超高效液相色谱_电喷雾串联四极杆质谱法检测牛奶中22种喹诺酮类抗菌素
超高效液相色谱 电喷雾串联四极杆质谱法检测牛奶中22种喹诺酮类抗菌素
包晓丽1
任一平2
张虹
*1
1
(浙江工商大学食品与生物工程学院,杭州310035)
2
(浙江省疾病预防控制中心,杭州310009)
摘 要 应用液相色谱 电喷雾串联四极杆质谱仪,检测牛奶中的喹诺酮类(QN s)抗菌素。样品经柠檬酸磷酸盐缓冲液(M cll va i ne)超声提取,采用固相萃取(SPE)方法净化提取液并对目标物质进行富集,用U PLC M S /M S 检测。实验通过空白基质溶液稀释标准,建立校正的标准曲线,可以降低基质对离子化的干扰。结果表明:吡哌酸、依诺沙星、西诺沙星、奥索利酸在3~300 g /kg ,帕珠沙星在5~500 g /kg ,氧氟沙星、加替沙星、司帕沙星在0 5~50 g /kg ,其余14种喹诺酮类化合物在1~100 g /kg 的线性范围内均具有良好的线性关系,相关系数在0 9851~0 9997之间,定量限(LOQ )为0 008~0 339 g /kg 。除了氟甲喹、萘啶酸、那氟沙星的回收率小于60%外,其它喹诺酮的回收率均在63.1%~94.6%之间,相对标准偏差为0 86%~13.12%。关键词 超高效液相色谱 串联质谱,喹诺酮类抗菌素,牛奶
2008 05 22收稿;2008 12 15接受
本文系浙江省科技计划重点项目(No .2008C22051)资助*E m ai:l hongzh1316@m ai.l zjgsu https://www.360docs.net/doc/b91550906.html,
1 引 言
喹诺酮类(QN s)药物是一类抗菌作用强,抗菌谱广的人工合成抗菌药。近年来,该类药物在牛奶中残留的现象普遍存在,从而危害人类健康。为了对QN s 类兽药残留实施监控,许多国家纷纷制定出喹诺酮在动物性食品中的限量。美国FDA 规定了家禽肉中的部分QNs 的限量。日本批准使用的QN s 仅有恩诺沙星(E NR )、二氟沙星、奥比沙星、达氟沙星、马波沙星、氧氟沙星和恶喹酸。欧盟在1999年3月公布的N o .508/1999号
[1]
法规中对牛奶中单诺沙星,氟甲喹,马波沙星,恩诺沙星和环丙沙星(C I P)的
最高残留限量作了规定。我国农业部发布的235号和236号公告对牛奶中QN s 的限量作了规定,并公布了对恩诺沙星和环丙沙星、恶硅酸和氟甲硅的检测方法
[2]
。
目前检测喹诺酮类药物的方法很多,包括免疫法[3~5]
、薄层色谱法[6]
、高效毛细管电泳
[7,8]
、高效液
相色谱
[9~15]
及液质联用技术
[15~19]
。其中最常用的方法是高效液相色谱法,分别使用紫外、荧光、二极
管阵列检测器和质谱检测器来检测。可是由于QN s 种类繁多,有些氟喹诺酮对UV 和FLD 的灵敏度不高。质谱检测器
[15~17]
具有高灵敏度和选择性,定性、定量准确,适合对QN s 进行多组分的快速检测。
目前,用LC MS /M S 确证并检测牛奶中QN s 残留的研究并不多,而且被检测QNs 的种类仅十几种,有必要建立能够检测更多种QN s 的液质联用方法。本研究采用固相萃取方法作为样品前处理的净化方法,结合超高压液相色谱四极杆串联质谱联用技术,同时检测牛奶中22种喹诺酮类药物。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
AC QU I TY TM
超高效液相色谱仪、M icr o m ass
Quattro U lti m a
TM
Pt 质谱仪(W aters 公司);A llegra
TM
X 22R 型离心机(Beck m an 公司);M illi Q 超纯水器(美国M illipore 公司);ULTRA TURRAX T 25型均质器(I K A WERKA 公司);KQ 500E 型超声仪(昆山超声仪器有限公司);M ilfordM assachuse tts 固相萃取装置(W aters 公司);B loud E l u t Plexa 固相萃取柱(3mL ,60m g ,瓦里安公司)。
诺氟沙星(NOR ),环丙沙星(C I P),洛美沙星(LOM ),氧氟沙星(OFL),氟罗沙星(FLE ),司帕沙星
第37卷2009年3月
分析化学(FENX I HUAXU E) 研究报告Ch i nese Journa l o f A na l y tica l Che m i stry
第3期389~394
(SPA ),培氟沙星(PEF),依诺沙星(ENO),均购于中国药品生物制品检定所;加替沙星(GAT),帕珠沙星(P AZ),莫西沙星(MOX),那氟沙星(NAD ),购于Toronto Researc h Che m i c als 公司;恩诺沙星(ENR ),沙拉沙星(SAR),萘啶酸(NAL),奥索利酸(OXO ),氟甲喹(FL U ),达氟沙星(DAN ),二氟沙星(D I F),马波沙星(M BF),均购于Dr .Ehrenstorfer Gm b H 公司;西诺沙星(C I N )和吡哌酸(PI P)购于S i g m a 公司;甲醇和乙腈(色谱纯,M erck 公司);甲酸(99%,Am eisensaeure 公司);柠檬酸,N a 2H PO 4和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)均为分析纯。EDTA M cllva i n e 缓冲溶液:0 2m ol/L Na 2H PO 4溶液和0 1mo l/L 柠檬酸溶液混合(p H 4.0),并加入适量EDTA 。2.2 样品预处理
取牛奶样品2.0mL 于离心管中,加入10mL 缓冲液匀浆30s ,在0 、18000r/m i n 下离心10m i n ,将上清液转移,按同样方法再提取一次,合并两次提取液,滤液经固相萃取柱净化。固相柱使用前依次用3mL 的甲醇、水和缓冲液活化。提取液过固相柱,用1mL 5%甲醇 水溶液淋洗,减压抽干,6mL 甲醇洗脱。洗脱液用氮气吹干,用初始流动相定容至2mL ,溶液过0 22 m 滤膜后待测。
取2.0mL 空白奶样10份,每份样品按上述萃取和净化过程进行处理,得到20mL 基质提取液。根据需要,用该基质溶液稀释标准储备液,配制成适当浓度的标准工作液。2.3 色谱质谱条件
W aters AC QU I TY SH I E LD RP 18色谱柱(100mm 2.1mm,1.7 m );流动相:A 液为甲醇/乙腈溶液(4/6,V /V );B 液为0 2%甲酸水溶液。流速:0 3mL /m i n ;柱温:40 ;进样体积:10 L ;样品温度:25 ;梯度洗脱:0~4.0m i n ,12%A,保持4m i n ;4.1~5.0m in ,A 液线性增加至17%;5.1~11.0m i n ,A 液线性增至48%;11.1~11.3m in ,A 液变至100%,保持0 5m i n ;12.0m i n ,A 液减小至12%。
ESI+离子源:毛细管电压3kV,锥孔电压40V,离子源温度120 ;RF 透镜1,40V;RF 透镜2,0 4V;脱溶剂温度350 ;脱溶剂气体流量500L /h 。质量分析器:低端分辨率1,13V;高端分辨率1,13V;离子能量1,1e V;低端分辨率2,13V;高端分辨率2,13V;离子能量2,2e V 。
3 结果与讨论
3.1 流动相的选择
在流动相中加入甲酸能增加QN s 在ESI+模式下的离子化效率。甲酸浓度为0 2%时,响应值最高。分别在流动相中加入0 2%甲酸或10mm o l/L 醋酸胺,结果发现在加入甲酸后,QNs 标准溶液的分离效果和峰形均优于醋酸胺。选择甲酸 乙腈流动体系,各QN s 出峰时间最快,但分离效果差,而随着甲醇加入量的增加,灵敏度逐渐增强。在V (乙腈)!V (甲醇)=6!4时,分离度、峰形和响应值均较满意。3.2 母离子和子离子的选择
用初始流动相稀释各个喹诺酮单标,对每个单标进行全扫描,确定每种喹诺酮的母离子质量数,然后分别对子离子及碰撞能量进行优化,从中选出丰度最高的碰撞能量作为最佳碰撞能量,选择两个丰度比较高的子离子作为定性和定量离子,建立多离子反应监测(MRM )模式,各种喹诺酮类药物的质谱采集参数见表1,总离子色谱图见图1。
图1 100 g /L 标准品总离子流色谱图
F i g .1 Ionic chro m a t og ram o f standard at 100 g /L
1~22峰编号同表1(t he p eaks num ber i s t h e sa m e as i n Tab le 1)。
390
分析化学第37卷
表1 喹诺酮类质谱采集参数
T able 1 Pa rame ters f o rM S M S detecti on o f qui no l ones
序号No .喹诺酮类Qu i n ol on es
母离子
Parent ion (m /z )碎片离子
Frag m en t i on (m /z )(碰撞能量Colli s i on al
energy ,e V )
定性/定量离子丰度比Abundance rati o of quali tati ve ion to qu anti tati ve ion (%)
1吡哌酸P i pe m i d i c aci d ,PIP 304.3286.5*(15)217.4(15)222马波沙星M ar b ofl oxaci n ,M BF 363.3320 4*(12)345.5(18)113氟罗沙星F l eroxacin ,FLE 370 4326.4*(15)269.3(25)
414依诺沙星Enoxaci n ,ENO 321.3303.4*(15)232.4(30)375帕珠沙星Paz u fl oxaci n ,PAZ 319.3301.4*(10)281.4(20)736氧氟沙星Ofl oxaci n ,OFL 362.4318.4*(16)344.4(18)47培氟沙星Pefloxaci n,PEF 334.4290 4*(16)316.4(18)668诺氟沙星Norfl oxacin ,NOR 320 3276.3*(14)302.3(18)649环丙沙星C i p rofloxaci n,C IP 332.3288.3*(16)314.3(18)5110达氟沙星Danofloxaci n,DAN 358.4340 3*(20)82.1(32)2811洛美沙星Lo m efloxaci n,LOM 352.4265.3*(20)308.3(14)9212恩诺沙星En rofloxaci n ,ENR 360 4316.4*(16)342.4(18)2813二氟沙星D ifl oxaci n ,DIF 400 4356.5*(15)299.4(25)5914沙拉沙星S arafl oxai n,SAR 386.4342.4*(16)368.4(20)4615加替沙星Gatifloxaci n,GAT 376.3332.4*(15)261.4(25)5016司帕沙星Sp arfloxaci n,SPA 393.4292.4*(20)349.5(15)6117莫西沙星M oxifl oxaci n,MOX 402.5384.5*(18)364.5(24)2718西诺沙星C i noxaci n ,C I N 263.2245.3*(18)217.3(12)8319奥索利酸Oxoli n i c aci d ,OXO 262.2244.2*(15)216.3(25)920萘啶酸Nali d i x i c aci d ,NAL 233.2215.2*(15)187.1(24)2821氟甲喹F l um equ i ne ,FL U 262.2244.2*(18)202.1(26)3522
那氟沙星Nad ifloxaci n ,NAD
361.3
343.3*(20)
283.3(30)
9
*:定量离子(t he quan ti tative i on)。
3.3 样品前处理条件的选择
研究了甲醇、乙腈和EDTA M c ll v a i n e 缓冲液对QN s 的提取效果。结果发现,EDTA M c ll v a i n e 缓冲液对大部分的QNs 提取效果优于其它两种提取液,而甲醇和乙腈的提取率普遍偏低,最终选择EDTA M cllvaine 缓冲液作为提取溶液。
取标准溶液过固相柱,分别用纯水、以及5%、10%和15%的甲醇水溶液作为淋洗液。结果发现,在纯水和5%甲醇水溶液中未发现PI P ;而10%和15%甲醇水溶液中有少量PI P 损失,且随着甲醇含量的增加,PI P 的损失增加。这说明PI P 的极性可能与甲醇相似,当甲醇浓度为10%时,PI P 能溶于其中而随其流失。纯水洗涤能力低于5%甲醇水溶液,不能洗去部分杂质,因此选用5%甲醇水溶液作为淋洗液。
取标准溶液,分别用6m L 的甲醇、乙腈和乙酸乙酯作为洗脱液,实验发现,乙酸乙酯的洗脱能力最差;而乙腈和甲醇洗脱后大部分QN s 的回收率均接近100%。实验选用甲醇作为洗脱溶液。3.4 方法学验证
3.4.1 标准曲线 将每份空白样品经过提取和净化后,用初始流动相定容至2m L ,用该提取液将标准液稀释成浓度为1、2、5、10、20、50和100 g /L ,计算得到标准曲线及相关参数,见表2。采用阴性样品基质加标法,可以有效地减少基质干扰,使得定量更加准确。3.4.2 方法的检出限和定量下限 方法检出限(LOD)是以空白样品基质稀释标准曲线上的最低浓度出峰时,取信噪比S /N =3和样品处理过程的稀释倍数计算得出。定量下限(LOQ )是以样品基质加标标准曲线上的最低浓度出峰时,取信噪比等于10(S /N =10)和样品处理过程的稀释倍数计算得出。各种喹诺酮在牛奶基质中的方法检出限和定量限见表2。图2为22种喹诺酮空白牛奶样品加标(20 g /L)色谱图,进样后在44个监测通道中并未发现明显的杂质干扰。
3.4.3 方法回收率及精密度 取空白牛奶样品中添加3个浓度水平的混合标准液,按2.3前处理方法进行处理,做回收率实验,每个水平重复3次,测精密度,结果见表3。是用添加水平为20 g /L 样品,重复实验7次测定得到日内精密度,连续5天重复取样测定日间精密度(见表3)。由表3可见,19种QN s
391第3期包晓丽等:超高效液相色谱 电喷雾串联四极杆质谱法检测牛奶中22种喹诺酮类抗菌素
表2 22种喹诺酮类药物的线性关系及定量限(LOQ )和检出限(LOD )T able 2 L i near range ,corre l ation coeffic i ent ,li m its o f detec ti on(LOD )and quantifi cation (LOQ )of 22types of qu i no lones (QN s)
喹诺酮QN s 标准曲线
L i n ear regression
equati on 相关系数Correl ation coeffici en t r 2
线性范围L i n ear range ( g/kg)LOQ ( g /kg)LOD ( g /kg)PIP y=0 7110x+0 25350 99913~3000 3390 102M BF y =0 6409x +0 16200 99971~1000 0100 003FLE y =0 8528x +0 53970 99711~1000 0250 007ENO y =0 1030x +0 31830 99923~3000 2130 064P AZ y =0 3876x +0 23750 99915~5000 3230 097OFL y =0 6147x +0 18770 99930 5~500 0140 004PEF y =0 3592x +0 05980 99961~1000 0470 014NOR y =0 2088x +0 06440 99971~1000 2150 064C IP y =0 2095x +0 06760 99811~1000 0460 014DAN y =0 5875x +0 05900 99941~1000 0260 008LOM y =0 7394x +0 17740 99951~1000 0430 013ENR y =0 1137x +0 11400 99911~1000 0240 007D I F y =0 7759x +0 24190 99901~1000 0220 006SAR y =0 4427x +0 16870 99901~1000 0410 012GAT y =0 3796x +0 14810 99930 5~500 0080 002SP A y =0 2748x +0 06520 99920 5~500 0080 002M OX y =0 4828x +0 04280 99861~1000 0310 009C I N y =0 3281x +0 14940 99923~3000 3190 409OXO y =0 4275x +0 13660 99973~3000 0780 023FL U y =0 1794x -0 01230 98511~1000 0370 012NAL y=0 1503x-0 03190 98641~1000 0400 012NAD
y =0 0156x +0 0003
0 9918
1~100
0 117
035
图2 牛奶加标样品色谱图(加标浓度20 g /L )
F i g .2 Chro m atogra m s of m il k sp i ked at 20 g /L w ith 22QN s
的回收率在61.9%~94.6%之间,能够达到比较满意的回收率,而方法的重现性也在可接受的范围内(RSD<15%),而FL U 、NAL 和NAD 的回收率尚不理想,低于60%。3.5 实际样品检测
购自市场的19个牛奶样品检测后,发现阳性样品10个,占52%;阳性样品包含4种喹诺酮类抗菌素,以C I P 检出最多,占42%,测得的最高含量为5~0 9 g /kg 。OFL 、NOR 和FL U 各有一个样品被检出,含量分别是37.4、9.1和23.4 g /kg 。除了OFL 和NOR 农业部并未规定其在牛奶中的限量,其余阳性样品中喹诺酮的含量并未超出2003年我国农业部发布的动物性食品中兽药最高残留限量的规定。
392
分析化学第37卷
实验结果表明,本方法可适用于牛奶中QNs 的定性定量检测,具有定量准确、灵敏度高、分析快速、操作简单等优点。QN s 的种类还有很多,其它种类的QN s 待于进一步研究。
表3 方法的回收率以及日内、日间精密度
T able 3 T est o f recover i es and i ntra day and i nte r day prec i sion
QN s
加标浓度
Add ed ( g/g)回收率Recovery (%,n =3)加入量Added (20 g /kg)
测得值
Found ( g /kg)日内Intra day
RSD(%,n =7)
日间I n ter day RSD(%,n =5)
PIP
156015073.8?1.379.6?3.782.3?1.715.39?3.7
4.89
6.01
M BF 5205086.7?2.888.9?2.486.3?5.917.09?3.7 4.341.41
FLE 5205084.1?5.693.1?3.185.8?6.017.80?4.6 5.212.56
ENO 156015083.2?3.990 2?0 688.9?1.717.37?3.6 4.202.58
P AZ 2510025061.9?6.863.2?1.069.1?7.912.21?2.4 4.028.64
OFL 2.5102582.4?0 884.1?0 484.0?3.516.34?2.8 3.481.97
PEF 5205086.7?
2.28
3.4?0 286.7?1.816.53?0 70 86
4.67C IP
5205081.0?4.386.6?1.086.
4?
2.1
16.93?2.1
2.57
0 51
DAN
5205082.8?3.5
85.7?1.483.7?1.416.96?3.1 3.742.88
LOM 5205088.5?0 586.9?0 585.4?3.917.00?1.9 2.262.27
ENR 5205085.7?2.986.9?0 385.6?4.416.76?3.3 3.945.09
DIF 5205091.1?3.894.6?1.692.9?4.418.27?3.5 3.871.94
SAR 5205086.7?3.187.9?1.588.0?3.417.20?2.0 2.432.70
GAT 2.5102584.2?2.787.4?1.886.9?5.016.84?3.3 3.971.12SP A
2.5102585.8?4.482.3?2.580 0?4.115.68?4.4
5.72
3.22
M OX 5205085.6?3.281.0?0 680 7?6.415.95?1.8 2.341.85
C I N 1560150
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16.22?2.9 3.365.50
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D eter m i nation of 22Qui nolones Anti bi otics R esidues i nM ilk by
U ltra Perfor mance L i qui d Chro matography w ith E lectrospray
Ionization Tande m M ass Spectro m etric D etection
B AO X iao L i 1,REN Y i P i ng 2,ZHANG H ong
*
1
1
(School of Food Sience and B io technology,Zhej i ang Gongshong Un i ver sit y,H angzhou 310035)
2
(Zhejiang P rovinci al Centre for D isease P revention and Control ,H angzhou 310009)
Abst ract The u ltra perfor m ance liquid chr o m atog raphy tande m m ass spectr o m etry (UPLC M S /M S)m ethod has been developed for 22(fl u o r o )qu i n olone (QN s)antibiobtics i n m il k w ith mu lti p le reaction m on itoring (MR M ).The analytes w ere ex tracted fro m the sa m ple using M c llvaine buffer by ultrasonic bath,and purified by so li d phase extracti o n(SPE )cartri d ge .The resi d ue w as dri e d under n itr ogen and d isso l v ed to UPLC M S /
M S.The i n terference of m atri x w as reduced by t h e m atrix m atched calibration standar ds curve .The linear range w as fr o m 3 g /kg to 300 g /kg for pipe m i d ic aci d ,enrofloxacin ,c i n oxac i n ,oxo li n ic aci d ,
fro m
5 g /kg to 500 g /kg for pazufloxaci n ,fr o m 0 5 g /kg to 50 g /kg for o floxacin ,gatifloxacin ,sparflox ac i n ,fro m 1 g /kg to 100 g /kg for other 14QN s w it h t h e good correlation coeffic ients(r ?0 9851).The lo w er li m it o f quantificati o n w as 0 008 g /kg to 0 339 g /kg .The recoveries w ere 63.1%-94.6%,0 86%-13.12%,respecti v e l y ,w ith re lative the standard dev iations of 0 86%-13.12%.But the recoveries w ere lo w er than 60%for flu m equine ,nali d i x ic acid and nadifloxaci n .The m et h od is si m ple ,accurate and sensiti v e for the si m u ltaneous de ter m inati o n of 22QNs .K eywords U ltra perfor m ance liquid chro m atog raphy tande m m ass spectro m etry ,quino l o ne anti b i o b tics ,m il k
(R ece i ved 22M ay 2008;accepted 15Dece mber 2008)
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分析化学第37卷
液相色谱-串联质谱法
消毒产品中丙酸氯倍他索和盐酸左氧氟沙星测定?液相色谱-串联质谱法 Determination of clobetasol propionate and levofloxacin hydrochloride in disinfection product - LC-MS-MS method 1 范围 本方法规定了膏霜类消毒产品中丙酸氯倍他索和盐酸左氧氟沙星残留量液相色谱-串联质谱测定方法。 本方法适用于膏霜类消毒产品中丙酸氯倍他索和盐酸左氧氟沙星残留量的测定。 取样量为0.1g时，本方法对丙酸氯倍他索和盐酸左氧氟沙星的检出限见表1。 表1 丙酸氯倍他索和盐酸左氧氟沙星的检出限、保留时间和特征离子 中文名称英文名称 检出限 （μg/g） 保留时 间（min） 特征离子(m/z) 丙酸氯倍他索Clobetasol propionate 0.009 7.83 467.0/355.2/373.4 盐酸左氧氟沙星Levofloxacin hydrochloride 0.06 1.11 362.0/260.9/318.2 2 规范性引用文件 3 原理 试样中丙酸氯倍他索和盐酸左氧氟沙星用甲醇提取，提取液经0.45μm滤膜过滤，用C18柱分离后，用液相色谱-串联质谱仪测定，正离子扫描，离子对定性，峰面积定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为不含有机物的纯水，纯水中干扰物的浓度需低于方法中待测物的检出限。 4.1甲醇：农药残留级。 4.2乙腈：农药残留级。 4.3甲酸：分析纯。
4.4标准品：丙酸氯倍他索和盐酸左氧氟沙星均购自中国药品生物制品检定所，纯度≥99.8%。 4.5标准溶液：准确称取丙酸氯倍他索适量，用乙腈－水（1：1）配制成100μg/mL 的标准贮备液。准确称取盐酸左氧氟沙星适量，用纯水配制成100μg/mL的标准贮备液。准确量取上述标准贮备溶液适量，用乙腈稀释配制成浓度为10.0μg/mL 的混合标准中间溶液，将标准中间溶液转移到安瓿瓶中于4 C保存。临用前，再根据需要用甲醇配制成不同浓度的标准使用溶液。 4.6甲酸溶液(0.2%，v/v)：量取2mL甲酸，用纯水定容至1000mL。 4.7 0.45μm滤膜。 5 仪器 5.1 液相色谱-串联质谱联用仪：HP1100高效液相色谱仪(Agilent) - API 4000质谱仪(Applied Biosystems) ，电喷雾离子化源(ESIMS，NI/PI模式)。 5.2 分析天平：感量0.1mg和0.001g。 5.3实验室纯水机：Barnstead纯水机。 5.4涡旋振荡器：Scientific Industries 涡旋振荡器。 5.5 具塞试管：10mL。 6 试样的制备与保存 6.1 试样的制备 取有代表性样品5g，搅拌均匀，制成实验室样品。 6.2 试样保存 制备好的试样置于室温保存。 7 测定步骤 7.1样品前处理 称取0.1g~0.2g样品(精确到0.001 g) ，置于10mL试管中，加入3.00mL甲醇溶液，涡旋振摇使样品分散后，超声振荡10min。静置，吸取上清液经滤膜（4.7）过滤后，供液相色谱-串联质谱测定。
浅析电喷雾质谱仪中的电喷雾系统
浅析电喷雾质谱仪中的电喷雾系统 王化斌 刘钟栋 郑隆钰 卢奎 (郑州工程学院,郑州 450052) 曹书霞 (郑州大学,郑州 450052) 刘艳 (清华大学,北京 100084) 摘 要:本文主要介绍了电喷雾质谱仪中的电喷雾部分的基本组成及基本原理。主要包括电喷雾的过程、喷雾源、气相离子的选择以及在电喷雾系统中发生的相关气相化学反应。最后介绍了电喷雾质谱的优缺点。 关键词:电喷雾,电喷雾质谱仪 The Basic Construction and Principles of the Electro_spray System in Electro_spray Mass Spectrometry Wang Huabin,Liu Zhongdong,Zheng Longyu,Lu Kui (Zhengzhou Institute of Technology,Zhengzhou 450052) Cao Shuxia (Zhengzhou University,Zhengzhou 450052) Liu Yan (Tsinghua University,Beijing 100084) Abstract:This article mainly introduced the basic construction and principles of the electro_spray sys tem of electro_spray mass spectrometry including the processes of electro_spraying,sampling gas phase ions and the accompanying chemical reactions and last the authors gave a roughly summary of the electro_spray mass spectrometry s advantages and disadvantages. Key words:Electro_spray,Electro_spray mass spectrometry 前言 电喷雾作为一种产生气相离子的方法是由Dole和他的合作者们于1968年提出的,在1973年,Dole等人提出将电喷雾与传统质谱仪联用,而 95
高效液相色谱质谱联用HPLC
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 高效液相色谱质谱联用HPLC .液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）的各种模式探索一、实验目的1、了解 LC-MS 的主要构造和基本原理； 2、学习 LC-MS 的基本操作方法； 3、掌握 LC-MS 的六种操作模式的特点及应用。 二、实验原理 1、液质基本原理及模式介绍液相色谱 - 质谱法（ Liquid Chromatography/Mass Spectrometry ， LCMS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，必然成为一种重要的现代分离分析技术。 但是，LC 是液相分离技术，而 MS 是在真空条件下工作的方法，因而难以相互匹配。 LC-MS 经过了约 30 年的发展，直至采用了大气压离子化技术（Atmospheric pressure ionization，API）之后，才发展成为可常规应用的重要分离分析方法。 现在，在生物、医药、化工、农业和环境等各个领域中均得到了广泛的应用，在组合化学、蛋白质组学和代谢组学的研究工作中，LC-MS 已经成为最重要研究方法之一。 质谱仪作为整套仪器中最重要的部分，其常规分析模式有全扫描模式（Scan）、选择离子监测模式（SIM）。 （一）全扫描模式方式（Scan）：最常用的扫描方式之一，扫描的质量范围覆盖被测化合物的分子离子和碎片离子的质量，得到的是 1/ 13
2015年版药典高效液相色谱法、质谱法.doc
2015 年版药典高效液相色谱法、质谱法
2015 版药典 --- 高效液相色谱法、质谱法 0512 高效液相色谱法 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。 注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处 理色谱信号。 1.对仪器的一般要求和色谱条件 高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱内径一般为 3.9 ～ 4.6mm，填充剂粒径为 3～lOμm。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约 2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 （1）色谱柱 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物 等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。 正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰 基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。 离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。 手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。 色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残 留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。 温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当 提高色谱柱的温度，但一般不宜超过 60℃。 残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相 pH 值一般应在 2～8 之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚 合物色谱柱可耐受更广泛 pH值的流动相，适合于 pH 值小于 2 或大于 8 的流动相。 （2）检测器最常用的检测器为紫外 - 可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、 蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。 紫外- 可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与被测物质的量有关，还与 其结构有关；蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用检测器，对所有物质均有响应，结构相似的物质在蒸发光散射 检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。 紫外 - 可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器和示差折光检测器的响应值与被测物质的量在一定范围内呈 线性关系，但蒸发光散射检测器的响应值与被测物质的量通常呈指数关系，一般需经对数转换。 不同的检测器，对流动相的要求不同。紫外 - 可见分光检测器所用流动相应符合紫外 - 可见分光光度法（通则 0401）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测 器和质谱检测器不得使用含不挥发性盐的流动相。 （3）流动相反相色谱系统的流动相常用甲醇 - 水系统和乙腈 - 水系统，用紫外末端波长检测时，宜选用乙腈 - 水系统。流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需用时，应尽可能使用低浓度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动 相中有机溶剂一般不低于 5%，否则易导致柱效下降、色谱系统不稳定。
液相色谱串联质谱的小知识
一、开机 water 2695/micromass zq4000: 开机步骤 1. 分别打开质谱、液相色谱和计算机电源，此时质谱主机内置的CPU会通过网线与计算机主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。 2. 等液相色谱通过自检后，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。（具体根据液相色谱不同型号来执行，下面以2695为例）。 a.打开脱气机 (Degasser On)。 b.湿灌注(Wet Prime)。 c.Purge Injector。 d.平衡色谱柱。 3.双击桌面上的 MassLynx 4.0图标进入质谱软件。 4.检查机械泵的油的状态（每星期），如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，请及时更换机械泵油。 5.点击质谱调谐图标（MS Tune）进入质谱调谐窗口。 6.选择菜单“Options –Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。几分钟后，ZQ就会达到真空要求，ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。 7.点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求。 8. 确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90 psi。 9.设置源温度（Source Temp）到目标温度。 关机 1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。 2.点击Standby 让MS 进入待机状态时，这时状态灯会由绿变红，这一过程是关质谱高电压的过程。 3．停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。 5．逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟后关闭（镇气）。 a) 对于ESI源，至少每星期做一次。 b) 对于APCI源，每天做一次。 6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。 7．选择Option / Vent，这时质谱开始泄真空，ZQ 前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。 FINNIGEN DECA 开关机及校正流程—— 1开机前准备事项 （1）确保质谱总电源开关（白色开关）及主板电源开关（黑色开关）处于关闭状态（O）； （2）检查真空泵油液面，确保泵内油页面处于标定的上下两线之间； （3）查看离子源洁净程度，ESI源查看喷口是否有固体析出，毛细管口是否完好；APCI喷口是否有积液； （4）气体压力，打开高纯氮气钢瓶总阀，调节出口压力调至0.65MPa，打开高纯氦气钢瓶总阀,调节出口压力调至0.25Mpa; （5）检查壳气及辅助气接口连接紧固，松开液相管路与离子源的接口； （6）开启动力电源，电压稳定，正常；
液相色谱-质谱联用(LC-MS)
液相色谱-质谱联用(LC-MS) LCMS分别的含义是：L液相C色谱M质谱S分离（友情赠送：G是气相^_^） LC-MS/MS就是液相色谱质谱/质谱联用 MS/MS是质谱-质谱联用（通常我们称为串联质谱，二维质谱法，序贯质谱等） LC-MS/MS与LC-MS比较，M（质谱）分离的步骤是串联的，不是单一的。 色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为色谱分析法。 色谱法的最早应用是用于分离植物色素，其方法是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素，并可分别进行鉴定。色谱法也由此而得名。 现在的色谱法早已不局限于色素的分离，其方法也早已得到了极大的发展，但其分离的原理仍然是一样的。我们仍然叫它色谱分析。 一、色谱分离基本原理： 由以上方法可知，在色谱法中存在两相，一相是固定不动的，我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相，我们把它叫做流动相。 色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。 使用外力使含有样品的流动相（气体、液体）通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。 由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 二、色谱分类方法： 色谱分析法有很多种类，从不同的角度出发可以有不同的分类方法。 从两相的状态分类：
高效液相色谱-串联质谱法
附件 面膜类化妆品中氟轻松检测方法 （高效液相色谱-串联质谱法） 1范围 本方法规定了面膜类化妆品中氟轻松的高效液相色谱-串联质谱测定方法。 本方法适用于面膜类化妆品中氟轻松的定性定量测定。 2方法提要 面膜类化妆品用饱和氯化钠溶液分散，用乙腈从分散液中提取氟轻松，用亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀提取液中大分子基质，经固相萃取小柱净化，用高效液相色谱仪分离，质谱检测器检测，采用保留时间和特征离子对丰度比定性，以待测物质相对应离子峰面积定量，以标准曲线法计算含量。 本方法的检出限为0.03 μg/g，定量限为0.05 μg/g。 3试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为纯化水。 3.1甲醇：色谱纯。 3.2乙腈：色谱纯。 3.3冰醋酸：优级纯。 3.4饱和氯化钠溶液。 3.5 10%亚铁氰化钾溶液：称取115 g亚铁氰化钾K4Fe(CN)6·3H2O固体，
用水溶解定容至1000 mL。 3.6 20%乙酸锌溶液：称取239 g乙酸锌C4H6O4Zn·2H2O固体，用水溶解定容至1000 mL。 3.7Oasis HLB固相萃取小柱或相当者：60 mg，3 mL。 3.8 标准物质：氟轻松，纯度不小于99.0%；标准物质的分子式、相对分子质量、CAS登录号、化学结构图参见附录A。 3.9 标准储备液（ρ=1g/L）：准确称取氟轻松标准物质（3.8）10mg，精确到0.01 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，于－18℃下冷冻保存。 3.10 标准工作溶液：临用时，取标准储备液（3.9）适量，用乙腈稀释成0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.80μg/mL系列浓度的标准工作溶液。 4仪器和设备 4.1 高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪（ESI源）。 4.2 分析天平：感量0.0001g；0.00001g。 4.3 涡旋混合器。 4.4离心机：转速5000r/min，容量10mL；50mL。 4.5 固相萃取装置。 5分析步骤 5.1样品处理 5.1.1提取 称取样品（带有载体的面膜，去除载体后取样）0.2 g，精确至0.0001 g，置15 mL具塞离心管中，加入3 mL饱和氯化钠溶液（3.4），于涡旋混合器上混合使样品分散，准确加入2 mL乙腈，充分涡旋提取2 min，以
高效液相色谱 质谱联用技术的应用
高效液相色谱质谱联用技术的应用 高效液相色谱(HPLC或LC)是以液体溶剂作为流动相的色谱技术，一般在室温下操作，可以直接分析不挥发性化合物、极性化合物和大分子化合物（包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等)，分析范围广，而且不需衍生化步骤。质谱是强有力的结构解析工具，能为结构定性提供较多的信息，是理想的色谱检测器，不仅特异，而且具有极高的检测灵敏度。串联质谱（MS/MS）是将一个质量选择的操作接到另一个质量选择的后面，在单极质谱给出化合物相对分子量的信息后，对准分子离子进行多极裂解，进而获得丰富的化合物碎片信息，确认目标化合物，对目标化合物定量等。［1］ 高效液相色谱一质谱(HPLC—MS)联用技术是近几年来发展起来的一项新的分离分析技术，将HPLC 对复杂样品的高分离能力，与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来，在药物分析、环境分析等许多领域得到了广泛的应用。［2］ 本文着重讲述液相色谱质谱联用仪在药物分析、环境分析上的应用。 1液相色谱质谱联用在药学分析上的应用 1.1LC/MS在药物代谢中的应用 Lee等［3］总结了利用LC／MS鉴定药物代谢产物的方法，主要包括以下几个步骤：测定原形药物的质谱；选择准分子离子、加合离子和主要的碎片离子进行多级质谱分析；选择原形药物的主要中性丢失，测定生物样品的中性丢失谱，图谱中的离子即为原形药物和可能的代谢物的分子离子；选择主要的子离子测定生物样品的母离子谱，所得母离子即为各个代谢物；测定生物样品中所有可能代谢物的子离子谱，解谱得到代谢物的结构。 王宁生等［4］以LC／MS联用技术及标准品对照法，分离检测健康志愿者口服复方丹参滴丸后，血清中水溶性成分及代谢产物，从一级质谱的分子离子峰推测，丹参素及原儿茶醛在体内分别与硫酸及葡萄糖醛酸结合，产生丹参素硫酸结合物及原儿茶醛的葡糖醛酸结合物。 Hsiu SL等［5］研究芍药苷在小鼠体内药代动力学，用LC／MS方法检测体内药物浓度，未检测到芍药苷原形药物；但在血浆及各种排泄物中，均可检测其代谢物，经液相色谱一质谱分析，结合核磁共振(NMR)，确定其为芍药苷的脱糖基代谢物，提示芍药苷给药后，在肠道经细菌转化为PG后，被吸收进入血液循环中发挥作用。 Chen SJ等［6］用LC／DAD／MS／MS联用技术，对山豆根碱在小鼠体内的代谢进行了研究，用ESI ／MSn技术检测山豆根碱的代谢物，并鉴定其主要代谢物为N一去甲基山豆根碱。 1.2LC/MS在药学浓度上的应用 M．Brolis等［7］采用I-IPLC—DAD—MS法从贯叶金丝桃Hyoericum performm中分离鉴定出槲皮素、异槲皮素、金丝桃苷等成分。 Gerthard Brillgma等［8］采用HPLC—NMR和HPLC—ESI—MS—MS法对Habropetalum dawei进行分析，分离鉴定出dioneopeltine、N-methyldioncophylline、N-methyl-7-epi-dioncophylline、tetralone、(1R，3R)和(1S，3R)-N-formyl-8-hydroxy-6-methoxy-l,3-dimthyltetra-hydroisoquinoline等7个已知化合物，以及5’-O-methydioncopeltine、isoquinoline phylline 2个新化合物。 徐智秀等［9］以反相高效液相色谱法分离了9种人参皂苷（I）, 利用三级四级杆质谱研究了9种I的一级质谱（主要给出相对分子质量信息）和二级质谱（提供碎片结构信息），通过它们的质谱图差异对其进行了鉴别, 并将方法用于实际样品中的9种I的定性。 郭继芬等［10］选用Discovery C18柱，以甲醇-水-甲酸(40:60:0.025)为流动相，经紫外检测后，在ESI- 扫描方式下，对HPLC—UV图谱中各色谱峰进行一级和二级质谱分析，与对照品比较鉴定了提取物中4个已知的黄酮类化合物，推断出3个未知黄酮苷类化合物可能的结构。 2液相色谱质谱联用在环境分析上的应用 1
电喷雾质谱法快速分析三种农药的残留
Journal of Organic Chemistry Research 有机化学研究, 2015, 3(3), 115-121 Published Online September 2015 in Hans. https://www.360docs.net/doc/b91550906.html,/journal/jocr https://www.360docs.net/doc/b91550906.html,/10.12677/jocr.2015.33016 Rapid Analysis of Three Kinds of Pesticide Residues Using Electrospray Ionization Mass Spectrometry Jing Li1*, Jun Yan2, Wenxiang Hu3* 1School of Chemistry and Chemical Engineering, Shanxi University, Taiyuan Shanxi 2Central Research Institute of China Chemical Science and Technology, Beijing 3Beijing Excalibur Space Military Academy of Medical Sciences, Beijing Email: *lxf7777@https://www.360docs.net/doc/b91550906.html,, *huwx66@https://www.360docs.net/doc/b91550906.html, Received: Jul. 13th, 2015; accepted: Aug. 4th, 2015; published: Aug. 10th, 2015 Copyright ? 2015 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.360docs.net/doc/b91550906.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) combined with electrospray ionization tan-dem mass spectrometry technology was used for rapid analysis of three kinds of pesticide resi-dues. In this manuscript, the rapid analytical method for Hexaconazo, Iimidacloprid residues, as well as the rule of tandem mass spectrometry for Difenconazole, was established. The method is simple and rapid. It is applicable to determine the pesticide and pesticide residues. Keywords Electrospray Ionization Mass Spectrmetry (ESI-MS), In-Source Collision Induced Dissociation (CID), Pesticide Residues, Rapid Analysis 电喷雾质谱法快速分析三种农药的残留 李竞1*，闫峻2，胡文祥3* 1山西大学化学化工学院，山西太原 2中化化工科学技术研究总院，北京 3北京神剑天军医学科学院，北京 *通讯作者。
液相色谱串联质谱联用技术-实验指导(许煊炜)
液相色谱串联质谱联用仪检测技术 实验指导 （2014、2015级） 课程内容（一个实验8学时）： （1）AB Sciex Qtrap 4500 三重四级杆/离子阱液相色谱串联质谱联用仪的结构原理、操作及定性定量应用。 （2）利用液相色谱串联质谱联用仪快速测定水果中7种农药的残留量。 吉林农业大学农业部参茸质检中心 2017.03
实验一AB Sciex Qtrap 4500 三重四级杆/离子阱液相色谱串联质谱联用仪的结构原理、操作及定性定量应用 一.实验目的和意义 通过学习液质联用仪的构成和使用方法，及其在定性、定量分析中的应用，培养学生使用液质联用仪进行仪器分析的能力，并培养学生严谨的科学态度、细致的工作作风、实事求是的数据报告和良好的实验习惯（准备充分、操作规范，记录简明，台面整洁、实验有序，良好的环保和公德意识）。培养培养学生的动手能力、理论联系实际的能力、统筹思维能力、创新能力、独立分析解决实际问题的能力、查阅手册资料并运用其数据资料的能力以及归纳总结的能力等。 （一）检测仪器 1、仪器名称高效液相色谱串联质谱联用仪（简称LC-MS-MS）。型号：4500 QTRAP（美国Applied Biosystems公司）。 2、仪器组成液相色谱部分：岛津LC-30A，配有在线脱气机、超高压二元泵、自动进样器；串联质谱部分：QTRAP4500，配有ESI离子源、串联四级杆/线性离子阱。 3、主要性能指标离子化方式：ESI电离质量范围：（5 ~ 1700）amu 分辨率：> 6900 质量稳定性：0.1 amu/12h 灵敏度：1pg reserpine, ESI+, MRM扫描（m/z : 609/195），信噪比S/N > 120:1 扫描速度：4000 amu/sec 质量准确度：< 0.01%（全质量数范围） 4、方法原理高效液相色谱二元泵将流动相泵人系统并混合，自动进样器将待测样品注入流动相中，随流动相进入色谱柱，由于样品不同组分在色谱柱中保留时间不同，各组分被分开，依次进入离子源。在离子源中，各组分以ESI或APCI方式电离，被加速后进入质量分析器。4500QTRAP 的质量分析器主要由Q1、Q2、Q3三组四级杆串联组成。Q1可将分子离子按质荷比（m/z）大小分开；Q2是碰撞室，可将母离子进一步破碎为碎片离子；Q3具有四级杆和线性离子阱两种功能，作为四级杆时可将分子离子或碎片离子按质荷比大小分开，作为离子阱还可富集离子从而提高检测灵敏度。各组分的不同离子在质量分析器中被破碎、分离，并按质荷比大小依次抵达监测器，经记录即得到按不同质荷比排列的离子质谱图。4500QTRAP通过串联四级杆/线性离子阱两种不同质谱技术的结合，可以在单次分析中对复杂样本中的单个成分同时进行定性和定量，也可以对多个化合物进行定量分析。整台仪器的控制、数据采集、数据处理、结果输出均由PC计算机Windows操作系统支持下的Analyst软件控制完成。
电喷雾质谱
电喷雾电离质谱（电喷雾部分）的简介 ESI-MS的大概结构 电喷雾质谱主要有两部分组成, 电喷雾部分和质谱仪部分。电喷雾部分可以提供一种相对简单的方式, 使非挥发性溶液相的离子转入到气相; 而质谱仪部分则可以提供一种灵敏的、直接的检验。 ESI的基本原理 ESI 是一种离子化技术, 它将溶液中的离子转变为气相离子而进行MS分析。电喷雾过程可简单描述为: ：样品溶液在电场及辅助气流的作用下喷成雾状带电液滴，挥发性溶液在高温下逐渐蒸发，液滴表面的电荷体密度随半径减少而增加，当达到雷利极限时，液滴发生库伦爆破现象，产生更小的带电微滴。上述过程不断反复，最终实现样品的离子化。由于这一过程即没有直接的外界能量作用于分子，因此对分子结构破坏较少，是一种典型的“软电离”方式。
ESI过程 ESI过程中大致可以分为液滴的形成、去溶剂化、气相离子的形成3 个阶段。 液滴的形成和雾化 样品溶液通过雾化器进入喷雾室, 这时雾化气体通过围绕喷雾针的同轴套管进入喷雾室, 由于雾化气体强的剪切力及喷雾室上筛网电极与端板上的强电压( 2~6 kV) ,将样品溶液拉出, 并将其碎裂成小液滴。随着小液滴的分散, 由于静电引力的作用, 一种极性的离子倾向于移到液滴表面, 结果样品被载运并分散成带电荷的更微小液滴。液滴的形成及电喷雾过程如图2 所示。 去溶剂化和离子的形成进入喷雾室内的液滴, 由于加热的干燥气-氮气的逆流使溶剂不断蒸发, 液滴的直径随之变小,并形成一个“突出”使表面电荷密度增加。当达到Rayleigh( 雷利) 极限时, 电荷间的库仑排斥力足以抵消液滴表面张力时, 液滴发生爆裂, 即库仑爆炸, 产生了更细小的带电液滴, 离子的形成如图 3所示。
高效液相色谱质谱联用-HPLC-MS-实验-含思考题
液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）的各种模式探索 一、实验目的 1、了解LC-MS的主要构造和基本原理； 2、学习LC-MS的基本操作方法； 3、掌握LC-MS的六种操作模式的特点及应用。 二、实验原理 1、液质基本原理及模式介绍 液相色谱-质谱法（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，必然成为一种重要的现代分离分析技术。 但是，LC是液相分离技术，而MS是在真空条件下工作的方法，因而难以相互匹配。LC-MS经过了约30年的发展，直至采用了大气压离子化技术（Atmospheric pressure ionization，API）之后，才发展成为可常规应用的重要分离分析方法。现在，在生物、医药、化工、农业和环境等各个领域中均得到了广泛的应用，在组合化学、蛋白质组学和代谢组学的研究工作中，LC-MS 已经成为最重要研究方法之一。 质谱仪作为整套仪器中最重要的部分，其常规分析模式有全扫描模式（Scan）、选择离子监测模式（SIM）。 （一）全扫描模式方式（Scan）：最常用的扫描方式之一，扫描的质量范围覆盖被测化合物的分子离子和碎片离子的质量，得到的是化合物的全谱，可以用来进行谱库检索，一般用于未知化合物的定性分析。实例：（Q1 = 100-259m/z） （二）选择离子监测模式（Selective Ion Monitoring，SIM）：不是连续扫描某一质量范围，而是跳跃式地扫描某几个选定的质量，得到的不是化合物的全谱。主要用于目标化合物检测和复杂混合物中杂质的定量分析。实例：（Q1 = 259m/z） 本实验采用三重四极杆质谱仪（Q1：质量分析器；Q2：碰撞活化室；Q3：
电喷雾电离质谱的简介与改进
电喷雾电离质谱
电喷雾电离质谱（电喷雾部分）的简介与改进 摘要：本文主要围绕电喷雾电离质谱的电喷雾部分的结构，原理，电喷雾的过程，以及其优缺点和应用对其做了简要的介绍，并在最后提出了一些改进的建议。希望通过本文的介绍大家可以进一步了解电喷雾电离质谱，并引起大家对电喷雾电离质谱的重视，在以后的实际运用中使其发挥更大的作用。关键字：电喷雾电离质谱质谱分析 Abstract: This paper mainly introduces the structure, principle, electrospray ionization process of ESI in ESI-MS（electrospray ionization mass spectrometry）, as well as its advantages、disadvantages and application, and concludes with some suggestions for improvement。 Through this paper I hope all of you can learn more about ESI-MS, draw your attention on ESI-MS, and let ESI-MS play a greater role in the practical application。Keywords: ESI-MS Mass Spectrometry 引言：电喷雾作为一种产生气相离子的方法是由Dole 和他的合作者们于1968 年提出的, 在1973年, Dole 等人提出将电喷雾与传统质谱仪联用, 而到1984 年才被用于实验中。电喷雾质谱作为一种较新的分析手段, 它正越来越广泛地被人们所利用。自从90 年代以来, 关于电喷雾质谱发展、应用和功能方面的出版物呈指数上升。但是在日常学习生活中电喷雾质谱却鲜为人知，对于质谱部分的介绍有很多书籍可以参考, 但对于电喷雾部分,国内关于此方面系统介绍的书籍、文章却极少。因此在此做一些介绍，并针对在实际分析工作中存在的一些问题提出一些改进的意见。 ESI-MS的大概结构 电喷雾质谱主要有两部分组成, 电喷雾部分和质谱仪部分。电喷雾部分可以提供一种相对简单的方式, 使非挥发性溶液相的离子转入到气相; 而质谱仪部分则可以提供一种灵敏的、直接的检测方式。 图 1电喷雾质谱示意图
液相色谱-串联质谱(LCMSMS)方法 - 岛津中国
液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）法测定癫痫患者血清中 卡马西平的浓度 谢 华ì，王 荣，贾正平?， 徐丽婷 （兰州军区兰州总医院临床药理基地，兰州 730050） 摘要目的：本文建立了液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）法测定患者血清中的卡马西平浓度的方法。方法：色谱柱：Zorbax Extend-C18柱（150×4.6 mm I.D，5μm）；流动相：甲醇-0.01mmol·L-1乙酸 胺溶液（80:20，v/v）；流速：0.3 mL·min-1。结果：卡马西平浓度在2～40 ng·mL-1范围内，峰面积与浓度线性关系良好，平均回收率为101.1%，日内精密度、日间精密度的RSD分别为3.39%和4.11%。并测定了10名患者血清中卡马西平的浓度。结论：本方法具有良好的灵敏度、准确度、精确度及专属性，结果准确，重现性好，易于操作，可用于患者血清中卡马西平浓度的测定。 关键词卡马西平；LC/MS/MS；血清 Content Determination of Carbamazepine in epileptic patient serum by Liquid Chromatographic Tandem Mass Spectrometry XIE Hua, JIA Zheng-ping*, WANG Rong, XU Li-ting (Base of Clinic Pharmacology, Lanzhou General Hospital, Lanzhou Command, Lanzhou 730050, China) ABSTRACT OBJECTIVE:An analytical method based on Liquid Chromatography with tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) detection was developed for the content determination of carbamazepine in epileptic patient serum. METHODS: The method included that the column was Zorbax Extend-C18(150×4.6 mm I.D.，5μm ); mobile phase was methanol-0.01mmol·L-1amine acetic acid (80:20，v/v) at a flow rate of 0.3 mL·min-1. RESULTS: The method was proved to be linear in the range of 2~40ng·mL-1 with a regression confficient of 0.9976. The average recovery rate was 101.1%(n=5). The RSD of average contents of intra-day and inter-day was 3.39% and 4.11% respectively. The carbamazepine concentrations of ten epileptic patient’s serums were detected. CONCLUSION: This method is accurate, precise, sensitive and specific to be used in the content determination of carbamazepine serum. KEY WORDS Carbamazepine; LC/MS/MS; Serum ?基金项目：国家科技部重大项目（2008ZXJ09014-010） ì主管药师。研究方向：临床治疗药物监测。电话：(0931)8994675; E-mial: xiehua-72@https://www.360docs.net/doc/b91550906.html, ?通讯作者：教授，主任药师，博士。研究方向：临床药学。电话：(0931)8994652。
液相色谱—质谱联用
液相色谱—质谱联用来进行物质分离的实验 一、实验目的 1.了解液相色谱—质谱联用的基本原理； 2.掌握液相色谱—质谱联用时的操作步骤及实验方法； 3.学习分析色谱图和质谱图。 二、实验原理 利用不同的物质在固定相和流动相中具有不同的分配系数，当两相作相对位移时，使这些物质在两相间进行反复多次分配， 使得原来微小的分配差异产生明显的分离效果，从而依先后次 序流出色谱柱，以此来达到分离多种物质的目的。然后依次流 出的物质进入质谱中被打碎成为各种离子而被检测到。以此达 到分离的目的。 三、实验仪器和材料 高效液相色谱仪及质谱仪（见下图）、甲醇、水、TADB（相对分子量516）、TAIW（相对分子量336）、色谱柱
四、实验步骤 1.将待分离的两种物质的混合物配成溶液加入到2号样瓶中去； 2.启动联机软件，在四元泵模块的空白处右键单击，在弹出的 “方法”选项中编辑好流动相和流速，点击确定，以使体系过 渡到目标状态，直到压力稳定为止； 3.进入“方法”菜单，“编辑完整方法菜单”，按照“方法参考”进行编 辑（“方法参考”中的参数编辑完成后继续进行编辑，编辑质 谱的相关参数：选择正负极及电压等），编辑完成后再次进 入“方法菜单”，选择“方法另存为”命名后点击“确定”进入“序列” 菜单，“序列表菜单”，然后编辑样品瓶位置为1号、样品名称、 使用方法、进样次数、数据文件、进样量，确定后再次进入 “序列菜单”的“序列参数”菜单，再选择文件夹，确定； 4.方法编辑完成且压力稳定后，点击进样器左上方的“序列/开 始序列”按钮，进行测试，等待测试完毕，点击停止按钮。 然后进入“脱机”软件，查看积分测试报告。 五、实验结果及分析 实验时的液相色谱条件统一为：70%的甲醇，流速0.4ml/min，进样量1ul，波长230nm，测试时间15min。在正极性条件下：
液相色谱串联质谱的小知识知识讲解
液相色谱串联质谱的 小知识
一、开机 water 2695/micromass zq4000: 开机步骤 1. 分别打开质谱、液相色谱和计算机电源，此时质谱主机内置的CPU会通过网线与计算机主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。 2. 等液相色谱通过自检后，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。（具体根据液相色谱不同型号来执行，下面以2695为例）。 a.打开脱气机 (Degasser On)。 b.湿灌注(Wet Prime)。 c.Purge Injector。 d.平衡色谱柱。 3.双击桌面上的 MassLynx 4.0图标进入质谱软件。 4.检查机械泵的油的状态（每星期），如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，请及时更换机械泵油。 5.点击质谱调谐图标（MS Tune）进入质谱调谐窗口。 6.选择菜单“Options –Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。几分钟后，ZQ就会达到真空要求，ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。 7.点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求。 8. 确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90 psi。 9.设置源温度（Source Temp）到目标温度。 关机 1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。 2.点击Standby 让MS 进入待机状态时，这时状态灯会由绿变红，这一过程是关质谱高电压的过程。 3．停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。 4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。 5．逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟后关闭（镇气）。 a) 对于ESI源，至少每星期做一次。 b) 对于APCI源，每天做一次。 6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。 7．选择Option / Vent，这时质谱开始泄真空，ZQ 前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。 FINNIGEN DECA 开关机及校正流程—— 1开机前准备事项 （1）确保质谱总电源开关（白色开关）及主板电源开关（黑色开关）处于关闭状态（O）； （2）检查真空泵油液面，确保泵内油页面处于标定的上下两线之间； （3）查看离子源洁净程度，ESI源查看喷口是否有固体析出，毛细管口是否完好；APCI喷口是否有积液； （4）气体压力，打开高纯氮气钢瓶总阀，调节出口压力调至0.65MPa，打开高纯氦气钢瓶总阀,调节出口压力调至0.25Mpa;