吲哚试验

吲哚试验

原理：某些细菌有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸形成吲哚（靛基质），吲哚能与对二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而呈红色。

实验方法：试剂盒法：将对二甲基氨基苯甲醛加入细菌蛋白胨水培养液中。（注：不能摇晃试剂盒）试管法：以接种环将待检菌新鲜斜面培养物接种于Dunham氏蛋白胨水溶液中，置37℃培养24~48h （可延长4~5d）；于培养液中加入戊醇或二甲苯2~3mL，摇匀，静置片刻后，沿试管壁加入Ehrlich氏或Kovac氏试剂2mL。

斑点试验法：将一片滤纸放在培养皿的盖子上或一张载玻片上，滴加1~1.5mL试剂液于滤纸上使其变湿，取18~24h琼脂平板培养物涂布于浸湿的滤纸上，在1~3min内观察。

试验结果

试剂盒法：呈红色反应，形成玫瑰吲哚，为吲哚试验阳性。不出现红色则为阴性。

试管法：出现红色颜色变化为阳性。不出现红色则为阴性。

斑点试验法：棕色的试剂由紫红变为红色者即为阳性。

?M→甲基红（MR）试验

原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解成为甲酸、乙酸、琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下，加入甲基红指示剂可呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、醛、酮、气体和水），培养基pH在5.4以上，加入甲基红指示剂呈橘黄色。本试验常与V-P试验一起使用，因为前者呈阳性的细菌，后者通常为阴性。

试验方法

取一种细菌的24h培养物，接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置37℃培养48~72h，取出后加甲基红试剂（甲基红0.02g，95%酒精60mL，蒸馏水40mL）3~5滴，立即观察结果。如果培养液呈红色者为阳性，橙色者为可疑，黄色者为阴性。

试验结果

培养液呈红色者为阳性，橙色者为可疑，黄色者为阴性。

?V→二乙酰（V-P）试验

原理：某些细菌能发生如下转换：葡萄糖→丙酮酸（脱羧）→乙酰甲基甲醇（Acetymethyl carbinol）→2，3—丁烯二醇（2,3—bytaylene cylycol），在有碱存在时氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物

起作用产生粉红色的化合物。本试验目的在于测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力。大肠埃希菌与产气肠杆菌均能分解葡萄糖，产酸产气，为区分两菌可采用V-P试验及甲基红试验。

试验方法

O’Meara’s法：将被检细菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基后，于35~37℃培养48h，于每毫升培养物中加入0.1mL试剂（40g KOH溶于100mL蒸馏水中，加入0.3g肌酐即成），猛烈摇振混合。

Baritt’法：同上法接种培养细菌，于2mL培养液内加入甲液（6%α-萘酚酒精溶液）1mL和乙液（40% KOH）0.4mL，摇振混合。

试验结果

试验时强阳性者约于5min后，可产生粉红色反应。如长时间无反应，置室温过夜，次日不变者为阴性。

C→枸橼酸盐利用试验

原理：当细菌利用铵盐作为唯一氮源，并利用枸橼酸盐作为唯一碳源时，若细菌能利用这些盐作为氮源和碳源而生长，则能利用枸橼酸钠产生碳酸盐，从而与利用铵盐产生的氨反应，形成NH4OH，使培养基呈碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝（BTB）由淡绿转为深蓝。

试验方法

Simmons氏培养基法：将被检细菌少量接种到培养基中，37℃培养2~4d，观察培养基颜色变化。

Christenten氏培养基法：将被检细菌少量接种到培养基中，接种时先划线后穿刺，孵育于37℃观察7d，观察培养基颜色变化。

实验结果

Simmons氏培养基法：培养基变蓝色，阳性；不变，阴性。

Christenten氏培养基法：培养基变红色，阳性；不变（黄色），阴性。

鉴定结果I M Vi C试验

大肠埃希菌+ + - -

产气杆菌- - + +