白细胞五分类技术

20世纪时发现了电阻抗原理，由于血细胞是一种不良导体，将血液标本稀释、溶血后制成白细胞悬液，在负压的作用下，悬液流经一个带有微孔的恒压电路时，每个细胞会产生一个电阻脉冲信号，这些信号经过微机的放大、甄别、整形等处理，最后计算出单位体积内的白细胞数。

这种方法最初只能进行细胞计数，美国科学家库尔特采用电子阻率与电子技术相结合，设计出了世界第一台电阻抗三分群血液细胞分析仪，第一次将白细胞分为了大细胞群、中间细胞群、小细胞群，并应用于临床，开创了血细胞分析的新纪元。三分类的方法中大细胞相当于中性粒细胞，中间细胞相当月嗜酸、嗜碱及单核细胞，小细胞相当于淋巴细胞。这种技术只起到了筛选的作用。随着科学技术的迅速发展，三分群血细胞分析技术在临床实践中的局限日益明显，因此，对血液白细胞进行五分类的仪器开始出现。1982年，Technicon公司生产的H6000型血液细胞分析仪器是第一部具有白细胞五分类能力的仪器。同时代的日本日立公司推出的图像分析法的白细胞分析仪HITACHI8200型，仅仅可以完成白细胞血片分类并没有其他血细胞计数分析能力。1990年前后，欧洲和题本许多厂家都陆续推出了各种类型的具有白细胞五分类功能的血细胞分析仪器。

目前已有的白细胞分类技术仪器按原理主要有三种类型：第一类是物理法，第二类是物理——化学法，第三类是图像分析法。

1.物理法

1.1VCS法

Beckman-Coulter公司生产的血细胞分析仪将电学与光学结合，该方法称为体积、电导、激光散射血细胞分析法（VCS）。V是利用电阻抗法测定细胞体积；C是利用高频电磁波，根据各种细胞核浆的电导性不同测理细胞内部结构、核浆比例；S是利用光散射原理测量细胞内颗粒的大小密度等结构特性。计算机根据3种技术得到的资料综合分析，将中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞一一分开，以白细胞分类散点图显示这些细胞，并提示异常淋巴细胞、幼稚细胞、有核细胞、抗溶血红细胞等信息。

1.2多角度偏振光激光散射技术

美国ABBOTT推出的五分类血细胞分析仪，采用了多角度偏振光散射技术（MAPSS）。MAPSS原理：血标本在特殊鞘液的作用下，红细胞内血红蛋白游离出细胞外，红细胞变得透明，而白细胞的内部结构和膜结构基本保持自然状态。当细胞悬液的鞘流经过检测器时，仪器从4个不同的角度得到每个细胞的光信号，这4个角度分别为0°前向角光散射测定细胞的大小；7°～10°狭角光散射测定细胞内部结构及其复杂特征；90°垂直光散射测定细胞内部颗粒和胞浆成分；90°消偏振光散射利用嗜酸性细胞内颗粒特有的消偏振特性，将嗜酸性细胞直接分离。计算机综合4个角度的光信号，将白细胞分类，并提供提示信息和相关图谱。2.物理——化学法

2.1流式细胞法、激光散射和细胞化学染色技术相结合技术

日本Sysmex公司全系列五分类血液细胞分析仪均采用此技术，这也是现在国内应用最广泛的仪器。这种方法通过连续流动的系统，将待测细胞经处理或染色后压入流动室，不含细胞的缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能被包绕着样品高速流动组成一个圆形的流束，待测细胞单行排列依次通过检测区域，通过光电效应将电信号转换为可被计算机识别的数字信号，经处理，可分析出血细胞中白细胞总数，各分类细胞的百分率和绝对值，细胞体积大小和内部信息，并且显示在屏幕上。

2.2激光散射和过氧化物酶染色相结合技术

西门子公司的全自动血液分析仪采用了这种技术。血标本进入仪器，在一系列的预处理液和白细胞过氧化物酶染色后流经检测器。每个细胞在激光束的照射下，各类细胞因过氧化物酶含量不同，具有不同的光吸收信号；根据每个细胞的前向角大小可以得到细胞的体积数据，

同时仪器有单独的嗜碱性细胞直接计数通道，计算机根据这些信息得出细胞分类结果。

2.3双鞘流技术和细胞化学染色法

ABX公司生产的血细胞分析仪采用了双鞘流（DHSS）分析法。标本首先在第一鞘流液中经过电阻抗测定分析，得到细胞体积测定结果．然后通过第二鞘流引导再行光吸收率分析．对细胞内容物进行测定，最终将细胞测定信息在散射图相应的位置表现出来。

2.4迈瑞激光散射和细胞化学染色技术

深圳迈瑞（Mindray）公司是国内最早生产五分类血细胞仪的厂家，采用半导体激光散射技术和细胞化学染色技术，配合改良的流式分析装置对白细胞进行精确的五分类分析。激光散射分析技术是五分类法常用的分析技术。由于细胞的物理特性，当激光照射到细胞时，会有不同角度的散射光出现。低角度(1°～5°)散射光可反映细胞体积大小信息；中高角度（10°～20°）。散射光可反映细胞颗粒的复杂性信息。综合这两个角度散射光的信息．结合其他特殊技术来完成自细胞的五分类测定。

3.图像分析法

近年来，瑞典CellaVision AB公司开发出一种新型自动影像血细胞分析系统。国内南昌百特公司也已经研制出了新一代同类数字化血细胞形态分析仪。其工作原理模仿人“脑——眼”系统的智能识别过程，运用计算机图像处理和模式识别，将从显微镜与摄像机得到的数字化细胞图像进行自动处理分析和分类。这种仪器的主要特点是运用图像处理分析技术提取细胞形态，色彩，纹理等方面的多种特征信息，并用模式识别技术进行细胞分类。

虽然这些细胞分类技术都为临床提供了准确的检验结果，但是却不能完全取代显微镜检查。Sysmex全系列仪器由于使用先进的激光散射和核酸荧光染色技术相结合，对正常白细胞分类准确无误，而且其散点图对异常细胞的提示非常具有参考价值。Cellavision AB公司自动影像血细胞形态分析系统只能作为五分类血液分析仪器的后处理，进行白细胞的形态学观察，虽可以大大减少工作量，但由于数据库容量不足，识别精度不够高等原因，仍然无法完全取代人工镜检。