“五氧化二磷使乙醇脱水”实验方案的调研报告
“五氧化二磷使乙醇脱水”
实验方案的调研报告
导读:：氧化二磷使乙醇脱水的争议探讨。乙醇脱水制备乙烯的实验方案。生成的产物是磷酸氢乙酯。亦发人深思：①P2O5具有强脱水性。提高温度磷酸氢乙酯断键成烯。
论文关键词：五氧化二磷，乙醇，磷酸氢乙酯，脱水，断键
1 提出问题
最近读到王金龙老师的《五氧化二磷使乙醇脱水的实证探索与反思》[1]，文章观点新颖、问题深刻，亦发人深思：①P2O5具有强脱水性，为什么不能使乙醇脱水形成乙烯？②80-90℃形成的磷酸氢乙酯和磷酸二乙酯，能否像硫酸氢乙酯一样高温（170℃）断键成稀？
2 展开调查
乙醇脱水制备乙烯的实验方案，传统做法是使用浓硫酸作脱水剂和催化剂，反应中由于浓硫酸的氧化性，易使乙醇碳化，不利于乙烯纯化和产率。笔者曾经研究将浓硫酸和95%灯用乙醇按体积比1∶2配比反应物，改变原来按体积比3∶1的原料配比，演示乙醇脱水高温（170℃）成烯、低温（140℃）成醚的两种方式[2]。
能否使用五氧化二磷代替浓硫酸作为乙醇脱水的脱水剂和催化剂？调研发现，五氧化二磷使乙醇脱水的争议探讨，出现截然不同的正反两种观点，介绍如下。
2.1正论——生成乙烯
认为80-90℃生成产物乙烯，碱洗或水洗后断键，产气能使高锰酸钾褪色。代表作品有：
①2001年秦丙昌老师《乙烯制备实验的研究和改进》研究：利用浓硫酸-磷酸在170-200℃制备乙烯[3]；
②2001年李双峰老师文《乙烯制取实验改良探究》认为:利用P2O5代替浓硫酸使乙醇脱水，80-90℃制备乙烯，无碳化现象[4]。
③2004年袁加程老师在《乙醇脱水制乙烯新法》[5]、《P2O5做脱水剂制备乙烯实验的研究》[6]认为:使用P2O5在80-140℃可制备乙烯。
④2005年冯桂荣老师《实验室制备乙烯条件探讨》利用H3PO4-P2O5在125-200℃制备乙烯[7]；
⑤2007年刘波老师《对乙醇脱水制乙烯实验的新研究》介绍了石棉绒、浓硫酸、五氧化二磷对乙醇的脱水效果，认为在80℃左右五氧化二磷的催化效果最为理想[8]。
⑥2008年王祖浩教授主编的普通高中课程标准实验教科书《有机化学》(苏教版)介绍乙醇性质，用P2O5在80℃时做乙醇脱水反应的催化剂[9]。
⑦2009年刘克成老师《五氧化二磷做脱水剂制备丙烯》研究结论：反应的最佳温度是150℃，异丙醇与五氧化二磷最佳物质的量之比为1∶1.25，此时丙烯的产率最高可达
37.1%[10]。
⑧2010年陆燕海老师《P2O5催化乙醇制乙烯实验反应条件的探究》认为：苏教版介绍
[9]在80℃左右不能生成乙烯，提出“P2O5与乙醇甘油浴150℃～160℃效果最佳，体系中乙烯气体即能持续产生，并使酸性高锰酸钾溶液迅速褪色”[11]。
根据调查的典型案例，河南发表论文https://www.360docs.net/doc/f22649480.html,分析认为，使用浓硫酸-磷酸
在170-200℃制备乙烯，降低了浓硫酸的浓度，有利于碳化程度的减弱（由于磷酸氢乙酯的稳定存在，脱水温度提高到200℃）；使用H3PO4-P2O5(无水乙醇)或单独使用P2O5（95%乙醇），其实质是相同的，但应分清2种观点：低温80℃和高温200℃，究竟是80℃制乙烯，还是200℃制乙烯，还是80℃、200℃都能制出乙烯？有待考证。
2.2 反论——不能脱水
认为产物使高锰酸钾褪色的现象是乙醇蒸汽而不是乙烯；80-90℃生成的产物是磷酸氢乙酯。代表作品有：
①2005年刘新民老师在《关于五氧化二磷在乙烯制备中应用的讨论》分析认为：在80-90℃的条件下五氧化二磷将乙醇脱水生成乙烯是不可能的。五氧化二磷也不能够使低级脂肪醇的磷酸酯脱磷酸生成烯[12]。
②2010年王金龙老师《五氧化二磷使乙醇脱水的实证探索与反思》认为：“P2O5与乙醇共热发生醇解反应，而不是脱水反应，生成物为磷酸氢乙酯和磷酸二乙酯”。“所有研究报告均未提及有烯烃生成(71页4⑸第6行)”[1]。
根据调查的典型案例，笔者归纳2点：①80-90℃P2O5不能脱乙醇成乙烯，形成的是磷酸氢乙酯；②P2O5不能使磷酸酯脱磷酸生成烯。第一结论从工业合成中已经得到佐证，第二结论是否准确？
2.3 磷酸氢乙酯的工业合成资料
①2006年陈飞老师《十六醇磷酸酯合成工艺研究》的研究结论：在少量水存在下进行反应，能提高产物中单酯的质量分数。在n(ROH)∶n(P2O5)∶n(H2O)=1.70∶1.00∶1.13，85℃下酯化反应10h，然后在85℃下，向反应体系加入相对磷酸酯质量4%的水进行水解2h。同时强调“反应温度较高时，易使醇脱水成烯烃断键，烯烃氧化或聚合使产物着色”[13]。
②2005年冯雍老师《短碳链单烷基磷酸酯的合成》介绍：以质量分数为125%的PPA(聚磷酸)，CH3OH/P2O5的摩尔比为2.0∶1，0.8mol的水解量，在60℃～70℃下酯化反应6h，水解反应2h，可以合成较为理想的短碳链单烷基磷酸酯[14]。
③“国外早在20世纪40年代就已经开始对MAP (磷酸单酯)进行研究，并取得了较好的成绩和有了一系列的产品，如德国Henkel公司，日本花王公司等。日本对磷酸单酯技术和工艺研究可以说是比较成熟的，且研制出大批的产品并运用到工业的各个领域”[15]。
磷酸酯表面活性剂被广泛用作化纤织物的抗静电剂、金属切削润滑剂、农药乳化剂、金属清洗剂、脱垢剂等外，近年来在油田化学领域也获得了较广泛的应用，如用作消泡剂、破乳剂及用于制备胶束酸和微乳酸等, 显示出广阔的应用前景[16]
以上资料显示，80-90℃形成磷酸氢乙酯已既成事实，生成乙烯的结论值得怀疑。若在高温下能否生成乙烯？即低温比较稳定的磷酸氢乙酯能否在高温断键成稀？
3. 实验方案的研究
3.1在80-90℃不能生成乙烯的实验证明
实验1：80-90℃反应，产生的气体通入高锰酸钾褪色的现象：
在一圆底烧瓶中加入95%乙醇5mL，迅速加入五氧化二磷4-5g，然后用酒精灯加热并将温度控制在80℃-90℃内（乙醇沸点78.4℃）。见图1。
①产生的气体直接通入酸性高锰酸钾溶液：有褪色现象；
②2次醇洗、水洗后通入高锰酸钾溶液：无气泡产生、无褪色现象。
实验2：参照实验：高锰酸钾和乙醇褪色的现象与之比较：
取1mL酸性高锰酸钾溶液在小试管，滴入1mL乙醇溶液，有褪色现象。
实验3：冷凝产气，得到液体，证明产气不可能是乙烯：
将[实验1]装置改换具支烧瓶，反应物配料不变，乙醇由球形漏斗补充加入，连接一冷凝管并通水冷却。反应物被加热到78℃-80℃时，烧瓶中就有大量气体生成，经过冷凝
管时几乎全部被冷凝而液化，收集到的液体经检验主要成分为乙醇。在整个反应过程中烧瓶中反应物的温度很难超过80℃，因为滴加的乙醇大部分被汽化而脱离反应体系。佐证材料[11]。
在反应过程中又滴加乙醇，加热过程中将产生的气体通过冷凝管冷凝而收集到液体10mL，烧瓶中剩余粘稠液体约4mL（磷酸氢乙酯和磷酸）断键，表明五氧化二磷只与少量乙醇发生了酯化反应，而大部分乙醇被蒸发形成冷凝液。
实验结论：
①[实验1]证明产气为乙醇蒸汽（直接加热，局部高温可能产生一些乙烯）论文网。
参考资料[3]、[7]、[8]介绍，80℃产生的气体直接通入高锰酸钾溶液有褪色现象，实际是蒸发的乙醇与高锰酸钾反应；
②由于乙醇的沸点低，反应物的温度很难超过80℃，参考资料[9]、[10]介绍的150℃～160℃，必须在乙醇蒸发完后才能实现；
③王金龙老师等认为，借助于通过水(或碱液)洗涤，…乙醇蒸气与水接触面积小，接触时间短，都易造成乙醇来不及被完全吸收而逃逸[12]。
实际操作中发现，乙醇极易溶于水，2次醇洗、水洗后，洗瓶内除开始因体系内气体受热膨胀出现气泡外，后来就根本不再有任何气体产生了，酸性高锰酸钾溶液也丝毫没有褪色的迹象。佐证材料[10]。
3.2提高温度磷酸氢乙酯断键成烯
实验4：回流制磷酸氢乙酯：
在一圆底烧瓶中加入4mL95%（密度0.79g/mL）乙醇，2mL85.54%的浓磷酸(物质的量的浓度为14.75摩/升，密度为 1.690克/毫升)，再加入五氧化二磷8g （C2H5OH/H3PO4/P2O5的摩尔比约为2∶1∶2），0.8mol的水解量，在60℃-70℃下回流酯化6h，水解反应2h。合成较为理想的短碳链单烷基磷酸酯。佐证材料[14]。
实验5：[实验4]回流制得的磷酸氢乙酯，温度升高170-200℃，有气体产生，2次醇洗、水洗后，通入高锰酸钾溶液，有褪色现象，证明产气是乙烯。
结论：磷酸氢乙酯类似硫酸氢乙酯断键成稀，由于磷酸氢乙酯的稳定存在断键，断键所需能量更大，温度比硫酸氢乙酯170℃更高。
3.3 P2O5催化乙醇脱水的实验证明
结论：P2O5脱水性的证明：用浓磷酸代替浓硫酸与乙醇反应，结果发现按醇酸体积比为(1∶3)进行反应时，反应混合物在110℃已经沸腾，温度升到250℃以上仍没有乙烯产生[实验6⑤][6]；用P2O5与乙醇反应，则能产生乙烯[实验6①、②]，但随着磷酸量的加入，P2O5又失去脱水作用[实验6③]，这显然与磷酸中含水较多有关，P2O5与水形成磷酸；若95%乙醇量过多，P2O5量过少，P2O5生成H3PO3，P2O5的加入实际是磷酸的加入，没有多余的P2O5去促使乙醇脱水成烯[10]，因此没有乙烯产生[实验6④]。必须有游离的P2O5才能使乙醇脱水成烯，实验证明P2O5催化乙醇脱水。
磷酸与乙醇形成磷酸氢乙酯的反应，必须有五氧化二磷，聚磷酸、焦磷酸，POCl3，PCl3为磷酸化剂等强吸水性物质的存在[16]。P2O5吸收水后变成磷酸，而磷酸是没有吸水性的，因此[实验4]中P2O5的加入量必须与乙醇等摩尔（C2H5OH/H3PO4/P2O5的摩尔比为2∶1∶2）。
3.4 P2O5催化乙醇脱水需要磷酸，成稀需经磷酸氢乙酯中间体的实验证明
实验7：按[实验1]进行实验，无水乙醇3mL，P2O52g，温度升高170-200℃断键，2次醇洗、水洗后无气体无乙烯（佐证材料[12]）；参照[实验6①]、[实验6②]，发现在少量水存在下进行反应，能提高乙烯产率（佐证材料：“在少量水存在下进行反应，能提高产物中单酯的质量分数[13]）。证明P2O5催化乙醇脱水分两步进行：
第一步，少量P2O5先形成磷酸（无水乙醇则先加磷酸），磷酸与乙醇在P2O5脱水作用下形成磷酸氢乙酯和水，P2O5吸收水转化为磷酸促进酯化反应进行；
第二步，在高温170-200℃磷酸氢乙酯断键成乙稀和磷酸。反应方程式如图2。
资料[12]认为“五氧化二磷也不能够使低级脂肪醇的磷酸酯脱磷酸生成烯”有待商榷，脱水作用只在第一步形成酯时产生，酯断键成稀是没有“脱水、吸水”过程的。资料[1]介绍“磷酸是中强酸，达不到浓硫酸的高酸度，不能使乙醇脱水。它与乙醇反应生成磷酸氢乙酯和磷酸二乙酯，这一点却与稀硫酸性质相似，自然也就称不上是反应的催化剂”，磷酸与乙醇反应生成磷酸氢乙酯和磷酸二乙酯，必须有五氧化二磷或浓硫酸等做脱水剂、吸水剂。
参考资料
[1]王金龙.五氧化二磷使乙醇脱水的实证探索与反思.化学教育,2010,1:69-71
[2]李先栓.演示乙醇两种脱水方式的实验设计和理论探讨.化学教育,2010,6:64
[3]秦丙昌.乙烯制备实验的研究和改进.化学教育,2001,1:34
[4]李双峰.乙烯制取实验改良探究.化学教育,2001,7-8:85
[5]袁加程.乙醇脱水制乙烯新法.化学教育,2003,12:48
[6]袁加程.P2O5做脱水剂制备乙烯实验的研究.化学教学,2004,6:4
[7]冯桂荣.实验室制备乙烯条件探讨.化学世界,2005,10:637
[8]刘波.对乙醇脱水制乙烯实验的新研究.化学教学2007,5:12
[9]王祖浩.普通高中课程标准实验教科书:有机化学基础(选修)1第2版,南京:江苏教育出版社,2008:69
[10]刘克成.五氧化二磷做脱水剂制备丙烯.化学教育,2009,8:56
[11]陆燕海.P2O5催化乙醇制乙烯实验反应条件的探究.化学教学,2010,8:14
[12]刘新民.关于五氧化二磷在乙烯制备中应用的讨论.化学教育,2005,5:61
[13]陈飞.十六醇磷酸酯合成工艺研究.日用化学工业,第36卷第5期,2006,10:331-333
[14]冯雍等.短碳链单烷基磷酸酯的合成.日用化学工业.第35卷第2期,2005,4:75-77,80
[15]章丽娜.磷酸单酯的合成和应用.云南化工第33卷第6期,2006,12:87-89
[16]唐永凡.磷酸酯表面活性剂的合成与应用.石油与天然气化工,1995,1:28
乙醇脱水
化工专业实验报告 实验名称：固定床乙醇脱水反应实验研究 实验人员：徐继盛同组人：赵乐、陈思聪、白帆 实验地点：天大化工技术实验中心630室 实验时间：2014年5月13号 年级2011 ；专业化学工程与工艺；组号10 ；学号3011207115 指导教师：冯荣秀 实验成绩： 天津大学化工技术实验中心印制
固定床乙醇脱水反应实验研究 一．实验目的 １．掌握乙醇脱水实验的反应过程和反应机理、特点，了解针对不同目的产物的反应条件对正、付反应的影响规律和生成的过程。 ２．学习气固相管式催化反应器的构造、原理和使用方法，学习反应器正常操作和安装，掌握催化剂评价的一般方法和获得适宜工艺条件的研究步骤和方法。 ３．动控制仪表的使用，如何设定温度和加热电流大小。怎样控制床层温度分布。 ４．学习气体在线分析的方法和定性、定量分析，学习如何手动进样分析液体成分。了解气相色谱的原理和构造，掌握色谱的正常使用和分析条件选择。 ５．学习微量泵和蠕动泵的原理和使用方法，学会使用湿式流量计测量流体流量。 二．实验原理 1.过程原理 乙烯是重要的基本有机化工产品．乙烯主要来源于石油化工，但是由乙醇脱水制乙烯在南非、非洲、亚洲的一些国家中仍占有重要地位．我国的辽源、苏州、兰州、南京、新疆等地的中小型化工企业由乙醇脱水制乙烯的工艺主要采用r—Al2，虽然其活性及选择性较好，但是反应温度较高，空速较低，能耗大。 乙醇脱水生成乙烯是一个吸热反应，生成乙醚是一个放热反应，分子数增不变的可逆反应。提高反应温度、降低反应压力，都能提高反应转化率。乙醇脱水可生成乙烯和乙醚，但高温有利于乙烯的生在，较低温度时主要生成乙醚，有人解释这大概是因为反应过程中生成的碳正离子比较活泼，尤其在高温，它的存在寿命更短，来不及与乙醇相遇时已经失去质子变成乙烯．而在较低温度时，碳正离子存在时间长些，与乙醇分子相遇的机率增多，生成乙醚。有人认为在生成产物的决定步骤中，生成乙烯要断裂C—H键，需要的活化能较高，所以要在高温才有和于乙烯的生成。 乙醇在催化剂存在下受热发生脱水反应，既可分子内脱水生成乙烯，也可分子问脱水生成乙醚．现有的研究报道认为，乙醇分子内脱水可看成单分子的消去反应，分子间脱水一般认为是双分子的亲核取代反应，这也是两种相互竞争的反应过程，具体反应式如下： C2H5OH → C2H4 + H2O (1)
固定床乙醇反应脱水
固定床乙醇反应脱水
实验四固定床乙醇脱水反应实验研究 一、实验目的 1. 掌握乙醇脱水实验的反应过程和反应机理、特点，了解针对不同目的产物的反应条件对正、副反应的影响规律和生成的过程。 2. 学习气固相管式催化反应器的构造、原理和使用方法，学习反应器正常操作和安装，掌握催化剂评价的一般方法和获得适宜工艺条件的研究步骤和方法。 3. 学习动态控制仪表的使用，如何设定温度和加热电流大小，怎样控制床层温度分布。 4. 学习气体在线分析的方法和定性、定量分析，学习如何手动进样分析液体成分。了解气相色谱的原理和构造，掌握色谱的正常使用和分析条件选择。 5. 学习微量泵和蠕动泵的原理和使用方法，学会使用湿式流量计测量流体流量。 二、实验原理 乙醇脱水生成乙烯，是一个吸热、分子数增不变的可逆反应。提高反应温度、降低反应压力，都能提高反应转化率。乙醇脱水可生成乙烯和乙醚，但高温有利于乙烯的生在，较低温度时主要
生成乙醚。乙醇在催化剂存在下受热发生脱水反应，既可分子内脱水生成乙烯，也可分子间脱水生成乙醚。现有的研究报道认为，乙醇分子内脱水可看成单分子的消去反应，分子间脱水一般认为是双分子的亲核取代反应，这也是两种相互竞争的反应过程，具体反应式如下： C2H5OH → C2H4 + H2O (1) C2H5OH → C2H5OC2H5 +H2O (2) 目前，在工业生产方面，乙醚绝大多数是由乙醇在浓硫酸液相作用下直接脱水制得。但生产设备会受到严重腐蚀，而且排出的废酸会造成严重的环境污染。因此，研究开发可以取代硫酸的新型催化体系已成为当代化工生产中普遍关注的问题。目前，在这方面的探索性研究已逐渐引起人们的注意，大多致力于固体酸催化剂的开发，主要集中在分子筛上，特别是ZSM-5分子筛。 研究发现，通过对反应热力学函数的计算分析可了解到乙醇脱水制乙烯、制乙醚是热效应相反的两个过程，升高温度有利于脱水制乙烯（吸热反应），而降低温度对脱水制乙醚更为有利（微放热反应），所以要使反应向要求的方向进行，
抗菌实验方法
一、抗菌实验 字体[大][中][小] (一) 体外抗菌实验 1. 实验前的准备工作 (1) 培养基的准备：肉汤琼脂培养基、真菌琼脂培养基等均可按药典规定的方法配制。 (2) 药液的准备：一般采用中草药水煎液，经滤过浓缩成1：10～1：1的浓度，试验前的药液需灭菌，以免污染影响结果。 (3) 试验菌株的选择及制备：一般使用典型的菌株，或从临床分离经鉴定后取得的菌株，如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌、链球菌、肺炎双球菌、白色念珠菌、酵母菌及真菌等。 细菌菌液的制备：将斜面菌种接种于普通肉汤培养基中，肺炎双球菌及溶血性链球菌须在上述培养基中加入5%～10%血清，或加入25%(V/V)或20%猪血水，37℃培养6～8小时或16～18小时。 真菌菌液的制备：将菌种接种于大试管中，并在22℃～25℃培养24小时或7天(视菌种及生长速度而定)，然后用灭菌生理盐水10mL洗脱制成混悬液。 菌液的浓度一般先采用培养液，如不显示抗菌作用，可再稀释成一定浓度。金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌可用1：1000浓度，肺炎双球菌、溶血性链球菌、白色念珠菌、酵母菌可用1：10或1：100浓度。 2. 实验方法 (1) 平碟法：取熔化后的培养基，每平碟(培养皿)倒入15mL，待凝固后，在培养基表面划线接种试验菌株，在划线的中间位置安放一个灭菌的不锈钢圈，在圈内滴入试验药液。也可采用打洞法，即在凝固的培养基上用已灭菌的打孔器打孔挖去琼脂块，将药液滴在洞内。用灭菌陶盖盖好，细菌在37℃、真菌在22℃～25℃培养18～20小时，观察细菌生长情况，如全线生长则认为该浓度的药液无抗菌作用，如细菌或真菌划线为药液所切断，则认为该浓度药液有抗菌作用。 (2) 平碟稀释法：先将中药药液2mL加入平碟内，再加入已溶化的培养基8mL，充分摇匀，待凝固后，划线接种菌株，同时用水2mL代替药液制作空白对照平碟，方法同样，接种后，将平碟倒置，在37℃(真菌在22℃～25℃) 培养18～20小时，观察结果。如对照碟长菌、药液碟不长菌，则认为有抗菌作用。 (3) 试管法：取试管12支，在每一试管中加入培养基5mL，于第1管中加被试药液5mL，混合均匀，吸出5mL加到第2管中，混合均匀，再吸5mL加到第3管中，依次操作，直到第10管，将第10管混合均匀后吸出5mL弃去，其药液稀释依次为1：2，1：4，1：8，……1：1024，再于前11管中各加入适当浓度的菌液0.1mL，第11管作为菌液对照，第12管不加菌液，加被试药液0.1mL，作为药液对照。将其全部在37℃(真菌22℃～25℃)培养16～24小时(真菌24～72小时)，观察各管菌株生长情况。如菌液对照管浑浊，表示菌株生长良好;药液对照管澄明，表示药液没有染菌。再将试验管与对照
实验三 乙醇脱水
实验三乙醇气相脱水制乙烯反应动力学 （本实验学时：7×1） 实验室小型管式炉加热固定床、流化床催化反应装置是有机化工、精细化工、石油化工等部门的主要设备，尤其在反应工程、催化工程及化工工艺专业中使用相当广泛。本实验是在固定床和流化床反应器中，进行乙醇气相脱水制乙烯，测定反应动力学参数。 固定床反应器内填充有固定不动的固体催化剂，床外面用管式炉加热提供反应所需温度，反应物料以气相形式自上而下通过床层，在催化剂表面进行化学反应。 流化床反应器内装填有可以运动的催化剂层，是一种沸腾床反应器。反应物料以气相形式自下而上通过催化剂层，当气速达到一定值后进入流化状态。反应器内设有档板、过滤器、丝网和瓷环（气体分布器）等内部构件，反应器上段有扩大段。反应器外有管式加热炉，以保证得到良好的流化状态和所需的温度条件。 反应动力学描述了化学反应速度与各种因素如浓度、温度、压力、催化剂等之间的定量关系。动力学在反应过程开发和反应器设计过程中起着重要的作用。它也是反应工程学科的重要组成部分。 在实验室中，乙醇脱水是制备纯净乙烯的最简单方法。常用的催化剂有： 浓硫酸液相反应，反应温度约170℃。 三氧化二铝气－固相反应，反应温度约360℃。 分子筛催化剂气－固相反应，反应温度约300℃。 其中，分子筛催化剂的突出优点是乙烯收率高，反应温度较低。故选用分子筛作为本实验的催化剂。 一、实验目的 1、巩固所学有关反应动力学方面的知识。 2、掌握获得反应动力学数据的手段和方法。 3、学会实验数据的处理方法，并能根据动力学方程求出相关的动力学参数值。 4、熟悉固定床和流化床反应器的特点及多功能催化反应装置的结构和使用方法，提高自身实验技能。 二、实验原理 乙醇脱水属于平行反应。既可以进行分子内脱水生成乙烯，又可以进行分子间脱水生成乙醚。一般而言，较高的温度有利于生成乙烯，而较低的温度有利于生成乙醚。因此，对于乙醇脱水这样一个复合反应，随着反应条件的变化，脱水过程的机理也会有所不同。借鉴前人在这方面所做的工作，将乙醇在分子筛催化剂作用下的脱水过程描述成： 2C2H5OH→C2H5OC2H5+H2O C2H5OH→C2H4+H2O 三、装置、流程及试剂 1、多功能催化反应实验装置介绍 该实验装置可进行加氢、脱氢、氧化、卤化、芳构化、烃化、歧化、氨化等各种催化反应的科研与教学。它能准确地测定和评价催化剂活性、寿命，找出最适宜的工艺条件，同时也能测取反应动力学和工业放大所需数据。本装置由反应系统和控制系统组成：
抑菌活性实验设计方案
八宝景天抑菌活性实验方案 1 材料与仪器 1.1 材料 八宝景天（茎、叶、花），采摘于吉林农业大学校园，去离子水洗净，阴干，经粉碎机粉碎(过40～60 目筛)，所得植物粉用密封袋于遮光处保存备用。 1.2 微生物 真菌：黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、黄瓜黑星病菌（Cladosporium cucumerinum）、辣椒炭疽病菌（Colletotrichum nigrum）由吉林省蔬菜花卉科学研究院提供。番茄叶霉病菌( Fulvia fulva )、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜茎腐病菌(Fusarium gramimearum)、水稻立枯病菌（Rhizoctonia solani Kuhn）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜菌核病菌(Sclerotinia sclerrotium) 均由吉林农业大学农学院植物病理研究室提供。 1.3 试剂与仪器 95%乙醇分析纯国药集团化学试剂有限公司 葡萄糖分析纯国药集团化学试剂有限公司 琼脂粉生化试剂天津科密欧化学试剂有限公司 马铃薯 JFSD-100粉碎机上海淀久中药机械制造有限公司 JJ200型精密电子天平美国双杰兄弟有限公司常熟双杰测试仪器厂HH-S数显恒温水浴锅江苏省金坛市医疗仪器厂 RE-2000旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂 SHZ-III型循环水真空泵上海亚荣生化仪器厂 TDL-5A低速大容量离心机上海悦丰仪器仪表有限公司 生化培养箱SPX-250型上海跃进医疗器械厂 ZKF035电热真空干燥箱上海实验仪器厂有限公司 KQ5200B型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司 不锈钢手提式灭菌器上海申安医疗器械厂 超净工作台上海生物科技有限公司
抗菌抗病毒常用实验研究方法知识
抗菌抗病毒常用实验研究方法 细菌、病毒性疾病是目前国内外流行的主要传染病,尤其是近两年来,由冠状病毒引起的SARS及由流感病毒引起的禽流感给动物及人类带来的严重危害,是人所共知的"由于各种疫苗的不断出现,虽然一些细菌、病毒病已得到了有效的控制,但是其治疗尚无有效的解决方法因此研制高效、低毒的新型中药抗菌、抗病毒制剂已成为巫待解决的问题。 1、常用的抗菌方法 1、1稀释法 1、1、1试管稀释法 培养基内抗生素的含量按几何级数稀释并接种适量的细菌，经孵育后，观察能引起抑菌作用最低抗生素浓度，称最低抑菌浓度(MIC)为该菌对药物的敏感度。稀释法所获得的结果比较准确，常被用作校正其他方法的标准。如以下黄贝贝等的青钱柳抗菌作用的实验研究和黄利权等的火绒草的抗菌活性研究的实验方法: 1、应用试管稀释法,测定青钱柳提取物对试验菌的抑菌效果,检验不同浓度下青钱柳提取物对细菌、霉菌的抗菌作用。结果:青钱柳提取物在体外对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等革兰氏阳性菌具有较强的抗菌作用;而对大肠埃希氏菌、铜绿假单孢菌等革兰氏阴性菌的抗菌作用不明显;对黄曲霉、烟曲霉等霉菌的抗菌作用不明显[1]。 2、采用试管稀释法,分别测定了火绒草水煎液、水提醇沉液、醇提物、醇提石油醚部分、醇提乙酸乙酯部分、醇提正丁醇部分、醇提水溶部分等7种提取物对大肠杆菌C83882、大肠杆菌C8390 3、大肠杆菌C8391 4、沙门氏菌C79-20、金黄色葡萄球菌Newbould S-30 5、金黄色葡萄球菌临床分离株等6株病原菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。试验结果表明,火绒草醇提物及其石油醚部分和乙酸乙酯部分对两种金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用,其MIC为0114 mg/ml生药浓度,MBC为0127 mg/ml生药浓度,而其它部分对金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱。火绒草醇提正丁醇部分和水溶部分对3株大肠杆菌和1株沙门氏菌具有较强的抑制作用,其MIC为2170 mg/ml生药浓度,MBC为2170 mg/ml 生药浓度,显示了较强的抗菌活性[2]。 1、1、2肉汤稀释法 以水解酪蛋白(M-H)液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待检细菌，定量测定抗菌药物抑制或杀死该菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度(MBC)。 如刘菁菁的研究蓝玉簪龙胆对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA) 的体内外抗菌活性。蓝玉簪龙胆分别以乙醇、氯仿、正丁醇、蒸馏水提取，得到极性不同的4部分产物，利用肉汤稀释法测定其对 MRSA 和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌( MSSA) 的最低抑菌浓度( MIC) ; 体内实验部分: 采用腹腔注射 MRSA 法建立小鼠感染模型，分别给予蓝玉簪龙胆水提液高、中、低剂量，银黄胶囊治疗 15 d，并与模型对照组比较，观察存活率。结果：体外实验: 蓝玉簪龙胆各极性组分对 MRSA 和 MSSA 菌株均有不同程度的抑菌作用，其中正丁醇组分抑菌作用最强，其次为乙醇、水层组分; 体内试验: 除了蓝玉簪龙胆大剂量组，其余各治疗组存活率均高于模型对照组，而蓝玉簪龙胆中剂量组存活率最高。结论蓝玉簪龙胆对 MRSA 和 MSSA 均具有一定的抗菌作用，而且敏感性差异无显著性; 对MRSA 感染小鼠有一定治疗作用[3]。胡景玉等为了了解衡水地区大肠埃希菌的药
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法
v1.0 可编辑可修改 1 实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法 一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。 二、实验原理 抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。 三、实验材料 供试药剂：速克灵或扑海因。供试病原菌：番茄灰霉病菌。 实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。 四、实验方法 采用管碟法。将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。 1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。灭菌蒸馏水为对照。2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。 3．浇制双层培养基：将装在试管内已灭菌的清水琼脂培养基10 mL溶化后，趁热倒入9 cm直径培养皿中，水平冷凝。将适合供试菌生长发育的100 mL培养基熔化后冷至45-50℃左右后，迅速吸取10 mL菌液加入培养基中，充分混匀后，立即吸取5 mL带菌培养基加在已凝固的清水琼脂培养基上，并使之均匀地铺在底层上。 4．注药用消毒镊子夹取不锈钢小管（即牛津杯，外径8.0mm、内径6.0mm、高10mm），每皿内按合适的间隔放置6个不锈钢小管，其中1个小管为对照，其余5管为5种不同浓度的药液（药液加至在管口形成凸面），在适合的温度下培养。 6．结果检查培养一定时间后，取出用十字交叉法测量抑菌圈直径，并以抑菌圈的有无及抑菌圈大小评价杀菌活性。若抑菌圈直径呈椭圆形，长短之差超过一个单位，最好舍去不要。
药物的体外抑菌试验
实验五药物的体外抗菌试验 药物的抗菌试验是为了检查药物的抗菌能力。该项试验方法已广泛应用于新药研究和指导临床用药。如抗菌药物的筛选，提取过程的生物追踪、抗菌谱的测定、耐药谱的测定、药敏试验、药物血浓度测定等各个方面。 药物的体外抗菌试验在实验室进行，优点是方法简便、需时短、用药量少，不需要活的动物、实验条件容易控制。因此，药物的体外抗菌试验已广泛应用各种测定了。 药物的体外抑菌试验是常用抗菌试验方法，其中最常用的方法用系列稀释法和琼脂扩散法。 （一）稀释法（结果示教） 稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法（斜面法）两种。这两种方法都可以用来测定药物的最小抑菌浓度（MIC）：是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度，通常用μg∕ml或U/ml表示。 （二）琼脂扩散法 它是将抗菌药物加至接种试验菌的平板表面，抗菌药物在琼脂胶内向四周自由扩散，其浓度随扩散距离增大而降低，在药物一定的扩散距离内，由于药物的抗菌效应，试验菌不能生长，此无菌生长的范围称为抑菌圈，抑菌圈的大小与药物的抑菌效应成正比。琼脂扩散法常有纸片法、管碟法、打洞法和挖沟法。 滤纸片法（K-B纸片法）－学生操作 滤纸片法是最常用的方法，适用于新药的初筛试验（初步药物是否有抗菌作用）及临床的药敏试验（细菌药物第三性试验、以便选择用药）。滤纸片分湿、干两种，可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在含菌的平板表面，也以预先做成一定浓度的干燥纸片。一般来说预先做成的干燥纸片实用一些而且准确一些。 至于干燥纸片的制备方法：选用吸水力强而且质地均匀的滤纸，用打洞机制成6mm直径的圆纸片，120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的各种适宜浓度的抗生素溶液，每100张纸片加入0.5ml药液，使它均匀浸润，放在无菌平皿中，
抑菌试验方案
利用吸附法测定壳聚糖无纺布抑菌性能试验方案 一、实验原理：本实验参考了国标GB/T20944方法，根据我们的材料特性进行了微调。即：选取革兰氏阴性菌（大肠杆菌（25922））和革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌（25923））两类代表性指示微生物。将测试材料浸泡在活化好的菌悬液（浓度控制为107CFU/ml）中，设置不同处理时间，稀释涂布，平板单菌落计数，计算无纺布材料的抑菌性能。 二、实验方法： 2.1试验菌种的活化 1）冻干粉接种至大豆蛋白肉汤(TSB)培养基，37℃培养24h。一部分用于抑菌试验，另一部分用于划线接种至斜面或平皿冷藏保藏（可保藏1个月）。 2）培养液稀释。活化好的菌悬液用稀释液稀释20倍，取1ml培养液添加到19ml稀释液（应提前灭菌）中。 3）式样预处理。大小合适的试样饱和吸水，灭菌处理。（周教授负责） 4）菌悬液洗涤。将稀释好的菌悬液转移到试样中，分别震荡15min 和30min，为防止微生物传代，影响试验结果，立即放入冰箱冷藏。 5）洗涤液梯度稀释。处理后的洗涤液立即梯度稀释到10-1, 10-2,10-3,10-4和10-5。具体方法：取1ml洗涤原液加入9ml稀释液此时为10-1梯度；取1ml稀释后的10-1菌液加入到9ml稀释液，此时为
10-2梯度；······。 6）涂布。分别取10-3,10-4和10-5的稀释液200ul涂布到平板（计数培养基，简称EA），每个处理做2个平行，37℃，培养24-48h，计数。 7）抑菌效果评价。参照GB/T20944。 三、试验简易流程 注：如果活化后的菌液浓度较高，可取10-4、10-5和10-6梯度稀释液涂布。
抗菌肽体外抑菌实验方法
微量肉汤稀释法（borth microdilution method） 实验方法： 1.用无菌蒸馏水在聚丙烯离心管中将抗菌肽和抗生素溶解制成1280 g/L的储 备液，然后用等量无菌的0.02%乙酸（含0.4% BSA）稀释，在用0.01%乙酸（含0.2% BSA）溶液对等量稀释后的溶液在进行一系列的双倍稀释，得到质量浓度为640，320，160……1.25 mg/L的共10个梯度的系列稀释液， 4 ?C下保存备用。 2.将待测细菌在灭菌MH肉汤琼脂平板上过夜培养，挑取菌落接种于灭菌试管 中的MH肉汤，37 ?C，180 r/min过夜培养。将培养后的菌液稀释至2*10^5-7*10^5 CFU/mL，向无菌的96孔平板中的1-11孔各加入100 μL的菌液，12孔不加入菌液而加入100 μLMH肉汤，然后从1～10孔逐一加入相应的待测抗菌肽，11孔作为扫描对照组不加肽。37 ?C，90 r/min培养18-24 h，这样待测抗菌肽的终质量浓度分别为64，32，16，……0.125 mg/L。（不知道待测抗菌肽添加量是多少，最终抗菌肽的终浓度怎么缩小了10倍） 3.最小抑菌浓度MIC（mininmal inhibitory concentration）就是能阻止50%以 上细菌生长的最小肽浓度。用酶标仪在490 nm下对平板进行扫描，肽的MIC 的确定按照比对照孔（11孔）的浑浊程度低50%以上的最小质量浓度计算。 4.最小杀菌浓度MBC（minimal bactericidal concentration）就是能抑制任何残 余菌落生长的肽的最低浓度。从没有细菌生长的平板孔中的内容物中取10 μL涂布到MH琼脂平板上，37 ?C培养18 h，以此来确定肽的MBC。 参考文献： 【1】汪以真，抗菌肽与抗生素的体外抗菌效果比较[J].中国兽医学报，2004，24（3）：270-273. 抗菌肽的体外抑菌实验（平板法） 1.稀释：将一定效价的抗菌肽做6个浓度的稀释，将抗生素按正常使用剂量同 样做6个浓度的稀释 2.指示菌：指示菌用液体LB培养基培养24 h后稀释至10^6 CFU/mL
乙醇脱水实验报告
乙醇脱水反应研究实验 一、实验目的 1. 掌握乙醇脱水实验的反应过程和反应机理、特点，了解针对不同目的产物的反应条件对正、副反应的影响规律和生成的过程。 2. 学习气固相管式催化反应器的构造、原理和使用方法，学习反应器正常操作和安装，掌握催化剂评价的一般方法和获得适宜工艺条件的研究步骤和方法。 3. 学习动态控制仪表的使用，如何设定温度和加热电流大小，怎样控制床层温度分布。 4. 学习气体在线分析的方法和定性、定量分析，学习如何手动进样分析液体成分。了解气相色谱的原理和构造，掌握色谱的正常使用和分析条件选择。 5. 学习微量泵和蠕动泵的原理和使用方法，学会使用湿式流量计测量流体流量。 二、实验原理 乙烯是重要的基本有机化工产品。乙烯主要来源于石油化工，但是由乙醇脱水制乙烯在南非、非洲、亚洲的一些国家中仍占有重要地位．我国的辽源、苏州、兰州、南京、新疆等地的中小型化工企业由乙醇脱水制乙烯的工艺主要采用-Al2O3，虽然其活性及选择性较好，但是反应温度较高，空速较低，能耗大。 乙醇脱水生成乙烯和乙醚，是一个吸热、分子数增不变的可逆反应。提高反应温度、降低反应压力，都能提高反应转化率。乙醇脱水可生成乙烯和乙醚，但高温有利于乙烯的生在，较低温度时主要生成乙醚，有人解释这大概是因为反应过程中生成的碳正离子比较活泼，尤其在高温，它的存在寿命更短，来不及与乙醇相遇时已经失去质子变成乙烯．而在较低温度时，碳正离子存在时间长些，与乙醇分子相遇的机率增多，生成乙醚。有人认为在生成产物的决定步骤中，生成乙烯要断裂C-H键，需要的活化能较高，所以要在高温才有利于乙烯的生成。 乙醇在催化剂存在下受热发生脱水反应，既可分子内脱水生成乙烯，也可分子间脱水生成乙醚。现有的研究报道认为，乙醇分子内脱水可看成单分子的消去反应，分子间脱水一般认为是双分子的亲核取代反应，这也是两种相互竞争的反应过程，具体反应式如下：C2H5OH—C2H4(g)+H2O(g) （1） C2H5OH—C2H5OC2H5(g)+H2O(g) （2） 目前，在工业生产方面，乙醚绝大多数是由乙醇在浓硫酸液相作用下直接脱水制得。但
乙醇脱水反应实验步骤修订
实验十五流动法测定γ-Al2O3小球催化剂乙醇脱水的催化性能 1. 色谱条件设置 检测器：FID，色谱柱：Porapak-Q柱，柱温：160℃，气化室：170℃，FID：250℃，色谱载气：N2，流速：30~40 mL/min，对应柱前压在160℃时约为0.14~0.16MPa（载气流量已调好，一般不要再调）。加热带设定温度：130℃，六通阀：采样时间1 min，其它时间处于分析状态（防止液态物种在定量管中冷凝）。 等催化剂开始活化后打开色谱仪。先通载气（氮气），再打开色谱仪总开关，进入主界面设置色谱参数：柱温：160℃，气化室：170℃，FID：250℃，检测器：20℃。按“起始”开始升温。待温度稳定后，打开氢气发生器和空气发生器的开关，等流速稳定后，按下“点火”按钮（FID有两个，根据色谱连接情况按点火1或者2）。若要调节仪器的灵敏度，先按左边“检测”，再按“设置”，调节对应的FID的灵敏度（一般为7~9之间，正常情况下不需要调整）。开启计算机，打开N2000在线色谱工作站，对“实验信息”和“方法”作必要的修改后进入“数据采集”界面，点击“查看基线”图标，等待基线稳定。插上加热带电源插头，设定加热带温度为130℃。 2. 催化反应测定步骤 (1) 装样。拆开电炉下面反应管上缠绕的加热带至两通接头螺帽位置，用扳手松开反应管上面和下面气路连接螺帽，从反应装置中卸下反应管，将其中的石英砂和催化剂倒入回收塑料桶中，可用洗耳球吹干净反应管。量取2 mL活化后Al2O3催化剂小球，称重后装入反应管中，用不锈钢管轻敲反应器，使催化剂装填均匀。在反应管上部装填干净石英砂至距管口约7 cm 处，并轻轻敲实，然后将反应管接入反应装置，并用扳手旋紧上下的接头螺帽。重新缠绕加热带包裹好反应管的下端。 (2) 活化。在减压阀关闭状态下打开氮气钢瓶总阀（逆时针为开启），调节减压阀出口压力至0.3MPa（顺时针旋转），调节反应装置控制面板上“调压”旋钮，使压力显示为0.2MPa。将尾气的三通活塞转至通皂膜流量计的位置，调节“调流”旋钮，使皂膜流量计测出的反应载气流速为80 mL/min，然后将尾气的三通活塞转到通入排空管道的位置。打开控温仪开关，设定温度为400℃，将反应炉温度升至400℃，活化1 h。 (3) 反应。催化剂活化结束后，设置“控温”仪表温度为250℃，炉子开始降温。待“测温”仪表温度降至270℃左右时，即可打开平流泵。乙醇进样管下接一个小烧杯，按“FLOW”，输入较大的流速（>1mL/min），再按“RUN”，待进样管出口乙醇流量稳定后，按“PAU”停止。将乙醇进样管从上端插入反应管（需将原来的螺帽取下，换上带乙醇进样管的螺帽），拧紧密封螺帽，设置平流泵流量为0.15 mL/min，开始向反应器中通入乙醇。调节“控温”仪表温度设定值，使“测温”仪表温度（即催化剂床层温度）显示为250±2℃。待“测温”仪表温度稳定后，将色谱仪上六通阀手柄从＂分析＂位置转至＂采样＂位置，1 min后重新转至“分析”位置，同时点击色谱工作站的“采集数据”图标，进行在线分析。待相关产物峰完全出来后（大约5~7 min），点击色谱工作站中“停止采集”图标，图谱文件自动保存。该温度下采样分析两次。第二次采样后，当六通阀转至“分析”时，将“控温”仪表温度升高10℃，等“测温”仪表温度稳定后，重复上面的采样分析步骤（每个温度下可只采样分析一次），直至“测温”仪表温度升至300℃左右，停止实验。 (4) 停止实验。关闭恒流泵，将乙醇进样管（连螺帽）从反应管中取出，换上原来取下的螺帽，关闭“控温”仪表，继续用载气吹扫反应管。关闭氢气和空气发生器，按色谱仪面板上的“关闭控温”按钮，让色谱仪降温，15 min后可关闭色谱总开关和氮气钢瓶总阀。 3. 色谱定量方法 本次实验使用校正面积归一法计算乙醇脱水反应的转化率和选择性。其相对摩尔校正因子为（以乙醇为1计）乙烯：0.74 ；乙醛：1.40；乙醇：1.00；乙醚：0.47。由于2分子乙醇反应才能转化为1分子乙醚，计算摩尔关系时应在乙醚面积乘以校正因子的基础上再乘以2。
中草药提取有效成分及抑菌试验的实验方案
题目：中草药提取有效成分及抑菌试验的实验方案 顾建凯，李威，宗凯，唐勇，吴杰 （生物技术0901） 一、问题的提出 西药抗生素的抗菌作用不容置疑，但其毒副作用、所引起的过敏反应、二重感染及细菌的耐药性等使其应用受到一定限制;单味中药抗菌谱一般较窄，其效用难以适应复杂而多变的病情;中药复方制剂因含多种有效成分，具有多方位的综合效用，抗菌谱广，且高效、低毒、不易产生耐药性等特点与优势，日渐受到学者们的重视。我小组想通过单味中药与中药复方制剂抑菌效果的对比，来验证中药复方的效果。 二、实验假设与理论依据 中医复方的抗菌作用所以优于单味药，主要在于通过配伍发挥了药物间的相辅相成作用，从而明显增强复方的抗菌效能。 三、实验目标 1.了解中药的抑菌作用 2.学习中药有效成分的提取方法 3.验证中药复方制剂的抑菌效果优于单味中药; 四、实验对象、方法及手段 1.实验对象 实验室中老师所准备的各种微生物 2.实验方法 目前中药包括复方制剂杭菌作用的测定方法大部分是沿用抗菌素的研究方法，主要分为体外抗菌作用和体内抗菌作用两个方面。体外抗菌作用的测定方法又分为三类:一是连续稀释法，包括肉汤连续稀释法即试管两倍稀释法，肉汤琼脂斜面连续稀释法，肉汤琼脂平板连续稀释法;二是扩散法，包括纸片法，小杯法、打孔法等;三是熏蒸法，因其只限于挥发性物质抗菌作用研究，所以在复方制剂抗菌研究中很少使用。体内抗菌作用的测定多用动物实验性感染治疗模型，该模型均系注射大量细菌引起暴发型感染如小鼠致死性感染，家兔腹膜炎等。 五、实验内容（实验步骤） 1.中草药提取液的制备。将各中草药烘干、粉碎，用35%的酒精于50℃萃取48h，将提 取液离心后，减压浓缩．用35%酒精定容，使最终质量浓度为1g/ml。置于0-4℃冰箱中，备用； 2.培养基制备。○1按改良液体 马丁培养基常规制备方法 配制，用于测定中药M IC 值的培养基加入微量酚红(0 001%)。○2牛肉膏蛋白胨琼
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法.doc
v1.0可编辑可修改实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法 一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。 二、实验原理 抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑 制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对 数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出 结果。但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。根据药剂施加在琼脂培养基表面方 式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。 三、实验材料 供试药剂：速克灵或扑海因。供试病原菌：番茄灰霉病菌。 实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。 四、实验方法 采用管碟法。将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般 为外径 8 mm，内径 6 mm，高 10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。 1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7 个浓度。灭菌蒸馏水为对照。 2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。在培养好的菌种上倒入10 mL 灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动 5 min ，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。用低倍（15× 20 倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野 80-100 个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。 3．浇制双层培养基：将装在试管内已灭菌的清水琼脂培养基10 mL溶化后，趁热倒入9 cm直径培养皿中， 水平冷凝。将适合供试菌生长发育的100 mL培养基熔化后冷至45-50 ℃左右后，迅速吸取10 mL菌液加入培养基中，充分混匀后，立即吸取 5 mL 带菌培养基加在已凝固的清水琼脂培养基上，并使之均匀地铺在 底层上。 4．注药用消毒镊子夹取不锈钢小管（即牛津杯，外径8.0mm、内径 6.0mm、高 10mm），每皿内按合适的间隔放置 6 个不锈钢小管，其中 1 个小管为对照，其余 5 管为 5 种不同浓度的药液（药液加至在管口形成 凸面），在适合的温度下培养。 6．结果检查培养一定时间后，取出用十字交叉法测量抑菌圈直径，并以抑菌圈的有无及抑菌圈大小评价 杀菌活性。若抑菌圈直径呈椭圆形，长短之差超过一个单位，最好舍去不要。 1
乙醇气相脱水制乙烯动力学实验
化工专业实验报告 实验名称：乙醇气相脱水制乙烯动力学实验 学院：化学工程学院 专业：化学工程与工艺 班级：化工班 姓名：学号 同组者姓名： 指导教师： 日期：
一、实验目的 1、巩固所学的有关动力学方面的知识； 2、掌握获得的反应动力学数据的方法和手段； 3、学会动力学数据的处理方法，根据动力学方程求出相应的参数值； 4、熟悉内循环式无梯度反应器的特点以及其它有关设备的使用方法，提高自己的实验技能。 二、实验原理 乙醇脱水属于平等反应。既可以进行分子内脱水成乙烯，又可以分子间脱水 生成乙醚。一般而言，较高的温度有利于生成乙烯，而较低的温度则有利于生成乙醚。 较低温度：O H H OC H C OH H C 25252522+→ 较高温度：O H H C OH H C 24252+→ 三、实验装置、流程及试剂 1.装置 本实验装置由三部分构成。 第一部分是有微量进料泵、氢气钢瓶、汽化器和取样六通阀组成的系统。 第二部分是反应系统。它是由一台内循环式无梯度反应器，温度控制器和显示仪表组成。 第三部分是取样和分析系统。包括取样六通阀，产品收集器和在线气相色谱信。 2.实验流程
内循环无梯度反应色谱实验装置流程示意图K3-进气旁路调节阀；K2-阀箱产物流量调节；K3-气液分离后尾气调节；J-进液排放三通阀；1-气体钢瓶；2－稳压阀；3-转子流量计；4-过滤器；5-质量流量计；6-缓冲器；7－压力传感器；8－预热器；9-预热炉；10-反应器；11-反应炉；12-马达;13-恒温箱;14-气液分离器；15-调压阀;16-皂膜流量计；17-加料泵 12 内循环无梯度反应色谱实验装置流程示意图 3.试剂和催化剂：无水乙醇，优级纯；分子筛催化剂，60～80目，重0.4g 。 四、实验步骤 1、打开H 2钢瓶使柱前压达到0.5kg/cm 2确认色谱检测中截气通过后启动色谱，柱温110℃，汽化室130℃，检测室温达到120℃，待温度稳定后，打开热导池——微电流放大器开关，桥电流至100mA ； 2、在色谱仪升温的同时，开启阀恒温箱加热器升温至110℃，开启保温加热器升温至180℃； 3、打开反应器温度控制开关，升温，同时向反应器冷却水夹套通冷却水； 4、打开微量泵，以小流量向气化器内通原料乙醇； 5、在200～380℃之间选择三个温度，测定每5分钟内反应后乙醇和水的质量并记录，每个温度测定2~3次。 五、数据处理 乙醇进料速度：0.3ml/min 乙醇每5min 内进料质量：1.5×0.79=1.185g
乙醇脱水实验报告
化工专业实验报告 实验名称：乙醇脱水反应研究实验 实验人员：xxxx 同组人：xxx xxx 实验地点：天大化工技术实验中心630 室 实验时间：2014年4月25日 班级/学号：11 级化材班 2 组xxxxxxxxxxx号实验成绩： 乙醇脱水反应研究实验
一、实验目的 1.掌握乙醇脱水实验的反应过程和反应机理、特点，了解针对不同目的产 物的反应条件对正、副反应的影响规律和生成的过程； 2.学习气固相管式催化反应器的构造、原理和使用方法，学习反应器正常 操作和安装，掌握催化剂评价的一般方法和获得适宜工艺条件的研究步 骤和方法； 3.学习动态控制仪表的使用，如何设定温度和加热电流大小，怎样控制床 层温度分布； 4.学习气体在线分析的方法和定性、定量分析，学习如何手动进样分析液 体成分。了解气相色谱的原理和构造，掌握色谱的正常使用和分析条件 选择； 5.学习微量泵和蠕动泵的原理和使用方法，学会使用湿式流量计测量流体 流量。 二、实验仪器和药品 乙醇脱水气固反应器，气相色谱及计算机数据采集和处理系统，精密微量液体泵，蠕动泵。ZSM-5型分子筛乙醇脱水催化剂，分析纯乙醇，蒸馏水。 三、实验原理 乙烯是重要的基本有机化工产品。乙烯主要来源于石油化工，但是由乙醇脱水制乙烯在南非、非洲、亚洲的一些国家中仍占有重要地位。 乙醇脱水生成乙烯和乙醚，是一个吸热、分子数增多的可逆反应。提高反应温度、降低反应压力，都能提高反应转化率。乙醇脱水可生成乙烯和乙醚，但高温有利于乙烯的生在，较低温度时主要生成乙醚，有人解释这大概是因为反应过程中生成的碳正离子比较活泼，尤其在高温，它的存在寿命更短，来不及与乙醇相遇时已经失去质子变成乙烯．而在较低温度时，碳正离子存在时间长些，与乙醇分子相遇的机率增多，生成乙醚。有人认为在生成产物的决定步骤中，生成乙烯要断裂C—H 键，需要的活化能较高，所以要在高温才有和于乙烯的生成。 乙醇在催化剂存在下受热发生脱水反应，既可分子内脱水生成乙烯，也可分子间脱水生成乙醚。现有的研究报道认为，乙醇分子内脱水可看成单分子的消去反应，分子间脱水一般认为是双分子的亲核取代反应，这也是两种相互竞争的反应过程，具体反应式如下： C2H5OH → C2H4 + H2O (1) C2H5OH → C2H5OC2H5 +H2O (2)
体外细菌实验方案
评价药物的抗幽门螺旋杆菌活性等指标 ⑴检测药物对幽门螺旋杆菌标准菌株的最小抑菌浓度。 ⑵检测药物对幽门螺旋杆菌标准菌株的最小杀菌浓度。 ⑶检测药物对临床各种幽门螺旋杆菌耐药菌株的最小抑菌浓度。 ⑷评价药物对临床一线治疗幽门螺旋杆菌药物甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素 等是否具有协同作用。 ⑸评价幽门螺旋杆菌标准菌株对药物是否耐药及耐药频率是多少？该药物与 临床治疗幽门螺旋杆菌一线药物是否存在交叉耐药。 ⑹评估药物的毒性。 ⑺看是否可以构建幽门螺旋杆菌的持留菌模型，以检测药物对处于持留状态 的幽门螺旋杆菌是否具有杀灭作用。 ⑻评价在酸性条件下，药物对幽门螺旋杆菌是否也具有抑制作用。 实验方法 药物对幽门螺旋杆菌标准菌株及临床各种耐药菌株最小抑菌浓度（Minimum 甲硝唑ibitory concentration, MIC）的测定药物对幽门螺旋杆菌最小抑菌浓度MIC是评价药物活性一个非常重要的指标。具体方法如下： 1培养细菌到达对数期，此时OD600应该在0.6-0.8之间。 2取菌液2ml至2个1.5ml的EP管内。 38,000rpm离心10min，去除上清，用新鲜配制的培养基洗涤一次。 4调节菌浓度至OD600=0.1，此浓度与0.5McFarland相当，约1×107 cfu/mL（所用培养基为1×）。另一个EP里调节菌浓度至OD600=0.2，相当于2×107 cfu/mL （所用培养基为2×） 5用相应浓度培养基稀释菌液100倍至浓度为1×105 cfu/mL和2×105 cfu/mL。6溶解药物。 7取灭菌96孔圆底微孔板，在板四周每孔加200μl灭菌去离子水，目的是减少检测孔内的培养基蒸发。 8在第二列孔B至G内，加100μl已经调节为2×105 cfu/mL浓度的待检测菌液（所用培养基为2×）。其余孔内B3至G11加入100μl已经调节为1×105 cfu/mL浓度的待检测菌液菌液（所用培养基为1×）。 9在第二列孔内分别加入100μl药物药物。充分混匀后，取100μl菌液加入到下一个孔内，依次类推。加到G10时取出100μl弃掉。G11不加药物做为对照。
中草药对大肠杆菌体外抑菌试验
中草药对大肠杆菌体外抑菌试验＊ 路振香时维静杨用光 （安徽技术师范学院，安徽凤阳，233100） 选用27种不同的中草药制剂（煎剂、挥发油、蒸馏液，以平板稀释法和纸片法对一株肉鸡源的大肠杆菌进行体外抑菌试验。结果表明，有14种中药对此株大肠杆菌有不同程度的抑制作用。试验还表明中药制剂的配方工艺不同，其抑菌的效果亦有不同。 关键词：中药；大肠杆菌; 抑菌作用 中兽医学有着悠久的历史和丰富的应用经验，在抗生素使用以前，对保障家畜健康起着重要作用。随着科学技术的不断发展，西药以其方便快捷的优势逐渐在临床应用中占据主导地位，但由于西药抗生素类的广泛使用，使得病原菌的抗药性日趋增强[1]，中草药作为替代抗生素解决抗药性和药残的重要方案，越来越受到重视[2-3]，尤其是近年来肉食品中的抗生素残留问题已经被提到了一定的高度，而大肠杆菌又属于多血清型和变异型强的细菌，极易产生抗药性，笔者用不同种类和浓度的中药制剂分别用平板稀释法和纸片法对大肠杆菌进行体外抑菌试验，以期筛选出具有临床应用价值的中药制剂，为畜牧业生产服务。 1材料方法 1.1材料 1.1.1试验菌株 肉鸡源大肠杆菌（安徽技术师范学院动科系预防兽医教研室提供）。 1.1.2 培养基 普通营养琼脂、麦康凯琼脂。按常规方法配制。 1.1.3 单味中药 银花、防风、板兰根、白芷、连翘、杏仁、射干、辛夷、贯众、羌活、荆芥、藿香，每ml相当于1g生药量。中草药的煎制与蒸馏由安徽技术师范学院中药实验室完成。 1.1.4 复方中药 银射煎液、麻杏射防煎液、羌藿连防煎液、辛芷荆煎液、辛芷荆蒸馏液、银射蒸馏液、羌藿连防蒸馏液、麻杏射防蒸馏液，每ml相当于1g生药量。 1.2 方法 1.2.1大肠杆菌对中药（单味、复方）敏感性的体外试验——平板稀释法[4]。 1.2.1.1取1ml原药液为第一支试管；在第二只试管中分别加入0.5ml原药液和0.5ml生理盐水以倍比稀释法稀释至第四支试管；第五支试管为无药对照，每支试管中均含有1ml不同浓度的药液。先把药液倒入无菌的平皿中，然后倒入60℃左右的无菌的普通营养琼脂或麦康凯琼脂，并迅速混合均匀，制成平板。然后以无菌的涂布棒蘸取细菌均匀涂布于平板表面，置37℃培养箱内培养24h后观察结果。 1.2.1.2 在第一支试管加入8ml原药液，第二支试管加入4ml原药液，第三支试管加入2ml 原药液，第四支试管加入1ml原药液，第五支试管为无药对照，在第二支试管至第五支试管中分别加入4ml、6ml、7ml及8ml生理盐水；按照1.2.1.1的方法制成平板，涂布细菌后 ＊项目基金：安徽技术师范学院稳定人才基金资助（批准号：YRC200316）