肠道病毒考试试题

一、A1型题（本大题17小题．每题1.0分，共17.0分。每一道考试题下面有A、

B、C、D、E五个备选答案。请从中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应题号的相应字母所属的方框涂黑。）

第1题

关于脊髓灰质炎减毒活疫苗，哪项是错误的

A 可刺激肠粘膜产生SIgA

B 可刺激血液中产生IgG

C 秋冬季节服用效果最佳

D 避免各型疫苗间的干扰

E 可在室温下长期保存

【正确答案】：E

【本题分数】：1.0分

第2题

不属于轮状病毒特点的是

A 为RNA病毒

B 电镜下呈车轮状形态

C 主要经粪口途径传播

D 可引起急性出血性结膜炎

E 可引起婴幼儿腹泻

【正确答案】：D

【本题分数】：1.0分

第3题

下列哪项不符合轮状病毒特性

A 能在常规组织培养中引起明显细胞病变

B 一般不引起病毒血症，预后良好

C 发病有明显的季节性，秋冬季多见

D 可感染人和多种动物

E 免疫电镜技术可从腹泻者粪便中检出病毒

【正确答案】：A

【本题分数】：1.0分

第4题

下列理化因素中不能灭活肠道病毒的是

A 紫外线

B 脂溶剂

C 氧化剂

D 56℃30分钟

E 0.3%甲醛

【正确答案】：B

【本题分数】：1.0分

第5题

最易引起病毒性心肌炎的病毒是

A 脊髓灰质炎病毒

B 柯萨奇病毒A组

C 柯萨奇病毒B组

D 埃可病毒

E 肠道病毒70型

【正确答案】：C

【本题分数】：1.0分

第6题

肠道病毒可以引起感染细胞

A 吸附红细胞

肠道病毒

肠道病毒（enterovirus） 1.肠道病毒：（1）属于小RNA病毒科中的肠道病毒属成员，由粪-口途径传播。（2）虽然感染胃肠道，但却很少引起胃肠道疾病，其靶器官以神经系统、肌肉和其他系统为主，引起脊髓灰质炎、脑膜炎、脑膜脑炎、心肌炎、心周炎、手足口病等疾病。（3）一种病毒血清型可引起几种不同的疾病综合征，而几种不同的血清型又可引起同一种疾病。 2. 肠道病毒种类与分型（1）脊髓灰质炎病毒(poliovirus)：分1、2、3三型（2）柯萨奇病毒(coxsackie virus) ：分A、B两组；（A组：包括A1~A22、A24型；B组：包括B1~B6型；）（3）埃可病毒(ECHO virus)：包括1~9、11~27、29~33型（4）新型肠道病毒：包括68、69、70、71型 3. 脊髓灰质炎病毒：①是引起脊髓灰质炎的病原体； ②脊髓灰质炎又称为小儿麻痹症，是一种危害中枢神经系统的传染病。（1）临床意义： ①传播途径：经粪-口途径感染，潜伏期2~10天 ②传染源：患者及无症状隐性感染者 ③临床表现：无症状感染、顿挫型脊髓灰质炎、无麻痹性脊髓灰质炎、麻痹型脊髓灰质炎1~2% （2）致病机制：（3）生物学特性： ①病毒近似球形，直径27～30nm，核心为单正链RNA，约7.2～8.5kb，核衣壳呈20面体立体对称，无包膜。 ②衣壳含4种蛋白（VP1～VP4），VP1、VP2和VP3暴露在病毒体表面，是抗体结合位点；VP4在核心内部与RNA结合。（4）培养特性：

①细胞：人胚肾、人胚肺、猴肾细胞、Hela、HEp-2、Vero等 ②最适温度：36～37℃CPE：培养3～5天出现 ③抵抗力较强（5）微生物学检验： 1.标本采集与处理标本：粪便、发病早期的咽部分泌物等 2.病毒分离与鉴定：人或猴肾原代细胞、Hela、V ero等细胞24～48小时可出现典型CPE 3.抗原检测：ELISA法 4.核酸检测：用RT-PCR等方法 5.抗体检测：单份血清检测IgM，双份血清检测抗体效价升高4倍（6）减毒活疫苗：①剂型：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型；②用法：口服（温水）； ③机理：产生分泌型IgA，阻止病毒入血； 4. 柯萨奇病毒（Coxsackievirus）：柯萨奇病毒是1948年在美国纽约州柯萨奇镇，从一名疑似脊髓灰质炎患者粪便中用接种乳鼠的方法首次分离出的，因而得名。（1）分类：根据对乳鼠引起的病理变化分为： A组：可使乳鼠产生广泛性骨骼肌炎，引起驰缓性麻痹。包括23个血清型 B组：可引起乳鼠局灶性肌炎及痉挛性麻痹，并常有棕色脂肪坏死、脑炎和心肌炎。包括6个血清型（2）临床意义： A. 传染源：患者或无症状带毒者 B. 传播途径：主要经粪一口途径，亦可由呼吸道传播。 C. 所致疾病：因其可侵犯呼吸道、胃肠道、肌肉、皮肤、心脏或中枢神经系统等多种组织器官，导致临床表现多样化。较重要的有：类脊髓灰质炎麻痹、无菌性脑膜炎、出疹性发热病、急性心肌炎和心包炎、流行性肌痛、疱疹性咽峡炎。（3）生物学特性 A. 病毒呈球形，直径为17～30nm B. 核心为线状单正链RNA，基因组长约7.5kb C. 核衣壳呈20面体立体对称，无包膜 D. 抗原性复杂，不仅型别多，而且型内还有抗原变异。（4）微生物学检验：检查程序与脊髓灰质炎病毒基本相同。但应注意下列问题： ①必须采用乳鼠接种法分离病毒，以免丢掉那些在细胞培养上不能增殖的病毒； ②由于人群中常有柯萨奇病毒携带者，因而从咽部或粪便取材分离出的病毒，不一定是病原因子；只有取病人双份血清做中和试验，测出特异性抗体有4倍或4倍以上增高时，才能确定病因关系。若从CSF、心包液或疱疹液分离出病毒，则可直接做出诊断； ③由于病毒型别多，很难用检测患者血清中特异性抗体的方法来判断是由哪一型病毒引起的疾病。因而血清学诊断法只适用于集体发病者。以分离株病毒为抗原，对流行区的病人或隐性感染者进行检测。 5. 埃可病毒（ECHOV）：埃可病毒是1951年脊髓灰质炎流行期间从患者粪便中分离出的能使培养细胞发生病变的非脊髓灰质炎病毒。因当时不了解其与疾病关系，故命名为人类肠道细胞病变孤儿病毒(ECHOV)简称之为埃可病毒（ECHOV）。（1）临床意义： ①ECHOV对人的致病性与柯萨奇病毒类似,一岁以下婴儿由ECHOV引起的中枢神经系统感染，常导致神经后遗症和智力障碍，在基本消灭了脊髓灰质炎的国家已引起重视。 ②ECHOV生物学特性和微生物学检验方法与柯萨奇病毒相似。 6. 新型肠道病毒：1969年以后分离出的肠道病毒新血清型，不再将其归属于柯萨奇病毒和

肠道病毒71型简介

第二节肠道病毒71型（EV71）作者：李兰娟出版社：浙江科学技术出版社肠道病毒71型（EV71）属于小RNA病毒科（Picornaradae）肠道病毒属（Enterovirus）的成员，归属于人类肠道病毒A。1974年Schmidt等人首次报道从美国加利福尼亚暴发的表现为神经系统症状疾病（1969～1973年）的患者中分离到EV71，随后，世界上许多国家相继报道了EV71病毒在不同地区的流行情况，EV71病毒已在世界范围内引起多次暴发与流行，人们逐渐认识到EV71病毒是手足口病的主要病原。目前已知EV71的感染可以导致手足口病、疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎（asepic meningitis）、脑炎（encephalitis）和脊髓灰质炎样的麻痹性疾病（poliomyelitis-like paralysis）等多种与神经系统相关的疾病。EV71可导致大范围的暴发流行，可伴有严重的CNS并发症或致死性肺水肿。近年来，EV71病毒的流行在亚太地区呈上升趋势，1975年保加利亚大流行,共有705名患儿感染，死亡44例；1997年马来西亚大流行感染2628人，死亡30多人；1998年，台湾地区暴发EV71的大流行，约有12万以上的人被感染，死亡78人。因此，有关EV71的病毒生物学特性、致病机理、诊断和预防等的研究日益受到人们的重视。一、病毒的一般特征（一）病毒颗粒结构该病毒的颗粒为二十面体立体对称的球形结构，无包膜和突出，直径约24～30nm，核酸为单股正链RNA。如同其他肠道病毒属成员一样，EV71型病毒基因组编码的分子量分别为34KD、30 KD、26 KD和7KD的多肽VP1(α)、VP2（β）、VP3（γ）、VP4（δ），构成原聚体，后者再拼装成具有五聚体样结构的亚单位（pentameric unit），60个亚单位通过各自的结构域相互连接，最终形成病毒的外壳。VP1 、VP2和VP3三个多肽暴露在病毒外壳的表面，而VP4包埋在病毒外壳的内侧与病毒核心紧密连接，因而抗原决定簇基本上位于VP1-VP3上。EV71病毒由于没有类脂膜，所以它对乙醚、脱氧胆酸盐、去污剂以及弱酸有抵抗性。此外，该病毒还能抵抗70％乙醇和5％甲酚皂溶液等常见的消毒剂，但是高温（56℃，30min）处理和紫外线照射可以很快将病毒灭活，它对各种氧化剂如高锰酸钾、双氧水、漂白粉等也很敏感。（二）基因组结构 EV71病毒的基因组为含有大约7411个核苷酸（7423/MS/87株）的单股正链RNA，腺嘌呤核苷酸和尿嘧啶核苷酸丰富（A+U=52.8）。RNA中仅有一个开放阅读框（ORF），编码含2194个氨基酸的多聚蛋白，在其两侧为5′和3′非编码区（UTRs），它与其他肠道RNA病毒一样，在3′末端有多聚腺苷酸（poly A）尾，而其5′末端共价结合有一个小分子量的蛋白（VPg）。病毒的单链RNA具有感染性（病毒裸露RNA的感染性仅为病毒颗粒的百万分之一），如果去除3′末端的多聚腺苷酸尾或基因组出现断裂，感染性便消失。相对而言，其5′末端连接的蛋白质对病毒的感染性没有明显的影响。 EV71基因结构图 (中国疾病预防控制中心提供)

肠道病毒EV71简述

肠道病毒EV71感染性疾病肠道病毒EV71是人肠道病毒的一种，简称为EV71，常引起儿童手足口病、病毒性咽峡炎，重症患儿可出现为肺水肿、脑炎等，统称为肠道病毒EV71感染疾病。哪些人容易患这种疾病？三岁以下婴幼儿多发，成人也可感染。环境卫生、食品卫生差，不良个人卫生习惯易发病。大部分病例病情较轻，可治愈。少数患者可出现脑炎及脑脊髓炎、肺水肿、循环衰竭等，严重时可危及生命。发病特点：年龄段普遍偏小，最大的患者11岁，最小的才1岁左右，其中2―3岁的居多；其次，发病地区分散，且主要在农村地区。这种病什么季节最容易发生？该病一年四季都可发生，常见于4～9月份。该病通过什么途径传播？ 1．人群密切接触是重要的传播方式，儿童通过接触被病毒污染的手、毛巾、手绢、牙杯、玩具、食具、奶具以及床上用品、内衣等引起感染。 2．患者咽喉分泌物及唾液中的病毒可通过空气（飞沫）传播，故与生病的患儿近距离接触可造成感染。 3．饮用或食入被病毒污染的水、食物，也可发生感染。这种病开始有哪些表现？患儿感染肠道病毒EV71后，多以发热起病，一般为38℃左右。部分病人早期有咳嗽流涕和流口水等类似上呼吸道感染的症状，有的孩子可能有恶心、呕吐等反应。

发热1～2天后开始出现皮疹，通常在手足、臀部出现，或出现口腔粘膜疱疹。有的患儿不发热，只表现为手、足、臀部皮疹或疱疹性咽峡炎，病情较轻。大多数患儿在一周以内体温下降、皮疹消退，病情恢复。如果孩子出现发热、有皮疹等症状，家长该怎么办？发现孩子发烧、有皮疹等症状，尽快到正规医院就诊。孩子患病后应暂停去幼儿园和学校，避免传染给他人，防止再感染其他疾病。根据医生建议，决定是否留院观察或住院治疗。患儿的家庭应使用肥皂、消毒液对日常用品、玩具、尿布进行消毒，对奶具、餐具煮沸消毒。患儿粪便及其他排泄物可用消毒剂或漂白粉消毒；将衣被阳光曝晒，室内保持通风换气。家庭如何预防这种病？春夏是肠道病毒感染容易发生的季节，要讲究环境、食品卫生和个人卫生。不喝生水、不吃生冷食物，饭前便后洗手，保持室内空气流通。尽量不要带婴幼儿去人群密集场所。哺乳的母亲要勤洗澡、勤换衣服，喂奶前要清洗奶头。幼儿园、托儿所如何预防这种病？托幼机构等儿童集体生活、学习的场所，要做好晨间体检，发现有发热、皮疹的孩子，要立即要求家长带小孩去医院就诊，同时报告相关部门。患儿应在家中休息，不宜继续上学。发现有发热、皮疹的孩子后，要立即对玩具、被褥、桌椅等进行消毒；同时做好食堂、卫生间、教室等的消毒处理。保持教室和寝室等活动场所通风换气。发现保育员、教师和其他工作人员有发热伴皮疹的，应立即暂停工作。小学如何预防这种病？答：小学要做好每日晨间体检。发现有发热、皮疹的孩子，要立即要求家长带去医院就诊，同时报告相关部门。患病学生不应继续上学，要在家中休息。

核酸检测测试题及答案

新冠病毒核酸检测培训测试单选题:1. 根据目前掌握的新型冠状病毒生物学特点、流行病学特征、致病性、临床表现等信息，该病原体暂按照病原微生物危害程度分类中（）类病原微生物进行管理？ A. 第一 B. 第二 C. 第三 D. 第四单选题:2. 可以进行新型冠状病毒检测标本采集人员为? A. 经过生物安全培训，培训合格且具备采样技能的人员 B. 医生 C. 研究所科研人员 D. 实验室管理人员单选题:3. 新型冠状病毒检测标本首选? A. 呼吸道标本 B. 便标本 C. 尿液 D. 结膜拭子标本单选题:4. 新型冠状病毒感染的特异性检测不包括? A. 核酸检测 B. 病毒分离 C. 抗体检测 D. 生化检测单选题:5. 抗体检测最好选用? A. 发病早期血清 B. 空腹血 C. 恢复期血清 D. 发病早期、恢复期双份血清单选题:6. 新型冠状病毒核酸检测技术不包括? A. 高通量测序 B. 荧光RT-PCR C. 数字PCR技术 D. 病毒分离单选题:7. 以下哪个条件不能确认新型冠状病毒感染? D

A. 同一份标本中新型冠状病毒2个靶标（ORF1ab、N）实时荧光RT-PCR检测结果均为阳性 B. 两种标本实时荧光RT-PCR检测同时出现单靶标（ORF1ab或N）阳性 C. 同种类型标本两次采样检测重复出现单个靶标阳性（ORF1ab或N） D. 单种标本单次单靶标阳性（ORF1ab或N）单选题:8. 可在BSL-2级实验室开展的新型冠状病毒相关实验活动不包括? A. 病毒分离 B. 标本分装 C. 标本灭活 D. 核酸检测单选题:9. 新型冠状病毒感染动物实验可以在（）实验室开展? A. BSL-1 B. BSL-2 C. BSL-3 D. ABSL-3 单选题:10. 鼻拭子采集的关键点是什么？ A. 鼻拭子：待拭子顶端到达鼻咽腔后壁时，轻轻旋转一周 B. 鼻拭子：沿下鼻道的底部向后缓慢深入，待拭子顶端到达鼻咽腔后壁时，轻轻旋转三周 C. 鼻拭子：沿上鼻道的底部向后缓慢深入，待拭子顶端到达鼻咽腔后壁时即可 D. 鼻拭子：沿中鼻道的底部向后缓慢深入，待拭子顶端到达鼻咽腔后壁时，轻轻旋转三周单选题:11. 咽拭子采集部位的关键点是什么？ A. 咽拭子：两侧咽扁桃体和咽后壁上下擦拭至少30秒 B. 咽拭子：两侧咽扁桃体稍微用力来回转动擦拭，然后在咽后壁上下擦拭至少30秒 C. 咽拭子：两侧咽扁桃体稍微用力擦拭，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次 D. 咽拭子：两侧咽扁桃体来回转动擦拭，然后再在咽后壁上下擦拭至少1次单选题:12. 实验室戴手套的注意事项？ A. 两层普通手套 B. 两层能盖过袖口的手套，每次戴手套前要做充气检查 C. 长袖筒一次性医用橡胶手套两层，手套袖筒必须覆盖住防护服袖口，用充气方法检查手套是否破损 D. 两层手套，用充气方法检查手套是否破损单选题:13. 采集新冠病毒呼吸道标本时戴什么级别的口罩？ A. N95及以上口罩 B. N99口罩 C. 医用外科口罩

肠道病毒标本的采集运送保存和实验室检测指南

肠道病毒标本的采集运送保存和实验室检测指南为及时、科学地采集和运送手足口病标本，规范实验室检测程序和检测方法，提高检测质量，特制定本指南。一、采样液 1．pH7.4～7.6 HANK氏平衡盐（含0.5%的牛血清白蛋白）。 2．pH7.4～7.6的Eagle’s MEM培养液（含0.5%的牛血清白蛋白）。二、标本种类及采集 1．咽拭子：用聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml采样液的采样管中。 2．患者粪便：采集5～10g粪便置于15ml空采样管中。 3．血清标本：须采集急性期、恢复期双份血清。用真空负压采血管采集血液标本5ml，室温静置30分钟，1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于2ml 无菌螺口塑料管中。标本采集好后，应在采样管上做好标记，并注明标本的种类，同时及时填写采样表，要求信息完整。三、标本保存及运送标本应在冷藏的条件下尽快进行送实验室检测，24小时内能检测的标本可置于4℃保存，24小时内无法检测的标本则应置于-70℃或以下保存。如无－70℃保存条件，则于－20℃冰箱暂存。血清可在4℃存放3天、-20℃以下长期保存。标本运送期间应避免反复冻融。四、标本的实验室检测 1．核酸检测：方法包括RT-PCR和Real-Time RT-PCR，首先使用肠道病毒

通用引物进行快速筛查，得到阳性结果后使用EV71、CoxA16等引物和探针进行分型。 2．病毒分离及鉴定：采用RD、Hep2和Vero细胞进行病毒的分离，第一代7日内仍然为阴性的标本需继续盲传一代。病毒鉴定采用中和试验（NT）和间接免疫荧光法（IFA）。 3．血清学检测：采用组合血清进行血清中和试验，双份血清具4倍增长才具有诊断意义。

病毒习题3 胃肠道病毒

第27章肠道病毒测试题一. 填空 1.脊髓灰质炎病毒的特异性预防目前主要采用口服减毒活疫苗,实行三价３次基础免疫. 初次免疫年龄为二月龄,加强免疫年龄为４岁. 2.肠道病毒包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒和新型肠道病毒６８型至７２型。 3.肠道病毒对外界和肠道环境的抵抗力均较强，对胃液中的胃酸、胰液中的蛋白水解酶和胆汁中的胆盐均有抵抗力。但对氧化剂敏感。１％高锰酸钾、１％双氧水和漂白粉可灭活病毒。 4.肠道病毒属中与医学密切相关的病毒主要有柯萨奇病毒、埃可病毒和新型肠道病毒。 5.对怀疑为肠道病毒引起的急性感染患者，进行细胞培养分离病毒时，常用的取材标本有咽拭子、直肠拭子、、和。二. 单选题 1.不属于肠道病毒共同特点的是 A.为裸露的小核糖核酸病毒 B.耐酸,耐乙醚 C.核酸有感染性 D.只在肠道增殖并引起腹泻 E.可侵犯神经系统及其它组织 2.脊髓灰质炎病毒多引起 A.隐性或轻症感染 B.瘫痪型感染 C.延髓麻痹型感染 D.慢性感染 E.迁延性感染 3.脊髓灰质炎病毒的感染方式是 A.经媒介昆虫叮咬 B.经口食入 C.经呼吸道吸入 D.经血液输入 E.经皮肤接触 4.脊髓灰质炎病人的传染性排泄物主要是 A.鼻咽分泌物 B.血液 C.粪 D.尿 E.唾液 5.能耐受脂溶剂的病毒为 A.流感,副流感病毒 B.风疹病毒 C.脊髓灰质炎病毒 D.呼吸道合胞病毒 E.麻疹病毒 6.与口服脊髓灰质炎减毒活疫苗注意事项不符的是 A.注意疫苗是否失效 B.勿用热开水和母乳送服 C.疫苗在运输途中要注意冷藏 D.为避免其它肠道病毒干扰,宜在冬季服用 E.需连续服三次,每次间隔一年 7.脊髓灰质炎病毒的致病特点不包括 A.传播方式主要是粪—口途径 B.可形成两次病毒血症 C.多表现为隐性感染 D.易侵入中枢神经系统造成肢体痉挛性瘫痪 E.易感者多为5岁以下幼儿 8.急性出血性结膜炎的病原是 A.肠道病毒70型 B.埃可病毒 C.腺病毒 D.肠道病毒69型 E.柯萨奇病毒

肠道病毒的分类与检测

肠道病毒的分类与检测摘要肠道病毒可引发多种感染，并且发病以综合症出现，一种综合症可有不同病毒所引起，同一种病毒可以导致不同综合症是肠道病毒感染的普遍现象。目前除脊髓灰质炎外，尚无疫苗可供预防，是当前严重影响人类健康的重要病原之一。肠道病毒主要经粪一口或呼吸道传播，所以对肠道病毒感染作出准确、及时的诊断是非常必要的。肠道病毒（Enterovirus）是小RNA病毒科，有67个血清型。人类肠道病毒包括：脊髓灰质炎病毒（Poliovirus）、柯萨奇病毒（Coxsackievirus）、埃可病毒（Echo）、甲型肝炎病毒以及新型病毒。目前常用的检测肠道病毒的方法有病毒分离培养、血清学鉴定、分子生物学方法，近年来，一些新型方法也使得肠道病毒的检测快速化与准确化。关键词肠道病毒/诊断/分类 1 肠道病毒形态特点肠道病毒是球形、无包膜、核衣壳20面体立体对称。肠病毒属病毒粒子在酸性pH 下稳定，在病毒制品中可观察到空衣壳，有时可观察到少量（1%）的重颗粒。基因组编码单一的VPg蛋白，但不编码L蛋白。不同肠道病毒及肠道病毒与鼻病毒间整个核苷酸序列一致性大于50%，一种肠道病毒不同株之间整个核苷酸序列的一致性大于75%。病毒主要在肠道细胞中复制，也能在神经、肌肉和其它一些组织中复制。大多数病毒感染无明显症状，病毒感染的临床症状包括轻微脑膜炎、脑炎、肌炎、心肌炎和结缔组织炎。耐酸和脂溶剂，不易被胃酸和胆汁灭活，在污水和粪便中活数月。 2肠道病毒的分类 2.1脊髓灰质炎病毒

此病症的典型临床经过六个阶段（潜伏期、前驱期、瘫痪前期、瘫痪期、恢复期和残留麻痹）。感染期间患者表现为低热及咽痛、咳嗽、腹泻、不安、嗜睡、多汗、脑膜刺激症、肌肉疼痛、皮肤感觉过敏，突发急性弛缓性麻痹等症状，最后多遗留下终生残疾。脊髓灰质炎病毒通过患者的粪便或口腔分泌物传染。人类是脊髓灰质炎病毒的唯一宿主，长期携带病毒的情况（例如无症状，但仍持续排出病毒长达6个月以上）很罕见。服用脊髓灰质炎疫苗（现在我国使用I、II、III型混合糖丸疫苗，是由减毒的脊髓灰质炎病毒制成的）是预防本病的主要措施。消灭脊髓灰质炎最根本的手段是提高人群免疫水平，断绝脊髓灰质炎野毒株在人群中的传播。脊髓灰质炎病毒分为三个血清型；两种不同抗原：D抗原和C抗原。D（dense，致密）抗原：具有病毒RNA，为完整的病毒颗粒，又称N（native）抗原；C（coreless，无核心）抗原：不含RNA，是D颗粒经56 ℃灭活，RNA释放后形成的无核酸空心衣壳，故又称H（heated）抗原；不同型别病毒C抗原可发生交叉反应，但D抗原无交叉反应；传播方式主要是粪-口传播，所致疾病是脊髓灰质炎。中毒机理：粪－口途径传播为主—上呼吸道，咽喉，肠道为侵入门户—先在局部粘膜和淋巴结中增殖—入血，形成第一次病毒血症—带有受体的靶组织（脊髓前角细胞、背根神经节细胞、运动神经细胞等）—在靶细胞中再次增殖后形成第二次病毒血症及临床症状。检测方法第一是微生物学检查，检测方法：病毒分离检查：取咽漱液、粪便等样本，细胞培养出现CPE；血清学诊断：中和试验；病毒核酸测定。第二是防治:口服减毒活疫苗或者注射灭活疫苗. 2.2 柯萨奇病毒柯萨奇病毒[2]对乳鼠的敏感性很高，根据它们感染乳鼠产生的病灶，柯萨奇病毒可以分为a、b两组。a组有23型病毒，b组有6型病毒。A组病毒：诱发新生乳鼠弥漫性骨胳肌炎，导致驰缓性麻痹。B组病毒：诱发新生乳鼠局灶性骨胳肌炎，导致痉挛性麻痹。通过型特异性抗原，经中和试验。Elisa方法等可以对各型进行鉴定。所有的b组及a组的第9型有共同的组特异性抗原，在b组内病毒之间有交叉反应，但是a组病毒没有共同的组特异性抗原。a组某些型别的型特异性抗原可在37℃引起人类O型红细胞凝集反应。柯萨奇病毒A型感染潜伏期1-3天，上呼吸道感染，起病急，流涕、咳嗽、咽痛、

人腺病毒分子生物学常用检测技术

Advances in Microbiology 微生物前沿, 2017, 6(2), 11-16 Published Online June 2017 in Hans. https://www.360docs.net/doc/273760275.html,/journal/amb https://https://www.360docs.net/doc/273760275.html,/10.12677/amb.2017.62002 The Molecular Biological Techniques for Human Adenovirus Detection Ye Li1,2, Tuo Dong1,2, Vladimir I. Zlobin3, Oleg Reva4, Zhangyi Qu1,2* 1Department of Microbiology, School of Public Health, Harbin Medical University, Harbin Heilongjiang 2Department of Natural-Foci Diseases, Institute of Environment-Associated Diseases, Sino-Russia Joint Medical Research Centre, Harbin Heilongjiang 3Research Institute for Biomedical Technologies, Irkutsk State Medical University, Irkutsk, Russia 4Department of Biochemistry, Bioinformatics and Computational Biology Unit, University of Pretoria, Pretoria, South Africa Received: May 12th, 2017; accepted: May 30th, 2017; published: Jun. 2nd, 2017 Abstract Adenovirus is one of the major viruses causing human respiratory diseases. The effective and rapid method in adenovirus detection is helpful to strengthen the surveillance of adenovirus in-fection, to investigate the epidemic trends timely, and to control the virus infection. The current molecular biological methods for adenovirus detection both used in laboratory and clinical are reviewed in this paper. The principle, characteristics and application of these techniques are commented. Keywords Adenovirus, PCR, Molecular Biological Detection 人腺病毒分子生物学常用检测技术李烨1,2，董妥1,2，Vladimir I. Zlobin3，Oleg Reva4，曲章义1,2* 1哈尔滨医科大学，公共卫生学院，卫生微生物学教研室，黑龙江哈尔滨 2中俄医学研究中心，环境相关疾病研究所，自然疫源性疾病研究室，黑龙江哈尔滨 3俄罗斯伊尔库茨克国立医科大学，生物医学技术研究所，伊尔库茨克，俄罗斯 4南非比勒陀利亚大学，生物信息学与计算生物学部，生物化学系，比勒陀利亚，南非收稿日期：2017年5月12日；录用日期：2017年5月30日；发布日期：2017年6月2日 *通讯作者。文章引用: 李烨, 董妥, Vladimir I. Zlobin, Oleg Reva, 曲章义. 人腺病毒分子生物学常用检测技术[J]. 微生物前沿,2017,

肠道病毒核酸检测试剂注册技术审查指导原则

附件4 肠道病毒核酸检测试剂注册技术审查指导原则本指导原则旨在指导注册申请人对肠道病毒核酸检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。本指导原则是针对肠道病毒核酸检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导性文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。一、范围（一）肠道病毒简介肠道病毒属于小RNA病毒科肠道病毒属，能引起人类致病的肠道病毒有多种，包括人肠道病毒A、B、C、D组，有100多个血清型。人类肠道病毒主要包括：脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒A组（Coxsackievirus A，CA）、柯萨奇病毒B组（Coxsackievirus B，CB）、人肠道致细胞病变孤儿病毒（简称埃可病毒）（Echovirus ECHO）、新肠道病毒等。新肠道病毒为1969年后陆续分离到的，例如新型肠道病毒71型（EV71）等。近年来，鼻病毒（Rhinovirus）被划入肠道病毒属，鼻病毒包括A、B、C组，已经先后分离得到140多个血清型。肠道病毒为球形，直径28～30nm，核衣壳二十面体立体对称，无包膜。病毒衣壳由60个相同的壳粒组成，排列为12个五聚体，每个壳粒由VP1、VP2、VP3和VP4四种蛋白组成。肠道病毒基因组为单股正链RNA，全长约为7.2～8.4kb，基因组分为三部分，两端为保守的非编码区，在肠道病毒中同源性非常显著，其中5’端非编码区常作为肠道病毒通用检测试剂检测的靶基因。中间为连续开放读码框，包含结构蛋白编码区和非结构蛋白编码区，结构蛋白编码区依次编码VP4、VP2、VP3和VP1共４个衣壳蛋白。衣壳蛋白不仅含有抗原决定位点，而且还有决定病毒组织嗜性的受体识别位点，介导病毒与细胞的吸附和进入。非结构蛋白编码区主要负责编码与病毒基因组复制以及病毒颗粒包装等有关的蛋白及酶，它们在RNA复制、细胞器修饰，细胞裂解及形态形成中发挥各自不同的功能。（二）肠道病毒致病性肠道病毒在肠道中增殖，但通常不引起肠道疾病。90%以上肠道病毒感染为隐性感染，或仅出现轻微的上呼吸道感染或流感样症状。不同肠道病毒可以引起相同的临床症状，同一种病毒可引起几种不同的临床疾病。肠道病毒的传染源为患者和无症状的病毒携带者。传播途径主要是粪-口途径，也可通过呼吸道传播，夏秋季是一年之中的主要流行期。肠道病毒以上呼吸道、咽喉和肠道为侵入门户，先在局部黏膜和咽、扁

肠道病毒71型引起手足口病的发病机制

综　　述肠道病毒71型引起手足口病的发病机制尤俊斌，苏郑明综述，陈讳莹审校［摘要］　手足口病（hand ，foot and mouth disease ，HFMD ）是由肠道病毒引起的传染病。其中肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）属于人类肠道病毒。近30年来EV71感染在亚太地区每2~3年暴发1次。EV71是手足口病的主要病原体，其详尽发病机制目前尚不清楚。文中综述EV71感染累及中Q 神经系统，引起心肌炎和肺水肿的发病机制研究现状。［关键词］　手足口病；肠道病毒71型；发病机制［中图分类号］　Q935 ［文献标志码］　A ［文章编号］　1008?8199（2012）08?0876?03 基金项目：广东省大学生创新实验项目（20105709）；R 头大学医学院杰出大学生科研基金（20105709）作者单位：515041R 头，R 头大学医学院生物化学与分子生物学教研室（尤俊斌、苏郑明、陈纬莹）通讯作者：陈纬莹， E -mail ：wychen@https://www.360docs.net/doc/273760275.html, Pathogenesis of hand ，foot and mouth disease caused by Enterovirus 71 YOU Jun?bin ，SU Zheng?ming reviewing ，CHEN Wei?ying checking （Department of Medical College of Shantou University ，Shantou 515041，Guangdong ，China ）［Abstract ］　Hand ，foot and mouth disease （HFMD ）is an infectious disease caused by intestinal virus.Enterovirus 71（EV71）is one of the most common strains of human enterovirus.In recent 30years ，EV71infection outbreaks every 2to 3years in the Asia?Pacific Regions ，and EV71is the main pathogen causing HFMD.The pathogenesis is still less understood.The studies on pathogenesis of EV71infection that involves in central nervous system ，leads to myocarditis or pulmonary edema are reviewed. ［Key words ］　Hand ，Foot and Mouth Disease ；Enterovirus 71；Pathogenesis 0　引言 HFMD 是由肠道病毒引起的传染病，多发生于 5岁以下儿童。其主要特征是发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疤疹，重症可引起无茵性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹（acute flaccid paralysis ， AFP ）［1］、急性肺水肿和心肌炎等［2］。引发手足口病的肠道病毒有20余种（型）。柯萨奇病毒A 组的4、5、9、10、16型，B 组的2、5型以及EV71均为手足口病较常见的病原体。其中以柯萨奇病毒A16型（Cox A16）和EV71最为常见［3-4 〗。人类感染EV71后，在小肠远端形成原发感染灶，病毒侵入肠壁固有层集合淋巴结（Peyer′spatch ）后大量复制，约第3天即有少量病毒逸入血流，播散，即“小病毒血症”，遍及网状内皮系统和其他靶组织。大多数感染者由于机体的兔疫防御机制可控制病毒感染而使病毒在体内播散停止，成为无症状感染。少数感染者由于病毒在网状内皮组织继续复制，约在第5天出现持续性重度病毒血症，大量病毒播散至脑膜、脑、脊髓、心脏、皮肤、釉膜等靶组织并继续复制，引发炎症性病变，成为“大病毒血症”患者。其中多数患者亦可在自身兔疫防御机制的作用下迅速中止 “大病毒血症”，使病毒在靶器官的复制停止，临床表现为轻症 HFMD 。仅有极少数患者病毒在靶器官广泛复制，成为重症感染患者［5］。个别重症患者病情进展快可致死亡。值得重视的是， 50%成人感染病毒后并无症状，但可传染家人尤其是学龄前儿童而致发病［6］。EV71与神经性并发症密切相关，在最近东甫亚和东亚地区的由EV71引起的大型HFMD 流行中尤为明显［7-8 〗。 1　EV71导致中枢神经系统、心肌、肺损害的机制1.1　中枢神经系统损害　感染EV71的住院儿童中约有10%~30%伴有中枢神经系统并发症［9］。EV71是一种高度嗜神经病毒，EV71的衣壳蛋白VP1与人类脑组织内表达的3种蛋白有亲和力，即鸟氨酸脱竣酶、基因捕捉锚蛋白重复序列和KIAA0697。在EV71感染时VP1大量合成，作用于上述蛋白而引起神经系统后遗症，如AFP 和脑炎［10］。脑干是最易被EV71感染的部位［11］。实验研究发现，给动物灌喂接种EV71后早期可引起万方数据

病毒核酸检测流程

病毒核酸检测流程展开全文病毒核酸实验室检测步骤具体操作如下： 1. 病毒采样：取病人唾液或者鼻咽拭子于病毒采样管保存 2. 核酸提取：提取病人唾液或者鼻咽拭子样本里的遗传物质，如果病人携带病毒，则样本里就会有该病毒的遗传物质RNA,使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期

保存的DNA应置于-70℃或液氮保存。 3.逆转录合成cDNA:进行提取液中RNA的逆转录，把RNA 逆转录成cDNA 逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA 酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。建议使用商品化RT-PCR 一步法试剂进行第一轮扩增反应。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。 3. PCR扩增反应（使用二次扩增的套式PCR扩增方法）:用病毒cDNA的特异性引物进行PCR扩增 PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板（DNA 或cDNA）。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。 5. 结果分析判定：

若有扩增出病毒的DNA条带，则判定病人体内有该病毒若没有扩增出DNA条带，则判定病所取样本无该病毒实验注意事项： ①每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。 ②核酸检测阳性：发现核酸阳性反应，应该重复采集样品进行复测，复测结果呈核酸阳性反应则判定为核酸阳性，复测结果为核酸阴性反应则判为不确定结果，需进一步随访检测。 ③核酸检测阴性：只可报告本次实验结果阴性。

手足口病病毒核酸检测结果分析

手足口病病毒核酸检测结果分析 [摘要] 目的通过手足口病病原体核酸检测，掌握眉山市2011年手足口病流行状况，为手足病预防和控制提供实验依据。方法收集2011-03/12间351例手足口临床诊断病例患者咽拭子标本，采用Real-time RT-PCR检测手足口病病原体核酸。结果在351例患者咽拭子标本中，178例检测结果为阳性，其中135例为肠道病毒71型（EV71）阳性（75.84％）；36例为柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）阳性（20.22%)，7例为其它肠道病毒阳性（3.93%），3～12月份均有病例报告，5、6月为发病高峰，发病年龄以4岁以下儿童（94.94%）为主，男女性别比为（1.54:1）。结论2011年手足口病病原以EV71型为主，5、6月为发病高峰，以4岁以下儿童发病为主。手足口病(hand-foot-mouth disease, HFMD)是由多种人肠道病毒引起的常见传染病，以婴幼儿发病为主。大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，易发生死亡。引起手足口病的肠道病毒包括肠道病毒7l型(EV71)和柯萨奇病毒A组(CoxA)、埃可病毒(Echo)的某些血清型，EV71感染引起重症病例的比例较大。肠道病毒传染性强，易引起暴发或流行[1]。近年来随着手足口病报告数的不断上升，手足口病防控形势十分严峻，目前手足口病实验室主要采用实时荧光PCR检测病毒核酸，此法快速、灵敏，特异强，弥补了普通PCR易污染和病毒培养分离耗时长的缺点。本文以实时荧光PCR方法对收集到的2011年351份临床诊断为手足口病的标本进行肠道病毒核酸进行检测，以期了解眉山市手足口病的病原学特征，为手足病预防和控制提供实验依据。作者单位：眉山市疾病预防控制中心（四川眉山620010）作者简介：杨俊英（1966-），女，大专，主管检验技师，微生物检验 1. 对象与方法 1.1 对象按照《四川省手足口病防控方案》要求，采集全市3-12月份临床诊断为手足口病病例（发病3日内）的咽拭子标本，共351份。 1.2 检测方法按照卫生部手足口病预防控制指南(2009版)要求，对手足口病人的咽拭子标本采用RT-PCR检测手足口病病原核酸。 1.3 检测试剂核酸提取试剂选用MagNA Pure LC Total NA Kit-HP（194，罗氏全自动核酸提取）；Real-time PCR(RT-PCR)法选用上海之江公司生产的肠道病毒通用（EV）、肠道病毒71型（EV71）及柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）RNA检测试剂盒。

呼吸道病毒多重核酸检测试剂-医疗器械技术审评中心

附件1 呼吸道病毒多重核酸检测试剂技术审查指导原则（征求意见稿）本指导原则旨在指导注册申请人对呼吸道病毒多重核酸检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。本指导原则是对呼吸道病毒核酸测定试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。如申请人认为有必要增加本指导原则未包含的研究内容，可自行补充。本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。一、范围呼吸道感染（Respiratory tract infection，RTI）是人类最常见的一类疾病，可以在任何性别、年龄和地域中发生，是

全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。呼吸道感染引起的临床症状和体征都较为相似，其临床表现主要为鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起气管炎、支气管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程也不尽相同。目前已证明，大部分呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。本指导原则适用于呼吸道病毒多重核酸检测试剂，适用样本类型应为鼻咽拭子、咽拭子、肺泡灌洗液、痰液或其他呼吸道分泌物样本等。检测对象应可引发相似的临床表现，可包括但不限于：甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、人偏肺病毒、腺病毒、呼吸道感染肠道病毒（肠道病毒/鼻病毒）、冠状病毒、博卡病毒。本指导原则适用于利用荧光探针聚合酶链式反应（Real-time PCR）或其他分子生物学方法，以特定的呼吸道病毒基因序列为检测目标，对来源于人体样本中的呼吸道病毒核酸进行体外定性检测，临床用于辅助诊断呼吸道病毒感染相关性疾病。涉及其他临床用途的呼吸道病原体核酸检测试剂可参考本指导原则。二、基本要求（一）综述资料综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性的说明、有关产品主要研究结果的总结和评价以及其他内容，其中其他包括同类产品在国内外批准上市的情况。与预期用途相关的临床适应症应重点描述呼吸道病毒型别与临床适应症的相关性及相关病毒在我国的流行特征；产品

病毒的分类

病毒的分类 1 按感染的对象分动物病毒、植物病毒、细菌病毒、昆虫病毒及真菌病毒，另外尚有类病毒(Viroids)拟病毒(Virusoid)和朊病毒(Prion)。 2 按遗传物质分类分DNA病毒和RNA病毒两大类，其遗传物质单股(single strand)或双股(double strand)、核酸分子量、RNA为正义(sense)或反义(antise… 1. 按感染的对象分动物病毒、植物病毒、细菌病毒、昆虫病毒及真菌病毒，另外尚有类病毒(Viroids)拟病毒(Virusoid)和朊病毒(Prion)。 2. 按遗传物质分类分 DNA病毒和RNA病毒两大类，其遗传物质单股(single strand)或双股(double strand)、核酸分子量、RNA为正义(sense)或反义(antisence) RNA都是主要的分类依据。 3.按基因结构划分 DNA病毒 l 腺病毒科 Adenoviridae l 疱疹病毒科 Herpesviridae EBV 带状疱疹病毒 l 虹彩病毒科 Iridoviridae l 乳头多瘤空泡病毒Papovaviruses l 小DNA病毒科 Parvoviridae l 痘病毒科 Poxviridae 天花病毒牛痘病毒 l 嗜肝DNA病毒科Viral Hepatitis乙型肝炎病毒 RNA病毒 l 冠状病毒科 Coronaviridae 严重急性呼吸道综合症病毒 l 玻那病毒科 Bornaviridae l 纤维病毒科 Filoviridae *埃博拉病毒 l 正黏液病毒科 Orthomyxoviridae *流感病毒 influenza virus *禽流感病毒Avian influenza l 副黏液病毒科 Paramyxoviridae 腮腺炎病毒麻疹病毒人类呼吸道融合病毒 l 小核醣核酸病毒 Picornaviruses 鼻病毒肠道病毒 l 反转录病毒科 Retroviridae *艾滋病病毒 HIV l 呼肠孤病毒科Reoviridae l 炮弹病毒科 Rhabdoviridae 狂犬病毒Rabies Virus 噬菌体噬菌体bacteriophage，简称phage，寄生于细菌中病毒的总称。