意你会发现人类原来生活在真菌的汪洋大海中。 当今世界，生物技术已迈入世界经济的支柱产业，真菌学在生物技术的大潮中得到了长足的发展。真菌是原始的真核生物，具有广泛的多样性，真菌生长我繁殖迅速，在很短的时间内就可以得到比动物和植物多得多的后代，能够直接、快速地进行遗传性状分离的
分析。因此，真菌可以作为研究基础生物学过程中的一个重要工具，真菌基因的多样性以及真菌分子生物学的发展，为生物技术产业提供了一个广阔的天地。 植物的生长环境直接影响内生真菌的生物多样性，植物物种的年代越久远，其生物内生真菌的多样性越丰富：抗病原性能越强的植物，其所含的内生真菌具有抗菌活性的可能行就越大；其所含的内生真菌有可能产生与植物相同或相似的抗菌无知或产生抗菌活性物质可能参与了药用植物的抗菌过程，本实验通过植物病原真菌和G+、G-细菌的抑制实验发现茎，根，花，种子或果实内生真菌的代谢产物具有不同程度的抑菌能力，并且对G+、G-有普片遍的抑菌作用。研究和开发内生真菌的寻找新的抗菌活性物质具有广泛的应用前景。 三.材料与方法： 3.1.1材料： 在校园内采集银杏、喜树、桂花树样品包括叶、茎、根、花、种子或果实。 3.1.2.药品与试剂： 葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O，马铃薯、琼脂。孟加拉红，青霉素，链霉素，甲基蓝，蛋白胨，酵母膏，蔗糖，磷酸盐，葡萄糖，琼脂条，无菌水等。消毒剂：75%的乙醇，0.1%升汞（HgCl2），次氯酸钠溶液（含活性氯10%），30%双氧水。双
腹部触诊流程
河南省肿瘤医院 腹部触诊流程与评分标准 科室姓名：主考老师：分数
腹部检查相关注意事项与知识点：
一、注意事项： 1.可以边检查边交谈，分散被检查者注意力，以减少腹肌紧张，注意被检查者面部表情。 2..避免用指尖猛戳病人腹部，每检查一个区域后，检查者手应提起并离开。 3.如果估计被检查者肝脏、脾脏肿大明显，开始检查部位应当下移。 4.视诊发现全腹膨隆见于腹腔积液、积气、胃肠胀气、腹腔巨大包块。局部膨隆见于脏器肿大、肿瘤／炎性包块、腹壁肿物、疝等。全腹凹陷见于消瘦、脱水、恶病质，需进行进一步检查。视诊内容有腹部外形、呼吸运动、腹壁静脉、胃肠型、蠕动波等。 5.病理状态下可见腹壁静脉曲张。判断曲张静脉的血流方向方法为：选择一段没有分支的腹壁静脉，用一手示指和中指指腹压在静脉上，然后一指紧压不动，另一指紧压静脉向外滑动，挤出该段静脉内血液，至一定距离后抬起该手指，看静脉是否迅速充盈，帮助判断血流方向。门脉高压：血流方向以脐为中心向四周伸展，俗称“海蛇头”；上腔静脉阻塞时上腹壁和胸壁静脉血流方向向下；下腔静脉阻塞时静脉血流方向向上。 二、腹部分区： （1）体表标志：包括肋弓下缘、腹上角、髂前上棘、腹直肌外缘、腹中线、腹股沟韧带和脊肋角等。 （2）腹部分区：包括四区法、九区法和七区法。 1）九分区法：由两条水平线和两条垂直线将腹部分为井字形九区，上水平线为两侧肋弓下缘连线，下水平线为两侧髂前上棘连线，两条垂直线通过左右
髂前上棘至腹中线连线的中点。四线相交将腹部分为左右上腹部（季肋部）、左右侧腹部（腰部）、左右下腹部（髂窝部）及上腹部、中腹部和下腹部9个区域。 2）四分区法：通过脐画一水平线与垂直线，两线相交，将腹部分为四区，即右上腹、右下腹、左上腹和左下腹。 3）七分区法：根据九分区法的两条水平线将腹部分为上中下区，上下腹部再由腹正中线分为左、右上腹部和左、右下腹部。中腹部则按照九分区法的两条垂直线分为左右中腹部和中腹部。 三、肝脾大测量 1．肝肿大的测量： 1）第一测量：右锁骨中线上，肝上界（肝相对浊音界）至下缘之间的距离。 2）第二测量：右锁骨中线上，肝下缘距肋弓的距离。 3）第三测量：前正中线上，剑突基底部至肝下缘的距离。 正常肝脏：肋下≤lcm，剑下≤3一5cm，上下径9—11cm。 弥漫性增大：见于肝炎、肝淤血、脂肪肝、早期肝硬化、白血病、血吸虫病。 局限性增大：见于肝脓肿、肝囊肿、肝肿瘤。 2、脾大的测量： 1）第一测量：又称甲乙线。左锁骨中线上，肋缘至脾脏下缘之间的距离。 2）第二测量：又称甲丙线。左锁骨中线与肋缘交点至脾脏最远点之间的距离。 3）第三测量：又称丁戊线。脾脏右缘距前正中线之间的距离。脾脏向右越过前正中线，
医学物理查体-腹部查体操作步骤
腹部查体 视诊 前嘱患者排空膀胱，低枕仰卧位 腹部外形：正常人腹部外形平坦（饱满，低平）对称，；弥漫性全腹膨隆见于腹水、胃肠胀气或巨大卵巢囊肿等；局部膨隆见于肿块或肿大的脏器等；腹部凹陷如舟状者见于恶病质及严重脱水；局限性凹陷见于手术瘢痕收缩。 腹部呼吸运动：男性和小儿以腹式呼吸为主；正常人腹式呼吸运动自如；腹式呼吸运动减弱见于腹膜炎症、腹水、急性腹痛、腹腔内巨大肿物或妊娠，消失见于急性腹膜炎或膈麻痹。腹壁静脉：正常人一般不显露，血流方向如何判断：选择一段没有分支的腹壁静脉，用右手食指和中指并拢压在静脉上，然后一只手指紧压静脉向外滑动，挤出该段静脉内血液7·5到10cm放松该手指，另一手指紧压不动看静脉是否充盈。门静脉高压（脐中向四周伸展—水蛇头）上腔静脉阻塞（血流向下）下腔静脉阻塞（脐下血流向上） 胃肠型和胃肠蠕动波：正常人一般看不到胃肠蠕动波；幽门梗阻者上腹部可见胃型或胃蠕动波；肠梗阻可见肠型或肠蠕动波 上腹部搏动：可见于正常较瘦者；病理情况见于腹主动脉瘤、右室肥大、肝血管瘤 腹壁其它情况：皮疹、色素、腹纹、瘢痕、疝、脐部和腹部体毛 ·听诊 肠鸣音：正常人为4-5次/分钟；超过10次/分钟为肠鸣音活跃，同时伴响亮、高亢、金属音为肠鸣音亢进；肠鸣音少于正常为肠鸣音减弱；持续听诊3-5分钟未听到肠鸣音，且刺激腹部仍无肠鸣音，为肠鸣音消失；故要求听诊至少3-5分钟 ·血管杂音：腹主动脉瘤可腹中部听到收缩期杂音；肾动脉狭窄可于脐左右处听到收缩期吹风样杂音；肝癌肿块压迫肝动脉或腹主动脉，可听到收缩期吹风样杂音；腹壁怒张静脉可听到连续的静脉嗡鸣音。听诊部位（腹中部，腹部两侧） ·摩擦音：脾梗塞，肝脾周围炎，可在深吸气时于各相应部位腹壁听到摩擦音 ·搔弹音：可协助测定肝下缘、微量腹水及扩张的胃界患者卧位，检查者手持听诊器置于右肋缘肝脏表面上，右手食指在上腹部沿听诊器半圆形等距离骚刮腹壁，未达肝缘，遥远轻微的声音，骚刮肝脏表面，声音明显增强近耳 ·叩诊 ·腹部叩诊音分布
微生物实验室真菌检查质量控制流程
微生物实验室真菌检查质量控制流程 一、目的 规范微生物实验室管理程序，确保临床报告的质量。 二、适用范围 微生物实验室的各类真菌检测。 三、职责 实验室检验人员均必须熟知并遵守本程序。 四、程序 (一)临床样本的采集与处理 1.皮屑边缘、疱壁、脓液、深层趾（指）间皮屑或活动边缘皮屑，取材前75%酒精消毒，作KOH 涂片。 2.甲屑用细挫或牙科磨钻取病甲与正常甲交界处并且贴近甲床部的甲屑，作KOH涂片。 3.毛发取病发（变色，无光泽，弯曲，脆易折断，松动易拔除）15根，75%酒精消毒，3～5 根作直接镜检。 4.脓液无菌采集，注意颗粒，用无菌蒸馏水稀释后寻找。可作革兰染色，常规的KOH涂片。 5.CSF 采集于无菌试管3～5ml，立即送检。置冰箱不宜超过1h。离心后以无菌吸管吸取离心沉 淀物1ml，作墨汁涂片镜检。 6.血液无菌抽血3～5ml立即于无菌抗凝管中，BHIB:血标本量为培养基量的1/10，37℃5～7d 出现浑浊或菌团，挑取镜检同时移种SDA（注：每天检查完毕后需摇动培养基，37℃震荡培养可加速真菌的生长，提高检出率。不作直接检查，因其直接检查阳性率低。
7.体液、痰液、尿液、粪便①体液标本量10ml离心沉淀取2ml沉淀液做直接镜检培养。②晨 痰3～5ml集于无菌瓶中(无菌生理盐水漱口数次后)，挑取黏液或脓性部分：KOH涂片培养。③早晨中段尿或清洁尿10ml，离心取沉淀液1ml做KOH涂片培养（SDA每管种0.5ml）。④拭子：一般尽量不用，缺点：A.不能得到足量的标本；B.采集的标本也不易从棉花纤维上分离下来;C.容易干竭。 采集标本后应迅速放入内装1~2ml无菌蒸馏水的试管送检KOH涂片培养。⑤纸盒送检，挑取黏液、脓血、乳酪样部分KOH涂片培养（加抗生素）注：单纯培养阳性，不一定有临床意义，KOH涂片发现菌丝，有诊断意义。 8.组织：标本置无菌平皿中立即送检，置无菌匀浆器加2ml蒸馏水，研磨成浆或1～2mm的小块， KOH涂片培养。 (二)涂片染色和直接镜检的质控 1.氢氧化钾/复方氢氧化钾法：标本置于载玻片上，加一滴浮载液，盖上盖玻片，放置片刻或微加 热，即在火焰上快速通过2～3次，不应使其沸腾，以免结晶，然后轻压盖玻片，驱逐气泡并将标本压薄，用棉拭或吸水纸吸去周围溢液，置于显微镜下检查。检查时应遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列等。 2.胶纸粘贴法：用1cm×1.5cm的透明双面胶带贴于取材部位数分钟后自取材部位揭下，撕去复带 在上面的底板纸贴在载玻片上，使原贴在取材部位的一面暴露在上面，再进行革兰染色或过碘酸锡夫染色，在操作过程中应注意双向胶带粘贴在载玻片上时不可贴反，而且要充分展平，否则影响观察。 革兰染色检查法：在载玻片上滴1滴生理盐水，将所采集的标本均匀涂在载玻片上，自然干燥后，火焰固定或甲醇固定。再选择革兰染色方法，染色后，以油镜观察。 3.染液的质量控制 （1）革兰染液每次新配置和使用中每周一次进行质控，并进行记录。 （2）氢氧化钾/复方氢氧化钾每周进行一次质控。 (三)真菌鉴定质量保证 1.对酵母样真菌如念珠菌或隐球菌在常规临床细菌室已有较成熟的方法学，可用显色培养基。 2.常规鉴定丝状真菌主要依赖于其生长过程中形态变化和特点，所以要求从事丝状真菌检测的检验
真菌的培养及形态观察
题目：真菌的培养及形态观察 动物科学1204班聂孝明 20121546 指导教师：邹玲 摘要：了解酵母菌和霉菌的菌落特征及在培养基中的生长表现，还有真菌的分离培养方法和载片培养，学习真菌水浸片的制备及形态观察。本实验通过真菌的固体培养，酵母菌水浸片旳制备观察及划线分离培养的方法进行形态观察。在固体培养基上，观察到A菌落成绿色比较光滑、有分生孢子、菌丝有横隔为青霉。D菌落有大量直立菌丝并且顶部发黑、有孢子囊、菌丝无横隔为根霉。B菌落大而光滑、显微镜下菌体较大、有假菌丝并且出芽生殖的为酵母菌。 关键词：酵母菌霉菌形态观察分离培养 引言：真菌在自然界中分布广、数量大、种类多。酵母菌是单细胞微生物，细胞核和细胞质有明显的分化，个体直径比细菌大10倍左右，多为圆形或卵圆形，无性繁殖为出芽生殖，可以形成假菌丝，有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。用美蓝染色液制成水浸片可以观察期外形和区分细菌的死活。霉菌的营养体是分支的丝状体，较大，分为基内菌丝和气生菌丝，不同的霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子，细胞易收缩变形，孢子容易分散。利用培养在玻璃纸上的霉菌作为观察材料，可以得到清晰，完整，保持自然状态的霉菌形态。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌种：酵母菌，青霉，根霉的斜面培养菌种 1.1.2试剂：沙堡培养基、美蓝染色液、70%酒精、无菌水等 1.1.3其他：解剖针、玻片、盖玻片、接种环、显微镜等 1.2方法 1.2..1真菌的划线分离培养 培养基：将沙堡琼脂培养基融化后，冷却至45摄氏度，注入无菌平皿中，每皿15~20ml，做成平板备用。 接种：取待分离的材料少许，投入无菌水试管中，振荡，使分离菌悬浮于水中，将接种环火焰灭菌后冷却，取上述悬液，进行平板划线分离。 培养与观察：划线完毕后，置于28摄氏度温箱培养2~5天，待形成子实器官后，取单个菌落部分，制片镜检。若只有一种菌，既得纯培养物。如有杂菌可取培养物少许制成悬液，用作划线分离，有时反复多次可获得纯种。也可在放大镜下观察，用无菌镊子夹取一段分离的真菌菌丝，在平板上分离培养，即可得到真菌的纯培养物。 1.2.2真菌在固体培养基上的生长表现： 酵母菌在固体培养基上菌落呈油脂状或蜡质状，表面光滑、湿润、粘稠，有的表面呈现粉粒状，粗糙或褶皱，菌落边缘整齐、缺损或带丝状。菌落颜色有乳白色、黄色、红色等。将不同的霉菌在固体培养基上培养2~5d，可见霉菌有绒毛状、絮状、绳索状等。大小依霉菌种类而异，很多霉菌的孢子和菌丝能产生色素，致使菌落表面、背面甚至培养基呈现不同的颜色，如黄色、绿色、黑色、橙色等。 1.2.3真菌的形态观察 1.2.3.1酵母菌水浸片的制备：将美蓝染色液或蒸馏水滴于干净的载玻片中央，用接种环以无菌及操作取培养48h的酵母菌少许，均匀涂于液滴中，染色2~3min后加盖玻片。注意切勿产生气泡，然后低倍镜和高倍镜观察其细胞形态、芽殖方式，注意酵母菌的形态、大小和芽体，同时可以根据是否染上颜色来区别死活细胞。 1.2.3.2挑取真菌孢子接入盛有灭菌水的试管中，震荡试管制成孢子悬液，用灭菌滴管吸取
腹部查体流程
腹部查体流程 一、一般准备 1、“报告考官我是瓦房店市中心医院XXX，进行腹部查体操作，可以开始吗？” 2、“室内温度适宜，光线充足” 3、洗手 4、站位：医生站在病人右侧。 5、“您好，您是XXX先生（女士）吗？我是XXX，是您的主治医师，现在我为您做腹部查体，请您去卫生间排尿”。 6、“请您仰卧，给您垫个小枕，请您双腿弯曲，双手自然放在身体两侧，请您放松腹部。” 暴露腹部范围：乳房（男性乳头；女性乳房下1/3）至耻骨联合，显露腹股沟区。 二、视诊： “腹部平坦，腹式呼吸为主，腹壁静脉无曲张，未见胃肠型及蠕动波，腹部无瘢痕、腹股沟区无包块，脐无异常隆起，上腹部无异常搏动。” 三、听诊： 1、肠鸣音：将听诊器先后放于右下腹和左上腹，听诊肠鸣音各＞1分钟，看表。“听诊1分钟”“肠鸣音4次/分，无气过水声”。 2、动脉杂音：将听诊器分别放于脐上腹中线稍偏左和左右上腹部听诊。“腹主动脉、肾动脉无血管杂音”。 3、肝脾摩擦音：将听诊器分别放于左右上腹部听诊。“深吸气！”“肝脾区无摩擦音”。 4、肝脏搔弹音：将听诊器用左手食指、中指固定在剑突下，右手食指分别在右锁骨中线、右腋中线和正中线，自脐平面向上弹击腹壁至肝下缘。“肝脏下界在这个位置，下缘无下移”。
5、微量腹水搔弹音：病人取肘膝位数分钟，听诊器置于脐部，用手指轻弹侧腹壁，重复轻弹同一部位，逐渐外移。“腹水搔弹音阴性” 四、叩诊 1、肝脏叩诊：分别沿右锁骨中线、右腋中线自上而下叩诊，再自下而上叩诊，至少2次。“肝上界位于右锁骨中线第5肋间、右腋中线第7肋间；肝下界位于右锁骨中线第6肋间、右腋中线第10肋间。” 2、肝区叩击痛：“您疼吗？肝区无叩痛。” 3、胆囊叩击痛：“您疼吗？胆囊区无叩痛。” 4、脾叩击痛：“您疼吗？脾区无叩痛。” 5、移动性浊音：“移动性浊音阴性。” 6、膀胱叩诊：“膀胱无充盈。” 7、肋脊角叩痛：“您疼吗？双肾区无叩痛。” 五、触诊 1、浅部触诊：“腹肌无紧张，腹壁无包块。” 2、深部触诊：“请您张口深呼吸，腹部放松，您疼吗？”。 正常：“全腹无压痛、反跳痛，无包块”。 异常：“腹部XX(部位)触及X*X厘米肿块，呈X形状，质地（软、韧、硬），压痛，有（无）搏动感，有（无）移动度（随呼吸移动、移动度大、不能移动等）。” 3、脏器触诊 A、肝脏、胆囊触诊: 正常：“肝脏肋下未触及，胆囊肋下未触及，Murphy征阴性”。 异常：“肝脏下缘位于肋下XX厘米，剑突下XX厘米，质地韧，表面不光滑，无包块，无波动，无触痛”。
(完整版)腹部检查操作步骤及要求
腹部检查操作步骤及要求 腹部检查的顺序与其他系统检查略有不同，由于触诊可导致肠鸣音的改变，故遵循望、听、叩、触的顺序进行为宜。 1．腹部的形态或轮廓：正常人腹部平坦对称。弥漫性全腹膨隆见于腹水、胃肠胀气或巨大囊肿等；局部膨隆见于肿块或增大的脏器等；腹部凹陷如舟状者见于恶病质及严重脱水；局限性凹陷多见于手术后疤痕收缩。 2．腹部呼吸运动：正常人呼吸运动自如。呼吸运动受限或消失见于急性弥漫性腹膜炎、腹水及膈肌麻痹。 3．腹壁静脉：注意检查静脉有无怒张及血流方向。腹壁静脉怒张见于肝硬化及上、下腔静脉梗阻。 4．腹壁皮肤：注意皮疹、色素沉着、腹纹、疤痕、疝、皮肤弹性、水肿、脐及体毛分布等。 5．胃型、肠型或蠕动波：正常人一般看不到胃肠蠕动波。幽门梗阻患者上腹部可见胃型或蠕动波。肠梗阻患者可见梯型肠型，蠕动方向不一致。 6．上腹部搏动：病理情况见于右室肥大、腹主动脉瘤及三尖瓣关闭不全。 【听诊】 1．肠鸣音：要求听诊3－5分钟，注意其频率、音调及强度。正常频率为4～5次／分钟，超过10次／分钟为频率增多，0－l次／3－5分钟称肠鸣音减少，见于麻痹性肠梗阻。肠鸣音高亢呈金属声见于机构性肠梗阻。 2．振水音：医生用微弯的手指，在病人上腹部进行连续冲击2－3次，同时将耳部接近上腹或用听诊器听取胃内气体与液体碰撞的声音，称为振水音，见于幽门梗阻或胃储留的病人。 3．心血管音：腹主动脉瘤可听到收缩期杂音；肾动脉狭窄可在脐左右处听到收缩期吹风性杂音；肝癌肿块压近肝动脉或腹主动脉时，可听到收缩期吹风性杂音；肝硬化门脉高压腹壁静脉怒张，可听到静脉嗡鸣音。 4．摩擦音：肝、脾周围炎时，在相应部位深呼吸时可听到摩擦音。 【叩诊】 1．肝叩诊： ⑴肝上界叩诊：沿右锁骨中线各肋间从上至下叩诊，叩诊音由清音转为浊音即肝上界。正常人肝上界位于第5肋间。当肝下缘触及时，应叩肝上界以确定肝脏是否真正肿大。正常肝浊音区（右锁骨中线）为9－11cm。 （2）肝下界叩诊：肝下界与结肠、胃等腹腔脏器重叠，故叩诊准确性差。（3）肝区叩击痛：以左手掌平放患者肝区，右手握拳用轻至中度的力量叩击左手背，出现疼痛者称肝叩击痛，见于肝脏肿、肝炎等。 2，胃泡鼓音区叩诊；为于左前胸下部，呈半圆形的鼓音区，为胃内含气所致。3脾叩诊；正常在左腋中线9一11肋间为脾浊音区，前缘不超过腋前线，宽度为5－7cm。 4．肾叩诊：将左手平放于病人肋脊角，右手掌握用轻到中度的力量叩击左手背。正常无肾叩痛。 5．膀胱叩诊：一般从脐下叩至耻骨联合上方，用以了解膀胱充盈度。 6．移动性浊音叩诊法：主要用于检查有无腹水存在。病人取平卧位，从脐部向
重症患者侵袭性真菌感染诊疗指南
重症患者侵袭性真菌感染诊疗指南(转载) 重症患者侵袭性真菌感染诊疗指南 重症加强治疗病房(ICU)患者就是侵袭性真菌感染(invasive fungal infections, IFI)的高发人群,并且IFI日益成为导致ICU 患者死亡的重要病因之一。为使重症医学工作者对IFI有一个全面、系统的认识,以便指导与规范我国ICU医生的医疗实践,中华医学会重症医学分会组织相关专家,依据近年来国内外研究进展与临床实践,制定出《重症患者侵袭性真菌感染诊断与治疗指南》。 一、重症患者IFI的流行病学 (一)ICU患者侵袭性真菌感染的发病率 在过去的几十年中ICU患者IFI的发病率不断增加,约占医院获得性感染的8～15%。以念珠菌为主的酵母样真菌与以曲霉为主的丝状真菌就是IFI最常见的病原菌,分别占91、4%与5、9%。在美国,念珠菌血症已跃居院内血源性感染的第四位。研究显示,器官移植受者真菌感染的发病率为20%～40%,而艾滋病患者发生真菌感染的可能性高达90%。尽管抗真菌的非药物治疗措施越来越受到重视,而且不断有新的抗真菌药物问世,但IFI的发病率仍有明显升高的趋势。 (二)ICU患者侵袭性真菌感染的重要病原菌 ICU患者IFI的病原菌主要包括念珠菌与曲霉。ICU患者IFI仍以念珠菌为主,其中白念珠菌就是最常见的病原菌(占4 0%～60%)。但近年来非白念珠菌(如光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌等)感染的比例在逐渐增加。 侵袭性曲霉感染的发生率也在逐渐上升,占所有IFI的5、9%～12%。曲霉多存在于潮湿阴暗且缺乏通风的环境中,其孢子飘浮于空气中而易于被病人吸入。曲霉属中最常见的就是烟曲霉、黄曲霉及黑曲霉,焦曲霉与土曲霉较少见。另外赛多孢霉属、镰孢霉属、接合菌中的根霉属与毛霉属的感染率也有所增加。 (三)ICU患者侵袭性真菌感染的病死率 ICU患者IFI的病死率很高,仅次于血液系统肿瘤患者。 侵袭性念珠菌感染的病死率达30%～60%,而念珠菌血症的粗病死率甚至高达40%～75%,其中光滑念珠菌与热带念珠菌感染的病死率明显高于白念珠菌等其它念珠菌。 尽管ICU患者侵袭性曲霉感染发生率低,但其病死率高,就是免疫功能抑制患者死亡的主要原因。 (四)ICU患者侵袭性真菌感染的高危因素 在ICU 中,IFI除了可发生于存在免疫抑制基础疾病或接受免疫抑制治疗的患者,更多的则就是发生在之前没有免疫抑制基础疾病的重症患者,这与疾病本身或治疗等因素导致的免疫麻痹/免疫功能紊乱有关。 与其它科室的患者相比,ICU患者最突出的特点就是其解剖生理屏障完整性的破坏。ICU患者往往带有多种体腔与血管内的插管,且消化道难以正常利用,较其她患者具有更多的皮肤、粘膜等解剖生理屏障损害,因此使得正常定植于体表皮肤与体腔粘膜表面的条件致病真菌,以及环境中的真菌易于侵入原本无菌的深部组织与血液。 ICU患者IFI的高危因素主要包括:①ICU患者病情危重且复杂;②侵入性监测与治疗手段的广泛应用;③应用广谱抗菌药物; ④常合并糖尿病、COPD、肿瘤等基础疾病;⑤皮质激素与免疫抑制剂在临床上的广泛应用;⑥器官移植广泛开展;⑦肿瘤化疗/放疗、HIV感染等导致患者免疫功能低下;⑧ICU诊治手段不断提高,使重症患者生存时间与ICU住院时间延长。
真菌学实验指导
本课程，本课程是大学本科生物技术、生物科学专业的选修课程。介绍真菌分类现状、分类方法（包括传统与现代分类方法的比较）、分类依据及其原则。本课程的教学不限于介绍研究的成果，重在介绍分析和解决问题的方法，以培养学生分析问题和创新的能力。所以在理论学习的同时开设综合性实验，培养学生观察、分析和动手能力。基本掌握真菌分离、鉴定的方法，并应用于真菌其它领域的研究。 本指导书适用于生物技术和生物科学专业。
1、实验：内生真菌的分离及鉴定 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????3 2、实验报告基本内容要求 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????7 3、实验报告格式????????????????????????????????????????????????????????????????8
实验内生真菌的分离及鉴定 实验学时：18 实验类型：综合 实验要求：选修 一、实验目的 1.了解真菌形态的基本特征。 2.掌握丝状真菌制片方法和真菌鉴定方法。 二、实验内容 采集植物样品包括叶、茎、根、花、种子或果实，然后对分离样品的内生真菌，并进行形态和分子生物学方法的鉴定。 三、实验原理、方法和手段 （一）实验原理 根据真菌的形态特征和ITS序列等分子证据对分离到真菌进行归类和鉴定。 （二）实验手段和方法 1、内生真菌分离纯化方法 1.1样品的表面消毒及预处理 分别取根、茎、叶、果实，用洗涤剂在自来水下洗净。 老树皮用75%酒精进行表面消毒后，用镊子取出，于酒精灯上烧灼15秒至表面焦糊，切成1×1cm2大小置于PDA固体培养基上。 对于根、茎、叶、果实按下列程序进行表面消毒： 75%的酒精漂（浸）洗2-3min→无菌水冲洗4-6次→0.1%升汞不同的消毒时间（共设置7个梯度）→无菌水冲洗4-6次→用灭菌滤纸吸干多余水分→无菌刀片将材料切成小块 将根、茎的表皮、韧皮部、木质部大致分开，并切成0.5×0.5cm2大小。将果实的外种皮去掉，消毒之后将内种皮去掉。 灭菌时，沥干的植物材料转放到烧杯中，记好时间，倒入消毒溶液，不时用玻璃棒轻轻搅动，以促进材料各部分与消毒溶液充分接触，驱除气泡，使消毒彻
2021年重症患者侵袭性真菌感染诊疗指南
重症患者侵袭性真菌感染诊疗指南(转载) 欧阳光明（2021.03.07） 重症患者侵袭性真菌感染诊疗指南 重症加强治疗病房(ICU)患者是侵袭性真菌感染(invasive fungal infections, IFI)的高发人群，并且I FI日益成为导致ICU患者死亡的重要病因之一。为使重症医学工作者对IFI有一个全面、系统的认识，以便指导和规范我国ICU医生的医疗实践，中华医学会重症医学分会组织相关专家，依据近年来国内外研究进展和临床实践，制定出《重症患者侵袭性真菌感染诊断和治疗指南》。咸阳215医院神经外科谢国强 一、重症患者IFI的流行病学 （一）ICU患者侵袭性真菌感染的发病率 在过去的几十年中ICU患者IFI的发病率不断增加，约占医院获得性感染的8～15%。以念珠菌为主的酵母样真菌和以曲霉为主的丝状真菌是IFI最常见的病原菌，分别占91.4%和5.9%。在美国，念珠菌血症已跃居院内血源性感染的第四位。研究显示，器官移植受者真菌感染的发病率为2 0%～40%，而艾滋病患者发生真菌感染的可能性高达90%。尽管抗真菌的非药物治疗措施越来越受到重视，而且不断有新的抗真菌药物问世，但IFI的发病率仍有明显升高的趋势。 （二）ICU患者侵袭性真菌感染的重要病原菌 ICU患者IFI的病原菌主要包括念珠菌和曲霉。ICU患者IFI仍以念珠菌为主，其中白念珠菌是最常见的病原菌(占40%～60%)。但近年来非白念珠菌(如光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌等)感染的比例在逐渐增加。 侵袭性曲霉感染的发生率也在逐渐上升,占所有IFI的5.9%～12%。曲霉多存在于潮湿阴暗且缺乏通风的环境中，其孢子飘浮于空气中而易于被病人吸入。曲霉属中最常见的是烟曲霉、黄曲霉及黑曲霉，焦曲霉和土曲霉较少见。另外赛多孢霉属、镰孢霉属、接合菌中的根霉属和毛霉属的感染率也有所增加。 （三）ICU患者侵袭性真菌感染的病死率 ICU患者IFI的病死率很高，仅次于血液系统肿瘤患者。