微生物实验4 芽孢观察
微生物实验报告
细菌的芽孢染色观察实验
刘欣怡201100140057
生命科学基地班
组别：周一下午三组
同组者：曹平平，周楠，
刘艺，刘希伟
实验时间：2012年10月22号
一、实验目的
1、学习并掌握芽孢染色法
2、了解芽孢杆菌的形态特征
3、巩固显微镜操作技术及无菌操作技术
二、实验器材
1、菌种
枯草芽胞杆菌，梭状芽胞杆菌。
2、溶液和试剂
5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液。
3、仪器和其他用品
酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），显微镜、吸水纸、擦镜纸，接种环，载玻片夹子，无菌水等。
三、实验原理
1、芽孢又叫内生孢子(endosopre)，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的
休眠体，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。
2、芽孢菌体的特点：
a.芽孢的含水率低，38%～40%。
b.芽孢壁厚而致密，分三层：外层是芽孢外壳，为蛋白质性质。中层为皮层，由肽聚糖构成，含大量2，6-吡啶二羧酸。内层为孢子壁，由肽聚糖构成，包围芽孢细胞质和核质。芽孢萌发后孢子壁变为营养细胞的细胞壁。
c.芽孢中的2，6-吡啶二羧酸（简称DPA）含量高，为芽孢干重的5%～15%。吡啶二羧酸以钙盐的形式存在，钙含量高。在营养细胞和不产芽孢的细菌体内未发现2，6-吡啶二羧酸。芽孢形成过程中，2，6-吡啶二羧酸随即合成，芽孢就具有耐热性，芽孢萌发形成营养细胞时，2，6-吡啶二羧酸就消失，耐热性就丧失。
d.含有耐热性酶。
芽孢由于有以上四个特点，使得芽孢对不良环境如高温、低温、干燥、光线和化学药物有很强的抵抗力。细菌的营养细胞在70～80℃时10分钟就死亡，而芽孢在120～140℃还能生存几小时，营养细胞在5%苯酚溶液中很快就死亡，芽孢却能存活15天，芽孢的大多数酶处于不活动状态，代谢活力极低，所以，芽孢是抵抗外界不良环境的休眠体。
3、芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用弱碱性染料，如孔雀绿或碱性品红在加热条件下进行染色时，此染料不仅可进入菌体，而且也可进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。
4、芽孢有的长在中央或近中央，圆形或椭圆形，芽孢的大小，位置，在分类鉴定上有一定的意义，它仅仅是芽孢细菌生活史的一个环节。芽孢可作为培养基灭菌彻底与否的检验依据、在杆菌中能形成芽孢的种类较多，在球菌和螺旋菌中只
有少数菌种可形成芽孢。
5、产生芽孢的几个属：
芽孢杆菌属(Bacillus) 、梭状芽孢杆菌属(Clostridium) 、芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)，
四、实验内容
根据实验提供的两种细菌，即枯草芽孢杆菌和梭状芽孢杆菌，然选一种或者两者都选，进行制片，进而染色观察细菌芽孢的形态特征。若选择两种菌，可以再制作在同一个载玻片上。
五、实验步骤
1、涂片
取一块洗净并自然晾干的载玻片，分别滴两小滴蒸馏水于载玻片靠近中央处；用接种环无菌操作，先将接种环在酒精灯上烧2遍，从酒精灯旁用稍冷却的接种环从枯草芽孢杆菌牛肉膏蛋白胨琼脂斜面或梭状芽孢杆菌牛肉膏蛋白胨琼脂斜面挑取适量菌苔（接触一或两下），在载玻片上的两滴蒸馏水中分别涂抹（接触三到四下），使菌悬液在载玻片上形成均匀薄膜或观察到小水滴有些浑浊。记录两者相对位置，不要弄混。并且还要记清载玻片真反面，可以做标记。
2、干燥固定
可以有酒精灯进行加热干燥，用夹子夹住载玻片在火焰上过1到2遍就放到手背上试一下玻片温度，一不烫手为原则，一直重复操作直至液滴完全干燥固定。
3、染色
向干燥固定好的片子上加数滴孔雀绿染液，使菌完全被覆盖，用木夹夹住载玻片一端，在微火上加热（可以在酒精灯上过几下，稍停一下再在酒精灯上过几下根据染液冒蒸汽的实际情况自行判断做法）至染料稍冒蒸汽并开始计时，维持5min。加热过程中及时补充染液。切勿让涂片干涸。
4、冷却后水洗
染色结束后，待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗载玻片背面，直至流出的水无色为止。
5、复染
水洗好后，用番红水覆盖菌，染色2min 。
6、水洗干燥
复染结束后，用缓流水洗载玻片背面，直至流出的水无色为止。然后自然风干。
7、镜检
将制好的玻片放在显微镜下，先低倍镜，再高倍镜，最后滴加香柏油用油镜观察芽孢形态，并记录。
8、实验结束
实验结束后，整理实验台，仪器归位，电器拔下电源，擦净染液。
六、实验结果及记录照片
1、芽孢染色观察结果：
显微镜视野中，芽孢呈现绿色，菌体呈现淡淡的红色或者无色透明（番红水复染不成功），亦或者视野中仅有几个番红水复染上了红色的菌。
枯草芽孢杆菌芽孢呈椭圆到柱状，位于菌体中央或末端，菌体基本无大变化；梭状芽孢杆菌芽胞呈圆形，比菌体粗，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。
综合来看，视野中，能看到有的菌中间有较亮且染为绿色的部分，即为芽孢。有的芽孢在菌的中间出现，即中生芽孢；有的芽孢在菌的末端出现，即端生芽孢；有的芽孢向外膨胀；有的芽孢不向外膨胀；有的芽孢游离在菌体之外，估计是操作中动作较大使得芽孢脱落下来。
2、芽孢染色观察记录图：
该图为梭状芽孢杆菌的观察视野。从图中可以看到第一次孔雀绿染色较好，但是水洗脱色以及复染色有点失败，大部分菌体没能染上红色，菌体大部分是绿色或无色。该图中能看到几个染色较好的细菌，菌体为红色，内含绿色的芽孢，为中生芽孢。
该图为枯草芽孢杆菌的观察视野。图中可以看到染色较好的绿色芽孢，但是菌体
近乎都为无色的，说明水洗脱色较好但是复染色不成功。对于菌体没能复染上红色，有两大可能原因：一是番红水浓度低，二是染色时间不够。
3、全班内搜寻好的实验玻片，进一步观察芽孢的形态特征
本实验图片从其他组获得，观察视野中可以看到一些复染色较好、呈紫红色的菌体，当然还有一些菌体是绿色或者无色；芽孢染色较好，被染成了绿色，但是游离的芽孢很多，估计有较为严重的不当操作致使很多芽孢从菌体中脱落下来。
4、资料查找图：与自己的实验结果进行对比，更进一步了解芽孢形态特征。
中生芽孢端生芽孢
游离芽孢
七、实验结果分析
1、本实验的观察结果：
能较为清楚地观察到芽孢的存在，而且能观察到不同的芽孢着生方式。
观察到不少的芽孢游离在菌体之外，估计和自己的操作有较大关系，分析此现象发生的原因可能有如下三种：a.由于芽孢较厚，耐压力细胞体强，可能由于在图片时用力过大，将细胞体的细胞壁压碎从而使的芽孢脱落出来； b.可能是由于菌体培养时间过久，芽孢正处于复苏阶段，所以大多数芽孢都从菌体中游离出来；c.可能在干燥固定和染色两个步骤中，加热的温度太高使得芽孢从菌体中裂出。
芽孢染色较好，均为绿色或浅绿色，但是外面的菌体基本上没染上番红水的红色，但是外面的菌体水洗脱色不错，在观察视野中成无色透明状。
没能复染上番红水的红色的原因可能有：番红水是番红染液的稀释液，浓度小不易使菌体染上色；番红水复染的时间较短，不足老师要求的2min；水洗后直接进行复染，或略了载玻片上的残余水，没有先用番红水冲载玻片而是直接覆盖，使得染液浓度又降低。
2、绿色芽孢及红色菌体的观察现象分析：
由于芽孢壁厚、透性低上不易着色，当用番红、结晶紫等进行单染色时，菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颜色，游离的芽孢呈淡红或淡蓝紫色的圈。但是用着色力强的染色剂孔雀绿，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经染色便难以被水洗脱。当用对比度大的复染色剂番红染色后，芽孢仍保留初染剂孔雀绿的绿色，而菌体和芽孢囊被染成复染色剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。
3、要保证本实验获得成功，必须要注意以下几点
a.选用适当菌龄的菌种，幼龄的尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已破裂。
b.加热染色时必须维持在染液微冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，如热不够则难以着色。
c.脱色必须等玻片冷却后进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂。
八、实验注意事项
1、加热时使用载玻片夹子或试管夹，以免烫伤。
2、使用染料时一定要注意避免沾到衣物上。
3、载玻片一定要洗净，自然晾干。
4、向载玻片上滴加两滴蒸馏水时一定要注意水滴要小。
5、载玻片未干燥固定前，注意水平放置玻片，以防载玻片上的两滴水滴混合以至于制片失败。
6、供芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢仍保留在菌体上为宜。
7、制片的干燥固定操作中，注意加热程度及载玻片温度，以免加热温度太高使得菌和芽孢裂开。
8、孔雀绿染色计时是从加热覆盖了染液的载玻片、看到有蒸汽冒出开始的。
9、孔雀绿染液染色过程中，需加热，但是不要一直放在酒精灯火焰上加热，以防载玻片加热断裂，可以在火焰上多过几下后移开稍稍冷却。
10、孔雀绿染液染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干涸。
11、补充染液，需要先将载玻片从酒精灯火焰上移开，等待稍稍冷却后再向载玻片上滴加孔雀绿染液，以防冷的染液遇到热的载玻片使得载玻片断裂。
12、本次实验中，水洗均冲洗载玻片无菌面。
13、实验中，图片时要动作轻缓，以防因动作太大而使得芽孢从菌体上脱落下来。
14、孔雀绿染液染色过程中，要注意不能持久加热，会使得载玻片温度很高，温度很高容易使得芽孢和菌体裂开。
15、孔雀绿染液加热染色后，需要将载玻片冷却一小段时间后再水洗，以防热的载玻片突然遇到冷的水流发生断裂。
16、注意两次染色的时间。
17、番红水复染并水洗干净后，一定要自然晾干载玻片。
18、镜检时，先低倍镜，再高倍镜，最后滴加香柏油换为油镜。
19、实验后洗干净手再离开。
九、实验思考题
1、用简单染色法能否观察到细菌的芽孢?说明原因。
答：不能。细菌的芽孢具有厚而致密的壁。透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。
2、为什么芽孢染色需要进行加热？
答：芽孢壁厚，透性低，不易着色。加热条件下染色，染料可以进入菌体内，也可以进入芽孢。
3、用孔雀绿初染芽孢后，为什么必须等载玻片冷却后再用水冲洗？
答：若玻片不冷却就直接冲洗，会因为突然遇冷而炸裂。
4、细菌芽孢用孔雀绿染色并加热时，为什么不能蒸干染液？
答：加热染色都不能把染料蒸干,染料被蒸干后积聚在玻片以及菌体上,干扰光线穿透影响镜下观察菌体结构情况。
5、若在视野中多看到游离的芽孢，而很少看到芽孢囊和营养细胞，试分析原因。
答：a.由于芽孢较厚，耐压力细胞体强，可能由于在图片时用力过大，将细胞体的细胞壁压碎从而使的芽孢脱落出来。
b.可能是由于菌体培养时间过久，芽孢正处于复苏阶段，所以大多数芽孢都从菌体中游离出来。
c.可能在干燥固定和染色两个步骤中，加热的温度太高使得芽孢从菌体中裂出。
6、本实验为什么应选用适当菌龄的菌种？
答：幼龄菌种尚未形成芽胞，而老龄菌芽胞囊已破裂。
十、实验小结
总体来看本次试验还是比较顺利的。
本次试验的不足之处是芽孢染色效果很好，但是菌体染色效果不是很好，偶尔有几个菌体被染上了红色或者淡红色，大部分都是透明的。
自我分析菌体没能复染上番红水的红色的原因可能有：
a.番红水是番红染液的稀释液，浓度小不易使菌体染上色；
b.番红水复染的时间较短，不足老师要求的2min；
c.水洗后直接进行复染，或略了载玻片上的残余水，没有先用番红水冲载玻
片而是直接覆盖，使得染液浓度又降低。
除去这点不足，在本次芽孢染色实验，我学会了很多。首先，我学会了是芽孢染色方法；其次，我对芽孢有了一个较为系统的认识，我认识到了多种形态的芽孢和并了解了芽孢对于细菌的重要性，我明白了芽孢不仅仅是生物的休眠体，芽孢的各种特性还是进行生物物种鉴定和分析的重要依据。通过本次试验，我还对细菌的芽孢的描述方法有了一定的了解。我相信本次实验会对以后的学习和研究等方面大有帮助。
在以后的微生物实验中，我要着重熟练操作，并且对比相似的操作，比如各种染色操作，提高自己的实验技能，为以后打下坚固的实验基础。
十一、参考文献
沈萍陈向东.微生物实验[M].4版.高等教育出版社
微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
微生物实验 微生物实验 细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌
细菌形态观察 一、实验目的 1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护 2.掌握细菌的三种形态 3.掌握临床常见细菌的形态及染色 4.掌握细菌的特殊结构 5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点 二、实验原理 1. 普通光学显微镜（油镜）的使用 1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头 2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时 停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰 3. 根据需要调节显微镜亮度 2. 普通光学显微镜的维护 1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前 2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最 后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头 3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内 4.做好使用记录 3．微生物知识 1．细菌按形态分类： 球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等） 杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等） 螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等） 2．细菌的基本结构 细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体 3．细菌的特殊结构 荚膜：如肺炎双球菌 鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌 菌毛 芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌 4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。 原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体 真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5．真菌 单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌
微生物实验操作
油镜的使用和维护 目的：掌握油镜的使用与维护，熟悉油镜的使用原理。材料：显微镜，拭镜纸，液体石蜡油，二甲苯 原理：油镜的透镜极小，工作焦距最短，光线通过玻璃和空气，由于介质密度不同发生折射，射入镜筒的光线极少，视野暗，物象不清晰。如在玻片与镜头（透镜）之间加上折光率和玻片（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515）就可减少光线的折射，加强视野的亮度，获得清晰的物象。 步骤：显微镜油镜的使用和维护 1.将显微镜平稳地安放在实验台适宜处。识别油镜头：标有100×、OIL、HI等字样。 2. 打开电源，用低倍镜对光，打开光圈，调节聚光镜的位置，使视野光线充足。 3. 标本上加镜油一滴，转动粗螺旋，使油镜头缓缓下降，用眼从侧面观察，直到油镜头浸入油中接近玻片为止。 4. 从目镜观察，同时徐徐转动粗螺旋提升，见模糊物象后再用细螺旋调节，直到见到清晰物象为止。 5. 观察完毕，粗螺旋提高镜头，取下标本片，油镜头使用后立即用擦镜纸擦净镜头上的油。如油已干，可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭，并立即用另一擦镜纸
擦去二甲苯，因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜头脱落。 6.将镜头转呈“八”字，调低聚光器，对号送入柜子内存放。 革兰染色 目的：掌握革兰染色的原理及操作。 材料：干净玻片，接种环，葡萄球菌和大肠杆菌18-24h 培养后的混合菌液，酒精灯，一套革兰染液 原理：主要为细胞壁结构的差异。G+三维肽聚糖结构的交联度大，通透性低，脂质少或无，酒精作用使孔径缩小；而G-肽聚糖为二维疏松结构，薄，外膜含大量脂质，易被酒精溶解，使细胞壁通透性增高，结晶紫-碘复合物被酒精溶解而脱色。 步骤： 1. 细菌标本的制作 （1）涂片：无菌操作。取一接种环混合细菌悬液，涂布成直径约1cm的涂片，涂片应薄而均匀。 （2）干燥：涂片最好在室温中自然干燥。必要时可将标本面向上，放在酒精灯上方微火处干燥。 （3）固定：标本面向上，在酒精灯火焰外焰按钟摆的速度来回通过3次，放置待冷后染色。固定的目的是
微生物大小与数量的测定实验报告
山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物 大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测 微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每 格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于 矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有 等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以 测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大 倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺 测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放 大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物 细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直 径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接 计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前 国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。 后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间 的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除 了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法， 此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操
实验一光学显微镜的使用与微生物观察
实验一光学显微镜的使用与微生物观察 第一节普通光学显微镜的使用 一、实验目的 1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。 2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。 3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。 二、基本原理 （一）普通光学显微镜的构造 普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。 1、机械系统 机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。 （2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。 （3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。
（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。 （5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后和左右移动。有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。 （6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物像更清晰。粗调螺旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。 图1-1 普通光学显微镜的构造 1. 镜座 2. 镜臂 3. 镜筒 4. 转换器 5. 载物台 6. 压片夹 7. 标本移动器 8. 粗调螺旋 9. 细调螺旋 10. 目镜 11. 物镜 12. 虹彩光阑（光圈）13. 聚光器14. 反光镜 2、光学系统 光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反光镜等。 （1）目镜：它的功能是把物镜放大的物像再次放大。目镜一般由两块透镜组成。上面一块称接目透镜，下面一块称场镜。在两块透镜之间或在场镜下方有一光阑。由于光阑的大小决定着视野的大小，故它又称为视野光阑。标本成像于光阑限定的
利用显微镜观察微生物.
第 7讲利用显微镜观察身边的微生物 【学习目标】 1. 说出显微镜的各部分结构名称及作用 2. 能说出低倍显微镜观察的主要步骤 2. 尝试利用高倍显微镜观察水体中的微生物 【学习内容】 一显微镜的基本结构: 【目镜】靠近人眼睛 , 用眼睛直接观察的镜头。一般有放大倍数 5倍、 10倍、 15倍等类型 , 其上面分别标有 5X 、 10X 、 15X 等字样 , 放大倍数越大的目镜越。 【物镜】固定于转换器上 , 靠近玻片的镜头。分低倍物镜、高倍物镜和油镜几种类型 , 普通物镜的放大倍数一般为 10倍、 40 倍、 45倍 ,其上面分别标有 10X 、 40X 、 45X 的字样 , 放大倍数越大的物镜越。 【准焦螺旋】准焦螺旋是固定在镜臂上用于调节焦距的旋钮 , 分调节幅度较大的粗准焦螺旋和调节幅度较小的细准焦螺旋两
种。 【转换器】位于显微镜镜筒下方可以自由 转动的圆盘 , 圆盘的上面有三个有螺纹的 圆孔 ,用于安装低倍物镜、高倍物镜和油 镜 (一般不装。根据实验需要可通过转动 转换器换用不同的物镜。 【遮光器】位于载物台下方的可转动的圆盘 , 有多个大小不同的圆孔 , 每一个圆孔称为一个光圈。可通过转动遮光器选择大小不同的光圈 , 以保证合适的进光量。有的遮光器上没有大小不同的圆孔 , 而有一个可调节光圈大小的结构。 【通光孔】载物台中央的圆孔 , 位置、大小都固定 , 无法改变。是光线进入视野的通道。 【反光镜】位于遮光器的下面 , 分凹面和平面两个反射镜面。反光镜的作用是将来自外部光源的光线进行反射,使光线经光圈、通光孔、 玻片、物镜、目镜,到达人的眼睛。凹面镜具有会聚光线的作用, 一般在较暗环境使用; 平面镜没有会聚光线的作用, 在明亮环境使用。 二高倍显微镜的基本操作:
微生物实验报告：微生物形态观察
微生物实验报告：微生物 形态观察 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020
实验一微生物形态观察 一、实验目的 1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用； 2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构； 3．练习手绘微生物图片。 二、实验原理 1．细菌基本形态 细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多 的。螺旋菌分为弧菌和螺菌。 除此之外，还有一些特殊形态的细菌。 2．细菌特殊结构 细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状 体，与细菌吸附或性结合有关。芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。
3．真菌的结构特征 菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。比如吸器、假根、子实体。 4．放线菌的结构特征 放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。不久，大部分气生菌丝成熟，分化成孢子丝，并通过横隔分裂方式，产生成串的分生孢子。 5．微生物菌落 菌落是在固体培养基上（内）以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态和构造等特征的子细胞集团。细菌的菌落有其自己的特征，一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易调取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等。不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映。 三、实验器材
微生物的形态和结构观察
实验一微生物的形态和结构观察 一、实验目的 1、掌握普通光学显微镜的正确使用方法； 2、掌握革兰氏染色法的原理及操作步骤； 3、在显微镜下观察细菌、酵母菌等的个体形态和结构。 《 二、基本原理 普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。 普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。 机械系统包括镜座、镜臂、镜台、物镜转换器、镜筒及调节器等。镜座是显微镜的基座，使显微镜能平稳地放置在桌子上；镜台又称载物台，是放置标本的地方，镜台上有压片夹用以固定被检标本，标本移动器可使标本前后和左右移动，有的标本移动器带有游标尺，
可指明标本所在位置；镜臂用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位；镜筒是连接目镜和物镜的金属筒，镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接；物镜转换器安装在镜筒的下端，其上装有3~5个不同放大倍数的物镜，可以通过转动物镜转换器随意选用合适的物镜；调节器安装在镜臂基部，是调节物镜与被检标本距离的装置，通过调节粗、细螺旋便可清晰地观察到标本。 光学系统主要包括目镜、物镜、聚光镜和反光镜等，较好的显微镜有内光源。目镜一般由两块透镜组成，不同的目镜上刻有5×、10×和15×等字符以表示该目镜的放大倍数；物镜是显微镜中很重要的光学部件，由多块透镜组成，根据物镜的放大倍数和使用方法的不同，分为低倍物镜（4×、10×和20×）、高倍物镜（40×和45×）和油镜（90×、95×和100×）等。被检物体经显微镜的目镜和物镜放大后的总放大倍数是物镜的放大倍数和目镜放大倍数的乘积。 形态观察主要包括群体形态和个体形态观察两方面。细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，显示出细菌的一般形态结构及特殊结构，在显微镜下用油镜进行观察。根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为简单染色、鉴别染色和特殊染色。本实验主要观察微生物的个体形态，掌握在细菌学中广泛使用的重要鉴别染色法——革兰氏染色法；通过此染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。 革兰氏染色有着重要的理论与实践意义，其染色原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈紫色。而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联疏松，而且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，因而细胞被脱色，再经蕃红复染后细胞呈红色。 《 三、仪器和药品 仪器：显微镜酒精灯接种柄接种环洗瓶载玻片滤纸镜油擦镜纸无菌水烧杯药品：结晶紫95%乙醇草酸铵碘碘化钾蕃红二甲苯降酚细菌（培养18~24小时的斜面菌种）细菌酵母菌等标本片。 草酸铵结晶紫染液：A液结晶紫2.0g，95%乙醇20mL；B液草酸铵0.8g，蒸馏水80mL。将A和B充分溶解后混合静止24小时过滤使用。 革氏染液：碘1g ，碘化钾2g ，蒸馏水300mL。
微生物形态观察实验报告
实验报告课程名称：生命科学趣味实验 实验名称：微生物形态观察 指导教师： 一、实验目的： 1．掌握普通光学显微镜的原理、结构、各部分的功能和使用方法。 2．了解酵母菌、霉菌的个体形态特征。 二、实验原理： 显微镜成像原理：目镜、物镜各自相当于一个凸透镜，被检标本置于聚光器与物镜之间，即物镜下方1～2倍焦距之间，物镜可使标本在物镜的上方形成一个倒立放大实像（倒像），该实像正好位于目镜的下焦点（焦平面）之内，目镜进一步将它放大成一个虚像，通过调焦可使虚像落在眼睛的明视距离处。 三、实验仪器、材料 酵母菌涂片、霉菌涂片。 奥林巴斯显微镜、擦镜纸等。 四、实验方法： 1 显微镜安置 取显微镜时一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳，置显微镜于平整实验台上，镜座距实验台边缘约3～4 cm，接通电源。 注意：显微镜移动时切忌用单手拎提。 2 选择物镜 将低倍物镜放入光路。 3 调整光强 打开显微镜主电源，调整照明度。通过亮度调整旋钮来改变电压大小从而调整显微镜亮度强弱。 4 调整聚光器位置和孔径光阑 在孔径光阑环上刻有物镜倍率（10倍，40倍），观察时将其与使用物镜相对应倍率放到正面。 5 放置标本 调粗调旋钮使载物台下降，向外拉开机械式载物台样本夹自前向后将标本切片放入平台，标本放稳后，再将标本夹轻轻放回原位；通过垂直旋转移动杆和水平旋转移动杆来上下和左右移动标本。
6 聚焦 ① 对焦要领为：从侧面看，转动粗调旋钮，使物镜尽可能接近标本；一边看目镜，一边调粗调旋钮，使载物台下降；看到标本后，再用细调旋钮正确对焦。 ② 调整瞳距：一边看目镜，一边移动双目镜筒，让左右视野一致。标识●的位置表示瞳距。 ③ 调整屈光度数：以右眼看右侧目镜，旋转粗、细调旋钮对好焦距；以左眼看左侧目镜，旋转屈光度调整环，对好焦距。 ④ 目镜眼罩使用方法：戴眼镜时候，将眼罩折叠，可防止眼镜和目镜接触所造成擦痕；不戴眼镜时候，将折叠眼罩向外拉长，可防止目镜和眼睛之间射入不必要光线，利于观察。 7 观察 在低倍镜找到合适目的菌将其移到视野中央。 8 高倍镜下观察 ① 转换高倍镜：眼睛从侧面注视物镜，用手转动转换器，换高倍镜。 ② 调焦：眼睛向目镜内观察，同时微微上下转动细调旋钮，直至视野内看到清晰物像为止。一般情况下，当物像在一种物镜中清晰聚焦，转动物镜转换器将其它物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本的准焦状态，称为物镜同焦，利用物镜同焦，可以保证在使用高倍镜时仅用细调旋钮即可对物像清晰聚焦，从而避免使用粗调旋钮时可能误操作损坏镜头或载玻片。 9 绘图 10 显微镜用毕后处理 （1）下降载物台，取下标本。 (2) 用擦镜纸清洁物镜及目镜； (3) 将各部分还原：载物台下降到最低位置；聚光器下降到最低位置；物镜镜头呈∧型，使物镜处于非光路位置；关好电源，将显微镜主电源开关拨到电压值为最小状态，然后断开电源。 五、实验结果： 10× 霉菌涂片 六、实验讨论： 可写实验体会。
实验 光学显微镜的使用及微生物个体形态的观察
实验一光学显微镜的使用及微生物个体形态的观察 一、实验目的和要求 1）了解显微镜的构造及成像原理。 2）掌握显微镜的使用方法和保养方法。 二、显微镜的构造 （一）机械裝置部分： 1）镜座：是显微镜的支架，由底座和镜臂组成。 2）载物台：又称镜台，用于安放载玻片，其上安有玻片夹和玻片移动器，调节移动器上的螺旋可使载玻片前后左右移动。镜台中央有一孔，称通光孔，可使反光镜上的光反射到物镜中来。 3）镜筒：其上端连接目镜，下端连接转换器。 4）转换器：其上安装三个物镜，镜检时旋转转换器即可换物镜头。注意转换物镜时。必须用手按住园盘旋转，勿用手指直接推动物镜，以免使物镜与转换器之间的螺纹松脱而损坏显微镜。 5）调焦裝置：包括粗细调焦旋钮，是调节镜筒上下移动的裝置。
（二）光学系统部分： 1）物镜：又称为镜头。有三个物镜头，二个干燥系物镜，一个油系物镜。物镜上标有主要参数，其含意是：例如：上排100/1.25是放大倍数为100，数值口径为1.25，下排160/0.17是指镜筒长为160毫米，盖玻片的厚度小于0.17毫米。它是显微镜的最重要的部分。 普通显微镜接物镜的工作原理 2）目镜：供眼睛观察物像用的，它将物镜放大的物像再放大，配有三个目镜，其上标有放大倍数。显微镜的总放大倍数是目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积. 3）聚光器：起聚集光线的作用，它可上下移动以调节最适光度。其下方安装有可变光圈,用以调节光的强度。 4）反光镜：安装在镜座上。它是一个有平凹两个面的双面镜。其作用是采集外来光线，并且送入聚光器，一般采集自然光时用平面镜，采集人工光源时用凹面镜。 三、实验材料和器材 双目显微镜、二甲苯、苯酚、擦镜纸、固定片等 四、实验操作步骤 （一）显微镜的使用方法： 1.准备工作：取出显微镜时，应一手握镜臂,一手托镜座，轻拿轻放，切忌碰撞和猛震。显微镜应放在离桌边60毫米左右的位置。再将登子的高低调节好，不得将显微镜倾斜。 2.采光：将低倍镜与镜筒调节成一条直线，用双眼向下看，同时调节反光镜寻找光源。直至全视野有均匀的明亮度，效果最佳为至。也可同时调节聚光镜和光圈。 3.放置标本：上升镜筒，将标本片放在载物台上，用玻片夹夹住，把标本移动至中央孔的位置。 4.调焦：眼睛看着低倍镜头，缓慢转动粗调旋钮，使低倍物镜头下端接近于玻片。再用
微生物实验报告思考题参考答案
实验一、微生物的简单染色思考题 1油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？ 答：油镜在使用时必须在载玻片与物镜之间滴加镜头油。油镜使用过程中要注意两点：（1）、使用后镜头的清洁：镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度，用完油镜必须进行“三擦”（观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯（或者乙醇乙醚溶液）擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原）。 （2）、.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 2、使用油镜时，为什么必须用镜头油？ 答：在使用普通显微镜时，当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 3、镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？ 答：低倍镜视野比较大，能看到的范围大，容易找到观察的目标，然后在用放大倍数高的高倍镜或油镜有目的的观察。 实验二、革兰氏染色 （1）为什么必须用培养24 h以内的菌体进行革兰氏染色？ 答：24h以内的菌体处于活跃生长期，菌体细胞壁具有典型特征，而处于老龄的革兰氏阳性细菌壁结构开始发生变化，染色时会被染成红色而造成假阴性 （2）要得到正确的革兰氏染色结果，必须注意哪些操作？哪一步是关键步骤？为什么？答：应注意如下几点： 其一，选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性； 其二，涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性； 其三，脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性 （3）当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作正确，结果可靠？ 答：当要确证未知菌的革兰氏反应时，可用已知菌进行混合涂片，使二者染色条件保持一致，如果已知菌的结果与预期相符，则证明操作操作正确，结果可靠。 实验三、微生物的显微镜直接计数法 1、在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？ 答：1）优点：直观、快速、操作简单。 2）缺点：
微生物实验报告
微生物实验报告 一环境中的微生物的检测和分离纯化 实验目的： 1 学习并掌握无菌操作技术原理和方法 2 学习用稀释涂布法分离微生物 3 认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的原理 实验材料： 1 土样溶液0.5ml，无菌生理盐水 2 取液器(1000μL一支，100μL一支)，培养箱，培养皿(12个)，无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，1000μL无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架 实验步骤： A培养基的制备(已提前制备好) B周围环境中的微生物的检测，在牛肉膏蛋白胨培养基平板上作如下实验 1 取三个平板，用100μL的取液器分别吸取100μL的河水、豆浆、豆奶，均匀加在三个培养基上，并用无菌玻璃涂棒涂布均匀(要多涂几次，时间约1-2分钟，使细菌均匀分布)。 2 再取三个平板，三个同学分别用手指(未洗过)在培养基上涂抹几秒钟，一个同学对应一个平板。 3 再取一个平板，其中一个同学将手用肥皂洗过后，再在培养基上涂抹。 4 再取一个平板，打开皿盖，一个同学对着培养基咳嗽，使口腔中的气流和飞沫落到培养基上。 5 再取一个平板，打开皿盖，在空气中放置10min左右，关上皿盖。 6 将上述9个平板放置在35℃的培养箱中培养24h。 C土壤中分离微生物 1 采土样，制备土壤稀释液(已准备好) 2 取三个平板，每个培养基上用取液器添加100μL的土壤稀释液，并用无菌玻璃涂棒涂布均匀(要多涂几次，时间约1-2分钟，使细菌均匀分布)。 3 将平板依旧放在35℃的培养箱中培养24h。 D菌落计数 培养24h后，取出培养平板，算出每个平板上的菌落数量。其中，土样中的微生物含量可用以下式子计算 土壤中的细菌含量(个/g土壤)=菌落平均数×10×稀释倍数 实验结果及数据： 实验结果如附图。
微生物实验报告材料(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
微生物实验 微生物实验细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌
细菌形态观察 一、实验目的 1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护 2.掌握细菌的三种形态 3.掌握临床常见细菌的形态及染色 4.掌握细菌的特殊结构 5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点 二、实验原理 1. 普通光学显微镜（油镜）的使用 1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头 2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时 停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰 3. 根据需要调节显微镜亮度 2. 普通光学显微镜的维护 1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前 2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最 后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头 3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内 4.做好使用记录 3．微生物知识 1．细菌按形态分类：
球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等） 杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等） 螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等） 2．细菌的基本结构 细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体 3．细菌的特殊结构 荚膜：如肺炎双球菌 鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌 菌毛 芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌 4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。 原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体 真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5．真菌 单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌 多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。如：霉菌 6．白假私酵母菌（白念） 生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落 厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定 致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染
《用显微镜观察身边的生命世界(三)》教案3
《用显微镜观察身边的生命世界(三)》教案 教学目标： 知识与技能： 1、用显微镜能看到肉眼不能看到的微小生物。 2、在水中生活着很多形态各异的微生物。 3、微生物通常都有特殊的构造和功能，以适应周围的环境。 4、微生物具有生物的特征，如：对环境有一定的需求、对外界的刺激有反应、能繁殖 等。 过程与方法： 1、在显微镜下观察水中活着的微生物，用图文方式记录它们的形态和行为特征。 2、发现微生物的生物特征。 3、对照资料识别微生物的种类。 情感、态度、价值观： 1、发展对微生物进行研究的兴趣。 2、培养微生物具有多样性和复杂性的意识。 教学重点：运用显微镜观察认识一些水中的微生物。 教学难点：记录并识别水中的微生物。 教学准备： 实验器材：显微镜、水中的微生物如草履虫、眼虫等。滴管、载玻片、盖玻片、脱脂棉。演示器材：介绍微生物的图片 教学过程： 一、观察水中的微生物 1、故事导入：罗伯特·胡克最早在显微镜下发现了生物的细胞结构，而列文·虎克用他自制的显微镜发现了曾经不为人知的奇妙的微生物世界，他在他的观察记录里这样描绘：“大量难以相信的各种不同的、极小的‘狄尔肯’……它们活动相当优美，它们来回地转动，也向前和向一旁转动……”“一个粗糙沙粒中有100万个这种小东西；而在一滴水中，‘狄尔肯’不仅能够生长良好，而且能活跃地繁殖——能够寄生大约270多万个‘狄尔肯”。“狄尔肯”（拉丁文中“细小活泼的物体”的意思）就是后来人们常说的微生物。1675年，雨水成了列文虎克的观察对象，他描述到：“我用4天的时间，观察了雨水中的小生物，我很感兴趣的是，这些小生物远比直接用肉眼所看到的东西要小到万分之一……这些小生物在运动的时候，头部会伸出两只小角，并不断地活动……如果把这些小生物放在蛆的旁边，它就好
微生物学实验报告.
微生物学实验报告 实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察 第一部分：显微镜的使用 一、目的要求 1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。 2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。 3．了解各种显微镜的主要特征。 二、实验原理 （一）光学显微镜的构造 微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光学部分。 1、机械部分 普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。 2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。 （二）放大倍数 标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短，这时光圈就要打开得愈大。 显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。 R=0.61λ/N.A 式中：R-----分辨距离； λ------作用光的波长； N.A------数值口径。 一些介质的折射率
介质折射率 空气 水玻璃香柏油 1 13 55 1.56 三、实验内容 （一）材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。 （二）方法： 细菌很小，须使用油镜方可观察到。油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法： 1、为使低倍镜取得最适之光源，可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度，将聚光器提高，光圈完全打开，然后调节电压旋钮至视野最合适。 2、滴一滴香柏油，固定于载物台上，用推动器调节到载物台正中。在双目侧视下，下旋粗调节器，使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。然后眼睛从目镜观察（如光线不足，可适当增大电源电压），徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后，再用细调节器调节以使物像清晰。如镜头已离开油面还未看到物像，则再重新操作。 3、更换标本时应先提高油镜头，再更换玻片，切勿随意移动显微镜的位置。 4、油镜观察完毕后，按“显微镜保护”中（6）项处理。 5、最后将油镜各部分还原，聚光器下降，反光镜垂直于镜座，镜头转成八字形， 以免与聚光器发生碰撞。 四、思考题 1、使用显微镜时为何调节下列构造？反光镜，光圈，聚光器，粗调节器，细调节器，镜头回转器。 答：聚光器的位置之升降可影响视野的明亮度，上升则视野明亮，下降则光线减弱。光圈的放大或缩小也可控制视野明亮程度。粗调节器和细调节器均是调节焦距的装置。镜头回转器为装置物镜和转换物镜之用。 2、使用不同放大倍数的物镜时，工作距离与光圈的关系。如何利用这一原理用好显微镜？ 答：物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短。标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 3、为何要选用与玻璃折射率相似的香柏油作为油镜的介质？油镜的原理是什么？ 答：香柏油只在使用油镜头时（100倍物镜）使用，因为当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n= 1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n=1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。可见光的波长平均为0.55μm。当使用数值孔径为0.65的高倍镜时，它能辨别两点之间的距离为0.42μm；而使用数值孔径为1.25的
微生物实验4 芽孢观察
微生物实验报告 细菌的芽孢染色观察实验 刘欣怡201100140057 生命科学基地班 组别：周一下午三组 同组者：曹平平，周楠， 刘艺，刘希伟 实验时间：2012年10月22号 一、实验目的 1、学习并掌握芽孢染色法 2、了解芽孢杆菌的形态特征 3、巩固显微镜操作技术及无菌操作技术 二、实验器材 1、菌种 枯草芽胞杆菌，梭状芽胞杆菌。 2、溶液和试剂 5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液。 3、仪器和其他用品 酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），显微镜、吸水纸、擦镜纸，接种环，载玻片夹子，无菌水等。 三、实验原理 1、芽孢又叫内生孢子(endosopre)，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的
休眠体，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。 2、芽孢菌体的特点： a.芽孢的含水率低，38%～40%。 b.芽孢壁厚而致密，分三层：外层是芽孢外壳，为蛋白质性质。中层为皮层，由肽聚糖构成，含大量2，6-吡啶二羧酸。内层为孢子壁，由肽聚糖构成，包围芽孢细胞质和核质。芽孢萌发后孢子壁变为营养细胞的细胞壁。 c.芽孢中的2，6-吡啶二羧酸（简称DPA）含量高，为芽孢干重的5%～15%。吡啶二羧酸以钙盐的形式存在，钙含量高。在营养细胞和不产芽孢的细菌体内未发现2，6-吡啶二羧酸。芽孢形成过程中，2，6-吡啶二羧酸随即合成，芽孢就具有耐热性，芽孢萌发形成营养细胞时，2，6-吡啶二羧酸就消失，耐热性就丧失。 d.含有耐热性酶。 芽孢由于有以上四个特点，使得芽孢对不良环境如高温、低温、干燥、光线和化学药物有很强的抵抗力。细菌的营养细胞在70～80℃时10分钟就死亡，而芽孢在120～140℃还能生存几小时，营养细胞在5%苯酚溶液中很快就死亡，芽孢却能存活15天，芽孢的大多数酶处于不活动状态，代谢活力极低，所以，芽孢是抵抗外界不良环境的休眠体。 3、芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用弱碱性染料，如孔雀绿或碱性品红在加热条件下进行染色时，此染料不仅可进入菌体，而且也可进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。 4、芽孢有的长在中央或近中央，圆形或椭圆形，芽孢的大小，位置，在分类鉴定上有一定的意义，它仅仅是芽孢细菌生活史的一个环节。芽孢可作为培养基灭菌彻底与否的检验依据、在杆菌中能形成芽孢的种类较多，在球菌和螺旋菌中只
微生物学实验报告
微生物学实验报告 （格式标准参考） (生命科学专业，生物技术专业) 教师：黎勇
目录索引 实验一油镜的使用和细菌的简单染色法 (3) 实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 (4) 实验三常用培养基的配制 (6) 实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别 (7) 实验五、微生物大小的测定与显微计数 (9) 实验六环境中微生物的检测和分离纯化 (10) 实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应 (12) 实验八（综合实验）化能异养微生物的分离与纯化 (13) 课程名称：微生物学实验班级：化生系生命科学本科
实验日期：指导教师：黎勇 实验一油镜的使用和细菌的简单染色法 〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术；观察细菌的基本形态；学习观察细菌的运动性的基本方法。 〔基本原理〕 1.N·A=n·sinα 2.D=λ/2N.A 3.目镜可提高放大倍数，但有效放大率取决于镜口率。已经分辨的物体不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。 4.用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时，可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。 〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸；细菌、放线菌等固定装片；培养18小时左右的B.subtilis. S.arueus菌斜面培养物；无菌水、生理盐水。 〔方法步骤〕： （一）油镜的使用 镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的物，并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置，虹彩光圈开到最大，镜头转开成八字形在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台（缩短镜头与装片距离，镜头浸入油中，至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）粗调器徐徐下降载物台（密切注视视野，当捕捉到物像时，立即用细调器校正）仔细观察并绘图取出装片，清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指辅助，迅速拭擦一、二次）用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯（2-3次）。 （二）细菌的简单染色法：涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察（三）细菌运动性的观察取洁净盖玻片，四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察 〔结果分析〕 1、画一圆圈表示视野，选取所观察的微生物绘图，注意特殊结构、形状和排列。（描绘时按视野实际大小5－10倍绘制） 菌名：大肠杆菌菌名：金黄色葡萄球菌 放大倍数：100×10（×5）放大倍数：100×10（×5） 特殊结构：无特殊结构：无 视野观察下微生物的形态 2、油镜使用时为什么必须干燥装片？
微生物学实验指导
实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察、大 小的测定和计数 一、实验目的 1、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养 2、观察细菌、真菌、原生动物的标本装片，学会绘制生物图 3、掌握使用测微尺测量微生物大小的方法 4、了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法 二、实验器材 1、显微镜 2、微生物标本装片 3、目、物镜测微尺 4、血球计数板 5、酵母菌液或霉菌孢子液 6、载波片、盖波片、烧杯、滴管、擦镜纸、香柏油、二甲苯等 三、显微镜的构造、原理及使用方法 1、构造 现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜，由机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置包括镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、调节器；光学系统包括目镜、物镜、聚光器、电光源。显微镜的总放大倍数为目镜和物镜的放大倍数的乘积。 2、操作 在目镜保持不变的情况下，使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。一般情况下，特别是初学者，进行显微观察时应遵循从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序，因为低倍数物镜视野相对大，易发现目标及确定检查的位置。 四、微生物大小的测量原理和方法 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体很小，只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和物镜测微尺。 1、目镜测微尺（图1-1）是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的 1
2 中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用物镜测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2、物镜测微尺（图1-2）是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm 等分为100格，每格长l0μm （即0.0lmm ），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将物镜测微尺放在载物台上，由于物镜测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即物镜测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从物镜测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用物镜测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去物镜测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 3、目镜测微尺的校正 把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把物镜测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与物镜测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度(图1-3)，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。因为物镜测微尺的刻度每格长l0μm ，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。 例如目镜测微尺5小格正好与物镜测微尺5小格重叠，已知物镜测微尺每小格为l0μm ，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/5＝10μm 用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。 由于不同显微镜及附件的放大倍数不同，因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用，当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 4、细胞大小的测定 移去物镜测微尺，换上待测菌体的装片，先在低倍镜下找到目的物，然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值，即等于该菌的长和宽。 结果计算： 长μm ＝平均格数×校正值 宽μm ＝平均格数×校正值 大小表示： 宽μm ×长μm 图1-1 目镜测微尺 图1-2 物镜测微尺 图1-3 目、物镜测微尺的校正