应用重定向超速区带离心法纯化HBsAg的研究-1.5
应用重定向超速区带离心法纯化HBs Ag的研究
姚 伟 郑菊梅 孟秀圆
(卫生部兰州生物制品研究所,兰州 730046)
摘 要 采用重定向超速区带离心法进行了从乙肝阳性血清中提纯HBs Ag的研究,获得了一套最佳离心条件,可清除阳性血清中的各种杂蛋白,获得不含乙肝病毒(Dane颗粒)的纯HBs Ag。此方法具有离心时间短、不漏液、故障少及成本低等优点。本试验结果为采用重定向超速区带离心法大规模纯化HBs Ag、基因工程表达产物及其它生物大分子蛋白提供了实验依据。
关键词 重定向超速区带离心 纯化 乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)
分类号 R521.6
The Practice Study for The Purif ication of H BsAg by Reorienting Ultra-Zonal Centrif ugation Y ao Wei Zheng J umei Meng Xiuyan.(L anzhou Institute of Biological Products Lanz hou730046) Abstract W e studied the purifica tio n o f HBsAg fro m the po sitiv e serum fo r HBV by reo rienting ultra-zo na l centrifug ation and g ained a suitable co ndition of centrifuga tio n.The ex tra pr otein was eli-minated by the m eth od.We o btained the pur e HBs Ag which ar e no n-Dane pa rtices.T his method has such charac ters of sho rter centrif ug atio n time,less breakdow n,low er co st and w itho ut lea king o f g radi-ent o r sa mple.T he results prov ided th e evidence fo r applying of r eorienting ultra-zonal centrifuga tio n in the la rg e sca le o f purification of HBsAg,the pro ducts o f g ene ex pr ession and o ther bio logical pr otein.
Key words Reorienting ultr a-zo nal centrifug atio n Purificatio n HBs Ag
区带离心法纯化HBs Ag的传统方法是采用一套专门的密封装置,转头在一定转速的动态情况下进、出样〔1〕。此法的缺点是易漏液,常因真空度不好导致离心失败造成样品损失,而且由于转头K系数较大,限制了离心速度,要达到一定的离心力须延长离心时间,因而使生产周期延长。为寻找到一种大规模纯化HBs Ag 等蛋白质分子的最佳方法,我们采用重定向超速区带离心法〔2〕进行了这方面研究。1964年N.
G.Anderson等〔3〕报道了采用重定向离心法在角度转头上分离DN A的实验。1972年Bond 等〔4〕根据颗粒密度(ρ)和沉降系数(S)用等密度区带离心和速率区带离心法,即S-ρ法分离了HBsAg,后来此法被用于大规模纯化HBsAg。但采用区带转头进行重定向超速区带离心大规模纯化HBsAg的实用报告在国内外报道不多。因此,探索重定向超速区带离心法在HB-sAg等生物大分子分离方面应用的可行性具有很高的实用价值。重定向区带离心的方法是:将梯度液和样品依次泵入区带转头内,然后起动离心。离心结束后停机,静态出样,在整个离心过程中梯度液经过水平—垂直—水平的两次重定向。此过程不影响梯度的线性分布,从而达到了分离纯化样品的目的。
1 材料与方法
1.1 设备与原材料
1.1.1 超速离心机:U ltra80。
1.1.2 重定向区带转头:T Z-28。
1.1.3 输液泵:SYB-G-405型。
1.1.4 紫外检测仪:HD-88-5A1型。
1.1.5 溴化钾:分析纯。
1.1.6 蔗糖:分析纯。
1.1.7 HBs Ag阳性血清:由兰州生物制品研究所疫苗三室提供。
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1.2 试验方法
1.2.1 离心条件的设定
根据含HBsAg 阳性血清中各种蛋白颗粒的密度及沉降系数差异,我们选用了S -ρ法纯化HBsAg ,即采用两次溴化钾等密度区带离心和一次蔗糖速率区带离心,并分别设定了最佳离心条件。由于在离心速度不变的条件下,转头的K 系数越小,效率越高,离心时间越短〔5〕。故可根据转头的K 系数按公式T 2=K 2T 1/K 1计算出离心时间(T )。已知现用R PZ 转头在25000r /min 时的K 系数为550,用蔗糖离心时间为16小时、溴化钾为22小时。而T Z -28转头的K 系数为310,考虑到颗粒浓度及梯度介质等对分离的影响及实际应用的方便,经反复试验,我们选择的最佳离心时间为:蔗糖8小时,溴化钾16小时。
1.2.2 离心方法
取经脱纤维蛋白和硫酸铵盐析后的HBs Ag 阳性血清1360ml,平均分为两份进行第一次溴化钾离心。
转头静止时,用输液泵以40ml /min 的流速依次泵入比重为1.34g /m l 垫液、1.32g /ml 样品、1.28g /ml 及1.04g /ml 梯度液,共1350ml,慢加速起动,离心速度27000r /min ,16小时,20℃。离心后降速待转头停止,用输液泵依次由转头底部抽出样品,经紫外检测仪描记样品在280nm 波长处的吸收曲线,出样后用反向间接血凝法(RP HA )检测样品的效价,并测量其密度值。然
后收取RP HA 效价≥1 128、密度在1.290- 1.150g /ml 部分,经超滤浓缩为480ml 进行第二次溴化钾离心,条件同第一次溴化钾离心。离心后收取R PHA ≥1 128、密度在1.269- 1.164g /ml 部分,经超滤浓缩为100ml ,进行蔗糖离心,梯度液为10%-50%蔗糖溶液,27000r /min,8小时,15℃,其余方法同溴化钾离心。离心后根据A 280的吸收曲线用RP HA 测各组分样品中HBsAg 的效价,用阿贝折射仪检测样品浓度(C %),从HBsAg 阳性的峰顶开始向前隔管取样做电镜检查
。
图1 KBr 等密度超离心后紫外吸收曲线(UV )、
密度(ρ)及血凝效价(RP HA )的关系
Fig.1Th e relationship of uv.ρand RP HA for
KBr iso tonic cen trifugation
图2 蔗糖速率区带离心后紫外吸收曲线(UV )、
蔗糖浓度(C %)及血凝效价(RP HA)关系
Fig.2Th e relations hip of UV,C %and RPHA for
s ucrose rate-zonal cen trifugation
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2 结果
样品经两次溴化钾离心,其紫外吸收图出现三个峰(见图1)。第一峰为球蛋白峰,第二峰为HBsAg与高密度脂蛋白(HDL)及Dane颗粒混合峰,第三峰为低密度脂蛋白(LDL)峰。第一、二峰之间有少量交叉,所收样品密度范围(RPHA≥1128部分)为1.290- 1.150g/m l。蔗糖离心后也出现三个峰(见图2),第一峰为Dane颗粒峰,第二峰为HBsAg峰,第三峰为HDL峰。第二峰电镜检查结果为:15-27管为均匀的22nm球形颗粒即HBsAg,未见Dane 颗粒,电镜检查结果合格〔6〕。
3 讨论
S-ρ法是根据HBsAg与其它血清蛋白的颗粒大小、密度等物理特性〔7、8〕的差异而设定的一种分离方法。根据等密度区带离心的原理,不同密度的颗粒经离心后分别处于与它同密度的区带内。HBs Ag的平均密度为1.2g/ml,LDL 为1.063g/m l,血清杂蛋白为≥1.30g/m l,经等密度区带离心可将其分离。由于阳性血清样品中蛋白浓度较大,经一次溴化钾离心后,HB-s Ag峰与球蛋白峰及LDL峰有少量交叉,所收样品内有少量杂蛋白。经二次溴化钾离心后HBsAg峰呈一独立峰,未与杂蛋白峰交叉,说明已与球蛋白及LDL分离,见图1。根据速率区带离心的原理,直径和沉降系数较大的颗粒沉降的较快。Dane颗粒的直径平均为42nm,S为260-320,HBs Ag的直径平均为22nm,S为33 -45,而HDL的直径平均为10nm,S为3-5,因而经速率区带离心可将其分开。在图2中, HBsAg峰呈一单峰,未与HDL及Dane颗粒峰交叉,说明分离效果较好,经电镜检查证实该峰为不含Dane颗粒的纯HBsAg。根据以上结果我们认为:重定向超速区带离心法用于从乙肝阳性血清中分离HBsAg,用于纯化基因工程表达产物(如CHO细胞表达HBsAg)及在生物领域内分离其它蛋白质等大分子是可行的。采用重定向超速区带离心需注意的是:重定向区带超离心的进样、出样都是在静态进行的,离心过程区带要经过两次重定向,此过程稍不注意可能造成区带之间部分混合,尤其在蔗糖离心时,由于蔗糖粘度大,重定向过程慢,更易造成区带混合。因此,为保证分离精度,离心过程应严格控制进、出样流速,起动时慢加速值应设低一点,从0-500r/min以2-4分钟为宜。另外,梯度液分配要准确,进样中要防止气泡进入,以免打乱梯度。
4 参考文献
1 苏拨贤主编.生物化学制备技术,北京:科学出版社,1986: 169
2 Rick w ood D.Centrifugation Th e Practical approach2nd ed.England:Univ ersity of Es sex,1984:228
3 T.S.W ork&E.W https://www.360docs.net/doc/a510511729.html,bo ratory Tech niques in Bioche-mis try and M olecular Biology.North-Holland,1976:189-196
4 Brakke,M.K,:M eth ods in virology,2:137,1967
5 陶宗晋主编.离心沉降分析技术,北京:科学出版社,1983: 95
6 中国生物制品规程(一部).血源乙型肝炎疫苗制造及检定规程1995:142
7 刘锡光等主编,病毒性肝炎实验诊断,北京:人民卫生出版社,1986:14,245
8 P.Adamowicz et al.Vaccine,Vol.2,Sep1984:211 (收稿 1997-09-23 修回 1998-01-13)
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集中式网络管理和分布式网络管理的区别及优缺点
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servlet请求转发的三种方式
servlet请求转发的三种方式 servlet中的请求转发主要有三种方式： 1、 forward：是指转发，将当前request和response对象保存，交给指定的url 处理。并没有表示页面的跳转，所以地址栏的地址不会发生改变。 2、 redirect：是指重定向,包含两次浏览器请求，浏览器根据url请求一个新的页面，所有的业务处理都转到下一个页面，地址栏的地址会变发生改变。 3、 include：意为包含，即包含url中的内容，进一步理解为，将url中的内容包含进当前的servlet当中来，并用当前servlet的request和respose来执行url中的内容处理业务.所以不会发生页面的跳转，地址栏地址不会发生改变。 测试如下： 首先编写三个html界面：分别是登录界面:login.html;登录成功界面：success.html;登录失败界面:fail.html. 之后，处理登录逻辑的servlet类如下： Java代码
运行后如果输入正确的用户名密码，则执行include方法，界面显示：include 包含。登录成功！并且地址栏地址未改变，若是输入错误登录名或者密码，界面显示：登录失败！并且地址栏地址改变。其中要注意的是sendRedirect方法中在要跳转的页面url前必须加上当前web程序路径名，这个路径通过request.getContextPath()可以得到。 如果吧其中include方法改为forward方法: Java代码 登录时输入正确信息，则跳转的页面地址不变，显示：登录成功！不包含url中的内容。 总结如下： redirect与include、forward的区别在于是不是同一个Request，redirect会有两次交互。 include与forward的区别在于输出的内容，include包含本身servlet与跳转页面内容的结果，而forward不包含本身servlet的内容。
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1.格式 这是一个链接 这是一个段落
换行
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Linux输入输出重定向的原理和实现
Linux I/O重定向的原理和实现 在Unix系统中，每个进程都有STDIN、STDOUT和STDERR这3种标准I/O，它们是程序最通用的输入输出方式。几乎所有语言都有相应的标准I/O函数，比如，C语言可以通过scanf从终端输入字符，通过printf向终端输出字符。熟悉Shell的朋友都知道，我们可以方便地对Shell命令进行I/O重定向，比如find -name "*.java" >testfile.txt 把当前目录下的Java文件列表重定向到testfile.txt。多数情况下，我们只需要了解I/O重定向的使用就够了，但是如果要编程实现类似Shell的I/O重定向以及管道功能，那么就需要清楚它的原理和实现。 下面本文就以Linux系统为具体例子，介绍I/O重定向的原理和实现（文中实验环境为Ubuntu 12.04，内核版本3.2.0-59）。 文件描述符表 理解I/O重定向的原理需要从Linux内核为进程所维护的关键数据结构入手。对Linux 进程来讲，每个打开的文件都是通过文件描述符(File Descriptor)来标识的，内核为每个进程维护了一个文件描述符表，这个表以FD为索引，再进一步指向文件的详细信息。在进程创建时，内核为进程默认创建了0、1、2三个特殊的FD，这就是STDIN、STDOUT和STDERR，如下图所示意： 所谓的I/O重定向也就是让已创建的FD指向其他文件。比如，下面是对STDOUT重定向到testfile.txt前后内核文件描述符表变化的示意图 重定向前：
重定向后： 在I/O重定向的过程中，不变的是FD 0/1/2代表STDIN/STDOUT/STDERR，变化的是文件描述符表中FD 0/1/2对应的具体文件，应用程序只关心前者。本质上这和接口的原理是相通的，通过一个间接层把功能的使用者和提供者解耦。 下面我们通过strace命令跟踪一下echo命令的系统调用： dagang@ubuntu12:~$ strace echo hello 2>&1 >/dev/null | grep write write(1, "hello\n", 6) = 6 我们可以看到write(1, "hello\n", 6) 这样一个系统调用，它的第一个参数1就是代表的STDOUT的FD，这说明对于echo程序，它只管（通过标准I/O函数从STDOUT）向FD 1写入，而不关心它们FD 1到底对应的是哪个文件。 Shell正是通过I/O重定向和管道这种特殊的文件把多个程序的STDIN和STDOUT串联在一起组成更复杂功能的，下面是Shell中通过管道的示意图： 下面我们用一个实际的例子来体验一下： dagang@ubuntu12:~$ sleep 30 | sleep 40 & [1] 5584 dagang@ubuntu12:~$ pgrep -l sleep 5583 sleep 5584 sleep dagang@ubuntu12:~$ ll /proc/5583/fd total 0 lrwx------ 1 dagang dagang 64 Feb 27 13:41 0 -> /dev/pts/3 l-wx------ 1 dagang dagang 64 Feb 27 13:41 1 -> pipe:[246469] lrwx------ 1 dagang dagang 64 Feb 27 13:41 2 -> /dev/pts/3 dagang@ubuntu12:~$ ll /proc/5584/fd
java Servlet请求转发和重定向
?请求转发 ?请求转发是指将请求再转发到另一资源（一般为JSP或Servlet）。此过程依然在同一个请求范围内，转发后浏览器地址栏内容不变 ?请求转发使用RequestDispatcher接口中的forward()方法来实现，该方法可以把请求转发到另外一个资源，并让该资源对浏览器的请求进行响应 RequestDispatcher rd = request.getRequestDispatcher(path); rd.forward(request,response); 或 request.getRequestDispatcher(path) .forward(request,response); ?重定向 ?重定向是指页面重新定位到某个新地址，之前的请求失效，进入一个新的请求，且跳转后浏览器地址栏内容将变为新的指定地址 ?重定向是通过HttpServletResponse对象的sendRedirect()来实现，该方法相当于浏览器重新发送一个请求 response.sendRedirect(path); ?请求转发和重定向区别如下： ?forward()只能将请求转发给同一个Web应用中的组件，而sendRedirect()方法不仅可以重定向到当前应用程序中的其他资源，还可以重定向到其他站点的资源。
?sendRedirect()方法重定向的访问过程结束后，浏览器地址栏中显示的URL会发生改变，由初始的URL地址变成重定向的目标URL；而调用forward()方法的请 求转发过程结束后，浏览器地址栏保持初始的URL地址不变。 ?forward()方法的调用者与被调用者之间共享相同的request对象和response对象；而sendRedirect()方法调用者和被调用者使用各自的request对象和response 对象，它们属于两个独立的请求和响应过程。 ?使用请求对象(request)存储数据（在servlet中存，在JSP中取）request. setAttribute(“score”,score); int score=(INTEGER)request. getAttribute(“score”); ?HttpServletRequest接口的方法： public void setAttribute(String name, Object obj) public Object getAttribute(String name) public Enumeration getAttributeNames() public void removeAttribute(String name) ?使用HttpSession对象存储数据 HttpSession session=request.getSession(); session. setAttribute(“score”,score); int score=(Integer) session. getAttribute(“score”); ?HttpSession接口的方法 public void setAttribute(String name, Object obj) public Object getAttribute(String name) public Enumeration getAttributeNames()
服务器重定向方法
以前也没怎么关注301重定向，第一因为没有网站要重定向，第二对于不带www的域名我都是用的转发到带www的域名。不过一场风波之后，很多服务商已经不提供转发服务了，虽说易名现在还可以享用到免费的转发服务，但是却不能不带www的转发到带www的同时进行MX记录解析，这对于需要MX解析的朋友也是一大烦恼。 而且有些域名在国外，转发更是用不了，也只能进行301永久重定向了，不然搜索引擎是把不带www 的站和带www的站分开对待的，只是我们习惯于用带www的域名罢了。 在网络上看了些教程，再根据自己的实践，也终于搞定了IIS服务器上的301永久重定向设置问题。实现方法如下： 1.新建一个站点，对应目录如E:\wwwroot\301web。该目录下只需要1个文件，即index.html或者加个404.htm。绑定要跳转的域名，如图： 2.在IIS中选中刚才我们建立的站点，右键，属性，主目录，选择重定向到，输入网址如： https://www.360docs.net/doc/a510511729.html,，同时注意选中下面的资源的永久重定向选项。如下图：
3.到此，我们已经完成了将https://www.360docs.net/doc/a510511729.html,这个域名301重定向到https://www.360docs.net/doc/a510511729.html,的工作。 注意问题： “上面输入准确的URL(X)”这个选项建议不要选。 不选的结果是： 当输入https://www.360docs.net/doc/a510511729.html,转到了https://www.360docs.net/doc/a510511729.html,， 当输入https://www.360docs.net/doc/a510511729.html,/sanwen/suibi/时，转到了https://www.360docs.net/doc/a510511729.html,/sanwen/suibi/。 选上的结果是： 当你输入https://www.360docs.net/doc/a510511729.html,或者https://www.360docs.net/doc/a510511729.html,/sanwen/suibi/都会转到https://www.360docs.net/doc/a510511729.html,。 好了，如果只是想把不带www的转到带www的或者其他没有用过的域名转到正在使用的域名，这样就可以了。但是如果你要的域名已经做过网站，想要把权重传递给新网站，可以参考下面这个方法： 第一步同上，主要是第二步，如图：
序列超速离心分离血浆脂蛋白
序列超速离心分离血浆脂蛋白 [目的与要求] 了解超速离心分离技术的原理，掌握制备性分离血浆脂蛋白的方法。 [原理] 基本原理见第六章6.1、6.2节。 本实验采用正常人抗凝血浆，以NaBr为密度介质，利用各脂蛋白颗粒密度不同，经过序列超速离心大量制备各血浆脂蛋白，经透析脱盐、PEG20000浓缩后保存备用。 [操作步骤] 1．血浆制备：取献血员全血400mL，EDTANa2抗凝，1000rpm离心15min，分离 血浆。根据血浆体积，加入0.015%的苯甲基氟磺酰（PMSF），防止脂蛋白变性。 2．CM和VLDL分离：血浆中加入适量的NaBr，调节密度至1.019g/ml，分置于离心管（38.5ml/管）中，加盖，用1.019g/ml密度液平衡，放入60Ti转头，在10℃下30，000rpm （100，000×g）离心20小时。CM和VLDL浮于离心管上层，用吸管小心吸取。 3．LDL分离：下层溶液中加入适量的NaBr，调节密度至1.060g/ml，分置于离心管中，加盖，用1.060g/ml密度液平衡，放入60Ti转头，在10℃下40，000rpm（170，000×g）离心24小时。LDL浮于离心管上层，用吸管小心吸取。 4．Lp（a）和HDL分离：下层溶液中加入适量的NaBr，调节密度至1.125g/ml，分 置于离心管中，加盖，用1.125g/ml密度液平衡，放入60Ti转头，在10℃下45，000rpm （225,000×g）离心24小时。Lp（a）、HDL和少量LDL浮于离心管上层，用吸管小心吸取。 5．HDL分离：下层溶液中加入适量的NaBr，调节密度至1.21g/ml，分置于离心管中，加盖，用1.21g/ml密度液平衡，放入60Ti转头，在10℃下50，000rpm（280，000×g）离心24小时。HDL浮于离心管上层，用吸管小心吸取。下层含有总量的50%的游离apoA-Ⅳ，可用于分离apoA-Ⅳ。 6．透析：已分离好的各部分脂蛋白含有大量的NaBr，需要透析脱盐。将各脂蛋白 溶液分别装入透析袋中，对抗0.01mol/L PBS（pH7.4）溶液透析过夜。 7．浓缩：将透析过夜的脂蛋白溶液连同透析袋一起放入盛有40%的PEG20000的 烧杯中，浓缩至适当体积。 [试剂] 1．NaBr 2．密度液：以NaBr与双蒸水配制，以比重计测定密度。配制成1）1.019g/ml； 2） 1.060g/ml；3）1.125g/ml；4）1.21g/ml 四种密度液。 3．苯甲基氟磺酰（PMSF） 4． 0.01mol/L PBS（pH7.4） 5. 40% PEG20000 [材料] 1．比重计： 1.000-1.100g/ml和1.100-1.200g/ml比重计 2．离心管：聚碳酸酯厚壁离心管，Beckman 3．角度转头： 60Ti Beckman 4．超速离心机：Beckman LM-80 5.平衡天平
重定向与转发的区别
重定向与转发的区别： 1.重定向访问服务器两次，转发只访问服务器一次。 2.重定向可以看见目标页面的URL，转发只能看见第一次访问的页面URL，以后的工作都是有服务器来做的。 3.重定向跳转后必须加上return，要不然页面虽然跳转了，但是还会执行跳转后面的语句，转发是执行了跳转页面，下面的代码就不会在执行了。 4.在request级别使用信息共享，使用重定向必然出错 5.还有一个大的区别就是，重定向可以访问自己web应用以外的资源 一、调用方式 我们知道，在servlet中调用转发、重定向的语句如下： request.getRequestDispatcher("new.jsp").forward(request, response);//转发到new.jsp response.sendRedirect("new.jsp");//重定向到new.jsp 在jsp页面中你也会看到通过下面的方式实现转发：
Linux重定向和管道
6.3 Linux重定向和管道 实验目的 通过重定向和管道操作： 1) 熟悉输入/输出(I/O) 重定向； 2) 把标准输出重定向创建一个文件； 3) 防止使用重定向的时候覆盖文件； 4) 把输出追加到一个现有的文件中； 5) 把一个命令的输出导入到另一个命令中。 实验内容与步骤 在本实验中将会用到下列命令： pwd：显示当前的工作路径。 cd：改变目录路径。 ls：显示指定目录的内容。 more：分页显示文件的内容。这是用于显示文本文件的首选方法。 head：截取显示文件的开头部分(默认为开头10行) 。 tail：截取显示文件的结尾部分(默认为最后10行) 。 cal：有关日历的命令。 set：当前shell下定义的一系列变量及其值。 echo：显示变量的值。 ps：显示当前进程的信息。 data：显示或设置系统日期和时间。 grep：查找文件中指定的关键字的行并输出。 步骤1：开机，登录进入GNOME。 在GNOME登录框中填写指导老师分配的用户名和口令并登录。 步骤2：访问命令行。 单击红帽子，在“GNOME帮助”菜单中单击“系统工具”-“终端”命令，打开终端窗口。 1. 使用重定向标准输出符号 步骤3：重定向标准输出，创建一个文件。 右尖括号或称大于符号(>) 把命令的输出发送到一个文件中：使用单个右尖括号，当指定文件名不存在的时候，将创建一个新文件；如果文件名存在，它将被覆盖。(注意：命令、重定向符号和文件名之间的空格是可选的) 。
重定向标准输出命令的格式是： command > file 1) 为核实当前所在目录位置，使用什么命令？ ___pwd________________________________________________________ 如果当前位置不在主目录中，使用什么命令可以改变到主目录中？ ___cd /__________________________________________________________ 2) 如果希望把文件和目录列表截获，存储为主目录中的一个文件，这样可以追踪主目录中有什么文件。使用什么命令，把长文件列表的输出重定向，创建一个叫做homedir.list的文件。 ____ls >homedir.list________________________________________________ 3) 新文件homedir.list被放在哪里？ __根目录_________________________________________________________ 使用ls命令核实新文件存在。 4) 使用什么命令，以一次一屏的方式，来查看刚才创建的文件内容？ __ls –l|more homedir.list____________________________________________ 5) 使用head命令截获homedir.list文件的前10行，通过重定向，创建一个叫做dhomedir.list-top-10的新文件。应该使用什么命令？ ___head –10 homedir.list >dhomedir.list-tail-10_________________________ 使用more命令查看文件的内容。 6) 使用tail命令，截获homedir.list文件的最后10行，通过重定向，创建一个叫做dhomedir.list-top-10的新文件。使用什么命令？ ___tail –10 homedir.list >dhomedir.list-top-10___________________________ 使用more命令查看文件的内容。 7) 截获cal -y命令的输出，把它存到名为calendar的文件中。查看文件的内容。截获了什么？ ___cal –y>calendar |more calendar 截获了2008年12个月份的日历 8) 截获cal 2010命令的输出，把它存到名为calendar的文件中。查看文件的内容。其中有什么内容？ _ cal -y 2010 > calendar |more calendar 2010年12月份的日历 日历有什么变化？ ____不是2008年，变成2010年了_____________________________________ 步骤4：防止使用重定向的时候覆盖文件。 在bash shell中，一个叫做noclobber的选项可以用来设定防止在重定向的过程中覆盖文件。可以在命令行中使用$set -o noclobber命令来完成。o代表选项。 为了重新激活clobber特性，使用$set -o noclobber；撤消则用set +o noclobber。 如果你使用的是csh shell，为了激活/撤消C shell中的clobber特性，使用set noclobber和unset noclobber。 1) 输入命令，打开shell中的noclobber选项。输入什么命令？ ___set –o noclobber__________________________________________ _____ 2) 输入命令ls -l > homedir.list，结果是什么？ ___bash:homedir.list:cannot overwrite existing file.因为clobber选项防止了重定向过程覆盖文件___________________________________ _ _ 3) 输入命令ls -l > homedir.list2，结果是什么？