饲用植酸酶活性的测定 分光光度法(标准状态：现行)

犐犆犛６５．１２０

犅４６

中华人民共和国国家标准

犌犅／犜１８６３４—２００９

代替ＧＢ／Ｔ１８６３４—２００２

饲用植酸酶活性的测定

分光光度法

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２００９ ０５ ２６发布２００９ １０ ０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

前 言

本标准代替ＧＢ／Ｔ１８６３４—２００２《饲用植酸酶活性的测定　分光光度法》。

本标准与ＧＢ／Ｔ１８６３４—２００２相比主要变化如下：

———缩小了方法的适用范围；

———改变了方法的最低定量限；

———改变了缓冲溶液的配制方法；

———细化了测定过程中的操作步骤；

———删除了相对法；

———扩大了添加植酸酶的配合饲料样品两次试验的允许差，相对偏差≤１５％。

本标准附录Ａ为资料性附录。

本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。

本标准负责起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所［国家饲料质量监督检验中心（北京）］，广东溢多利生物科技股份有限公司，武汉新华扬生物有限公司。

本标准主要起草人：马东霞、詹志春、史宝军、苏晓鸥、詹连生、梁雪霞、张苏。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

———ＧＢ／Ｔ１８６３４—２００２。

饲用植酸酶活性的测定

分光光度法

１　范围

本标准规定了以分光光度法测定饲用植酸酶的活性。

本标准适用于作为饲料添加剂使用的植酸酶产品，也适用于添加有植酸酶的配合饲料。方法最低定量限为１３０Ｕ／ｋｇ。

２　规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

ＧＢ／Ｔ１４６９９．１　饲料　采样

３　术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

３．１

植酸酶活性　狆犺狔狋犪狊犲犪犮狋犻狏犻狋狔

在温度３７℃、ｐＨ５．５０条件下，每分钟从浓度为５．０ｍｍｏｌ／Ｌ植酸钠溶液中释放１μｍｏｌ无机磷，即为一个植酸酶活性单位，以Ｕ表示。

４　原理

植酸酶在一定温度和ｐＨ条件下，将底物植酸钠水解，生成正磷酸和肌醇衍生物。在酸性溶液中，能与钒钼酸铵生成黄色的复合物，可于波长４１５ｎｍ下进行比色测定。

５　试剂和材料

除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。清洗试验用器皿不要用含磷清洗剂。

５．１　磷酸二氢钾（ＫＨ２ＰＯ４）：基准物。

５．２　乙酸缓冲液（１），犮（ＣＨ３ＣＯＯＮａ）＝０．２５ｍｏｌ／Ｌ：称取２０．５２ｇ无水乙酸钠于１０００ｍＬ烧杯中，加入９００ｍＬ水搅拌溶解，用冰乙酸调节ｐＨ至５．５０±０．０１，再转移至１０００ｍＬ容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度。室温下存放２个月内有效。

５．３　乙酸缓冲液（２），犮（ＣＨ３ＣＯＯＮａ）＝０．２５ｍｏｌ／Ｌ：称取２０．５２ｇ无水乙酸钠，０．５ｇ曲拉通Ｘ １００（ＴｒｉｔｏｎＸ １００），０．５ｇ牛血清白蛋白（ＢＳＡ）于１０００ｍＬ烧杯中，加入９００ｍＬ水搅拌溶解，用冰乙酸调节ｐＨ至５．５０±０．０１，再转移至１０００ｍＬ容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度。室温下存放２个月内有效。

５．４　底物溶液，犮（Ｃ６Ｈ６Ｏ２４Ｐ６Ｎａ１２）＝７．５ｍｍｏｌ／Ｌ：称取０．６９ｇ植酸钠（Ｃ６Ｈ６Ｏ２４Ｐ６Ｎａ１２，相对分子质量为９２３．８，纯度为９５％），精确至０．１ｍｇ，置于１００ｍＬ烧杯中，用约８０ｍＬ乙酸缓冲液（５．２）溶解，用冰乙酸调节ｐＨ至５．５０±０．０１，转移至１００ｍＬ容量瓶中，并用乙酸缓冲液（５．２）定容至刻度，现用现配