苹果的品质分析

苹果的品质分析实验报告

一、还原糖的测定-3，5-二硝基水杨酸法

1.1【实验目的和要求】

1、掌握还原糖定量测定基本原理

2、学习比色定糖法的基本操作

3、熟悉分光光度计的使用方法

1.2【实验原理】

还原糖是指含有游离的半缩醛（酮）基的糖。单糖都是还原糖，某些双糖如乳糖、麦芽糖是还原糖；多糖则为非还原糖。多糖在水溶液中不形成真溶液，只能形成胶体，于此可将之与可溶性的单糖和双糖分开。

在碱性条件下，3,5二硝基水杨酸与还原糖公热后被还原成3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其产物。在一定范围内，还原糖的量和反应中的棕红色物质颜色深浅的程度成正比例的关系。在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度，查对标准曲线并计算，便可求出还原糖的含量。利用酸可使没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再进行测定，这样可分别求知样品中总糖和还原糖的量。该定糖法，操作简便，快速，杂质干扰少。

1.3【实验器材】

分光光度计、水浴锅、电子分析天平、电炉、精密PH试纸、试管、三角瓶、容量瓶、量筒、玻璃漏斗及滤纸、移液管

1.4【实验材料及试剂】

（1）苹果

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：把6.3g3,5-二硝基水杨酸和262ml 2mol /L NaOH 溶液加到酒石酸钾钠的热溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌使其溶

解，冷却后加水定容至1000mL ，贮于棕色瓶中

（3）500μg/ml 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的分析纯葡萄糖500mg,加少量水溶解后再加3ml 12mol/L 浓盐酸（防止微生物生长），加水定容至1000ml

1.5【实验操作步骤】

1、葡萄糖标准曲线的绘制

取六只试管编号，分别按1顺序加入试剂，进行操作。

表1

管号 1 2 3 4 5 6 500μg/ml葡萄糖0．0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

DNS试剂/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 加热沸水浴5min，然后冷却

蒸馏水/ml 4 4 4 4 4 4 A540 00.0320.1020.1720.2510.304将上述各管溶液摇匀，在分光光度计上于波长540nm处比色测定，用空白（1号管）溶液调零点，记录吸光度值A540 nm。以葡萄糖含量为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线于坐标纸上.

2、样品中还原糖的提取

准确称取3份实验材料约0.5g,于研钵中磨成匀浆（加水约3ml），转入三角瓶，并用水约30ml 冲洗研钵2-3 次，洗液一并转入三角瓶中。于沸水上加热20nin，冷却后定容到约50ml容量瓶中，过滤后待测。

3、样品含糖量的测定

拿6只试管编号，分别按表2顺序加入试剂，进行操作。将各管摇匀后，用标准曲线的空白管溶液调零点，测定它们的吸光度，从标准曲线上查出其相应的含糖量。

表2

管号11'22'33'

还原糖待测样品/ml 0.5

DNS试剂/ml 0.5

加热沸水浴5min，然后冷却

蒸馏水/ml 4ml

A540nm 0 0.032 0.102 0.172 0.251 0.304

1.6【结果计算】

葡萄糖含量标准曲线如下：

按下述公式计算出样品中还原糖的含量。

还原糖含量=还原糖质量（mg）×样品提取液体积（ml）/还原糖样品质量（mg）×0.5(ml)

吸光度 1.67 1.698 1.781 1.781 1.916 1.962 还原糖质量/mg 1.313 1.336 1.4 1.4 1.505 1.541 还原糖含量26.26% 26.72% 28% 28% 30.10% 30.82% 平均含量28.32%

1.7【结果分析与讨论】

二、蛋白质含量的测定————考马斯亮蓝G-250染色法

2.1【目的和要求】

掌握考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理和方法.

2.2【实验原理】

考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后

变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成

正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时

间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，

可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋

白质快速测定方法。

2.2【实验器材】

分光光度计，离心机，分析天平，药物天平，研钵，烧杯，量筒，容量瓶，刻度吸管，具塞

刻度试管，漏斗，漏斗架，剪刀

2.3【实验材料和试剂】

（1）苹果

（2）.标准溶液：准确称取100mg牛血清蛋白，溶于100ml蒸馏水中，即为1000μg/ml (3)染色液：称取0.1g考马斯亮蓝G-250溶于50ml 90%乙醇溶液中，再加入100ml 85% 磷酸，最后用蒸馏水定容至1000ml，此溶液可放置一个月

2.4【实验步骤】

1．标准曲线绘制

0~1 000μg／mL 标准曲线的绘制：另取6 支10mL 具塞试管，按表1取样。其余步骤同（1）操作，做出蛋白质浓度为0~1 000μg／mL 的标准曲线。

表1

管号 1 2 3 4 5 6 100μg/ml

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

牛血清蛋

白/ml

蒸馏水/ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0

得到从1号到十号管牛血清蛋白溶液浓度分别为0，200,400,600,800,1000ug/ml,准确吸取各管溶液0.1ml，分别放入10ml具塞试管中，再加入5ml考马斯亮蓝G-250试剂，盖塞，将试管中溶液纵向倒转混合，放置2min后，在分光光度计上，于595nm波长处，以0号管做空白调零，测定吸光度A595nm，以蛋白质浓度为横坐标，A595um为纵坐标，绘制0~1000ug/ml标准曲线

·

2．样品提取液中蛋白质浓度的测定

称取新鲜绿豆芽下胚轴2g 放入研钵中，加2mL 蒸馏水研磨成匀浆，转移到离心管中，再用6mL 蒸馏水分次洗涤研钵，洗涤液收集于同一离心管中，放置0.5~1h 以充分提取，然后在4 000r/min 离心20min，弃去沉淀，上清液转入10mL 容量瓶，并以蒸馏水定容至刻度，即得待测样品提取液。另取2 支10mL 具塞试管，按下表取样。吸取提取液0.1mL （做一重复），放入具塞刻度试管中，加入5mL 考马斯亮蓝G-250 蛋白试剂，充分混合，放置2min 后用1cm 光径比色杯在595nm 下比色，记录光密度OD595nm，并通过标准曲线查得待测样品提取液中蛋白质的含量X（μg）。以标准曲线1 号试管做空白。测得样品吸光度A595nm.

2.5【结果计算】

蛋白质标准曲线如下：

由标准曲线可以查出相应的蛋白质浓度（μg/ml），可按如下公式计算出样品中蛋白含量

样品蛋白质含量（μg/g鲜重）＝查出的蛋白提取液质量浓度（μg/ml）×提取液总体积（ml））／（样品鲜重（g）×测定时取用提取液的体积（ml））

计算结果如下：

管号 1 1' 2 2' 3 3' 吸光度0.232 0.155 0.152 0.201 0.178 0.183

蛋白质浓度/μ

415.7 305.7 301.4 371.4 338.6 345.7 g/ml

样品蛋白质含量

2078.5 1528.5 1507.1 1857.1 1692.8 1728.5 μg/g

平均μg/g 1732.083

2.6【结果分析与讨论】

三、维生素C的测定----2，6—二氯酚靛酚滴定法

3.1【目的和要求】

掌握用2，6—二氯酚靛酚测定维生素Cde 原理和方法。

3.2【实验原理】

维生素C（抗坏血酸）属于水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时

易得坏血病。它广泛存在于植物中，尤以蔬菜与水果中含量丰富。

维生素C有强的还原性，在中性和微酸性环境中它能将呈蓝色的染料2,6-二氯酚靛酚

在酸性溶液中呈红色，在中性或酸性溶液中呈蓝色。所以，当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有

抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸全部被氧化后，再滴下2,6-二氯酚靛酚将立即使溶液

呈淡红色，从而显示到达滴定终点。如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与

样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。

此法操作简便，但存在下列缺点：①生物组织中的脱氧抗坏血酸及结合抗坏血酸同样具有维生素C的生理作用，用此法不能测出。②生物材料提取液中含有的其他还原性物质，也可以使2,6-二氯酚靛酚还原脱色而引起误差。③提取液中常存在的色素类物质干扰滴定终点的观察。

由于提取液中其他还原性物质还原2,6-二氯酚靛酚速度较慢，故可将滴定过程控制在2min之内，并判断终点以淡红色15～30s内不消失为准。当提取液绿色素太多，严重干扰终点判断时，可先用白陶土或AL(OH)3乳液脱色。这些措施在一定程度上减少了测量的误差。

3.3【实验材料】

离心机，研钵，三角瓶（100mL×4），容量瓶（50mL×1），量筒（20mL×1），大离心管（50mL×1），滴定管（酸式）（×1），移液管（10mL×2）。

3.4【实验材料及试剂】

⑴苹果

⑵0.005mg/mL标准维生素C溶液：准确称取维生素C20mg，用1%草酸溶液定容至200mL。以1%草酸稀释定容至200mL。临用时配，冰箱中储存。

⑶0.1mg/mL2,6-二氯酚靛酚溶液：称取干燥的2,6-二氯酚靛酚钠20mg，放入200ml 容量瓶中，加热蒸馏水150ml，滴加0.01mg/mlNAOH溶液4~5滴，剧烈摇动10min，冷却后加水至刻度。摇匀后用滤纸过滤，放入棕色瓶中。储存在冰箱中备有，有效期1周，使用前标定。

⑷1%草酸溶液，2%草酸溶液。

3.5【实验步骤】

1．样品提取

取1g白菜叶，加5ml 2%草酸溶液，于研钵中研磨成浆状，将提取液及残液一起转移到离心管中，用20ml2%草酸溶液分2~3次冲洗研钵，溶液一并转入离心管中，在其中加入AL(OH)3乳液（可用适量白陶土代替），摇匀并静置约5MIN ，然后以3000r/min离心15~20min，上清液转移到50ml容量瓶中，以2%草酸溶液定容至刻度，即为样品提取液，摇匀备用。

2．标准液滴定

准确吸取0.005mg/ml标准维生素c溶液10ml，放入三角瓶中，同时吸取10ml1%草酸溶液于另一个三角瓶中做空白对照，用已标定的2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色出现，且15s内不消失为止，记录所用毫升数，计算每毫升2,6-二氯酚靛酚溶液所能氧化抗坏血酸的毫克数。

0.005mg/ml标准维生素C滴定

管号 1 2

0.005mg/ml标准

10 10

维生素C /ml

标准维生素C含

0.05 0.05

量/mg

2,6-二氯酚靛酚

2.16 2.06

/ml

K/ mg/ml 0.02315 0.2427

K平均/ mg/ml 0.02371

3．样品提取液滴定

准确吸取样品液两份，每份10.0ml，分别放入两个锥形瓶中，用标志过的2,6-二氯酚靛酚溶液滴定，空白样滴定方法同前。

3.6【结果计算】

按下述公式计算出样品液中还原型维生素C的含量。

（V1—V2）╳ K ╳ V

100g样品中维生素C的量（mg） = ╳100

V3 ╳ m

式中：V1 为滴定样品提取液所用的2，6—二氯酚靛酚的体积，ml

V2 为滴空白对照所用的2，6-二氯酚靛酚的体积，ml

V3为样品提取液测定时所用的滤液的体积，ml

V 为样品提取液下士的总体积，ml

K 为1mL 2，6—二氯酚靛酚溶液氧化维生素C的量，mg/ml，可由标定计算

m 为10mL样液相当含样品的量，g

计算结果如下：

管号 1 1’ 2 2’ 3 3’2,6-二氯酚靛酚

0.16 0.26 0.18 0.3 0.3 0.18

/ml

平均/ml 0.21 0.11 0.11

每100g样品中维

生素C含量/mg 2.490 1.304 1.304 平均含量/mg 1.7

3.7【结果分析与讨论】