柱后衍生应用

柱后衍生系统参数

柱后衍生系统参数 一、技术指标 1衍生溶剂泵 1.1 流速范围：0.05- 2.0ml/min, 0.01ml/min增量可调； 1.2 流速准确度：± 2.0%或30ul/min(1.0ml/min时测得)； 1.3 流速精度：±0.5%相对标准偏差(流速为0.5ml/min，重复6次测得)； 1.4 最大操作压力：2500psi或更优； 1.5 最大耐压压力波动：± 2.5%在0.5ml/min，脱气甲醇，反压800psi； 1.5 标配泵头清洗装置(seal wash)； 1.6 管线为PEEK材质； 2衍生反应器 2.1衍生温度范围: 室温至120℃； 2.2 衍生温度稳定性: ±0.5℃（80℃时测得）； 2.3逆流热交换衍生管设计技术,使得在线衍生快速、充分，极大降低扩散，确保在线衍生检测稳定、准确； *2.4 本套柱后衍生系统将与WATERS E2695液相色谱仪配套使用，因此必须能由empower 色谱工作站软件自动控制。 二、配置 1、衍生溶剂管理器1套； 2、柱后衍生模块1套； 3、配套柱温箱控制器1套； 4、2mL 定量环2个； 5、2500uL 注射器2根； 三、售后服务 1. 供应商为用户提供1年的保修，保修期从验收合格之日算起，终身维修。仪器在保修期内如出现三次以上严重质量问题，供应商应当予以更换或是全面检修，并提供自更换和全面检修后用户验收合格之日起1年的保修期（投标时提供设备制造商维保承诺书）。 2. 保修期满后1年内维修只收材料费。仪器设备保修期过后，出现故障需要更换各种零配件或者消耗品时，供应商应以不高于本项目同等折扣优惠供应（折扣率=本合同价/官方报价）。 3. 保修期内或是保修期外，在用户提出维修要求的24小时内做出答复，并在仪器出现故障的72小时之内到达现场（不可抗拒原因除外），及时帮助客户解决问题。

高效液相色谱习题和答案解析

高效液相色谱法习题 一、思考题 1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 3．在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么? 4．液相色谱有几种类型? 5．液-液分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？6．液-固分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 8．离子交换色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 9．离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么? 10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？11．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？ 12．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？ 13．何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱？试述它们的基本原理 14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？15．高效液相色谱进样技术与气相色谱进样技术有和不同之处？ 16．以液相色谱进行制备有什么优点？ 17．在毛细管中实现电泳分离有什么优点？ 18．试述CZE的基本原理 19．试述CGE的基本原理 20．试述MECC的基本原理 二、选择题 1．液相色谱适宜的分析对象是（）。 A 低沸点小分子有机化合物 B 高沸点大分子有机化合物 C 所有有机化合物 D 所有化合物 2．HPLC与GC的比较，可忽略纵向扩散项，这主要是因为（）。 A 柱前压力高 B 流速比GC的快 C 流动相钻度较小 D 柱温低 3．组分在固定相中的质量为MA(g)，在流动相中的质量为MB（g），而该组分在固定相中的浓度为CA（g·mL －1），在流动相中浓度为CB（g·mL－1），则此组分的分配系数是( )。 A mA/m B B mB/mA C CB/CA D CA/CB。 4．液相色谱定量分析时，不要求混合物中每一个组分都出峰的是＿。 A 外标标准曲线法 B 内标法 C 面积归一化法 D 外标法 5．在液相色谱中，为了改善分离的选择性，下列措施（）是有效的？ A 改变流动相种类 B 改变固定相类型 C 增加流速 D 改变填料的粒度 6．在分配色谱法与化学键合相色谱法中，选择不同类别的溶剂（分子间作用力不同），以改善分离度，主要是（）。 A 提高分配系数比 B 容量因子增大 C 保留时间增长 D 色谱柱柱效提高 7．分离结构异构体，在下述四种方法中最适当的选择是（）。 A 吸附色谱 B 反离子对色谱 C 亲和色谱 D 空间排阻色谱 8．分离糖类化合物，选以下的柱子（）最合适。 A ODS柱 B 硅胶柱 C 氨基键合相柱 D 氰基键合相柱 9．在液相色谱中，梯度洗脱适用于分离（）。 A 异构体 B 沸点相近，官能团相同的化合物 C 沸点相差大的试样 D 极性变化范围宽的试样 10．在高效液相色谱中，采用254 nm紫外控制器，下述溶剂的使用极限为（）。 A 甲醇210 nm B 乙酸乙醋260 nm C 丙酮330 nm 11吸附作用在下面哪种色谱方法中起主要作用（）。 A 液一液色谱法 B 液一固色谱法 C 键合相色谱法 D 离子交换法 12．当用硅胶为基质的填料作固定相时，流动相的pH范围应为（）。

光化学衍生器-黄曲霉毒素检测-柱后衍生15版药典专用

普瑞邦PriboFast?KRC 光化学柱后衍生反应器PriboFast?KRC光化学柱后衍生反应器广泛应用于液相色谱检测分析, 使用时置于色谱柱和检测器之间，进行柱后连续光化学衍生反应提高荧光、紫外、电化学检测和化学发光检测器的灵敏度和响应的选择性。 采取液相色谱-荧光法检测黄曲霉毒素时，使用光化学衍生器进行柱后衍生,不需 要任何化学试剂, 能有效增强黄曲霉毒素B 1和G 1 的荧光强度，黄曲霉毒素B 1 和G 1 灵敏 度能够达到0.1ppb以上； 1、运行环境： 温度5℃～40℃；相对湿度≤85%；适用电压220V（±10%），50Hz(±2%) 2、技术参数 2.1与HPLC-荧光检测器配套使用在线对黄曲霉毒素B 1、G 1 进行衍生，不需要任 何化学试剂 2.2黄曲霉毒素B 1、B 2 、G 1 、G 2 的检测限低于0.1ppb. 2.3符合15版中国药典，AOAC 2005.08, AOCS Aa 11-05和欧盟药典 2.8.18标准分析方法。 3、配置要求 3.1 KRC柱后衍生光化学反应池(还包括10米透明质化线圈，254 纳米灯管， 抛光反应池架，电源控制器）1套 3.2塑料漏斗(10 个/包)1包 3.3玻璃微纤维滤纸（1.5um，100张/盒）1盒 3.4一次性测试管（250个/包）1包 3.4 Peek 两通(客户自备) 4、技术资料 3.1提供仪器设备的中文安装操作说明书。 3.2提供仪器设备的英文说明书。 3.3 仪器设备须经中国政府批准在中国境内销售，适合中国国家标准，或通 用国际标准。 3.4 仪器设备的保修期为一年。在保修期内，供货厂商在接到用户要求对所 购仪器设备进行维修时，应在24小时之内给予答复以及后续维修服务。

HPLC柱前衍生和柱后衍生

HPLC柱前衍生和柱后衍生 1、为什么要衍生？ 衍生化最为主要的目的就是提高目的物的可检测性。对于GC来讲，多数是为了增强目的物挥发性或者改善目的物极性；对于HPLC来讲多数是为了提高检测器对目的物的相应。 2、衍生化分类：柱前衍生和柱后衍生。柱前衍生是在经过分析柱前使分析物与衍生剂反应，反应产物在分析柱上实现分离，实际分离的是衍生产物，检测的也是衍生产物；柱后衍生是分离物在分析柱中实现分离后，在衍生池内与衍生剂反应，在柱子中分离的是目的物，在检测器处检测的衍生产物。 3、适用的化合物：生物酸/碱、胺类、抗生素（聚醚类抗生素多见）和氨基酸类。 4、衍生化要求？ 1）衍生剂必须过量且稳定；不过量反应不完全，检测不充分。不稳定，重现性差。 2）衍生物、衍生产物和衍生副产物至少是好分离的。当然如果只能检测到衍生产物最好。3）衍生反快速完全。反应慢，柱前衍生还可以，但柱后不行。因为流速固定，衍生池管路长度一定，留给衍生化的时间是一定的。柱前衍生可以在系统外等衍生完毕后进样，但也是影响效率的。 5、两种衍生比较 柱前衍生优点是，对设备要求不高，可以手工衍生，而且对衍生时间要求相对宽泛。缺点是，引入了过多的物质，如：衍生剂、衍生产物（当然这个是检测需要的）和衍生副产物，对柱子有潜在的负面影响，另如采用手工衍生也会引入过多的认为因素。 柱后衍生优点是，重现性好，认为因素少，引入物质比较少。缺点是，可能有扩散问题，在柱子中分离结束后，就存在扩散，如果衍生慢（必然流速低）、管路长扩散问题就会比较严重，再有就是要求有一套外源的泵系统和一个检测池，对于设备要求较高。 仪器管路的清洗 Agilent的液相，反相柱，想用异丙醇清洗下系统.用纯异丙醇,流速一般在0.2~0.4ml/min 先用甲醇-水，甲醇洗，再用异丙醇洗，流速低一点，根据你的压力决定，不要超过平时使用压力就可以了,洗完了，再用甲醇洗 把流通池拿掉，看基线，基本可以确定，问题在哪个方向，如果基线稳定，那就是流通池或者流动相或者泵什么的问题了.再有，检测器光路透镜老化什么的也会有这个情况，光电倍增管是否老化等 基线走不平一般是1.流动相脏，2.灯能量不够（流通池），3.系统有气泡，4.泵压力不稳。5.系统有杂质等。 10%异丙醇作用 冲洗泵头的，防止含盐流动相中的盐分结晶损毁宝石杆 开机就要用，控制一定的流速，不能太快也不能太慢 带缓冲盐的流动相一定要用,每分钟2-3滴的速度，虹吸，保持泵的宝石杆湿润，起保护作用的 安捷伦1200，灯使用时间大概半年，今晚把紫外灯关闭后冲洗柱子，两小时候开灯老显示紫外灯打开失败。怎么回事啊？ 1.如果只是关2小时的话实际上就是浪费灯能量了 关一次一般就是8小时的能量损失

高效液相色谱柱后衍生(pickering)测定氨基甲酸酯类农药

美瑞泰克有限公司中国代表处 https://www.360docs.net/doc/711011296.html, 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-87890417 高效液相色谱柱后衍生技术应用在农药残留氨基甲酸盐杀虫剂 (Carbamate Pesticide)方面的分析分析 1． 氨基甲酸盐杀虫剂分析柱 Pickering Labs 氨基甲酸盐分析柱利用EPA 和AOAC 的指定方法，保证了氨基甲酸盐残余物的良好分离。对于C18柱，两种水/甲醇梯度模式可以用来分别对甲醇中和水中的样品进行分析。扩展的分析法采用C8柱结合水/甲醇或水/氰甲烷梯度洗脱可以将23种氨基甲酸盐进行分离。甲醇与氰甲烷之间选择性的不同可以分别被用来对各自的出峰进行鉴定。 杀虫剂分析的柱后条件： 衍生试剂1：加水分解衍生试剂CB130 衍生试剂2：100mg of OPA, 2g Thiofluor ? in 950 mL of CB910 反应器1：100℃，0.5mL 反应器2：环境温度，0.1mL 衍生试剂流速：0.3mL/min 检测： 荧光检测器：λex 330nm, λem 465nm 氨基甲酸盐柱1846250 （4.6×250mm ） , C18, 5um

美瑞泰克有限公司中国代表处 https://www.360docs.net/doc/711011296.html, 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-87890417 1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ） 2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ） 3. 杀线威（Oxamyl ） 4. 灭多威（Methomyl ） 5. 3-Hydroxycarbofuran 6. 涕灭威（Aldicarb ） 7. 残杀威（Propoxur ） 8. 克百威（Carbofuran ） 9. 西维因（Carbaryl ） 10. 1-萘酚（1-Naphthol ） 11. 甲硫威（Methiocarb ） 12. BDMC (内部标准) 氨基甲酸盐柱1846150 （4.6×150mm ） , C18, 5um 1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ） 2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ） 3. 杀线威（Oxamyl ） 4. 灭多威（Methomyl ） 5. 3-Hydroxycarbofuran 6. 涕灭威（Aldicarb ） 7. 残杀威（Propoxur ）

HX-G光化学柱后衍生仪

HX-G光化学柱后衍生仪 简介 在要准确测定黄曲霉毒素含量时，需将黄曲霉毒素B1和G1衍生，提高其荧光强度。这种用于液相－荧光法测定黄曲霉毒素时进行柱后光化学衍生的装置称为柱后衍生装置, （又叫光化学衍生装置，光化学衍生器）。光化学柱后衍生器通过在高能强光照射条件下，使样品迅速发生化学反应的方法对黄曲霉毒素B1和G1进行衍生，与电化学碘衍生方法效果是等同的。黄曲霉毒素B2和G2含量性质不受该衍生步骤的影响。 使用光化学柱后衍生器可在线实现对黄曲霉毒素B1、G1进行衍生，不需要任何化学试剂。光化学在线衍生系统，不仅帮助您获得重复性好的结果，还可以帮助您降低化学物质的污染和危害，检测成本更低廉。 本公司生产的“HX-G”系列光化学柱后衍生器引进国外先进的照度控制技术和关键的控制元器件，各项性能均达到国外同类型仪器的指标，且性能价格比远优于进口产品。 为了正确地使用本产品，请先阅读使用说明书并遵照其操作！ 一、产品主要特点： HX-G型光化学柱后衍生器具有以下特点：

o无需使用化学物质（降低检测成本的同时，也避免操作人员接触有毒化学物质）； o增加HPLC仪器的寿命（没有腐蚀性酸流经毛细管）； o无需冲洗步骤； o光照强度控制系统稳定，高亮LED光源光强显示； o结果与电化学方法（碘衍生）一致； o黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的最低检测限均小于0.5 PPB； o符合AOAC 2005.08，AOAC2008.02，AOAC Aa 11-05，中国台湾标准（食字0981800370号公告）和欧盟药典2.8.18标准分析方法； o符合中国药典2015附录第224页2351 黄曲霉毒素测定法第一法②光化学衍生法 o符合中国国家标准和进出口检验标准 二、主要技术指标： 外形尺寸：155mm(195mm)×115mm×460mm(HX-G型) 屏幕显示：高亮3位LED光源光强显示屏(红色) 光源灯管功率：8w 电源：220V/50Hz 重量：约3Kg

高效液相色谱仪LC2000-技术标书(全检测器+自动进样器+柱后衍生)

液相色谱仪 技术标书 1. 总则： 1.1 提供相应货物的技术规格文件，在应答的品目标题下，表明货物的型号、商标名称及生产厂家。 1.2 货物的制造和检验，必须是按照现行的中国国家标准，或通用国际标准。 1.3 仪器设备如需特殊工作条件（如：水、电源、磁场强度、特殊温度、湿度、振动强度等），应在相关文件中加以说明。 1.4 所提供的货物的技术规格应与响应品目所要求相符。应根据产品的正式出版样本（原本）和说明书如实逐项填写技术规格响应表。 1.5 在价目表上应分别列出每台（套）设备的单价及每台（套）设备的配置清单，每个包的总价应是该包中各设备单价的总和，如在统计上有差错，则以单价为准，总价由买方更正。 2. 工作条件 除该品目在技术要求中另有说明外，所有仪器、设备和装置，均应适合以下条件： 能在电源电压220V（±10%），50Hz，5~35℃。 3．技术参数 3.1 输液泵 3.1.1 液体输送原理：双柱塞串联往复式，自动脉冲抑制系统； 3.1.2 流速范围：0.001mL/min～9.999mL/min； 3.1.3 最大输出压力：39MPa； 3.1.4 *流速准确度：±2μL/min(0.01～0.1mL/min); ±2%(0.101～8.01mL/min); ±4%(8.01～9.999mL/min)； 3.1.5 *流速精密度：SD＜0.02min 或RSD＜0.075%(流速为1.0mL/min时的保留时间)； 3.1.6 润湿部分材料：SUS 316,陶瓷，氟树脂。 3.2 梯度系统 3.2.1 混合液体数：4种液体；

3.2.2 *混合原理：用比例阀的开关时间编程进行梯度比例控制，流动相只在泵前合流，泵后直接混合； 3.2.3 *混合准确度：±1%； 3.2.4 *混合精密度：0.2%； 3.2.5 四元连续在线脱气（选配）。 3.3 紫外检测器 3.3.1 光源：进口氘灯； 3.3.2 光学系统：比例双光束，凹面光栅，1200线/mm； 3.3.3 波长范围：190～600nm； 3.3.4 波长精度：≤±2nm； 3.3.5 波长重复性：≤0.2nm； 3.3.6 光谱带宽：≤8nm； 3.3.7 *噪音水平：不超过±0.00001AU (254nm,流通池充满空气，时间常数2.0秒)； 3.3.8 *漂移水平：不超过0.00025AU/hr (254nm,室温恒定，稳定的工作状态)； 3.3.9 自动调零范围：－0.3～2 AU； 3.3.10 补偿范围：0～2AU,每步0.001ＡＵ； 3.3.11 响应时间：0.1 , 0.5 , 2.0 , 4.0 秒； 3.3.12 波长时间程序：有。 3.4柱温箱 3.4.1 操作简便； 3.4.2 控温精度：≤±0.1℃； 3.4.3 控温范围：室温+5℃～80℃。 3.5 Primaide自动进样器 3.5.1 *进样方法：全部体积直接进样方式（高压进样）； 3.5.2 *样品数：≥200个（标准1.5ml样品瓶）； 3.5.3 *扩展样品数： 4mL×128； 3.5.4 标准进样体积：0.1－50μL（100μL标准注射器）；

柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述

柱前衍生和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法的进展与评述 美瑞泰克有限公司中国代表处整理 柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述 以下主要对两种类型的七种应用广泛的氨基酸分析方法进行介绍，讨论和研究。 1、柱前衍生技术和反向色谱分离 氨基酸à衍生物à色谱分离 1.1 AQC(6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚氨基甲酸酯)法 优点：能同时检测一级二级氨基酸，检出现1pmole 缺点：pH值和洗脱温度要求控制准确。 1.2 PITC（异硫氰酸苯酯）法 缺点：PITC试剂进入柱子使柱填料过早的老化，柱子寿命降低，因此过量的衍生剂需要真空干燥除掉，为此，仪器要附设衍生及真空干燥装置。（主要用在生物饲料及食品分析中应用） 1.3 OPA （邻苯二甲醛-巯基乙醇） 缺点：OPA只能与伯氨反应，使二级氨不能同时被检测。由于反向柱分离过程中会有部分衍生物发生裂解，致使OPA-氨基酸的稳定性很差，尤其是胱氨酸和赖氨酸衍生物信号衰减较快，灵敏度低。 1.4 DANSYL-Cl（丹磺酰氯）法 优点：同时可以检测1，2级氨基酸同时能够准确的测定样品中的胱氨酸。 缺点：衍生物在紫外光下不稳定，特别是蛋氨酸对紫外光十分敏感，收率很低，因此衍生反应必须避光进行，而且反应最好要在室温下进行40min左右，如果温度高于45度降低衍生物的产率。 1.5 FMOC-Cl（芴甲氧羟基氯）法 2 柱后衍生技术和阳离子交换色谱分离 2.1 OPA（邻苯二甲醛-巯基乙醇）法 优点：程序化柱后衍生，OPA以极快的速度于氨基酸反应成发荧光团物质，又在很短的时间内进入灵敏度很高的荧光检测器检测，消除了柱前手动衍生是衍生物不稳定的因素，该方法具有较高的分辨率和灵敏度。 2.2 Nin-hydrin（茚三酮）法 优点：程序化衍生，衍生反应速度快（60S），衍生物稳定性好，衍生试剂能同时与一级和二级氨基酸反应并同步检测。 缺点：衍生物只能用紫外检测器检测，使灵敏度较低而不适合微量氨基酸测定；衍生反应条件要求较高，需要附设加温衍生装置，仪器造价高；流动相与衍生液同时泵入体系，体系平和时间较长长。 综上所述：经过改进和完善的柱后衍生，离子交换色谱法，仪器已具备很高的自动化水平，被分离出来的氨基酸在特有的诸侯氧化剂衍生设备中按固定程序与衍生剂迅速反应并被检测，消除了个样品由于衍生时间，衍生温度等因素的差异带来的测试误差，实践证明该方法是继稳定性分辨率，分离度具佳的可靠的氨基酸分析方法，而衍生试剂不直接计入色谱柱，使柱寿命延长时柱后衍生法的一明显优势。 柱前——柱后衍生对照表 自动化程度衍生物的稳 定性柱子的损害前处理氨基 酸 分析的种类一次性设备 投入 柱前衍生法低低大繁琐18-26种小柱后衍生法高高小简单22-45种大

美国Pickering柱后衍生仪-氨基糖苷类抗生素

提取步骤 安普霉素，庆大霉素，新霉素 货号 描述 9410917 ALKION?阳离子交换柱 K + 型 4.0x150 mm 9493020 ALKION?保护柱 K + 型 3.0x20 mm 1700-1118 氨基糖苷类提取溶液, 4x950 mL/瓶 1700-1101 磷酸钾洗脱液, KO1, 4x950 mL/瓶 1700-1102 氢氧化钾洗脱液, KO2, 4x950 mL/瓶 1700-1103 氯化钾洗脱液, KO3, 4x950 mL/瓶 O120 o-PHTHALALDEHYDE (OPA), 1x5 g/瓶 OD104 OPA 稀释剂, 4x950 mL/瓶 3700-2000 THIOFLUOR?, 1x10 g/瓶 色谱柱和试剂 氨基糖苷类抗生素经常使用于动物饲料中用来控制肠道中的微生物，这有助于促进动物生长和健康。这需要一种检测方法来测定饲料和畜牧产品中残留的抗生素浓度。 下面阐述一种检测饲料和畜牧产品中氨基糖苷类物质的简便、稳定的分析方法。样品与同类的提取溶液混合均匀后，粗提液直接进样H P L C 离子交换 柱分析。柱流出物与OPA//Thiofluor?衍生试剂混合，衍生试剂与氨基糖苷类抗生素的主要胺部分形成高效的荧光衍生。 方法 分析条件 色谱柱: ALKION? 阳离子交换, K +型, 4 x 150 mm, 货号9410917 ALKION? 保护柱, 3 x 20 mm, 货号9493020温度: 40 °C 流速: 0.8 mL/min 流动相: KO1, 钾离子缓冲液 KO2, 钾离子滴定用标准液 KO3, 钾离子强度调节剂 柱后衍生条件 柱后衍生系统: Pinnacle PCX 或Vector PCX 反应体积: 0.15 mL 温度: 45 °C 试剂: o-Phthalaldehyde/Thiofluor + Brij 35?流速: 0.3 mL/min 检测器: 荧光检测器 λex: 330 nm λem: 465 nm 样品与提取溶液(货号1700-1118)按1:10(w/v)比例混匀10 min 。离心10 min 。混合液分为三层：颗粒层、悬浮乳状物层、悬浮脂肪层。用小铲小心地刮起并去除脂肪层。把乳状物转移到密封样品瓶中。把此样品瓶置于沸水浴中加热15 min 使乳状物沉淀。离心10 min 。上清液过滤0.45 μm 滤膜后，置于自动进样瓶中。 Aminoglycoside Antibiotics in Feed 饲料中氨基糖苷类抗生素检测

UltiMate3000DGLC双三元液相色谱的在线柱后衍生技术_

selectivity could be achieved by this method according to the selective complementarity of the two columns．In the experiment ，ACN-H 2O was used as the SPE mobile phase with a flow rate of 1mL /min and ACN-10mmol /L NH 4Ac was used as the analytical mobile phase with a flow rate of 1mL /min．Serum samples were injected directly into the SPE column and the biological matrix was washed out with the loading solvent．By rotation of the switching valve ，Clozapine ，Quetiapine and Ｒisperidone were eluted from the SPE cartridge in the back-flush mode and transferred to the analytical column by the chromatographic mobile phase．The whole time of the online SPE purification and chromatographic separation of the analytes was 18min．Calibration curve of Clozapine with good linearity （r =0．9996）was obtained in the range of 10－1800μg /L in human serum ，and the recoveries at low ，medium and high concentration levels were 118．4%，105．0%and 105．4%．Calibration curve of Quetiapine with good linearity （r =0．9997）was obtained in the range of 3．6－640μg /L in human serum ，and the recoveries at low ，medium and high concentration levels were 112．8%，101．1%and 101．5%．Calibration curve of Ｒisperidone with good linearity （r =0．9995）was obtained in the range of 0．71－128μg /L in human serum ，and the recoveries at low ，medium and high concentration levels were 100．7%，97．2%and 98．8%．In conclusion ，the established automated online SPE-HPLC-UV method demonstrated good performance in terms of linearity ，specificity ，limits of quantification ，and was successfully utilized to quantify Clozapine ，Quetiapine and Ｒisperidone in human serum． Keywords High performance liquid chromatography ；Online solid phase extraction ；Clozapine ；Quetiapine ； Ｒisperidone ；Serum （Ｒeceived 18July 2014；accepted 14October 2014）櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫 UltiMate 3000DGLC 双三元液相色谱的在线柱后衍生技术 衍生化是指被测物质与相应的试剂发生化学反应，改变被测物质的化学和物理性质，提高被测物质的检测灵敏度，改善被测物质混合物的分离度，从而达到利于分析的目的。衍生化在HPLC 分析中应用广泛，其中在线柱后衍生使用居多。传统的在线柱后衍生需要一个独立的泵来输送衍生试剂以实现衍生的目的，但这些额外的独立装置有时由于与液相色谱系统本身不能进行很好的联用，往往导致运行不甚理想。赛默飞UltiMate 3000DGLC 双三元液相色谱由于具有两个独立的泵和流路，一个泵进行分析，另外一个泵可以完成如输送衍生试剂等的辅助功能，可以很好地实现在线柱后衍生应用，而且这些功能很多情况只需要一个简单的柱后三通或反应管的连接就可以实现。此外，在HPLC 和MS 联用时，为了增强离子化效率，需要另外的流路泵入甲酸或乙腈，使用UltiMate 3000DGLC 双三元液相色谱也可以简单方便地实现这样的功能。例如食品中黄曲霉毒素的检测，使用UltiMate 3000DGLC 双三元液相色谱的右泵作为分析泵，左泵做衍生泵，以0.05%碘溶液作为衍生反应试剂，一套系统即可方便自动化地实现在线柱后衍生，提高黄曲霉毒素的检测灵敏度，以满足法规的检测要求。7281第12期沈广虎等：在线固相萃取-高效液相色谱法同时测定人血清中氯氮平、奎硫平和利培酮的含量

赛默飞世尔高效液相色谱仪与兰博柱后衍生系统操作规程

赛默飞世尔高效液相色谱仪与兰博柱后衍生系统操作规程 1.打开稳压电源，开启主机各单元和工作站并使两者通讯； 2．在电脑右下脚，出现灰色变色龙图标，如果没出现上图灰色变色龙图标则按如下操作，点开电脑左下脚“开始”、点“程序”选择“chromleon”下的“Server monitor”，点“start”键启动后关闭，则电脑右下脚托盘区，出现灰色变色龙图标；可双击桌面上快捷方式进入工作站； 3.左边为泵的控制区，在“Flow”下输入流速，在“%B”“%C”“%D”内输入比例；右边为检测器控制区，点击“Lamp on”前的方框； 4.将已经脱气的柱后衍生系统的衍生试剂溶液置于储备瓶中，打开反应器的和试剂泵的开关，设定反应器的温度及试剂泵的流速，在温度控制模块按“▲或▼键”调整至适合的衍生温度，按“RUN/STOP”键，该模块开始加热； 5.沿逆时针方向旋转旁通阀排气后，试剂泵模块的“ml/min灯”亮起，按“▲或▼键”调整衍生剂流速，按“RUN/STOP”键该泵模块开始运行，按“Run”键开启试剂泵； 6.打开检测器，三分钟后可以采集基线，点击快捷栏蓝色圆点，在需要采集的通道前打勾，在“Wavelength”内输入波长，采集基线，开始平衡，平衡时间约30分钟； 7.点单针进样：待基线平稳后，点停止采集，点击快捷栏内的进样按钮，输入进样体积，“OK”，再点击采集，进样即可，待所有峰出完后，点击停止采集即可；

8.采集数据，计算结果； 9.完成样品检测后，充分冲洗液相色谱仪与柱后衍生系统； 10.每次实验完成后都应当及时清洗系统，可先用10%的甲醇（或乙腈）水溶液清洗30分钟，再换纯甲醇（或乙腈）清洗30分钟。若长时间不用，可在其清洗完成后将管路卸下并用堵头将各个接头堵死。 11.注意事项：a保持流动相和贮液器的清洁，并定期清洗； b流动相（水应为高纯水和色谱纯试剂）并经过滤脱气； c启动时流量要由小渐大，避免压力的骤然升高； d应使用液相专用进样针，并经常冲洗进样阀； e保持检测器的清洁，每次分析完后连同柱子一道冲洗， 用缓冲盐作流动相时，必须先用水冲洗干净，再逐步 过渡到有机溶剂； f色谱柱必须保存在有机溶剂中； g上机样品必须经过滤处理； h系统长期关闭情况下HPLC泵和柱后衍生系统泵均需 用水/甲醇混合液至少冲洗系统30min，再保存到纯甲 醇里。

PMP柱前衍生高效液相色谱法-终版

糖组成分析（PMP-HPLC） 混合单糖标准品的准备： 称取各单糖标准品（L-Fuc；L-Rha；L-Ara；L-Xyl；D-Man；D-Gal；D-Glc；D-GalA；D-GlcA）溶于去离子水中，配成1mg/ml以待分析。 多糖的水解 称取2-4mg多糖样品于鸡心瓶（10ml）中，加入1ml H2O预溶，再加入1ml 4M的TFA，橡皮膏封闭瓶口，置110℃烘箱中水解（中性多糖水解2h，酸性多糖水解4h）；冷却至室温后，加甲醇多次（4次）除去多余的TFA至无酸味；水解的多糖样品复溶于200μLH2O。 单糖的PMP衍生化 取50μL多糖水解液或50μL混合单糖标准品溶液于2ml EP管中，分别与50μL的0.6mol/L 的NaOH溶液充分混合，加入100μL 0.5mol/L的PMP（0.2613g/3ml）甲醇溶液，塞紧塞子封紧后，漩涡振荡仪混匀；在70℃水浴中反应100min，取出冷却至室温。加入100μL 0.3 mol/L 的HCl中和，再加700μl去离子水以及1ml氯仿萃取，漩涡振荡，静置1-2h。吸取上层水相900μl，再加入900μl的氯仿萃取一次，静置1h，再去上层水相800μl，再加入800μl 的氯仿萃取一次，或用低速离心代替静置处理。用带有0.22μm微孔滤膜的注射器过滤后，装入液相瓶中待HPLC进样分析。 HPLC分析糖组成 Agilent 1260高效液相色谱系统 色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm, 5μm； 流动相：Buffer A: 15%乙腈+85%磷酸盐缓冲液 Buffer B: 40%乙腈+60%磷酸盐缓冲液 磷酸盐缓冲液：0.05M 磷酸二氢钾缓冲液（pH 6.7） KH2PO4 13.6g及NaOH 1.8g溶液2L水中； 乙腈（HPLC级）； 时间（min）Buffer A Buffer B 0 100 0 10 90 10 30 80 20 35 80 20 45 80 20 45.01 100 0 55 100 0 柱温：20℃； 紫外检测波长：254nm； 流速：1ml/min； 进样体积：20μl。

柱后衍生法测定氨基甲酸酯类农药

柱后衍生法测定氨基甲酸酯类农药 摘要：采用NY/T 761-2008标准方法（柱后衍生高效液相色谱荧光检测法）对10种氨基甲酸酯类农药及其代谢产物进行了测定。 关键词：氨基甲酸酯，柱后衍生，蔬菜水果，农残检测 氨基甲酸酯类（Carbamates ）被广泛用作是杀虫剂、除草剂、杀菌剂等。它通过抑制昆虫乙酰胆碱酶（Ache ）和羧酸酯酶的活性，造成乙酰胆碱（Ach ）和羧酸酯的积累，影响昆虫正常的神经传导而致死。 2008年4月30日农业部发布的NY/T 761-2008标准中的第三部分，规定了蔬菜和水果中的10种氨基甲酸酯类农药及其代谢产物多残留液相色谱检测方法：氨基甲酸酯类农药经柱分离后在线水解生成甲胺，再进行荧光衍生，采用荧光检测器检测。根据该方法，对10种氨基甲酸酯类农药及其代谢物混合标准品进行了测定。 仪器： LabAlliance 二元高压梯度系统，带有荧光检测器，配备Sensivate 柱后衍生装置， OV2001型柱温箱，色谱柱：SMT-Elite-C18（4.6 mm × 25 mm ，5 μm ），氨基甲酸酯柱后衍生试剂包。 分析条件： 色谱柱柱温：42℃ 荧光检测器波长：λex=330 nm ，λem=465 nm 流动相：A ：水 B ：甲醇 梯度（A %/T ）：85/0，75/2，75/8，60/9，55/10，20/19，20/25，85/26 衍生试剂：水解：0.05 mol/L NaOH 溶液，0.3 mL/min ，100℃ 衍生：使用0.4%硼酸钠溶液配制的OPA 溶液，含OPA 100 mg/950 mL ，巯基乙醇2 g/950 mL ， 0.3 mL/min ，室温。 进样量：10 μL 标准品色谱图： 6 1 2 3 4 5 7 8 9 10 6 氨基甲酸酯类农药标准品色谱图 1— 涕灭威亚砜 2—涕灭威砜 3—灭多威 4—三羟基克百威 5—涕灭威 6—速灭威 7—克百威 8—甲萘威 9—异丙威 10—仲丁威

Waters高效液相色谱仪与兰博柱后衍生系统操作规程

Waters高效液相色谱仪和兰博柱后衍生系统操作规程 1.打开稳压电源，开启主机各单元和工作站并使两者通讯； 2.双击电脑桌面上的Empower快捷图标，出现Empower登录窗口。输入用户名和密码，点击OK进入Empower工作站。单击高级键，选择用户类型和QuickStart界面，点击确定。然后选择带选定的操作项目以及色谱系统，单击确定。 3.编辑仪器方法和方法组。在流量选项中设置泵模式、总流量以及流动相配比，选择等度或者梯度；在波长模式中选择相应的波长模式，输入所需波长；点击“文件”，选择“另存为”，输入一起方法名称，点击“保存”，点击“文件”，选择“退出”。 4.将已经脱气的柱后衍生系统的衍生试剂溶液置于储备瓶中，打开反应器的和试剂泵的开关，设定反应器的温度及试剂泵的流速，在温度控制模块按“▲或▼键”调整至适合的衍生温度，按“RUN/STOP”键该模块开始加热； 5.沿逆时针方向旋转旁通阀排气后，试剂泵模块的“ml/min灯”亮起，按“▲或▼键”调整衍生剂流速，按“RUN/STOP”键该泵模块开始运行，按“Run”键开启试剂泵； 6.单击平衡系统按钮进入平衡系统/监事基线界面，选择相应的仪器方法，点击平衡/监视器，在监视窗口监视基线至系统平衡，停止监视状态，点击停止按钮。单击样，点击参数编辑快捷方式进入定义单进样参数编辑界面，输入样品名、功能、方法组等参数，点击进样； 7.采集数据，计算结果；

8.完成样品检测后，充分冲洗液相色谱仪与柱后衍生系统； 9.每次实验完成后都应当及时清洗系统，可先用10%的甲醇（或乙腈）水溶液清洗30分钟，再换纯甲醇（或乙腈）清洗30分钟。若长时间不用，可在其清洗完成后将管路卸下并用堵头将各个接头堵死。 10.注意事项：a保持流动相和贮液器的清洁，并定期清洗； b流动相（水应为高纯水和色谱纯试剂）并经过滤脱气； c启动时流量要由小渐大，避免压力的骤然升高； d应使用液相专用进样针，并经常冲洗进样阀； e保持检测器的清洁，每次分析完后连同柱子一道冲洗， 用缓冲盐作流动相时，必须先用水冲洗干净，再逐步 过渡到有机溶剂； f色谱柱必须保存在有机溶剂中； g上机样品必须经过滤处理； h系统长期关闭情况下HPLC泵和柱后衍生系统泵均需 用水/甲醇混合液至少冲洗系统30min，再保存到纯甲 醇里。

关于二级柱后衍生系统的使

二级柱后衍生系统 对于柱后衍生呢大家都很熟悉了，柱后衍生就是样品先经过色谱柱进行分离，样品组分经分离后从色谱柱中流出，在特定的条件下进行衍生化反应，使待测样品中的组分可以被检测器检出。柱后衍生系统是将高效液相色谱仪中通过色谱柱后的样液与衍生试剂混合，混合溶液在一定的时间内通过反应器完成反应，如果反应速度慢，可以通过加热反应器以提高反应速度。有些衍生反应则需要加入两种溶剂，也就是需要先后通过两种反应才能使待测样液完成衍生其检测性被提高，最后混合液进入检测器检测，这种情况呢就会用到二级柱后衍生系统，其中检测器一般为紫外可见光检测器和荧光检测器。最为典型的就是检测氨基甲酸酯类农药残留和检测水中的草甘膦。前者需先水解再进行衍生，后者需要先氧化再进行衍生。一个完整的柱后衍生系统是由计量泵、脉冲阻尼器、加热线圈、反应室组成。如下图所示： 要注意的是衍生试剂配置完成后必须经过过滤和超声脱气才能够使用，避免有杂质和气泡进入损坏管路和影响检测结果的准确性。在通电使用仪器之前先要检查电源插座是否良好接地，一定要确保连接好背面地线！如果发生管路大量漏

液时可能对电气有腐蚀作用，长期腐蚀可能引起漏电，造成事故损失，因此请先确保仪器良好接地再给仪器通电！ 当第一次使用该仪器时，作为衍生系统动力装置的输液泵以下操作步骤不可少： 1．连接所有使用的液路管和衍生试剂，吸取衍生试剂液路管头上要安装溶剂过滤头。 2．拧下排气阀废液口上的PEEK头和废液管。 3．取出厂家配备的备件包中新的PEEK头和注射器。 4．将注射器装好吸液枪头后在排气阀废液口。 5．打开排气阀后，用手抽动注射器进行手动吸液。 6．当衍生试剂进入注射器内，观察并确定进液管内无明显气泡后关闭排气

柱后衍生装置的注意事项及所需要求康诺6000PCR柱后衍生装置

柱后衍生装置的注意事项及所需要求 一：柱后衍生系统的注意事项： 1、保持流动相和贮液器的清洁，并定期清洗。 2、流动相(水应为高纯水和色谱纯试剂)并经过滤脱气。 3、应使用液相专用进样针，并经常冲洗进样阀。 4、启动时流量要由小渐大，避免压力的骤然升高。 5、保持检测器的清洁，每次分析完后连同柱子--道冲洗。 6、色谱柱必须保存在有机溶剂中。 7、用缓冲盐作流动相时，必须先用水冲洗干净，再逐步过渡到有机溶剂。 8、上机样品必须经过滤处理。 9、系统长期关闭情况下泵和柱后衍生系统泵均需用水/甲醇混合液至少冲洗系统,再保存到纯甲醇里。 二：衍生化反应要满足要求： 1、专属性强、检测性高。 2、区别目标物和母液：反应和检测程序的专一性越强，母液中其他物质的干扰越弱。目标物的信号一定要与不反应的背景分开。 3、反应时间要短：缓慢的反应不适合快速分析。对于大多数反应来说不应超过 5min。可通过升温或增加试剂浓度来加快速度。反应不一定要充分，由于反应的进程和管子峰展宽的混合作用，在反应完全之前就会得到最大的信号。 三：柱后衍生装置的优点： 1、采用高灵敏温度传感器，配合控制系统，温控精度标准值。 2、具备双重过温自动断电保护功能，高温报警提示，使用安全。 3、内置大功率加热元件，高效导热内胆，使恒温腔在短时间内达到指定温度并保持稳定。 4、机体表面喷涂耐腐蚀漆料，内置漏液孔，具备耐腐蚀防漏液优点。 5、加厚机体，稳定可靠，可与各种型号液相色谱系统配套。 柱后衍生装置的注意事项及所需要求 一：柱后衍生系统的注意事项： 1、保持流动相和贮液器的清洁，并定期清洗。 2、流动相(水应为高纯水和色谱纯试剂)并经过滤脱气。 3、应使用液相专用进样针，并经常冲洗进样阀。 4、启动时流量要由小渐大，避免压力的骤然升高。 5、保持检测器的清洁，每次分析完后连同柱子--道冲洗。 6、色谱柱必须保存在有机溶剂中。 7、用缓冲盐作流动相时，必须先用水冲洗干净，再逐步过渡到有机溶剂。 8、上机样品必须经过滤处理。 9、系统长期关闭情况下泵和柱后衍生系统泵均需用水/甲醇混合液至少冲洗系统,再保存到纯甲醇里。 二：衍生化反应要满足要求： 1、专属性强、检测性高。 2、区别目标物和母液：反应和检测程序的专一性越强，母液中其他物质的干扰越弱。目标物的信号一定要与不反应的背景分开。

HPLC 柱后衍生方法测定10 种氨基甲酸酯类农药

HPLC柱后衍生方法测定10种氨基甲酸酯类农药 氨基甲酸酯类农药由于具有杀虫谱广，用量少、药效快等优点而得到广泛的应用。但是这类杀虫剂一旦进入人体内，可生成具有致癌作用的亚硝酸化合物，故而氨基甲酸酯类农药并不是绝对安全的。鉴于此，农业部于2008年制定了的新《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》（NY/T 761-2008）。其中氨基甲酸酯类农药的检测种类增加到10种。本文参考新标准，使用岛津快速色谱柱shim-pack XR-ODS （3.0mmI.D.×75mmL. 2.2 μm），建立了针对10种氨基甲酸酯类农药的检测方法，供相关检测人员参考。 ■实验部分检测原理 采用高效液相色谱柱后衍生方法测定氨基甲酸酯类农药。样品经ODS柱分离后，氨基甲酸酯类化合物与氢氧化钠发生水解反应生成甲胺。甲胺与邻苯二甲醛(OPA)和2-巯基丙酸(MEPA)反应生成一种异吲哚产物，可用荧光检测器定量。 试剂与仪器 标准品：准确称量单一标准品，使用甲醇配置成1000 mg/L的标准溶液。取一定量单标配置成10 mg/L混标母液，然后逐级稀释成不同浓度的混标。母液保存于-28℃。 试剂：甲醇，HPLC级；纯水，Milli-Q 超纯水仪制备得到；氢氧化钠，AR；硼酸，AR；2-巯基丙酸和邻苯二甲醛(OPA)，购自国药集团化学试剂有限公司；一级反应试剂：称取1.0g氢氧化钠，溶于500mL水中；二级衍生试剂：称取15mg邻苯二甲醛(OPA)，溶于50mL甲醇中，得到A液；称取3.34g硼酸和0.18g氢氧化钠，溶于400mL纯水中，得到B 液；将A液和B液混合，过滤，脱气后加入11μL 2-巯基丙酸，混合，使用当天配制。所有试剂和样品需用0.45μm以下滤膜过滤。 仪器：Shimadzu氨基甲酸酯柱后衍生系统。具体配置为：输液泵LC-20AD×2和LC-20AB，脱气机DGU-20A5，自动进样器SIL-20A，检测器RF-10A XL，柱温箱CTO-20A，化学反应箱CRB-6A，控制器CBM-20A，工作站LC-Solution。 色谱条件 色谱柱：Shimadzu Shim-pack XR-ODS 75mmL.×4.6mm I.D., 2.2μm；流动相：A相－水，B相－甲醇；流速：1.0mL/min；柱温：42℃；进样量：5μL；波长：Ex=330nm，Em=465nm；一级反应温度100℃，流速0.5mL/min；二级衍生温度50℃，流速0.5mL/min。梯度洗脱程序如表1所示： Time B Conc. 0.00 8 5.00 8 6.00 35 11.00 45 15.00 80 16.00 80 16.01 8 18.00 Stop 表1梯度洗脱程序