RNA样品保存液使用说明注意事项
RNA样品保存液
Cat. No. ZH0103 保存：室温组分说明
Cat. No. ZH0103-A ZH0103-B
Volume 100 ml 500 ml
产品简介
本产品是一种新型的RNA 稳定试剂，可迅速渗入组织保护RNA。其迅速的保护作用确保了下游基因表达分析结果的准确性。该试剂保护后的样本可长期保存，即使是多次反复冻融RNA 也不会降解。经保护的RNA 在37°C 下可保存 2 天，18-25°C 下可保存7 天，2-8°C 下可保存 4 周，-20℃或-80°C 条件下可长期保存。经该产品保存的组织可用于所有关于RNA 的后续实验，包括总RNA 的提取，micro RNA 的提取，mRNA 的提取等。
表1：常见存放温度与其最长存放时间关系
保存温度保存时间
37℃两天(保存三天的样品
RNA 有部分降解)
18-25℃一周(保存两周的样品
RNA 有轻微降解)
2-8℃一个月
-20℃和-80℃长期
注意事项
1. RNAstore 保存中如果有沉淀，置于37℃溶解后使用。
2. 要保存的组织样本的任何一边的最大厚度都不能超过0.5 cm，如果厚度过大超过0.5 cm，RNAstore 渗入组织样本中的速度将会减慢，由此会造成RNA降解，这时需要将组织样品切碎，使组织样本的任何一边厚度都少于0.5 cm，然后将处理好的组织块放入到5-10倍体积的RNAstore 中保存。
3. 保存于RNAstore 中的组织样品如果需要长途运输，运输过程中需要确保组织完全浸没在RNAstore 中。
4. 若用该试剂保存植物叶片组织样本，则需将叶片表面蜡表皮破坏，因为植物叶片表面存在的蜡质使RNAstore 很难完全渗入组织中，如果蜡表皮被破坏的植物叶片可以用该试剂进行保存。
操作步骤
ⅰ保存新鲜组织样品
1．估计完全浸没样品所需要RNAstore 的量（1 g组织需5 ml RNAstore）。
2．标记收集管并加入估计所需量的RNAstore 。
3．以最快速度将样品剪切成厚度小于0.5 cm的碎块。
注意: 鼠的肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切直接放入本产品中保存，有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。
4．将组织碎块完全浸没于收集管里的RNAstore 中。
5．将收集管存放于适当条件下，存放时间不能超过该温度下的最长存放时间（存放时间见表1）。
6．RNA提取：取出保存的组织样本，立即开始RNA提取或进行其他处理。
ⅱ保存培养细胞，悬浮细胞和细菌
1．标记收集管。
2．将待保存的细胞样品转移到离心管中，离心收集细胞/细菌，弃上清。
3．用冰浴的缓冲液（PBS）洗涤一次。
4．将细胞悬浮在少量缓冲液中。
5．加入5-10倍体积的RNAstore，混匀。
6．将收集管存放于适当条件下，存放时间不能超过该温度下的最长存放时间（存放时间见表1）。
7．RNA提取前样品处理：
⑴ 4℃保存的细胞样品需先离心，倒弃保护液并收集细胞。
⑵ -20℃或-80℃保存的样品需先在室温下融化。
8.立即开始RNA提取或进行其他处理。
iii 保存全血中的白细胞
1．先将白细胞从红细胞和血清中分离出来。
注意：不要将全血、血浆或血清中的RNA保存在RNAstore中，因为它们蛋白含量过高，与RNAstore 混合后易形成不溶的沉淀。
2．用冰浴的缓冲液（PBS）洗涤一次。
3．将白细胞悬浮在少量缓冲液（PBS）中。
4．加入5-10倍体积的RNAstore，混匀。
5．将收集管存放于适当条件下，存放时间不能超过该温度下的最长存放时间（存放时间见表1）。
6．RNA提取前样品处理：
⑴ 4℃保存的白细胞样品需先离心，倒弃保护液并收集细胞。
⑵ -20℃或-80℃保存的白细胞样品需先在室温下融化。
7．立即开始RNA提取或进行其他处理。
实验样品采集运输保存方法
1.R N A实验样品采集、保存方法 使用范围及样品量 类别：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Array& PCR Service 样本量： 样本样本量 哺乳动物培养细胞样品（悬浮细胞）1*107个 哺乳动物培养细胞样品（贴壁细胞）15cm2 植物组织样品100mg-1g，根据植物不同部位的组织决定组 织需要量，尽可能多些，但不必超过1g 动物组织样品 新鲜组织样品 A. 使用RNAlater试剂 取新鲜组织（注：动物死亡后尽快在10min内取材），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，所用组织必须切至厚度在一下，然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管（或冻存管）中。 4度孵育过夜，此时样品管需要横置以便组织块充分接触到RNAlater，然后转入-20中保存，样品在-20不会冻结，但溶液中可能会有一些晶体出现，这并不影响后续的RNA抽提。 B. 使用Trizol试剂 取新鲜组织（1min以内），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，每50-100mg组织加入1ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品，最好冰上进行操作。
匀浆的裂解液4度短期保存（1month），-20或者-70度长期保存。 冻存组织 生物体死亡后尽快（10min以内）切取新鲜组织，并以PBS或生理盐水清洗干净切成小块；培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。 细胞沉淀（1*107个）中加入1ml Trizol裂解液 反复吸打几次后，目视可见细胞层溶液完全 -70保存 贴壁细胞 从培养容器中吸出并弃去培养液 培养瓶直接加入Trizol试剂，Trizol用量与细胞贴壁面积有关，15cm2细胞贴壁面积加入1mlTrizol。 反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。 -70度保存。 植物组织样品 准确取得所需新鲜组织后，如有必要可用PBS清洗干净，将所用组织切碎，装入冻存管中或者用锡箔包裹好。 立即投入液氮中保存。 2.血液类样品采集、保存方法 适用范围及样品量 全血/血细胞：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Array& PCR Service 血清/血浆：Microarray Service；PCR Array& PCR Service
原代细胞培养和传代培养的方法及其注意事项
初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒 初代消化培养法 1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。 5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。 6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速 （500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。 7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。 8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。 初代组织块培养法 1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。 2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。 3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。 4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
血样样本的采集和处理
血液样本的采集和处理 血液样本的采集和处理 (1) CD4+和CD8+ T淋巴细胞样品的采集和处理 (4) 血液样本的采集和处理 一、血清样品的采集和处理 1、用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置1～2h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清于血清管内备用。 2、如用滤纸片采样，则手指或耳垂局部严格进行消毒，在刺破皮肤后，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其他物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包装送检。 二、抗凝血样品采集和处理 1、用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 2、应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+ /CD 8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸橼酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选取K3EDTA或枸橼酸纳。 3、用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在4～8h内分离PBMC和血浆，否则应在24～48h内分离血浆和血细胞。
三、采集样品注意事项 1、采集样品原则上应按临床采血技术规范操作（试剂盒说明书有特殊要求除外）。 2、采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具（有条件者可用持针器），以避免直接接触血液；直接接触HIV感染者/艾滋病（AIDS）病人血液/体液的操作，应戴双层手套。 四、样品的保存 1、用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期（一周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。 2、用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下，进行病毒RNA检测的样品如需存放3个月以上应置于-80℃。 3、用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期存放，样品采集时间超过48h则不可检测。 五、样品的运送 1、实验室间传递的样品应为血清和血浆，除特殊情况外一般不运送全血。 (1) 第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免破碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。 (2) 第二层容器：要求耐受性好，防渗漏，容纳和保护第一层
细胞培养集锦一个培养300多种细胞人的经验总结
细胞培养集锦(一个培养300多种细胞人的经验总结) 一、消化与吹打 版上很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题，并不是因为细胞消化最重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。 许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很多有价值的经验，也见到很多人的困惑。其实细胞培养，尤其是细胞系的培养，就消化而言，不是太难，做得多了，善于总结经验，就能把细胞越养越好。一般的程序步骤，细节操作，我这里就不讲了，只讲一些基本操作背后的知识，如果不对之处，欢迎指正，一起讨论： 1，其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37度消化。 2，什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可
生物等效性实验生物样品处理注意事项(严)知识讲解
生物等效性实验生物样品处理注意事项(严)
生物等效性实验生物样品处理注意事项一、样品采集后的的处理和贮存 鉴于生物样本的特点，为了避免样品中被测药物发生分解或产生其他化学变化，取样后最好立即进行分析测定，但实际工作中几乎无法做到，常需将收集到的样品冷藏、冰冻，临用前再融化并放至室温后使用。在样本冷冻贮藏前，需及时进行处理。 1.1血液样本处理注意事项 1.1.1. 在肌肉注射或静脉输含有葡萄糖或电解质(含钾、钠、氯离子)的液体时，建议3小时以后采集静脉血样本进行这些项目的检验，以防止上述检验项目因输液引起的假性升高。 1.1.2保定非麻醉状态的动物时应尽量避免用力挤压动物头颈和胸腹，以免引起血液淤滞，局部组织缺氧，造成血液某些成分的改变，特别是测定乳酸，血液含氧量等指标时。 1.1.3血液中红细胞内外成分有很大差异，溶血可造成红细胞内的物质向细胞外转移，如K+、Mg2＋和某些酶类(LD、AST、ALT、ACP)；另外，溶血还可干扰某些化学项目(TBil、DBil、TC等)的测定，严重影响结果的准确性，血样本应防止溶血。引起溶血的原因有：注射器采血时抽吸力太大；血液与抗凝剂比例失调；混匀样本时过度振荡；注射器或采血容器带水或容器污染；全血放置时间长或突然受冷或受热；注射器中的血沫注入采血容器；真空采血时如未
采满至相应刻度，残存负压造成红细胞破裂；不拔针头直接注入采血容器；样本离心时离心力过大等。为避免溶血，取血时应注意： ①、抽拉注射器时应尽量避免注射器内产生大量真空； ②、添加抗凝剂后的容器在除必要干燥流程后应及时密封； ③、混匀样本时避免用力过度，切勿产生泡沫； ④、避免重复使用注射器、针头、采血管、毛细玻璃管等一次性用品，手术刀片和剪刀等器材取材时尽量洗去残留血液； ⑤、采血时的室温应控制在22℃至25℃，采取的血液容器在需要放入冰盒时，切勿紧贴冰袋，冰水； ⑥、当注射器内因吸入空气产生血沫时，注意弃掉血沫，在将血液注入采血容器时勿将血沫一并注入； ⑦、使用真空采血管需抽取负压时切勿过量； ⑧、将血液注入采血容器时要除去针头，轻柔推入； ⑨、离心带有血细胞的血样时，按照规格设定离心参数； 1.1.4. 正确选择采集管。通常情况下多采用血清为样本(不抗凝)，部分检测项目需注意样本属性为血清或血浆，两者不可替代。一些特殊检验项目需要使用抗凝剂时，应注意选择合适的抗凝剂并注意抗凝剂与血液的比例，以防止样本凝血或红细胞形态的改变；抗凝血样本采集后立即轻轻摇匀至少上下颠倒8次，以防凝血发生。 1.1.5. 多项化验采血顺序：血培养瓶(厌氧瓶优先)→蓝帽管→黑帽管→红/黄帽管→绿帽管→紫帽管→灰帽管→其他。
细胞样品收集注意事项
细胞样品收集方法 一、蛋白 以T75培养瓶为例 1.把培养上清彻底转移至50或15ml离心管中，用PBS洗涤1-2次（PBS 需彻底吸干，洗液时把板倾斜），每次洗涤时，均需把PBS转移到同一个 50或15ml离心管，每培养瓶细胞准备一个离心管，切勿混淆； 2.每培养瓶加入300ul RIPA裂解液（加入裂解液时，一定用放平，是细胞 与裂解液充分接触）, 把上述离心管离心（水平转角离心机，1000RPM, 8min）,彻底移除上清，加入300ul RIPA裂解液，吹打12下后，把裂解 液转移至同一培养瓶中，则培养瓶中合并有200ul，盖好盖子，用封口膜 封口后置于-80℃保存；注意做好标记！ （如果用PBS洗涤后，细胞未飘起，则把600ul RIPA裂解液直接加入培养瓶）备注：给你提供的RIPA裂解液用EP管装，每管990ul，同时提供PMSF,使用时每管加入10ul PMSF,混匀再使用。操作要快，做好一瓶，放好一瓶！强烈建议一瓶一瓶的做。 表一 培养器皿RIPA裂解液用量备注 6孔板150-300ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml 35mm培养皿150-300ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml 60mm培养皿300-600ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml 100mm培养皿600-1200ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml T25培养瓶300-600ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml
T75培养瓶600-1000ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml
流式检测上机前细胞处理流程与注意事项
流式检测细胞周期与凋亡样品处理流程 1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液 2.1000r/min离心5min，收集沉淀。 3.沉淀用PBS洗2次，1000r/min离心5min，收集沉淀。 4.细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。即可送检。 备注：1.每个细胞样品细胞量需达到106（细胞沉淀要打散，避免细胞聚集），细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。 2.样品可在-20℃保存一个月 流式检测细胞DNA倍体样品处理流程 1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液 2.1000r/min离心5min，收集沉淀。 3. 沉淀用PBS洗2次，加入相应种属的淋巴细胞或鸡红细胞做为内参，内参与 预检测细胞的比例为1：3 4. 1000r/min离心5min，收集沉淀。 5. 细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。即可送检。 备注：1.每个细胞样品细胞量需达到106（细胞沉淀要打散，避免细胞聚集），细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。 2.样品可在-20℃保存一个月 检测胞内蛋白上机前细胞处理流程 1.收集实验处理好的细胞，用PBS洗2次，2%多聚甲醛固定15min。 2.离心弃掉多聚甲醛，再用70%的冰乙醇固定过夜（4℃）。 3.离心弃掉乙醇，PBS洗一遍，加破膜剂0.5%TritonX-100 50ul/106个细胞 15min。 4.直接在0.5%TritonX-100中加一抗室温孵育30min，离心，用PBS洗一次， 加荧光标记二抗（需进口二抗,国内的效价比较低效果不好），总体系为100ul，总体系中应含0.25%（体积分数）的TritonX-100，室温孵育30min。 5.也可以直接加FITC直标的一抗。 6.离心，用PBS洗一次，用2%的多聚甲醛固定，4℃存放待测。 备注：1. 市面上的多聚甲醛多为4%的，可用PBS稀释。如果用两步标记，应做不加一抗，只加二抗的对照管
细胞传代培养标准操作规程
细胞传代培养（消化法）标准操作规程 一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1. 无菌磷酸生理缓冲液(PBS) 2. 胰酶-EDTA溶液(0.05%胰酶-0.53mM EDTA-4Na): 以10ml分装于15 ml无菌离心管中，保存于–20℃，使用前放在37℃水槽回温。 3. 新鲜培养基 4. 无菌吸管/离心管/培养瓶 三、操作步骤 1. 传代前准备 （1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 （2）用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 （3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 （4）点燃酒精灯：注意火焰不能太小。 （5）准备好将要使用的消毒后的空培养瓶。 （6）取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。 （7）从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。 （8）打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。 2. 胰蛋白酶消化 （1）加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。
（2）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。 （3）吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。 3. 吹打分散细胞 （1）吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。 （2）吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。 （3）平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8 分钟。 （4）弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 4. 分装稀释细胞 （1）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。 （2）分装：将细胞悬液吸出分装至2～3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。（3）继续培养：用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。 5. 悬浮型细胞的传代 （1）吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000 rpm 5 分钟。 （2）吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。 注意事项： 1.严格的无菌操作。 2.适度消化：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。
细胞培养的注意事项
相关疾病： 每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢? 早走早脱身，从此专注黑生物 1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。 2. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。 3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。 4. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)。 5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。 6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。 非科班出身经验分享 1. 别怕浪费。枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。 2. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来... 刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。 3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。 4. 实验结束后对实验台的消毒。紫外什么的，用前用后都照个30 分钟。 5. 身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。比如实验台，又比如培养箱内部。 6. 细胞的密度根据细胞的性质、传代的时间以及自己的心情来定。培养基的话最多最多不要超过2 天就要换一次。细胞可以不传代，但是培养基是一定要换的。 大概就是，不该碰的地方不碰，有影响的地方少碰; 该使劲的时候绝对不含糊，不该使劲的地方一定忍住。如果是比较简陋的操作台就一定要摆个酒精灯，所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。如果是高级台子就多用酒精喷喷。感觉生物的实验，心疼钱就还是不要做了。 最后一点点绝对非科班的经验。癌细胞真是坚挺。有一次实在是不想传了，放了 5 天
生物等效性实验生物样品处理注意事项(严)
生物等效性实验生物样品处理注意事项 一、样品采集后的的处理和贮存 鉴于生物样本的特点，为了避免样品中被测药物发生分解或产生其他化学变化，取样后最好立即进行分析测定，但实际工作中几乎无法做到，常需将收集到的样品冷藏、冰冻，临用前再融化并放至室温后使用。在样本冷冻贮藏前，需及时进行处理。 1.1血液样本处理注意事项 1.1.1. 在肌肉注射或静脉输含有葡萄糖或电解质(含钾、钠、氯离子)的液体时，建议3小时以后采集静脉血样本进行这些项目的检验，以防止上述检验项目因输液引起的假性升高。 1.1.2非麻醉状态的动物时应尽量避免用力挤压动物头颈和胸腹，以免引起血液淤滞，局部组织缺氧，造成血液某些成分的改变，特别是测定乳酸，血液含氧量等指标时。 1.1.3血液中红细胞外成分有很大差异，溶血可造成红细胞的物质向细胞外转移，如K+、Mg2＋和某些酶类(LD、AST、ALT、ACP)；另外，溶血还可干扰某些化学项目(TBil、DBil、TC等)的测定，严重影响结果的准确性，血样本应防止溶血。引起溶血的原因有：注射器采血时抽吸力太大；血液与抗凝剂比例失调；混匀样本时过度振荡；注射器或采血容器带水或容器污染；全血放置时间长或突然受冷或受热；注射器中的血沫注入采血容器；真空采血时如未采满至相应刻度，残存负压造成红细胞破裂；不拔针头直接注入采血容器；样本离心时离心力过大等。为避免溶血，取血时应注意： ①、抽拉注射器时应尽量避免注射器产生大量真空； ②、添加抗凝剂后的容器在除必要干燥流程后应及时密封； ③、混匀样本时避免用力过度，切勿产生泡沫； ④、避免重复使用注射器、针头、采血管、毛细玻璃管等一次性用品，手术刀片和剪刀等器材取材时尽量洗去残留血液； ⑤、采血时的室温应控制在22℃至25℃，采取的血液容器在需要放入冰盒时，切勿紧贴冰袋，冰水； ⑥、当注射器因吸入空气产生血沫时，注意弃掉血沫，在将血液注入采血容器时勿将血沫一并注入； ⑦、使用真空采血管需抽取负压时切勿过量； ⑧、将血液注入采血容器时要除去针头，轻柔推入； ⑨、离心带有血细胞的血样时，按照规格设定离心参数； 1.1.4. 正确选择采集管。通常情况下多采用血清为样本(不抗凝)，部分检测项目需注意样本属性为血清或血浆，两者不可替代。一些特殊检验项目需要使用抗凝剂时，应注意选择合适的抗凝剂并注意抗凝剂与血液的比例，以防止样本凝血或红细胞形态的改变；抗凝血样本采集后立即轻轻摇匀至少上下颠倒8次，以防凝血发生。 1.1.5. 多项化验采血顺序：血培养瓶(厌氧瓶优先)→蓝帽管→黑帽管→红/黄帽管→绿帽管→紫帽管→灰帽管→其他。
细胞培养的注意事项
相关疾病: 每天对待细胞比孝敬爹妈还用心,那真就是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,瞧在眼里怕丢了,培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢? ?早走早脱身,从此专注黑生物??１。严格无菌操作,多喷喷酒精,要就是对灭菌得东西不放心,自己包自己送自己烘干。 ?２.不要与别人共用试剂耗材,自己准备一套。 ?３、有可能得话在拿到新细胞得时候做好支原体衣原体检测。??4。水浴锅很脏,生化培养箱要就是得手动加湿得话盘里得水也会很脏,勤换(灭菌水加进去)。 5、晚上离开得时候最好给细胞房照紫外,超净台就是用完就开、?? 6、最好得就是同一时间就您一个人在用细胞房在养细胞。? 非科班出身经验分享 1、别怕浪费。枪头什么得只要有可能污染就换,如果用酒精灯就什么都稍微烤一下,别直接放到火上,离一段距离、? 2、动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆得气泡,动作太轻就吹不下来.。、刚开始得时候吹细胞太痛苦了,稍微一下就起泡。后来就就是吹得时候枪里得培养基不要一次全都压出来,留一点,枪得最头部尽量深得在液面以下。??3。离开过操作台得东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍,包括一切实验耗材、仪器、以及您带着手套得手。??４。实验结束后对实验台得消毒、紫外什么得,用前用后都照个3０分钟、? 5。身体得各个部分尽量得少接触不需要接触得地方得地方、比如实验台,又比如培养箱内部。 ?6、细胞得密度根据细胞得性质、传代得时间以及自己得心情来定。培养基得话最多最多不要超过２天就要换一次。细胞可以不传代,但就是培养基就是一定要换得。 大概就就是,不该碰得地方不碰,有影响得地方少碰; 该使劲得时候绝对不含糊,不该使劲得地方一定忍住、如果就是比较简陋得操作台就一定要摆个酒精灯,所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。如果就是高级台子就多用酒精喷喷。感觉生物得实验,心疼钱就还就是不要做了。 最后一点点绝对非科班得经验。癌细胞真就是坚挺。有一次实在就是不想传了,放了5天吧,感觉都长了几层出来,培养基都黄了。抱着试一试得心情传了一次,又坚强得活过来了。当然,状态肯定也差得很了。? 换种心情,好好生活! 养了三年细胞,各种肿瘤细胞,说一点自己得瞧法: ?１。培养细胞前,可以瞧瞧细胞特点说明书,包括细胞正常生长得状态图、传代、培养 2. 不同细胞生长周期不同,有得生长很快,比如说MＤA-MB—2３1,传代基得类型等。?? 得时候取离心悬液得十分之一就已经足够了,有得又就是特别慢,等得人心焦,BT474就就是,传代就是一分二,复苏起始得时候两周多才能长满,所以就要在培养细胞得过程中多多摸索了。? 3、对于娇弱得细胞,就得细心呵护了,胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速与时间,每天都要去瞧一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。?
标本采集方法及注意事项
临床常用检验标本的采集方法及注意事项 医学检验又称临床检验，是指通过感官观察，试剂反应，仪器分析等，对离体标本如体液，分泌物，排泄物和脱落物进行的检验。它为临床诊断，病情判定，疗效观察，预后评估等提出实验数据。 检验结果的准确与否，与病人采样前的状态，准备，取样方法和标本携带等因素有关。临床护士必须掌握各种检验标本采集的方法，时间，饮食的要求，药物的影响，标本的存放温度及采集标本时的体位等状况。为此，护士要有对病人负责的精神，科学的工作态度，严谨的工作作风，一丝不苟地做好临床标本的采集工作，并根据本地区或本医院所提供的正常参考值及临床表现进行结果判断，为治疗护理提供参考依据。 各种标本采集的注意事项的重要意义 护士承担着大多数标本的采集任务，由于标本的来源，性质，采集方式不同，将直接影响临床检验结果的准确性。因此，护士必须熟悉自己所在单位有关实验室的情况，明确采集标本的要求，以保证标本质量，为临床诊断提供可靠依据。 1 血标本采集方法及注意事项 采血时机：提前向病人讲解抽血化验检查的目的，方法和采集标本的时机，解除病人的恐惧或焦虑，安慰病人，使之处于安定状态，避免因精神-体液变化影响检验的结果。根据检验的不同要求，采血的时间也不同： 空腹抽血适宜作血糖，血脂，肝功能，肾功能，电解质等生化检验。禁食时间约12小时，时间过长易引起低血糖虚脱。 餐后2小时，上午8-9时抽血，可做血液内激素测定及餐后血糖测定。 急性心肌梗死发病后，16-24小时天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，肌酸激酶（CK）达峰值；30-60小时乳酸脱氢酶(LDH)达峰值,维持3-6d。 急性胰腺炎发作后2-12小时血清淀粉酶开始上升，12-72小时达高峰，4小时左右恢复正常。留取血细菌培养标本时，应在病人体温达38.5度以上时抽取血标本，阳性率较高。 采血部位 动脉采血：常用采血部位股动脉，桡动脉，足背动脉等。由于动脉压力高，危险性较大，故采血后按压穿刺点5-10分钟。 静脉采血：是最常用的采血方法，可选择的表浅静脉多，要求护士必须严格无菌操作，避免感染，可选择较大的静脉穿刺，争取一次操作成功。 毛细血管采血：只需很小量标本，多在手指，足趾或足跟等部位采血，如全血细胞计数，快速血糖，血脂等检验，或婴幼儿。 采血器材：a,注射器，瓶塞，玻璃或塑料试管，防腐剂，抗凝剂，标签等。B，真空采血器：以不同彩色标记各种试管盖，用于不同实验。（我院常用的真空采血管规格及标志） 添加剂：一般分防腐剂和抗凝剂二类。常用抗凝剂有乙二胺四乙酸（EDTA）二甲抗凝，枸橼酸盐，草酸钠（钾）均系与钙作用而抗凝；肝素则抑制凝血酶活性而有抗凝作用，用于血PH，血气，内分泌激素，氨基酸，药物浓度，6-磷酸葡萄糖，染色体等检查。用抗凝试管时，每管的抗凝剂与采血最大量有关，要求与血液充分混匀，不够可致血液凝固。 标本的类型：血标本有三类：即全血，血浆，血清。 全血：用抗凝剂。 血清：不用抗凝剂。常用于多种生化分析，如蛋白质，脂类，无机盐，酶，肝功能，肾功能检查。 血浆：有多种抗凝剂。用于红细胞积数，红细胞比容，血沉，血型鉴定，血红蛋白电泳，交
微生物实验操作注意事项
微生物实验注意事项 一、无菌操作要求 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 3.接种食品样品时， 4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求 1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有 0.5- 0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W 3.无菌间使用前后应将门关紧，紫外灯，距离在 1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置 三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 （一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法 1．灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。 （2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。 2．装放（1）干热灭菌器： 装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。 （2）大型高压蒸气锅： 放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。 3．设备检查（1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。
细胞培养的过程及注意事项
细胞培养的过程及 注意事项
36细胞培养的过程及注意事项 细胞的培养过程及注意事项；根据培养过程中是否需要分割培养物进行再培养而将细；一、原代培养；（一）过程；原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种；1、组织块培养法；(1)基本操作过程；1）、用培养液湿润所取组织材料，并用锋利的眼科剪；2）、用湿润的吸管吸取切碎的组织块，清清吹到培养；3）、将培养瓶翻转，使瓶底朝上，在种植了组织块一；4）、将种植了组织块 细胞的培养过程及注意事项 根据培养过程中是否需要分割培养物进行再培养而将细胞培养分为原代培养和传代培养。 一、原代培养 （一）过程 原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种及培养等步骤。原代培养的方法很多，基本和最常见的是组织块培养法和分离细胞法。 1、组织块培养法
(1)基本操作过程 1）、用培养液湿润所取组织材料，并用锋利的眼科剪将附在其上的脂肪和结缔组织去除干净。再用平衡液（PBS）或Hanks液漂洗；用锋利的眼科弯剪将组织块剪成小块；再用PBS或Hanks 液漂洗多次，直至液体不浑浊、无油滴、清亮为止。 2）、用湿润的吸管吸取切碎的组织块，清清吹到培养瓶皿中，并将其按一定间距均匀放在培养瓶底壁上，量不要过多，要将组织块切面贴在培养瓶底壁上； 3）、将培养瓶翻转，使瓶底朝上，在种植了组织块一侧的对侧面加足培养液，勿使组织块与培养液接触，塞紧瓶塞； 4）、将种植了组织块的一侧朝上，静置于37℃培养箱中；待组织块贴壁1h到3h后翻瓶，使贴壁的组织块浸没与培养液中，静置； 5）、每隔2到3天更换一次培养液，或者根据培养瓶种颜色的变化确定换液时间。 2、注意事项 1）、组织块接种后的前3天，从组织块向外迁徙的细胞数很少，组织块的黏附不牢固，在观察和移动的过程中，注意不要引
细胞培养注意事项
细胞房操作注意事项 1、细胞房实验耗材、仪器、药品等均不可随意带进或带出； 2、严禁无关人员进入细胞房，如无特殊情况，每次进入细胞房不得超过2人，切勿带细胞房外人员进入细胞房； 3、保持细胞房卫生，细胞房每两个星期打扫一次，需要清理的地方有：培养箱、无菌操作台以及一切操作皆有可能碰到的地方，清理时均需要用70%的酒精擦洗；地面也需要用70%的酒精擦洗，另外拖鞋、挂衣钩也需要用酒精擦洗。配打扫用酒精用的大烧杯在细胞房水龙头旁边； 4、每次处理细胞前、后均需要打扫无菌操作台； 5、细胞房的任何药品均需标注详细，如名称、配制时间、配制人、浓度等各项指标，否则一律丢弃； 6、培养基要分瓶使用，各用自己的培养基，以免交叉污染； 7、不得随意使用、移动他人的细胞，如想使用，务必通知细胞持有人； 8、细胞房用的物品进细胞房前均需要灭菌，常用的有：枪头、离心管、水、PBS，灭离心管的时候需要把离心管盖子一个一个的松开，灭水和PBS的时候一定要记得松开瓶口。拿进细胞房之后要先放在细胞房用紫外照射灭菌后方可使用。 9、任何物品（药品、培养瓶等）进无菌操作台里都必须先喷酒精。 贴壁细胞培养方法 细胞培养的一般步骤： 实验 复苏——培养——传代— 冻存 一、细胞复苏方法： 1、先在细胞房准备好应当准备的，如清理好无菌操作台、培养基、一个装有9 ml 培养基的10 ml的离心管和37℃的水浴锅； 2、从-80℃的冰箱里取出细胞，迅速到细胞房，然后打开棉花，然后快速的晃动冻存管，1分钟内必须全部溶化掉； 3、将冻存管喷上酒精放进无菌操作台，手上喷好酒精，将手放进无菌操作台里，用枪将细胞转移至准备好的装有9 ml培养基的离心管里，盖紧盖子，用封口膜封好，放进离心机内离心，设定好转速（不同的细胞不一样，如：MCF-7的转速是800 RPM，所有细胞的转速均不要超过1000 RPM）和时间5分钟；
WESTERN BLOT样品制备注意事项及步骤
Western Blot样品制备注意事项及步骤Western Blot样品制备是这个实验的第一步。而且是关键步骤，要求尽可能的获得所有蛋白质。所以我们在做wtstern blot实验应注意以下问题： 1：在合适的盐浓度下，应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。 2：选择合适的表面活性剂和还原剂，破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价键二硫键，使其形成一个各自多肽的溶液。 3：尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子。 4：防止蛋白质在样品处理过程中的人为的修饰，制备过程应在低温下进行，以避免细胞破碎释放出的各种酶类的修饰（建议加入合适的蛋白酶抑制剂） 5：样品建议分装成合适的量，然后冷冻干燥或直接以液体状态置-80℃中保存，但要注意不要反复冻融。 下面我们详细介绍一下western blot实验的详细步骤。 一：准备工作： 一个水浴箱，一台超声装置，组织匀浆器 二：需要的溶液： 裂解液Laemmli样品缓冲液 三：操作步骤： 1)培养细胞蛋白质样品的制备： 1：胰酶酶解后裂解： 细胞培养至80%左右密度时，以含0.05%胰蛋白酶消化，细胞经预冷的PBS漂洗3次，离心收集在离心管中，加入450μl裂解液反复吹打。
2：皿上直接裂解： 细胞培养至80%左右密度时，细胞经预冷的PBS漂洗3次，加入450μl裂解液，细胞刮刀收集，用移液器转移至离心管中，反复吹打。 以上所得的样品最终用超声细胞破碎仪超声处理，超声时为5S，间歇时间为10S，功率为100-120W至溶液清澈无粘稠为止，处理过程在水浴中进行，后4℃25000g离心1小时取上清或以最大强度超声4次，每次15-30S，在每次超声步骤之间将样品转置水浴中15S，加入Laemmli 样品缓冲液（视蛋白样品浓度，以1：1或1：2的比例混合），强力混匀，样品置100℃水浴箱里水浴加热3-5分钟，10000g离心10分钟，取出清液，将其移入另一洁净试管中，至此，电泳样品已准备就绪。（样品可立即使用也可以分装冻存，-20℃存放的样品可稳定保持数月）。 2)组织样品的制备： 手术切除的组织块迅速置于预冷的0.95生理盐水中，漂洗数次，以清洁表面的血迹，将组织称量后切成几个较小的组织块放入机戒组织匀浆器中，按组织净重，裂解液=1：10的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆，离心收集上清（如有粘稠物可超声处理，具体方法见细胞培养的样品制备，也可以冷冻干燥降解核酸后，将冻干的蛋白质样品溶解在适当的上样buffer中，混匀后静置3小时使样品中的蛋白质充分的溶解，有5分钟即可，4度离心收集。）加入Laemmli样品缓冲液（视蛋白样品浓度，以1：1或1：2的比例混合）强力混匀，样品置100度的水浴箱水浴加热3-5分钟，10000g离心10分钟，取上清液，将其转入另一洁净的试管中，至此，电泳样品已准备就绪（样品即可立即使用也可也可以分装冻存，-20℃存放的样品可稳定保持数月。）
细胞培养注意事项问题解答
细胞培养注意事项问题解答 细胞培养技术解答 一、细胞培养基础问答 1.BHK细胞就是指BHK21吗？ 答：BHK细胞是指幼年叙利亚地鼠肾细胞(Baby Hamster Syrian Kidney)，1961年建株。原始的细胞株是成纤维细胞，贴壁依赖性。1963年获得单细胞克隆细胞。后经无数次传代后细胞可悬浮生长，它广泛用于增殖各种病毒，生产兽用疫苗。最常用的是BHK21的一个亚克隆细胞，即克隆13或C13 。 2.二倍体细胞有什么特点？ 答：二倍体细胞的染色体组型是2n核型；贴壁依赖接触抑制；一般可传代50代；无致瘤性。如W1-38：正常胚肺组织人二倍体细胞系。MRC-5：从正常男性肺组织中获得的人二倍体细胞系。 3.什么是动物细胞大规模培养？ 答：所谓动物细胞大规模培养技术(large-scale culture technology)是指在人工条件下(设定pH、温度、溶氧等)，在细胞生物反应器(bioreactor)中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、CHO(中华仓鼠卵巢)细胞、BHK-21、Vero细胞(非洲绿猴肾传代细胞)等，并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。 在过去几十年来，细胞培养技术经有了很大发展，从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube等贴壁细胞培养，发展为生物反应器(Bioreactor)进行大规模细胞培养。 4.细胞体内外培养的差别是什么？ 答：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。 5.什么是无血清培养基？与普通培养基有什么区别？ 答：无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。添加组分可能包括纤连蛋白、层粘连蛋白等贴壁因子、胰岛素、转
污水采样注意事项
污水采样方法： 采样表内容应包括污染源名称、监测项目、采样点位、采样时间、样品编号、污水性质、污水流量、采样人姓名、水温、气压，污水处理工艺、主要设备名称（如果有处理设施）等。 1、用样品容器直接采样时，必须用水样冲洗三次后再采样。（采油除外） 2、采样时应注意除去水面的杂物、垃圾等漂浮物。 3、在分时间单元采集样品时，测定pH、COD、BOD、DO、硫化物、油类、有机物、余氯、粪大肠菌群、悬浮物、放射性等项目的样品，不能混合只能单独采样。其中悬浮物、BOD、硫化物、油类、余氯的水样必须单独定容采样全部用于测定。 4、当水深大于1m时，应在表层下1/4深度采样，水深小于或等于1m时，在水深的1/2处采样。 5、在污染源监测中，随污水流动的悬浮物或固体微粒，应看成是污水样的一个组成部分，不应在分析前滤除。油、有机物和金属离子等，可能被悬浮物吸附，有的悬浮物中就含有被测定的物质。所以，分析前必须摇匀取样。 6、湍流部位，例如在“T”形管、弯头、阀门的后部，可充分混合，一般作为最佳采样点，但是对于等动力采样（即等速采样）除外。 7、细菌监测项目采样时不能用水样冲洗采样容器，不能采混合水样，应单独采样后2h内送实验室分析。水样中余氯的处理：灭菌前按500ml采样瓶加入%Na2S2O3溶液，然后盖好瓶盖灭菌。当被测水样含有高浓度重金属时，可按500ml采样瓶加入1ml15%的乙二胺四乙酸二钠盐溶液，然后再灭菌。从自来水龙头采集样品时，采水前可先将水龙头打开至最大，放水3-5min，然后将水龙头关闭，用酒精灯火焰灼烧约3min灭菌或70%的酒精溶液消毒水龙头及采样瓶口，然后打开龙头充分除去水管中滞留的杂质，然后采集水样。一般采集容量为采样瓶的80%左右，以便检查时，能充分振摇混合样品，获得具有代表性的样品。同一采样点与理化监测项目同时采样时，应先采集细菌学检验样品。 样品的保存： 对于不同的监测项目应选用容器材质、加入的保护剂及用量与保存期、及洗涤方法等见水四版的54页表2-3-1。 一般可以将样品在4℃冷藏。