泽泻的化学成分及其免疫抑制活性筛选

张朝凤＊

,周爱存,张　勉

(1.中国药科大学现代中药重点实验室生药学研究室,江苏南京210038)

[摘要]　目的:研究泽泻A l i s m a o r i e n t a l i s 的免疫抑制活性物质。方法:利用色谱技术进行分离和纯化,并通过现代波谱方法鉴定其结构,采用体外细胞培养法,测定萜类化合物对小鼠脾脏T 淋巴细胞增殖的活性。结果:从泽泻中分离鉴定了12个化合物。分别为倍半萜类c l o v a n d i o l (1),o r i e n t a l o l E (2),a l i s m o x i d e (3),a l i s m o l (4)和三萜类4α,10α-d i h y d r o x y -5β-H -g u a j -6-e n (5),a l i s m o r i e n t o l s A (6),泽泻醇F (7),泽泻醇A (8),13β,17β-环氧泽泻醇A (9),23-乙酰泽泻醇B (10),1H-i n d o l e -3-c a r b o x y l i c a c i d (11)和琥珀酸(12)。化合物9,10和24-去乙酰泽泻醇A 均具显示了剂量依赖性免疫抑制趋势。结论:化合物1,5,11和12均为首次从该属植物中分离得到,首次对化合物1的N M R 波谱数据归属问题进行了修正,活性结果显示原萜烷型三萜类化合物具有一定的免疫抑制活性。

[关键词]　泽泻;三萜;倍半萜;免疫抑制

[收稿日期]　2008-09-21

[通信作者]　＊张朝凤,T e l :(025)85309639,F a x :(025)85309639,E -m a i l :n j c h a o f e n g @126.c o m

泽泻为泽泻科泽泻属植物A l i s m a o r i e n t a l i s (S a m .)J u z e p .的干燥块茎。具有利小便,清湿热的功

效,临床多用于治疗糖尿病、小便不利、水肿、热淋涩痛等证[1]

。泽泻的化学成分主要以萜类为主,包括原萜烷型三萜、愈创木烷型倍半萜以及部分的二萜及其苷类等成分[2]

。文献[3-4]报道泽泻多糖成分对

免疫系统有调节作用,而有关原萜烷型三萜类化合物的免疫抑制活性尚未见报道。本研究试验拟从离体免疫细胞活性测定的角度出发,在细胞水平上揭示泽泻免疫抑制活性的有效成分,为开发泽泻的新用途及用于临床抗排斥治疗提供理论依据。

作者曾报道从泽泻分离出的4个原萜烷型三萜[5]

,本研究进一步从90%乙醇提取物中分离纯化得6个愈创木烷型倍半萜类化合物c l o v a n d i o l (1),o r i e n t a l o l E (2),a l i s m o x i d e (3),a l i s m o l (4),4α,10α-d i h y d r o x y -5β-H-g u a j -6-e n (5),a l i s m o r i e n t o l s A (6)。和4个已知原萜烷型三萜泽泻醇F (a l i s o l F ,7),泽泻醇A (a l i s o l A ,8),13β,17β-环氧泽泻醇A (13β,17β-e p o x y a l i s o l A ,9),23-乙酰泽泻醇B (a l i s o l B 23-a c e t a t e ,10)(图1),以及2个其他类成分1H-i n d o l e -3-c a r b o x y l i c a c i d (11)和琥珀酸(12)。化合物1,5,11和12均首次从该属中分得,首次对化合物1的N M R 波数据进行了更正。采用M T T 法测

定小鼠脾液T 淋转细胞的活性,结果显示原萜烷型三萜类物质13β,17β-环氧泽泻醇A (9),

23-乙酰泽泻醇B (10)和24-乙酰泽泻醇A ,具有剂量依赖性免疫抑制活性

。

图1　化合物1～10的结构式

1　材料X -4型数字显示显微熔点测定仪(温度未校正);A g i l e n t 1100L C-M S D T r a p 质谱仪及H R -T O F -M s 质谱仪;N i c o l e t I m p a c t 410型红外光谱仪(K B r 压片);B r u k e r A C F-300,500型核磁共振仪

(T M S 内标)。薄层色谱和柱色谱用硅胶为青岛海洋化工厂生产,S e p h a d e x L H-20为P h a r m a c i a 公司生产。所用试剂均为分析纯。

实验药材购自安徽省亳州市药材市场,经本室张勉教授鉴定原植物为泽泻科泽泻A .o r i e n t a l i s ,凭

994·第34卷第8期2009年4月

V o l .34,I s s u e 8

p r i l ,2009

证标本(2006-8)存放于中国药科大学生药研究

室。

2　提取与分离

泽泻药材20k g 粉碎,用8倍量的90%乙醇热回流提取3次,每次1h ,回收乙醇至无醇味,依次分别用石油醚(60～90℃)、醋酸乙酯萃取。醋酸乙酯萃取物(460g )经硅胶柱色谱,石油醚-醋酸乙酯(50∶1～1∶2)梯度洗脱,得F r .1～F r .11。各部分经反复硅胶柱色谱,S e p h a d e x L H-20凝胶柱色谱,反相柱色谱和重结晶等分离纯化方法,得到单体化合物12个,从F r .1得到化合物4(20m g ),从F r .2得到化合物1(8m g ),2(10m g ),5(10m g ),10(30m g )。F r .4得到化合物3(10m g )和11(5m g ),F r .7得到化合物6(10m g ),8(100m g ),F r .8得化合物9(80m g ),12(100m g ),F r .10得化合物7(70m g )。3　结构鉴定

化合物1　无色针状结晶(丙酮)。[α]20

D -4.3°(c 0.1,甲醇)。遇10%硫酸香草醛显粉红

色。E S I -M Sm /z 237.0[M -H ]+

,256.2[M +N H 4]+

,H R-T O F-M S 提示分子式为C 15H 26O 2([M+N a ]

261.1832,C a l .261.1825)。1

H-N M R

中显示3个甲基单峰信号[δ0.87,0.97,1.04(3H ,

s ,e a c h )],2个连氧叔碳上的氢信号[δ3.3(1H ,b r s ),3.79(1H ,d d ,J =5.1,5.5)];13

C-N M R 谱显示15个碳信号,结合D E P T 谱,确定为3个伯

碳、6个仲碳、3个叔碳和3个季碳。根据上述碳

氢谱以及D E P T 谱信号,推测该化合物可能为倍半萜类化合物,但考虑到该化合物结构中有6个仲碳,故推测该化合物并非为泽泻中典型的愈创木烷型倍半萜,可能是拥有五元环与八元环骈合的结构类型,根据该化合物不饱和度为3,且结构中未看到有不饱和碳信号,推测该化合物中有3个

环。1H-1

HC O S Y 谱中可以看到以下相关δ3.3(H -2)与1.61～1.67(H -3a ),1.95～2.05(H -3b )相关;1.61～1.67(H-3a ),1.95～2.05(H-3b )与1.06～1.12(H-4)相关;1.28～1.32(H-7a ),1.34～1.45(H -7b )与1.38～1.42(H -8a ),1.08～1.16(H-8b )相关;3.79(H-10)与1.69～1.74(H-11a ),1.47～1.53(H-11b )相关,通过对H S Q C 和H M B C 谱的综合分析,对该化合物的碳谱氢谱进行归属。N O E S Y 谱中可以看到以下相关信息δ0.87(H-15)与1.43(H-6)相关;0.87(H-15)与3.79(10-H )相关;1.54,0.92(H-9)与3.79(H-10)相关;0.97(H-13)与3.3(H-2)相关,可以推测H-15,H-6,H-9,H -10处于同侧,H-13与H-2处于同侧,未看到H-9与H-13,H-9与H-2相关,推测H-9与

H-13,H-2处于异侧。故最终确定该化合物为c l o v a n d i o l [6],首次对该化合物的碳氢信号的归属进行了修正。

表1　化合物1的N M R 数据归属及H M B C 的相关(C D C l 3,300M

H z )N o .1

H M B C

1　34.9　23.3b r s

75.1　

31.61～1.67m ,1.95～2.05m 26.2C-1,C -2,C-4,C-541.06～1.12m 26.4C-5,C -95　

44.6　6

1.42～1.44m 50.8

C-5,C -7

71.28～1.32m ,1.34～1.45m 20.7C-8,C -681.38～1.42m ,1.08～1.16m 33.2C-2,C -7

91.54d (12.7),0.92d (13.0)35.6C-1,C -4,C-5,C-6,C-8103.79d d (5.5,5.1)

81.0C-9,C -4,C-11111.69～1.74m ,1.47～1.53m 47.9C-10,C-5,C-6,C-12,C-14,C -1512　37.3C-13,C-11,C-7130.97s 28.3C-2,C -1,C-9,C-8141.04s 31.5C-12,C-15,C-11,C-6

0.87s

25.5

C-14,C-12,C-11,C-6

化合物2　无色针状结晶(石油醚-丙酮),E S I

-M S m /z 531[2M+N a ]+,277.2[M+N a ]+。1

H-N M R (C D C l 3,300M

H z )δ:1.02(3H ,d ,J =6.9H z ,H -12),1.04(3H ,d ,J =6.9H z ,H-13),1.20(3H ,

s ,H-15),1.33(3H ,s ,H-14),1.58(1H ,m ,H -5),1.72(1H ,m ,H-1),1.95(1H ,m ,H-11),3.79

995·第34卷第8期2009年4月

V o l .34,I s s u e 8

p r i l ,2009

(1H ,d ,J =9.3H z ,H-6)。参考文献[7],确定该

化合物为泽泻萜醇E 。

化合物3　无色方晶(三氯甲烷-甲醇),m p

140～142℃,1

H -N M R (C D C l 3,300M H z )δ:0.97(3H ,d ,J =6.9H z ,H-13),0.99(3H ,d ,J =6.9H z ,H -12),1.21(3H ,s ,H-15),1.27(3H ,s ,H-14),5.50

(1H ,d ,H-6)。13

C -N M R (C

D C l 3,75M H z )δ:51.0(C -1),21.7(C-2),40.7(C-3),80.3(C-4),50.6(C -5),121.5(C-6),149.7(C -7),25.2(C-8),42.9(C -9),75.2(C-10),37.4(C -11),21.3(C -12),21.5(C-13),22.8(C -14),21.6(C -15)。参考文献[7],确定该化合物为a l i s m o x i d e 。

化合物4　无色油状物(石油醚-醋酸乙酯),1

H-N M R (C D C l 3,300M H z )δ:0.96(3H ,d ,J =6.7H z ,H-12),0.99(3H ,d ,J =6.7H z ,H-13),4.71,4.76(1H ,e a c h ,s ,H-14)1.19(3H ,s ,H-15),5.54

(1H ,b r s ,H-6)。13

C-N M R (C D C l 3,75M H z )δ:54.6(C -1),24.6(C -2),39.9(C-3),80.3(C -4),46.9(C -5),121.4(C -6),149.1(C -7),29.7(C -8),36.9(C -9),153.6(C -10),37.2(C -11),21.1(C -12),21.3(C -13),24.6(C -14),106.3(C-15)。参考文献[7]确定该化合物为a l i s m o l 。

化合物5　无色针状结晶(石油醚-丙酮),E S I

-M S m /z 237.0[M-H ]-,218.9[M-H 2O-H ]-。1

H-N M R (C D C l 3,300M H z )δ:0.97(3H ,d ,J =6.8H z ,H-12),0.98(3H ,d ,J =6.8H z ,H-13),1.18(3H ,s ,H-14),1.41(3H ,s ,H-15),2.25(1H ,q q ,H -11),2.34(1H ,m ,H-8),2.59(1H ,m ,H-5),2.68

(1H ,m ,H -1),5.15(1H ,d ,H -6)。13

C-N M R (C D C l 3,75M H z )δ:50.9(C-1),24.9(C-2),36.3(C -3),82.5(C-4),51.0(C-5),120.6(C-6),149.2(C -7),31.4(C-8),38.2(C -9),74.1(C -10),38.0(C -11),21.2(C -12),21.3(C -13),23.9(C -14),25.3(C -15)。参考文献[8]对照,确定该化合物为4,10-d i h y d r o x y -5-H-g u a j -6-e n 。

化合物6　无色针状结晶(甲醇),E S I -M Sm /z

271.0[M-H ]-。1

H-N M R (C D C l 3,300M H z )δ:0.93(2H ,d ,J =6.7H z ,H-12,13),1.19(3H ,s ,H-14),1.31(3H ,s ,H-15),2.46(1H ,b r d ,J =9.6H z ,H-5),2.68(1H ,d d ,J =9.6,9.6H z ,H-5),3.84(1H ,s ,

H-6)。13

C -N M R (C

D C l 3,75M H z )δ:52.9(C -1),24.8(C -2),41.4(C-3),85.2(C-4),52.2(C-5),74.7(C -6),77.8(C -7),31.0(C-8),38.0(C -9),73.0(C -10),36.6(C -11),18.1(C -12),18.1(C-13),32.5(C -14),25.4(C -15)。综合上述波

谱数据,参考文献[9]发现该化合物与a l i s m o r i e n t o l s A 很相似,但该化合物波谱数据与文献报道的波谱数据不完全吻合,考虑到所用的溶剂不同,结合H M B C ,H S Q C 谱确定该化合物为a l i s m o r i e n t o l s A 。

化合物7　无色针晶(甲醇),E S I -M S m /z 487.

1[M -H ]-。1

H-N M R (C D C l 3,300M H z )δ:0.88,1.05,1.06,1.07,1.23,1.24,1.29(3H ,s ),1.14(3H ,d ,J =7.0H z ,H-21),1.75(1H ,b r d ,J =10.7H z ,H-9),2.86(1H ,m ,H-20),3.05(1H ,d ,J =1.7H z ,H-24),3.79(1H ,m ,H-11),4.03(1H ,b r d ,J =11.9

H z ,H-23),4.46(1H ,d d ,J =5.1,5.1H z ,H-16)。13

C -N M R (C

D C l 3,75M H z )δ:30.8(C-1),33.9(C-2),219.7(C -3),47.0(C-4),48.2(C -5),19.9(C -6),33.6(C -7),40.5(C -8),49.7(C-9),37.0(C -10),70.5(C-11),35.0(C-12),136.9(C-13),55.4(C -14),39.5(C -15),80.1(C -16),133.2(C -17),24.4(C-18),25.5(C-19),26.6(C-20),18.3(C -21),33.9(C -22),72.6(C-23),77.2(C -24),73.3(C -25),26.8(C -26),27.0(C-27),29.6(C-28),19.9(C-29),23.7(C-30)。参考文献[9]鉴定化合物9为泽泻醇F 。

化合物8　无色粉末(三氯甲烷-甲醇),E S I -M Sm /z 489.3[M -H ]-。1

H -N M R (C D C l 3,300M H z )δ:0.95,1.00,1.01,1.03,1.08,1.16,1.22(3H ,e a c h ,s ),0.96(3H ,d ,J =7.0H z ,H-21),1.61(1H ,m ,H-22),1.70(1H ,b r d ,J =10.7H z ,H-9),2.74(1H ,m ,H-12),2.95(1H ,b r s ,H-24),3.70(1H ,d d ,J =3.5,9.3H z ,H-23)3.82(1H ,d d d ,J =5.9,

10.7,10.7H z ,H-11)。13

C -N M R (C

D C l 3,75M H z )δ:30.9(C -1),33.7(C-2),220.6(C -3),46.9(C -4),48.5(C -5),20.1(C-6),34.3(C -7),40.4(C -8),49.6(C -9),36.9(C -10),69.7(C-11),34.3(C -12),137.6(C-13),57.0(C-14),30.4(C-15),29.4(C -16),135.4(C -17),22.9(C-18),25.5(C -19),28.2(C-20),20.1(C-21),40.1(C-22),69.4(C -23),69.7(C -24),74.0(C-25),27.1(C -26),26.1(C -27),29.1(C -28),20.0(C-29),24.0(C-30)。参考文献[10]确定该化合物为泽泻醇A 。

化合物9　无色粉末(丙酮)。1

H-N M R (C D C l 3,300M H z )δ:1.05,1.06,1.08,1.08,1.12,1.27,1.31(3H ,e a c h ,s ),1.08(3H ,d ,J =7.0H z ,H-21),3.09(1H ,b r s ,H-24),4.04(1H ,d d ,J =2.5,9.5H z ,H-·

996·第34卷第8期2009年4月

V o l .34,I s s u e 8

p r i l ,2009

23),4.16(1H,d d,J=10.4,3.5H z,H-11)。13C-N M R(C D C l

3,75M H z)δ:31.0(C-1),34.9(C-2),219.5(C-3),46.9(C-4),49.2(C-5),20.1(C -6),35.5(C-7),38.9(C-8),48.9(C-9),37.0 (C-10),68.6(C-11),33.6(C-12),73.5(C-13), 50.1(C-14),30.7(C-15),26.5(C-16),78.3(C-17),20.0(C-18),24.7(C-19),30.9(C-20),17.6 (C-21),40.5(C-22),68.6(C-23),77.3(C-24), 73.3(C-25),26.6(C-26),26.8(C-27),29.6(C-28),19.3(C-29),25.7(C-30)。参考文献[11]确定该化合物为13β,17β-环氧泽泻醇A。

化合物10　无色棱状结晶(醋酸乙酯),E S I-M S m/z513.3[M-H]-,1H-N M R(C D C l3,300M H z)δ: 0.97,1.04,1.05,1.06,1.14,1.31,1.33(3H,e a c h s),0.99(3H,d,J=7.0H z),1.72(1H,d,J=10.7

H z,H-9),2.06(3H,s,O A c),2.55(1H,d d,J=5.5,

13.2H z,H-12),2.71(1H,d,J=8.4H z,H-24),3. 80(1H,d d d,J=5.5,10.6,11.0H z,H-11),4.61 (1H,d d d,J=2.6,8.4,10.6H z,H-23)。参考文献[12]鉴定化合物10为23-乙酰泽泻醇B。

化合物11　红褐色针晶(醋酸乙酯),薄层色谱用10%香草醛硫酸显色为橘红色。E S I-M Sm/z 160.1[M-H]-,115.9[M-C O O]-,1H-N M R (D M S O-d6,300M H z)δ:7.17(2H,m,H-6,7),7. 42(1H,b r d,J=7.5H z,H-8),7.99(1H,b r d, J=7.5H z,H-5),8..01(1H,s,H-2),10.9 (1H,s,C O O H)。13C-N M R(D M S O-d6,75 M H z)δ:132.5(C-2),107.0(C-3),121.4(C -4),122.6(C-5),112.5(C-6),121.2(C-

7),126.4(C-8),136.9(C-9),166.3

(C O O H)。参考文献[13]确定该化合物为1H-i n d o l e-3-c a r b o x y l i c a c i d(11)。

化合物12　白色片状结晶(三氯甲烷-甲醇), m p187～190℃。E S I-M S m/z116.8[M-H]-。1 H-N M R(C D3O D,300M H z)δ:5.00(1H,s,O H),2. 56(2H,s,C H2)与标准品共薄层,R f值与显色行为完全一致,混合熔点不下降,确定该化合物为琥珀酸。

4　免疫抑制活性筛选

曾报道泽泻的免疫活性物质是酸性多糖A l i s-m a n P I I和S I[14-15],有关其原萜烷三萜及倍半萜的免疫调节活性尚未见报道。按照文献[16]的方法制备C57B L/6小鼠脾细胞,首先采用M T T法筛选上述化合物对正常小鼠脾细胞的毒性,结果表明24

-乙酰泽泻醇A与化合物6,9和10无明显的细胞毒性。在此基础上针对无明显细胞毒活性的化合物进一步进行T淋巴细胞增殖活性测试,无菌取小鼠脾脏,96孔培养板中,每孔加入脾细胞5×105个,同时加入化合物溶液(终浓度分别为1×10-6,1×10-5,1×10-4g·m L-1)以及C o n A(5m g·L-1),每个样3复孔。培养72h后,运用M T T法检测,用酶标仪测定A值(560n m),结果以刺激指数表示:刺激指数S I=A样品/A空白。结果表明原萜烷类成分24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B(10)和13β, 17β-环氧泽泻醇A(9)具有剂量依赖性免疫抑制趋势(表2)。

表2　化合物9,10和24-泽泻醇A对小鼠

脾脏淋巴细胞的增殖活性(S I,x±s,n=3)

样品

1×10-6

g·m L-1

1×10-5

g·m L-1

1×10-4

g·m L-1

C o n A 12.11±0.52

24-泽泻醇A11.42±0.747.83±0.850.86±0.11化合物911.82±0.2211.34±0.844.87±0.22化合物1011.72±0.374.88±0.370.76±0.05

[参考文献]

[1]　江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科技出版社,

1977:164.

[2]　尹春萍,吴继洲.泽泻及其活性成分免疫调节作用研究进展

[J].中草药,2001,32(12):222.

[3]　尹仁杰,吴继洲.泽泻的研究进展[J].医药导报,2003,22

(5):295.

[4]　J i a n g ZY,Z h a n g XM,Z h a n g FX,e t a l.An e wt r i t e r p e n e a n d

a n t i-h p a t i t i sB v i r u s a c t i v ec o m p o u n d s f r o m A l i s m ao r i e n t a l i s

[J].P l a n t a M e d,2006,72(10):951.

[5]　Z h o uA C,Z h a n gCF,Z h a n gM.A n e wp r o t o s t a n et r i p e n o i d

f r o mt h e r h i z o m e o f A l i s m a o r i e n t a l e[J].中国天然药物,2008,6

(2):109.

[6]　G u p t a AS,D u kHD.S t u d i e s i ns e s u i t e r p e n e s-X L V I:S e s q u i t-

e r p e n s

f r o mt h e o l e o r e s i n o f D i p t e r o c a r p u s p i l o s u s:H u m n l e n e e p o-

s i d e-Ⅲ,c a r y o p h y l l e n o-Ⅰa n d c a r y o p h y l l e n o-Ⅱ[J].T e t e r-

h e d r o n,1971,27(3):635.

[7]　彭国平,楼凤昌.泽泻化学成分的研究[J].天然产物研究与

开发,2001,13(3):1.

[8]　F e r d i n a n dB,J a s m i nJ.N e u el a b d a n-d e r i v a t eu n ds e s q u i t e r-

p e n e a u s S i l p h i u m-a r t e n[J].P h y t o c h e m i s t r y,1979,18(12):

1987.

[9]　J i a n gZY,Z h a n gXM,Z h o uJ,e t a l.T w o n e ws e s q u i t e r p e n e s

f r o mA l i s m a o r i e n t a l i s[J].C h e m P h a r m B u l l,2007,55(6):905.

[10]　彭国平,朱国元,楼凤昌.泽泻中二个三萜新成分的研究Ⅱ

[J].天然产物研究与开发,2002,14(4):5.

[11]　彭国平,朱国元,楼凤昌.泽泻三萜成分的研究Ⅲ[J].天然产

物研究与开发,2002,14(6):7.

997

第34卷第8期2009年4月 V o l.34,I s s u e　8

　A p r i l,2009

[12]　彭国平,楼凤昌.四川产泽泻中三萜成分的研究[J ].天然产

物研究与开发,2001,13(4):1.

[13]　郭森辉,钟惠民,林文翰.中国南海海绵X e t o s p o n g i at e s t u d i n a r -i a 化学成分研究[J ].青岛科技大学学报,2007,28(6):502.

[14]　T o m o d a M,G o n d a R ,S h i m i z uN ,e t a l .C h a r a c t e r i z a t i o no f a n

a c i d i c p o l y s a c c h a r i d e h a v i n g i m m u n o l o g i c a l a c t i v i t i e s f r o mt h e t u -

b e r o f A l i s m a o r i e n t a l e [J ].B i o l P h a r mB u l l ,1994,17(5):572.

[15]　S h i m i z uN ,O h t s uS ,T o m o d a M ,e t a l .Ag l u c a nw i t hi m m u n o -l o g i c a l a c t i v i t i e sf r o m t h et u b e ro fA l i s m ao r i e n t a l e [J ].B i o l P h a r m B u l l ,1994,17(12):1666.

[16]　李　江,谢　鸣,甘　媛.小柴胡汤及其药群配伍抗小鼠H 22

肝肿瘤及免疫调节作用[J ].中国中药杂志,2008,33(9):1039.

C h e m i c a l c o n s t i t u e n t s o f A l i s m a o r i e n t a l i s a n d t h e i r

i mm u n o s u p p r e s s i v e f u n c t i o n

Z H A N GC h a o f e n g ＊,Z H O UA i c h u n ,Z H A N Gm i a n

(K e y L a b o r a t o r y o f M o d e r n C h i n e s e M e d i c i n e s ,M i n i s t r y o f E d u c a t i o n ,C h i n a P h a r m a c e u t i c a l U n i v e r s i t y ,

N a n j i n g 210038,C h i n a )

[A b s t r a c t ]　O b j e c t i v e :T o i n v e s t i g a t e t h e c h e m i c a l c o n s t i t u e n t s w i t h i m m u n o s u p p r e s s i v e f u n c t i o n f r o mA l i s m a o r i e n t a l i s .Me t h -o d :T h e c h e m i c a l c o n s t i t u e n t s w e r e i s o l a t e d a n d p u r i f i e d b y k i n d s o f c o l u m n c h r o m a t o g r a p h y a n d i t s s t r u c t u r e s w e r e e l u c i d a t e d b y N M R s p e c t r a a n dp h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t i e s .I t s i m m u n o c o m p e n t e n c e o f l y m p h o c y t e s t a k e n f r o ms p l e e n o f m o u s e w e r e e x a m i n e d b y M T Ta s -s a y .R e s u l t :T w e l v e c o m p o u n d s w e r e i s o l a t e d a n d i d e n t i f i e d a s c l o v a n d i o l (1),o r i e n t a l o l E(2),a l i s m o x i d e (3),a l i s m o l (4),4α,10α-d i h y d r o x y -5β-H-g u a j -6-e n(5),a l i s m o r i e n t o l s A(6),a l i s o l F (7),a l i s o l A(8),13β,17β-e p o x y a l i s o l A(9),a l i -s o l B 23-a c e t a t e (10),1H-i n d o l e -3-c a r b o x y l i c a c i d(11)a n d c u c c i n i c a c i d (12).C o m p o u n d s 9,10a n d a l i s o l A 24-a c e t a t e s h o w e di m m u n o s u p p r e s s i v e f u n c t i o n .C o n c l u s i o n :C o m p o u n d s 1,5,11a n d 12w e r e i s o l a t e df i r s t l yf r o m t h i s g e n u s ,a n dt h eN M R

s p e c t r a d a t a o f 1w e r e c o r r e c t e d f i r s t l y ,s o m e p r o t o s t a n -t y p e t r i t e r p e n o i d s m a y b e d e v e l o p e d a s n e wd r u g w i t h i m m u n o s u p p r e s s i v e f u n c -t i o n .

[K e yw o r d s ]　A l i s m ao r i e n t a l i s ;s e s q u i t e r p e n e s ;p r o t o s t a n -t y p e t r i t e r p e n e s ;i m m u n o s u p p r e s s i v e f u n c t i o n

[责任编辑　王亚君]

全国中医痛证论坛征文通知

中华中医药学会主办的“全国中医痛证论坛”将于2009年8月在广西桂林召开,会议将邀请中西医有关方面的权威专家学者作专题报告。现将有关征文事宜通知如下:

一、征文内容:(1)针对头面痛、颈肩痛、腰背痛、四肢骨关节痛、软组织痛、妇科痛证、癌症痛等各种疼痛的临床研究;(2)治疗手段的研究,如微创介入治疗、麻醉镇痛、中药镇痛、针灸推拿镇痛、针刀镇痛、气功镇痛;(3)痛证的基础研究;(4)其他与痛证有关的研究。

二、征文要求:(1)未正式公开发表过的论文。(2)论文力求主题鲜明、论据充分、资料详实。(3)稿件篇幅在4000字以内,关键词3-8个,注明作者姓名、职称、单位、具体通讯地址、邮政编码、电子信箱等。(4)论文请寄打印稿并网络发送电子版,请在信封上注明“痛证论坛征文”,邮件以“作者姓名+痛证论坛征文”命名。请用w o r d 文档以附件的形式发送,收到必复,若无回复,请与编辑部联系。(5)每篇论文共收审稿费、版面费380元,稿件请自留底稿,恕不退稿。投稿时请同时寄出审稿费及版面费,截止日期:2009年5月30日。三、其他事宜:稿件经审稿录用后将在国家级中文核心期刊《中华中医药杂志》(原《中国医药学报》)2009年增刊上刊出。参加大会学术交流者,由中华中医药学会颁发论文证书和国家Ⅰ类继续教育学分。

四、联系方式:北京市朝阳区和平街北口樱花路甲4号《中华中医药杂志》社(收);邮编:100029;电话:010-********;E -m a i l :64216650@163.c o m 。

998·第34卷第8期2009年4月

V o l .34,I s s u e 8

p r i l ,2009