植物油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2测定方法1

植物油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2测定方法

1.适用范围

本方法适用于出口粮食、植物油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的定量测定。

2.原理

将提取、浓缩后的样液与标准黄曲霉毒素同时经连续薄层层析分离后，对标准点和样液点进行荧光强度的扫描测定。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

三氯甲烷；甲醇；正已烷或石油醚：沸程30～60℃；苯；乙腈；无水乙醚或乙醚：经无水硫酸钠脱水；丙酮；异丙醇；以上试剂均为分析纯，除乙腈外均需重蒸；苯-乙腈混合液：98+2；甲醇-水：55+45。

展开剂：丙酮-三氯甲烷混合液：1+9；丙酮-三氯甲烷混合液：7+93；异丙酮-丙酮-三氯甲烷：5+10+85；苯-乙醇-水：46+35+19；硅胶G：薄层色谱用；三氟乙酸；无水硫酸钠；黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准溶液：10 μg／ml黄曲霉毒素单一标准溶液：精密称取黄曲霉毒素B1、G1 1～1.2mg，黄曲霉毒素B2、G2 0.5～0.6mg，先加入2ml乙腈溶解后，再用苯定容至100ml，避光保存于低温冰箱内；标准溶液浓度及纯度的测定参照GB 5009.22－85《食品中黄曲霉毒素B1的测定方法》中2.14条；黄曲霉毒素混合标准使用液：用标定过的黄曲霉毒素标准溶液，配制成B1、G1浓度为0.2μg／ml，B2、G2浓度为0.1μg／ml的混合标准溶液或单一标准溶液。

去毒液：次氯酸钠溶液：取100g漂白粉，加入500ml水，搅拌均匀，另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3·10H2O）溶于500ml温水中，再将两液混合、搅拌，澄清后过滤。此滤液含次氯酸钠浓度为2.5％。若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍，所得溶液的浓度约为5％。污染的玻璃仪器用1％次氯酸钠浸泡半天或用5％次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果；10％重铬酸钾-硫酸洗液：浸泡被污染玻璃仪器片刻即可去毒。

3.2.仪器

薄层扫描仪：备有荧光检测器；薄层凝涂布器；连续薄层层析展开仪；展开槽；展开缸；紫外光灯：100～125W，带有波长365nm滤光片；玻璃板5 cm×20cm、10cm×20cm、20cm×20cm；全玻璃浓缩器；电动振荡器；小型粉碎机；微量注射器。

4.试样抽取

按各类出口粮食及油类取样规定，取代表性样品，经粉碎与连续多次用四分法缩分，最后缩分至0.5～1 kg。粮食需全部粉碎过20目筛，花生样品需脱壳后粉碎过10目筛，混匀。5.实验步骤

5.1.提取

花生、玉米等粮食类：称取20g粉碎过筛样品（面粉不需粉碎）。置于250ml具塞锥形中，加30ml正已烷或石油醚和100ml甲醇-水溶液，润湿瓶塞，盖紧颜漏，振摇30min，静置分层，以叠成折叠式快速定性滤纸过滤于带刻度的125ml分液漏斗中，待下层甲醇-水溶液分清后，放出20ml甲醇-水溶液于第二个125ml分液漏斗内，并加入20ml三氯甲烷，振摇2min。静置分层，如出现乳化现象可滴加少许甲醇促使分层，将三氯甲烷层通过装有约10g无水硫酸钠玻璃漏斗后，流入全玻璃浓缩瓶中，然后用数毫升三氯甲烷洗涤无水硫酸钠层，一并收集于浓缩瓶内，在60～70℃水浴中减压浓缩至干后，用苯-乙腈混合液定容至1.0ml，即为分析样液。

花生油、香油、菜油等：称取4 g油样于小烧杯中，用20ml正已烷或石油醚将油样全部转至125ml刻度分液漏斗中，再用20ml甲醇-水分次洗烧杯，洗液一并转至上述分液漏斗内，

振摇2min，静置分层后，将下层甲醇-水放入第二个125ml刻度分液漏斗中，在原分液漏斗中再加5ml甲醇-水溶液重复提取一次，提取液一并移入第二个分液漏斗中，并在第二分液漏斗中加入20ml三氯甲烷，以下按“花生、玉米等粮食类”自“振摇2min，静置分层”起依法操作。

5.2.薄层层析

5.2.1.薄层板的制备：称取约14g硅胶G加36～40ml水，在研钵中研成糊状后立即倒入涂布器内，可涂成厚度约0.25mm的5 cm×20cm玻璃板8块，或10cm×20cm玻璃板4块，或20cm×20cm玻璃板2块，室温干燥约15min后，置105～110℃烘箱内活化1 h，取出，放于干燥器内备用，放置时间超过一周时，需重新活化后再用。

5.2.2.初步层析与确证

5.2.2.1.衍生物法：黄曲霉毒素B1和G1能与二氟乙酸反应产生衍生物（其比移值B1＞G1）。B2、G2不起反应。于一块5 cm×20cm的薄层板上，以距薄层板下端3 cm为基线，自左端约1 cm起沿基线1 cm等距点四个点，第一点为2μl标准混合使用液；第二点为20μl样液；于以上两点各加三氟乙酸1小滴，反应5min后，用低于40℃热风吹2min，冷却后，再依次点第三点为2μl混合标准使用液；第四点为20μl样液；吹干。将薄层板放入装有10ml乙醚的展开槽内，展至13cm处，取出吹干后，再用10ml丙酮-三氯甲烷（1+9）展开剂再展一遍，取出吹干后，在紫外光下观察样液是否产生与黄曲霉毒素B1、G1标准点相同的衍生物，未加三氟乙酸的三、四两点，可依次作为样液与标准的衍生物空白对照。

5.2.2.2.黄曲霉毒素G1和G2的确证：可用苯-乙醇-水（46+35+19）展开，若标准点与样液点出现重叠，即可确定。

5.2.2.3.在展开的薄层板上喷以硫酸（1+3），吹干后，则黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2都变为黄色荧光。

5.2.3.定量测定：经确证的阳性样品进行薄层分离和定量测定。

5.2.3.1.连续层析法

5.2.3.1.1.点板：将10cm×20cm的薄层硅胶板用橡皮刮塞刮去左右两边硅胶层各1 cm，以距底边1.5cm处为基线。自左1 cm开始，以1 cm间距依次滴加黄曲霉毒素混合标准使用液1，3，5，7，10μl，依次相当于B1、G1 0.2，0.6，1.0，1.4，2.0ng；B2、G2 0.1，0.3，0.5，0.7，1.0 ng和样液点。滴加样液体积依样品含黄曲霉毒素含量而定。

5.2.3.1.2.展开：室温20℃，相对湿度约70％条件下，按以下条件进行连续层析分离。

乙醚饱和：7min；

预展：10min；

丙酮-三氯甲烷（7+93）饱和：10min；

展开：15min后，取出吹干。

5.2.3.1.3.观察：于紫外光下，在标准点和与标准比移值相同的样液点下方，用针尖轻刺标记，以确定各点的扫描起点，然后进行扫描测定。

5.2.3.2.双向展开法

5.2.3.2.1.点板：于20cm×20cm薄板上，按下图点板。

原文地址:https://www.360docs.net/doc/2413954707.html,/biotech/exp/bioexp/2010/q82064643.html

为什么硫代硫酸钠标准溶液配制好后不应马上滴定?

最佳答案

Na2S2O3.5H2O 一般都含有少量杂质, 如S、Na2SO3、Na2SO4、Na2CO3及NaCl等

所以不能直接作为标准液，需要滴定。

并且要在溶液有可能发生的反应发生完，稳定，不再发生变化后（比如酸度影响使得大苏打分解出硫等等）滴定。

因此不能马上滴定，否则会有误差。