API 20E及API20NE使用步骤

API 20E、API 20NE使用说明：

概要说明：

API 20 E 是肠杆菌科和其它非苛养G-杆菌的标准鉴定系统，包括21 个标准化微型生化测试和鉴定资料库可鉴定的菌谱名录请参考说明书后的鉴定表。

原理：

API 20 E 试验条是由20 个含干燥底物的小管所组成，这些测定管用细菌悬浮液接种培养一定时间後通过代谢作用产生颜色的变化或是加入试剂後变色而观察其结果，根据说明表判读反应参照分析图索引或使用鉴定软件得到鉴定结果。

试条的准备：

准备一个培养盒盘和盖子，倒入5mL蒸馏水或软化水，于盘的蜂窝小凹中，造成一个湿室。在盘的边缘写上编号。

从报装中取出实验条放到盘中。

API 20E操作步骤：

1．取API 0.85% NaCl（5mL）培养基或使用5mL0.85%无杂质生理盐水

2．用吸管或接种针从分离物的平板上挑取单个分纯菌落至悬浮基物中建议适用新鲜培养3．仔细研匀以达到均一的细菌悬液

4．用同一根吸管，将菌悬液充满[CIT]、[VP]和[GEL]管的管部和杯部（加满）

5．其他管仅充满管部（不是杯部）

6．ADH、LDC、ODC、H2S和URE管用矿物油覆盖以形成厌氧环境

7．盖上培养盒

8．孵育18~24小时

结果判读：

添加附加试剂：

TDA试验加1滴TDA试剂深褐色为阳性反应

IND试验加1滴JAMES试剂反应立即发生粉红色出现为阳性反应

VP试验加1滴VP1和1滴VP2试剂至少等待10分钟浅粉或红色表示为阳性结果如浅粉红色在10至12分钟内出现判断结果为阴性

NO2测定：各加一滴Nit 1 和Nit 2试剂於葡萄糖管内，待2~3分钟後，红色表示阳性，阴性反应（黄色）可能由於还原至N2（有时还有气泡）：加2-3mg锌粉到葡萄糖管，5分钟後，如果管保持黄色表示N2阳性记录於报告

对照结果判读（加入附加试剂前阳性结果包括GLU试验的数量少于3个重新培养21小时且不要加任何试剂）

板条的准备

准备一个培养盒，在盒子中加入5ml 纯水，以建立一个湿润的环境。将板条放入盒子中

菌液的制备

取一个装有无菌生理盐水的试管。

挑数个独立菌落在生理盐水中混匀，制成一个0.5 MAC标准浑浊度的菌悬液。

板条的接种

用无菌注射器吸取生理盐水菌液到NO3 至PNPG的试验管中（杯部分不需加）。

加矿物油到GLU ，ADH 和URE 试验管中，直至呈凸出的新月形

打开AUX培养基安瓿瓶，加入200ul（4－8滴）剩余的生理盐水菌液，混合均匀并避免形成气泡。从GLU 至PAC 试验管要注满AUX菌液，管的表面呈平的或稍凸，但不能凹下去或呈凸出的新月形。。

盖上盖子在30－35?C下培养24小时。

板条读数

24小时后，参照生化反应表读数，并记录所有自然发生的反应。

按下列要求读实验NO3 和TRP：

NO3 实验: 加一滴NIT1和NIT2试剂至NO3管中，5分钟后，呈现红色为阳性反应。如果是阴性反应，则在NO3的管中加入2－3mg的锌粉，如果5分钟后仍是无色，则N2为阳性反应。如果产生粉红色，则为阴性反应。

TRP 实验：加一滴JAMES试剂，反应立即发生，产生粉红色为阳性。

同化试验

观察GLU 至PAC 试验管中细菌生长情况，不透明杯为阳性反应。

鉴别

把板条中的反应编成数字代码后在APILAB Plus 软件查出菌种。

如提示如下情况，板条必须重新培养：

IDENTIFICATION NOT V ALID BEFORE 48 HR INCUBATION.

在培养48小时以前得出的鉴定结果是无效的。

如发生上述情况，则在NO3 和TRP 的微型管中加入矿物油，在35?C下，再培养24小时，除了前三管即NO3, TRP和GLU只能取24小时的结果外，其它再读一次结果。