哮喘小鼠肺内HMGB1及TLR2的表达及1,25-(OH)_2D_3的干预作用
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收稿日期：2015-05-11责任编校：崔建华
哮喘小鼠肺内HMGB1及TLＲ2的表达及1，25－（OH）2D3的干预作用
张艳，李彦玲，王伟郑州大学第三附属医院儿内科，河南郑州450052
摘要：目的观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）及Toll样受体2（TLＲ2）在哮喘小鼠肺内的表达，及1，25－二羟基维生素D3（1，25－（OH）2D3）对二者表达的影响。方法将30只BALB/c小鼠随机分为3组：对照组、哮喘组和干预组，应用HE染色方法观察各组小鼠肺组织形态学改变，并测定相同级别支气管气道壁厚度，免疫组化法观察HMGB1、TLＲ2的表达，ＲT－PCＲ方法测定各组小鼠肺内HMGB1mＲNA及TLＲ2mＲNA的表达。结果哮喘组小鼠肺内HMGB1及TLＲ2的表达均高于对照组，干预组二者的表达明显低于哮喘组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；哮喘组气道壁厚度高于对照组及干预组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论HMGB1和TLＲ2参与了哮喘的发病过程；1，25－（OH）2D3能抑制HMGB1及TLＲ2在哮喘小鼠肺内的表达，且在具有抑制哮喘小鼠气道重塑的作用。
关键词：1，25－（OH）
2D
3
；哮喘；高迁移率族蛋白B1；Toll样受体2
中国图书分类号：Ｒ－332文献标识码：A文章编号：1001-4411（2016）06-1273-04；doi：10.7620/zgfybj.j.issn.1001－4411.2016.06.60 Expressions of pulmonary HMGB1and TLＲ2expressions and the intervention effect
of1，25－（OH）
2D
3
in mice with asthma
ZHANG Yan，LI Yan－Ling，WANG Wei.
Department of Pediatrics，the Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou，He＇nan450052，China Abstract：Objective To observe the expressions of high mobility group box1（HMGB1）and Toll－like receptor2（TLＲ2）in lung of
mice with asthma and the effect of1，25－（OH）
2D
3
on expressions of the two factors.Methods Thirty BALB/c mice were randomly divid-
ed into control group，asthma group，and intervention group.HE staining was used to observe morphological changes of lung tissue，the thicknesses of airway wall of the same degree were measured，immunohistochemical method was used to observe the expressions of HMGB1 and TLＲ2，ＲT－PCＲwas used to detect the expressions of HMGB1mＲNA and TLＲ2mＲNA in lung.Ｒesults The expression levels of HMGB1and TLＲ2in lung of asthma group were higher than those in control group，the expression levels of HMGB1and TLＲ2in lung of in-tervention group were lower than those in control group，there were statistically significant differences（P＜0.05）；the thicknesses of airway wall of the same degree in asthma group were statistically significantly higher than those in control group and intervention group（P＜0.05）.
Conclusion HMGB1and TLＲ2participate in the pathogenesis of asthma；1，25－（OH）
2D
3
can inhibit the expressions of HMGB1and
TLＲ2in lung and airway remodeling of asthmatic mice.
Key words：1，25－（OH）
2D
3
；Asthma；HMGB1；TLＲ2
支气管哮喘是一种气道慢性炎症性疾病，多种细胞及细胞组分参与其发病过程，是威胁公众健康的慢性呼吸系统疾病之一，具体病因尚未完全明确。高迁移率族蛋白B1（high mobility group box1，HMGB1）是一种高度保守且普遍存在的核蛋白，在胞外HMGB1与其受体晚期糖基化终产物受体（receptor for advanced glycation end products，ＲAGE）、Toll样受体2（Toll like receptor2，TLＲ2）、Toll样受体4（Toll like receptor4，TLＲ4）结合，促使多种炎症因子的释放，从而放大炎症反应［1］。1，25－（OH）2D3除参与骨骼和钙的代谢外，还有免疫调节的作用。目前有研究表明维生素D与支气管哮喘的发病有关［2］，本实验通过建立哮喘小鼠模型，并给予1，25－（OH）2D3进行干预，测定HMGB1和TLＲ2在各组小鼠肺内的表达，观察1，25－（OH）2D3对哮喘的影响及其可能的作用机制。
1材料和方法
1.1动物及主要试剂30只SPF级健康BALB/c雌性小鼠［6 8周龄，体重（20?2）g］，由河南省实验动物中心提供。鸡卵清蛋白（ovalbumin，OVA）和1，25－（OH）2D3购自Sigma公司，免疫组化一抗
购于北京博奥森生物技术有限公司，二抗及显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司，Trizol反试剂盒和PCＲ试剂购自Transgene公司。
1.2实验方法
1.2.1哮喘模型的制备将30只BALB/c雌性小鼠随机分为3组：对照组、哮喘组和干预组。参照既往实验方法制备哮喘模型［3］：第1、8、15天进行致敏，即给予哮喘组和干预组腹腔内注射抗原混合液0.2ml （含10%氢氧化铝0.15ml、OVA50μg和生理盐水0.05ml），对照组腹腔内注射0.2ml生理盐水。第22天起每天激发1次，即哮喘组和干预组小鼠给予雾化吸入1%OVA，每次30min；对照组给予生理盐水雾化吸入，共14次。干预组于每次激发前30min 按4μg/kg给予1，25－（OH）2D3进行干预，即腹腔内注射1，25－（OH）2D3混合液0.08ml（含1，25－
（OH）
2D
3
0.08μg、无水乙醇2.0μl、生理盐水
0.08ml）；哮喘组和对照组每次激发前30min腹腔注射生理盐水0.08ml。
1.2.2标本制备各组小鼠于末次激发后24h内处死，取出左肺用于ＲT－PCＲ检测。取出右肺置于4%甲醛溶液中外固定48h，酒精梯度脱水，石蜡包埋，并进行切片，片厚3μm，用于HE染色及免疫组化染色。
1.2.3HE及免疫组化染色从每只小鼠的肺组织切片中随机选取3张用于HE染色。HE染色下观察各组小鼠肺组织形态学改变；每张切片随机选取5个直径约2mm的完整支气管横截面，应用Image Pro Plus6.0图像分析软件测定支气管基底膜周径、总管壁面积（自黏膜层到平滑肌层），并用支气管基底膜周径将测量值标准化，以总管壁面积/支气管基底膜周径代表相应管壁层的厚度。每只小鼠肺组织切片中随机选取3张进行免疫组化染色，每张切片随机选取5个高倍镜视野（10?40），应用计算机图像分析系统测定HMGB1和TLＲ2的平均IOD值。
1.2.4ＲT－PCＲ方法测定HMGB1mＲNA及TLＲ2mＲNA采用Trizol提取左肺组织总ＲNA，使用逆转录试剂盒合成单链cDNA，再设计引物，扩增目的基因。HMGB1上游引物序列：5＇－GAAGAGGAG-GAAGAAGAGGA－3＇，下游引物序列：5＇－GCAAGGT-TAGTGGCTATTGA－3＇，产物长度270bp；TLＲ2上游引物序列：5＇－AGAATCAATACAATAGAGGGAGAC－3＇，下游引物序列：5＇－TCGACTTTAGACTTTGGGAC－3＇，产物长度331bp；内参GAPDH上游引物序列：5＇－GAGGCCGGTGCTGAGTATGT－3＇，下游引物序列：5＇－GGTGGAAGAGTGGGAGTTGCT－3＇，产物长度618 bp。反应条件：94?预变性2min，1个循环；94?变性30s，55?退火30s，72?延伸2min，共35个循环；72?总延伸6min。扩增产物在2%琼脂糖凝胶上进行电泳，应用凝胶电泳成像系统观察目的基因，目的基因HMGB1及TLＲ2mＲNA的表达量以目的基因HMGB1及TLＲ2的DNA条带与内参GAPDH的DNA条带灰度值的比值表示。
1.3统计学分析应用SPSS17.0进行统计学分析。数据用（x?s）表示，不同组间的比较采用单因素方差分析，两个变量的相关性采用Pearson相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1各组小鼠肺组织HE染色对照组支气管黏膜完整，上皮细胞排列整齐，黏膜下见少量炎症细胞浸润；哮喘组支气管黏膜增厚，上皮细胞破坏，气道壁增厚，黏膜下可见大量炎性细胞聚集；干预组气道炎症及气道壁厚度均较哮喘组减轻。见图1、表1。
2.2各组小鼠肺内HMGB1和TLＲ2的表达HMGB1阳性染色为棕黄色，主要分布于气道上皮细胞和肺泡上皮细胞中，在胞浆和胞核中均有表达，HMGB1在哮喘组的表达高于对照组和干预组。TLＲ2阳性染色呈棕黄色，主要分布炎症细胞及气道上皮细胞的胞膜、胞浆，在哮喘组的表达高于对照组和干预组。见图2、图3、表1。
2.3各组小鼠肺内HMGB1mＲNA及TLＲ2mＲNA的表达HMGB1mＲNA和TLＲ2mＲNA在哮喘小鼠肺内的表达明显高于对照组和干预组，差异均有统计学意义（F=766.023、86
3.726，P均＜0.05）。见图4、表2
。
A
对照组B
哮喘组C干预组图1各组小鼠肺组织病理形态学改变（HE，?400）
D
对照组E
哮喘组F干预组图2各组小鼠肺内HMGB1的表达（SP，?400
）
G
对照组H
哮喘组I干预组
图3各组小鼠肺内TLＲ2的表达（SP，?400）
表1各组小鼠肺内HMGB1及TLＲ2的表达及
气道壁厚度（x?s）
组别例数HMGB1（IOD）TLＲ2（IOD）气道壁厚度（μm2/μm）
对照组1015.7?1.619.3?1.219.9?1.4
哮喘组1091.5?8.9a91.6?6.5a51.3?4.9a
干预组1037.1?2.1b38.9?3.1b26.6?1.5b
F值532.593411.575140.524
P值＜0.05＜0.05＜0.05
注：a为与对照组比较，P＜0.05；b为与哮喘组比较，P＜0.05
。
1对照组；2哮喘组；3干预组
图4各组小鼠肺组织中HMGB1mＲNA及TLＲ2mＲNA的表达
表2各组小鼠肺组织中HMGB1mＲNA及
TLＲ2mＲNA表达（x?s）
组别例数HMGB1mＲNA TLＲ2mＲNA
对照组100.135?0.0080.184?0.011
哮喘组100.650?0.035a0.682?0.049a
干预组100.346?0.014b0.358?0.027b
F值766.023863.726
P值＜0.05＜0.05
注： a.为与对照组比较，P＜0.05； b.为与哮喘组比较，P＜
0.05。
2.4相关性分析肺组织内HMGB1与TLＲ2的表达
呈正相关（r=0.970，P＜0.01），肺组织内
HMGB1mＲNA及TLＲ2mＲNA的表达呈正相关（r=
0.980，P＜0.01）。
3讨论
HMGB1是一种高度保守的核蛋白，在核内参与
核小体的构建和稳定，调节基因的转录，并参与细胞
复制及分化成熟等生命活动。近年来，HMGB1作为
一种新的晚期炎症因子受到广泛关注。核内HMGB1
可通过炎症细胞的主动分泌和坏死细胞的被动释放转
移至细胞外，在核外通过与ＲAGE、TLＲ2、TLＲ4等
受体结合，激活相应的信号传导途径，从而介导炎症
反应、促进细胞分化、血管生成及肿瘤生长等［4］。
近年来研究发现，HMGB1与脓毒症、风湿免疫、肿
瘤、缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化等多种疾病密切
相关［5］。有研究表明，支气管哮喘患者诱导痰液中
的HMGB1水平明显高于对照组，且与哮喘的严重程
度呈正相关。表明HMGB1可能在哮喘的发病过程中
发挥作用［6］。
Toll样受体家族（TLＲs）是免疫系统中一个经
典的膜受体家族。TLＲ2、TLＲ4可与胞外HMGB1结
合影响转录因子NF－ΚB的作用而发挥效应［1，7］。既
往研究已表明TLＲ4参与了哮喘的发病过程［8］。TLＲ2
主要分布于单核细胞、树突状细胞、巨噬细胞、小神
经胶质细胞、B细胞和T细胞（包括Treg细胞）等
表面。在心肌细胞、血管内皮细胞、血管外膜的成纤
维细胞、动脉粥样硬化斑块区的巨噬细胞和内皮细胞、气道上皮细胞、肺泡及肾小管上皮细胞亦有TLＲ2的表达［9］。HMGB1与TLＲ2结合后可活化MyD88、IＲAK和TＲAF，进而激活NF－ΚB，诱导炎症反应［10］。王钰发现TLＲ2和TLＲ4在在变应性鼻炎组小鼠鼻黏膜细胞核和胞浆的表达明显高于正常小鼠［11］。本实验结果显示，哮喘小鼠模型肺内HMGB1及其受体TLＲ2的表达均高于对照组，ＲT－PCＲ结果显示哮喘组小鼠肺内HMGB1mＲNA及TLＲmＲNA的表达量均高于对照组，且二者的表达呈正相关，提示HMGB1与TLＲ2结合激活NF－ΚB传导通路可能参与了哮喘的发病过程。
维生素D是人体所必需的营养素之一，其活性代谢产物除具有调控钙盐代谢和骨骼稳定等作用外，还参与宿主的防御、免疫调节和修复等病理生理过程，与儿童生长发育及某些疾病密切相关。1，25－
（OH）
2D
3
能够影响活化T细胞的分化，减少IL－2和
IFN－γ的分泌，抑制Th1细胞反应，通过增加IL－4、IL－5、IL－10的分泌促进Th2细胞反应，并促进Th1细胞向Th2细胞转化［12］。夏维等发现应用1，25－
（OH）
2D
3
对哮喘豚鼠进行干预，能降低哮喘豚鼠的
气道阻力和肺组织炎症，抑制肥大细胞释放类胰蛋白酶［13］。张巧玲等给予生命早期小鼠补充维生素D，并制作哮喘模型，发现补充中等剂量维生素D组肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸细胞数明显减少，肺组织病理改变程度较轻［14］。宋颖芳等通过实验表明维生素D能够通过抑制NF－ΚB活化下调哮喘小鼠肺组织中MMP－9的表达，从而减轻气道重塑［15］。以上研究提示维生素D可抑制哮喘炎症反应和气道重塑过程。本实验结果显示1，25－（OH）2D3干预组小鼠气道上皮细胞脱落、炎症细胞浸润及气道壁增厚均较哮喘组减弱，提示1，25－（OH）2D3在改善哮喘气道炎症和气道重塑方面发挥作用。干预组小鼠肺内HMGB1和TLＲ2蛋白及mＲNA的表达均明显低于哮喘组，提示1，25－（OH）2D3抑制了HMGB1和TLＲ2在哮喘小鼠肺内的表达。
本实验结果表明，1，25－（OH）2D3可以改善哮喘小鼠气道炎症及气道重塑，为哮喘的治疗提供新的思路，但具体作用途径以及其降低HMGB1及TLＲ2在哮喘小鼠肺内表达的机制仍需进一步研究。
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收稿日期：2015-07-13责任编校：李秀娟
文字和标点符号使用规范
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稿件中标点符号应根据GB/T15834—1995《标点符号用法》正确使用。以下为使用标点符号需要注意的几点：①表示数值范围的连接号以采用“ ”为宜。但在参考文献表中表示文献页码起止范围时，应一律采用连字符。连接复合词、重叠词的两个部分的连接号，用连字符。②省略号应采用2个三连点“……”，其后不写“等”字及其他标点符号。③撰写外文文章时应遵循外文习惯使用标点符号，如英文无顿号“、”，应使用逗号“，”；无浪纹连接号“ ”，应使用连字符“－”；无书名号“《》”，书名、刊名用斜体排印。
重症哮喘题库1-1-8
重症哮喘题库1-1-8
问题： [单选,A1型题]以下是重症型哮喘的临床表现，但除外（） A.呼吸困难，可出现胸腹矛盾运动，三凹征 B.呼吸困难，常端坐呼吸、大汗淋漓 C.呼吸频率大于30分钟 D.脉率110分钟、常有交替脉 E.脉率120／分钟、常有奇脉 重度哮喘急性发作时，患者休息状态下也存在呼吸困难，端坐呼吸；说话受限，只能说字，不能成句。常有烦躁、焦虑，发绀、大汗淋漓。呼吸频率常30分钟，辅助呼吸肌参与呼吸运动。双肺满布响亮的哮鸣音，脉率120分钟。常有奇脉。PEFR或FEV150%正常预计值或本人平时最高值，或100L 分钟或疗效2小时。PEF昼夜变异率30%。吸入空气情况 下，PaCO245mmHg，PaO250mmHg，SaO291%～92%、pH降低。除上述重度哮喘的表现外，危重哮喘（重症哮喘）患者还表现为：严重呼吸困难，呼吸浅快，常被迫端坐，甚至出现胸腹矛盾运动或三凹征；不能讲话，嗜睡或意识模糊；呼吸音减弱或消失（沉默肺）；心动徐缓、奇脉；动脉血气表现为严重低氧血症和呼吸性酸中毒，患者呼吸可能很快停止，于数分钟内死亡。重症哮喘时脉率120／分钟、常有奇脉，但不会出现交替脉。故答案选择D。
问题： [单选,A1型题]以下患者体征中，符合重型哮喘的表现为（） A.呼吸困难，一般伴有出现潮式呼吸 B.端坐呼吸、存在哮鸣音甚至沉默肺 C.呼吸频率大于25分钟 D.脉率110分钟、常有交替脉 E.意识清晰、语言流畅
问题： [单选,A1型题]心源性哮喘与支气管哮喘不同点在于（） A.慢性、阵发性、季节性发作史 B.呼气性呼吸困难 C.肺部听诊哮鸣音 D.心脏无特殊体征 E.咳粉红色泡沫痰 心源性哮喘与支气管哮喘的不同点是前者咳粉红色泡沫痰，因为心源性哮喘是急性肺水肿，粉红泡沫痰是其典型特征。两者均可呈慢性、阵发性、季节性发作，均呈呼气性呼吸困难，肺部均闻及哮鸣音。并非瓣膜病或非先天性心脏病时，心源性哮喘也无心脏特殊本征。故答案选择E。 (辽宁11选5 https://www.360docs.net/doc/ce10838503.html,)
哮喘病因病理是什么
哮喘病因病理是什么 病理病因本病的病因较复杂，大多认为是一种 多基因遗传病，受遗传因素和环境因素的双重影响。(一)遗传因素哮喘与遗传的关系已日益引起重视，根据家系资料，早期的研究大多认为哮喘是单基因遗传病，有学者认为是常染色体显性遗传(autosomal dominant inheritance)的疾病，也有认为是常染色体隐性遗传(autosomal recessive inheritance)的疾病，目前则认为哮喘是一种多基因遗传病，其遗传度约在70%～80%，多基因遗传病是位于不同染色体上多对致病基因共同作用所致，这些基因之间无明显的显隐性区别，各自对表现型的影响较弱，但有累加效应，发病与否受环境因素的影响较大，所以，支气管哮喘是由若干作用微小但有累积效应的致病基因构成了其遗传因素，这种由遗传基础决定一个个体患病的风险称为易感性，而由遗传因素和环境因素共同作用并决定一个个体是否易患哮喘的可能 性则称为易患性，遗传度的大小可衡量遗传因素在其发病中的作用大小，遗传度越高则表示遗传因素在其发病中的作用大小，遗传度越高则表示遗传因素在发病中所起的作用越大，许多调查资料表明，哮喘患者亲属患病率高于群体患病率，并且亲缘关系越近，患病率越高;在一个家系中，患病人数越多，其亲属患病率越高;患者病情越严重，其亲属患病率也越
高，汪敏刚等调查哮喘患儿Ⅰ及Ⅱ级亲属的哮喘患病率，并与对照组比较，哮喘组中Ⅰ级亲属哮喘患病率为8.2%，Ⅱ级亲属患病率为2.9%，前者的哮喘患病率明显高于后者，对照组的Ⅰ，Ⅱ级亲属哮喘患病率分别为0.9%和0.4%，其患病率分别低于哮喘组Ⅰ，Ⅱ级亲属的哮喘患病率。哮喘的重要特征是存在有气道高反应性，对人和动物的研究表明，一些遗传因子控制着气道对环境刺激的反应，章晓冬等采用组织吸入法测定40例哮喘患儿双亲及34例正常儿童双亲的气道反应性，哮喘患儿双亲大多存在不同程度气道反应性增高，PC20平均为11.6mg/ml，而正常儿童双亲的PC20均大于32mg/ml，说明哮喘患者家属中存在气道高反应性的基础，故气道高反应性的遗传在哮喘的遗传中起着重要的作用。 目前，对哮喘的相关基因尚未完全明确，但有研究表明可能存在有哮喘特异基因，IgE调节基因和特异性免疫反应基因，常染色体11q12q13含有哮喘基因，控制IgE的反应性;近几年国外对血清总IgE遗传学的研究结果认为，调节总IgE的基因位于第5对染色体;控制特异免疫反应的不是IgE调节基因，而受免疫反应基因所控制，免疫反应基因具有较高的抗原分子的识别力，在小鼠实验中证实免疫反应基因位于第17号染色体上的MHC区域中，有研究表明，人类第6号染色体上HLA区域的DR位点也存在免疫反应基因，控制了对某种特异性抗原发生免疫反应，所以，在哮喘的发病过程中受
哮喘动物模型研究现状精
哮喘动物模型研究现状 【摘要】支气管哮喘是呼吸系统一种常见病与多发病。其发病机制复杂，建立合适的动物模型有助于开发治疗人类变应性疾病的新药。本文主要就哮喘动物模型的研究现状进行综述。 关键词】哮喘动物模型 Abstract ： Bronchial asthma is a common disease and frequently encounter ed disease of respiratory apparatus.The pathogenesy is complic ated,establishing suitable animal models of asthma benefits th e development of new drug to treat humans'allergic disease.A brief review on the establishment of animal modles on asth ma was made in this *****. Key words：asthma;animal modle 支气管哮喘是呼吸系统一种常见病与多发病。有关哮喘发病机制的探索、新治疗方法的评价、新药研究与开发都主要依赖于动物实验。但是，动物自发形成的变应性哮喘很少，目前，哮喘的动物模型还很难完全模拟人类哮喘，只能在动物身上模拟哮喘的某些特征。 本文主要就哮喘动物模型的研究现状进行综述。用于模拟人类支气管哮喘的动物种类很多，常用的如豚鼠、大鼠、小鼠、家兔等，用猫、狗、猪等动物复制哮喘模型也有报道。 1豚鼠 豚鼠是使用最广泛的变应性疾病动物模型。尽管这种动物与人类有极大差异，但致敏豚鼠的过敏性支气管收缩在研究抗过敏、支气管扩张药物方面仍然是最常使用的模型。 致敏豚鼠的支气管过敏反应是常用的“速发型”变态性支气管收缩模型］1］,这类模型的发病机制与人类的哮喘症相仿，同属I型变态反应，其模型发病快，阳性率极高，但病程短，有些动物可发生急性过敏性休克而死亡，为防止动物过度反应死亡，可在激发前给豚鼠腹腔注射适量抗组胺药。腹腔注射卵白蛋白致敏豚鼠，致敏后14?21d,再用1 %的卵白蛋白给豚鼠雾化吸入2min或用0.01 %的卵白蛋白雾化吸入60min,可诱导豚鼠产生迟发相支气管收缩，在雾化吸入17?24h达峰］2］0此外，豚鼠还是研究职业性哮喘建立的第一种动物模型［3］。 以豚鼠作为哮喘模型有许多好处，例如：价格低廉，易处理，变应原诱发的支气管收缩与人类支气管哮喘中的收缩特点相同。但豚鼠缺乏具有明确基因型的种系，也缺乏相关的免疫学和分子生物学试剂，尽管能产生很好的气道炎症模型，但对于进一步深入研究免疫和遗传机制较困难。因此，在实验中越来越多地使用大鼠、小鼠等动物进行研究。 2大鼠
案例分析-支气管哮喘
2009-11-16
呼吸科案例分析
田艳平
患者基本信息
? 患者：张某 ? 性别：男 ? 年龄：61岁 ? 身高：174cm ? 体重：65kg ? 职业：保险代理
1
2009-11-16
主诉
发作性喘憋50余年、加重10天
现病史
患者于50余年前无明显诱因出现发作性喘憋，以 呼气性呼吸困难为主，可自行缓解或服药后缓解， 未系统诊治。青壮年时期上述症状不再发作。近5 年来喘憋发作频繁，闻刺激性气味如花粉、油烟味 以及冷空气后可诱发，4年前曾就诊于友谊医院， 诊断为“支气管哮喘”，使用茶碱、万托林及舒利 迭等药物可缓解症状，10天前患者闻油烟味后喘憋 发作，伴咳嗽、有少量粘性白痰。
2
2009-11-16
既往史
1.高血压病史20年，最高可达165/80m mHg,口服苯磺酸氨氯地平、酒石酸美 托洛尔,但服药不规律 2.胃溃疡病史5年(用药具体不详)
? 药物食物过敏史
无药物食物过敏史
? 家族史
否认家族遗传病史
3
2009-11-16
个人史
? 吸烟史：40年，5支/日 ? 饮酒时：40年，2-3两/日
体格检查
? T 36.8度 Bp140/80mmHg ? P 110次/分 RR 20次/分 ? 神清，口唇无紫绀，球结膜无水肿，颈静脉无怒张， 全身浅表淋巴结未及肿大。双肺呼吸音低，双肺可 闻及广泛响亮的哮鸣音，两肺底闻及少量湿啰音。 心界不大，律齐，各瓣膜听诊区未闻及病理性杂音。 腹软，无压痛，肝脾肋下未触及，双下肢无水肿。
4
支气管哮喘教学大纲
支气管哮喘概述 教学要求 一、熟悉本病的病因及发病机理。 二、掌握本病的临床表现，类型、诊断及鉴别诊断，并发症 三、掌握本病的防治方法，重点为发作期的治疗。 一、特征： (一)病理特征：一种气道的慢性炎症，主要有嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T淋巴细胞等细胞参与，在受到激发因子刺激时具有气道高反应性(BHR)。 (二)临床特征： 反复发作性的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和清晨发作、加剧，多数患者可自发或治疗后缓解。 二、病因及机制： 病因还不十分清楚。主要病因有过敏、感染、食物、药物、气候变化、运动等。发病机制不完全清楚，可概括为免疫-炎症反应、神经机制和气道高反应性及相互作用。 三、临床表现： (一)典型症状：诱因；发作性呼气性呼吸困难或胸闷；可伴咳嗽、咳痰。 (二)体征：广泛哮鸣音、呼气时间延长、肺过度充气体征。严重者心率增快、奇脉、胸腹反常呼吸(示膈肌疲劳)、紫绀。 (三)不典型表现：久治不愈的咳嗽(干咳)、肺部未闻哮鸣音(原因?)。 四、有关检查：
1、肺功能检查：可了解病情程度和观察治疗效果。必要时作气道激发试验、支气管舒张试验、呼气峰流速。 2、血气分析：呼吸衰竭判断。 3、胸片检查：排除其它疾病，有无并发气胸。 4、变应原检测：结合病史有助于对患者的病因诊断和脱离致敏因素的接触。 5、其它：如血嗜酸性粒细胞计数、痰检等。 五、诊断： 1. 反复发作喘息、气急、胸闷或咳嗽，多与接触变应原、冷空气、物理、化学性刺激以及病毒性上呼吸道感染、运动等有关。 2. 发作时在双肺可闻及散在或弥漫性，以呼气相为主的哮鸣音，呼气相延长。 3. 上述症状和体征可经治疗缓解或自行缓解。 4. 除外其他疾病所引起的喘息、气急、胸闷和咳嗽。 5. 临床表现不典型者（如无明显喘息或体征）应有下列三项中至少一项阳性：1）支气管激发试验或运动激发试验阳性；2）支气管舒张试验阳性FEV1增加≥12%，且FEV1增加绝对值≥200 ml； 3）昼夜PEF变异率≥20 %。 符合1～4条或4、5条者，可以诊断为哮喘。 病情评价： 1、非急性发作时：根据发作频率、药物治疗来分。 2、急性发作时：依发作时症状、体征和有关检查来分，尤其是重度和危重者。
哮喘的病理
北京宣武医院预约挂号https://www.360docs.net/doc/ce10838503.html, ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 哮喘的病理 经典的支气管哮喘病理生理学认为，支气管平滑肌的痉挛和肥大是引起哮喘病的主要病理学改变，但近年来的研究结果认为无论在发病机制方面，还是在影响气道通气方面，气道炎症以及炎症诱发的气道重塑比平滑肌痉挛可能更为重要。 实际上大、中支气管软骨环的环状支撑力可大大限制气道平滑肌的痉挛效应，但在细小支气管，气道平滑肌的痉挛仍然可以诱发较为明显的支气管狭窄。一般认为哮喘病患者的气道炎症以小气道为主，可是最近Martyn的研究表明哮喘病患者的气道炎症可以存在于大、小气道的20多级支气管直至肺泡，提示了哮喘病的气道炎症是广泛而弥漫性的，可以累及整个气道，通常越靠近管腔的组织层面，其炎症损伤就越严重，因此气道上皮往往是炎症损伤最为严重的。 有关气道炎症的性质仍然有一定争议，目前有变应性炎症、神经源性炎症、病毒感染性炎症等多种理论，根据气道炎症中的细胞浸润以嗜酸细胞为主，目前大多数学者倾向于认为哮喘病的气道炎症是变应性的。同时还认为在变应原诱发的速发相哮喘反应中，引起哮喘病人气道通气障碍的原因以气道平滑肌痉挛为主;而在变应原诱发的迟发相哮喘反应中，气道粘膜主要以气道变应性炎症改变为主，是气道变应性炎症所导致的粘膜炎性水肿、充血、渗出物增加甚至粘液栓形成引起了气道的阻塞性改变，近年来通过对哮喘病患者在肺段内变应原支气管激发试验前后的纤支镜活组织病理学检查也证实了这一点。 气道重塑以气道慢性炎症为发生基础，是气道炎症慢性化发展的必然结果，由于气道长期持续性的炎症反复发作，反复修复，结果导致组织增生而发生重塑。气道重塑主要发生在成年哮喘患者，大多数成人慢性哮喘病患者均可产生不同程度的气道重塑，儿童哮喘较为少见。 气道上皮的炎性损伤-修复-再损伤-再修复所导致的气道重塑可能是哮喘病发展成难治性哮喘的重要病理生理学基础。气道重塑的发生机制与气道内炎性细胞释放的炎症促进因子和生长因子有关，基因表达、其他细胞因子和炎性介质也参与了气道的重塑机制。气道重塑在临床上可表现出不可逆性或可逆性差的气道通气功能障碍和气道高反应性，同时仍然可以出现迟发相哮喘反应的特征。
第七章 支气管哮喘
第七章支气管哮喘 支气管哮喘(bronchial asthma，简称哮喘)是由多种细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病。这种慢性炎症与气道高反应性相关，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，并引起反复发作性的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和(或)清晨发作、加剧，多数患者可自行缓解或经治疗缓解。支气管哮喘如诊治不及时，随病程的延长可产生气道不可逆性缩窄和气道重塑。而当哮喘得到控制后，多数患者很少出现哮喘发作，严重哮喘发作则更少见。来自全球哮喘负担的数据表明，尽管从患者和社会的角度来看，控制哮喘的花费似乎很高，但不正确的治疗可导致哮喘反复发作，治疗费用将会更高。因此，合理的防治至关重要。为此，世界各国的哮喘防治专家共同起草，并不断更新了全球哮喘防治倡议(Global Initiative for Asthma,GINA)。GINA目前已成为防治哮喘的重要指南。 [流行病学] 全球约有1.6亿患者。各国患病率不等，国际儿童哮喘和变应性疾病研究显示13～14岁儿童的哮喘患病率为0-30%，我国五大城市的资料显示同龄儿童的哮喘患病率为3%～5%。一般认为儿童患病率高于青壮年，老年人群的患病率有增高的趋势。成人男女患病率大致相同，发达国家高于发展中国家，城市高于农村。约40%的患者有家族史。 [病因和发病机制] (一)病因
哮喘的病因还不十分清楚，患者个体过敏体质及外界环境的影响是发病的危险因素。哮喘与多基因遗传有关，同时受遗传因素和环境因素的双重影响。 许多调查资料表明，哮喘患者亲属患病率高于群体患病率，并且亲缘关系越近，患病率越高；患者病情越严重，其亲属患病率也越高。目前，哮喘的相关基因尚未完全明确，但有研究表明存在有与气道高反应性、IgE调节和特应性反应相关的基因，这些基因在哮喘的发病中起着重要作用。 环境因素中主要包括某些激发因素，如尘螨、花粉、真菌、动物毛屑、二氧化硫、氨气等各种特异和非特异性吸入物；感染，如细菌、病毒、原虫、寄生虫等；食物，如鱼、虾、蟹、蛋类、牛奶等；药物，如普萘洛尔(心得安)、阿司匹林等；气候变化、运动、妊娠等都可能是哮喘的激发因素。 (二)发病机制 哮喘的发病机制不完全清楚，可概括为免疫-炎症反应、神经机制和气道高反应性及其相互作用。 1.免疫-炎症机制 免疫系统在功能上分为体液(抗体)介导的和细胞介导的免疫，均参与哮喘的发病。 (1)抗原通过抗原递呈细胞激活T细胞，活化的辅助性T细胞(主要是Th2细胞)产生白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-10和IL-13等进一步激活B 淋巴细胞，后者合成特异性IgE，并结合于肥大细胞和嗜碱性粒细胞等
重度哮喘发作的定义
根据GINA和我国支气管哮喘防治指南，哮喘急性发作可根据病情严重程度分为轻度、中度、重度和危重型4级。见表1。 表1 哮喘急性发作时病情严重程度的分级 （一）重度哮喘发作：患者休息状态下也存在呼吸困难，端坐呼吸；说话受限，只能说字，不能成句。常有烦躁、焦虑、紫绀、大汗淋漓。呼吸频率常>30次/min，辅助呼吸肌参与呼吸运动。双肺满布响亮的哮鸣音，脉率>110 次/min。常有奇脉。使用?2-激动剂后PEFR或FEV1<50%正常预计值或本人平时最高值，或<100L/min,或疗效<2小时。PEF昼夜变异率>30%。吸入空气情况下，PaCO2>45mmHg,PaO2<50mmHg,SaO2<91–92%，pH降低。 （二）危重哮喘发作：又称为致死性哮喘，除上述重度哮喘的表现外，患者常不能讲话，嗜睡或意识模糊，呼吸浅快，胸腹矛盾运动，三凹征，呼吸音减弱或消失（沉默肺），心动徐缓，动脉血气表现为严重低氧血症和呼吸性酸中毒，提示危险征兆，患者呼吸可能很快停止，于数分钟内死亡。原因可能为广泛痰栓阻塞气道，呼吸肌疲劳衰竭，或并发张力性气胸、纵隔气肿。总体上根据其临床特点，危重哮喘可分为两种基本类型（表2）。 1.缓发持续型（致死哮喘I型）此型多见于女性，约占致死性哮喘的80%~85%。患者症状控制不理想，常反复发作，或长时间处于哮喘持续状态不能缓解，常规治疗效果不佳，病情进行性加重，在几天甚至几周内恶化，以迟发性炎症反应为主，病理改变为气道上皮剥脱，粘膜水肿、肥厚，粘膜下嗜酸性粒细胞浸润，粘液栓堵塞。 2.突发急进型（致死哮喘II型）此型较少见，主要发生在青壮年，尤其是男性病人。病情突然发作或加重，若治疗不及时，可于短时间内（几小时甚至几分钟内）迅速死亡，故也称
支气管哮喘动物模型的研究现状
虽匿壁堡壅查！！！！生筮堡鲞整！塑！坐！堡！！旦ｉ！！坚型！！！！！∑亟：！！：塑！：！ 支气管哮喘动物模型的研究现状 李颖华李超乾 【摘要】支气管哮喘（哮喘）是一种常见多发病，哮喘实验动物模型的建立在研究其病因、发病机制以及制定防治方案等方面有着重要意义。通过对近年来国内外哮喘动物实验研究文献进行总结，从实验动物的选择、制备模型的方法及模型的应用等方面进行综合分析，为进一步开展哮喘研究提供帮助。 【关键词】哮喘；实验模型；动物 Ｒ￥ｅａｃｈｓｔａｔｕｓｏｎａｎｉｍａｌｍ仇ｌｅｌｏｆｂｒｏｎｃｈｉａｌ嬲ｔｈｍａＬＪｙ抽ｇ’．Ｉｌ“ｎ，ＬＪＣ＾口Ｄ＿ｑ记以．ＤＢ户口ｒ￡ｍ明ｒｏ，Ｒｅ５夕ｉ，ｕ￡ｏｒｙＭｇ矗ｉｃｉ拜Ｐ，执。Ｆｉｒ盯Ａ，，ｉｚｉ口ｆＰｄＨｏｓ户ｉｆ口ｚＤ－厂ＧＭｎ刀ｇｚｉＭＰｄｉｆ口Ｚ己％ｉｔ膪，百ｉｆｙ，Ｎ＆竹行ｉ挖ｇ５３００２１，（玩ｉ珂ａ ｌ［为ｒｒ８ｓｐｏ起ｄｉ以ｇ口“ｆ＾ｏｒ：ＬＪ（流口Ｄ—ｑｉ口粗 【ＡｂＳｔｒａｃｔ】Ｂｒｏｎｃｈｉａｌａｓｔｈｍａｉｓａｋｉｎｄｏｆｃｏｍｍｏｎａｎｄｒｅｃｕｒｒｅｎｔｄｉｓｅａｓｅ，ｓｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇａｎａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｏｆａｓｔｈｍａｐｌａｙｓａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｒｏｌｅｉｎｅｔｉｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｓｉｓ，ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｙ，ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄ ｃｕｒｅｏｆａｓｔｈｍａ．Ｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｏｎａｓｔｈｍａ，ｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｌａｔｅｓｔａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆａｎｉｍａｌ。ｍｅｔｈｏｄｓｏｆｆｏｒｍｕｌａｔｉｎｇａｍｏｄｅｌａｎｄｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｏｄｅｌ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ａｓｔｈｍａ；Ｍｏｄｅｌ；Ａｎｉｍａｌ 支气管哮喘（哮喘）是由嗜酸粒细胞、肥大细胞、 Ｔ细胞及白细胞等多种细胞及细胞组分参与的慢性 气道炎症，并由此产生气道高反应性，从而引起可逆 性气流受限的一种疾病。近二十年来，世界范围内 的哮喘发病率呈上升趋势，哮喘在工业化国家的发 病率翻了一倍，是１５岁以下儿童住院的主要原 因Ｌ１］。然而，哮喘的发病机制复杂，目前为止，人类 对哮喘发病的原因尚未十分明确，而直接对人体进 行实验有很大的限制性，因此，有关哮喘发病原因、 诱发因素、发病机制及药物防治等的研究在相当程 度上还需要通过动物实验进行。下面就近几年来支 气管哮喘动物模型制作的现状作一综述。 ｌ实验动物的选择 目前，国内外常用的哮喘动物模型有小鼠、大鼠 及豚鼠，也有使用马、羊、兔、犬等模型。有关研究发 现哮喘动物模型间不仅存在着种属、品系、性别、年 龄差异，在不同饲养坏境、佐剂及激发方法等方面也 有着显著差异性。 １．１小鼠近年来，随着大量的相关免疫学及分子 作者单位：５３００２１南宁，广西医科大学第一附属医院呼吸内科 通讯作者：李超乾．综述． 生物学试剂的出现，以及小鼠免疫遗传背景较清楚， 品系较纯等优点，用小鼠制作哮喘模型有逐年增加 的趋势，在国外小鼠已成为主要的哮喘模型，国内仍 以大鼠和豚鼠为主。常用的品系有ＢＡＬＢ／ｃ、 Ｃ５７ＢＬ／６、Ａ／Ｊ等，可用于制作过敏性、感染性及转 基因哮喘模型。用小鼠制作的哮喘模型能产生早发 型和迟发型哮喘反应，多数模型均能复制出与人类 相似的特征，包括气道炎症反应、气道高反应性 （ＡＨＲ）、气道黏液增多等，并已制备出反映气道慢 性炎症过程的气道重塑模型。Ｃｏｎｅｊｅｒｏ等［２１利用小 鼠制作的模型能产生明显的ＩｇＥ型超敏反应、细胞 因子［如白介素（ＩＬ一４）、ＩＬ一５、ＩＬ一１３等］明显肺部炎 症浸润。最近有学者研究发现用ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６ 系制作的哮喘模型，其炎症反应无明显差别［３］。小 鼠模型的缺点是体积小，操作及取材较困难，且其制 作往往需要多次致敏和激发。 １．２大鼠大鼠品系纯，来源多，价格较便宜，有关 分子生物学试剂较多，标本采集量较充足，对抗原反 应性较为一致，能出现与人类哮喘类似的速发相及 迟发相变态反应，因而大鼠哮喘模型应用有逐渐增 多的趋势。Ｓｃｈｍｉｅｄｌ等［４３用卵自蛋白（０ＶＡ）和灭 活的百日咳杆菌进行，１周后激发，于激发后４ｈ、万方数据
重症支气管哮喘症状鉴别常规
重症支气管哮喘症状鉴别常规 【临床表现】 支气管哮喘是由多种细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、嗜中性粒细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾患。这种慢性炎症导致气道高反应性的增加，并引起反复发作性的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和(或)清晨发作、加剧，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，多数患者可自行缓解或经治疗缓解。也有部分患者发作开始就非常严重，或常规治疗后仍不缓解，临床上常称为重症支气管哮喘。由于支气管严重阻塞，可威胁生命，需要积极救治。 【病因及主要病理生理改变】 患者基本致病因素包括遗传因素和接触外源性变应原，如吸人花粉、油烟、尘螨等，摄入 牛奶、海鲜等食物以及接触变应原如化妆品、药物等；重症哮喘发作诱因很多，同前基本明确的有以下几种：变应原或其他刺激因素持续存在、运动、呼吸道病毒感染可使哮喘患者气 道反应性进一步增高，引起哮喘发作．呼吸道细菌感染并不引起过敏反应，但是由于气道分泌物增多，可以加重气道狭窄，使哮喘发作或加重，其他还有精神心理因素、药物、气候等。
支气管哮喘的发病机制是气道综合性病理生理变化的结果．包括炎症基础和气流阻塞两方而，气道炎症是由多种炎症和结构细胞、细胞因子和炎性介质参与并相互作用形成．累及大、小气道和肺组织．并引起气道高反应性；气流受阻主要是由气道平滑肌功能失调异常收缩、支气管黏膜水肿、黏膜下炎症细胞浸润、腺体分泌亢进引起分泌物堵塞，以及逐渐加重的气道重塑等多种原因引起。 【院前急救】 1.吸氧。 2.吸入β2受体激动剂。 3.脱离变应原。 4.去除诱发因素。 【急诊检查】 （一）肺功能 1.呼气峰流速（PEF），应用峰流速仪测定。PEF<60%个人 最佳值，或PEF变异率（PEFR）>30%诊断为重度支气管哮喘发作。 2.第一秒用力呼气容积（FEV1）和用力肺活量（FVC）。 FEV1<60%个人最佳值，或FEV1变异率>30%诊断为重度支气管哮喘发作。 （二）动脉血气分析或无创脉搏氧饱和度 低氧血症是重症哮喘的主要死亡原因之一，所以监测血氧
哮喘动物模型研究现状
哮喘动物模型研究现状 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】支气管哮喘是呼吸系统一种常见病与多发病。其发病机制复杂，建立合适的动物模型有助于开发治疗人类变应性疾病的新药。本文主要就哮喘动物模型的研究现状进行综述。 【关键词】哮喘动物模型 Abstract：Bronchial asthma is a common disease and frequently encountered disease of respiratory apparatus.The pathogenesy is complicated,establishing suitable animal models of asthma benefits the development of new drug to treat humans’allergic disease.A brief review on the establishment of animal modles on asthma was made in this paper. Key words：asthma;animal modle 支气管哮喘是呼吸系统一种常见病与多发病。有关哮喘发病机制的探索、新治疗方法的评价、新药研究与开发都主要依赖于动物实验。但是，动物自发形成的变应性哮喘很少，目前，哮喘的动物模型还很难完全模拟人类哮喘，只能在动物身上模拟哮喘的某些特征。
本文主要就哮喘动物模型的研究现状进行综述。用于模拟人类支气管哮喘的动物种类很多，常用的如豚鼠、大鼠、小鼠、家兔等，用猫、狗、猪等动物复制哮喘模型也有报道。 1 豚鼠 豚鼠是使用最广泛的变应性疾病动物模型。尽管这种动物与人类有极大差异，但致敏豚鼠的过敏性支气管收缩在研究抗过敏、支气管扩张药物方面仍然是最常使用的模型。 致敏豚鼠的支气管过敏反应是常用的“速发型”变态性支气管收缩模型［1］，这类模型的发病机制与人类的哮喘症相仿，同属Ⅰ型变态反应，其模型发病快，阳性率极高，但病程短，有些动物可发生急性过敏性休克而死亡，为防止动物过度反应死亡，可在激发前给豚鼠腹腔注射适量抗组胺药。腹腔注射卵白蛋白致敏豚鼠，致敏后14～21d，再用1％的卵白蛋白给豚鼠雾化吸入2min或用0.01％的卵白蛋白雾化吸入60min，可诱导豚鼠产生迟发相支气管收缩，在雾化吸入17～24h达峰［2］。此外，豚鼠还是研究职业性哮喘建立的第一种动物模型［3］。 以豚鼠作为哮喘模型有许多好处，例如：价格低廉，易处理，变应原诱发的支气管收缩与人类支气管哮喘中的收缩特点相同。但豚鼠缺乏具有明确基因型的种系，也缺乏相关的免疫学和分子生物学试剂，尽管能产生很好的气道炎症模型，但对于进一步深入研究免疫和遗传机制较困难。因此，在实验中越来越多地使用大鼠、小鼠等动物进行研究。
如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定教程文件
如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定 实验肿瘤学的需要导致肿瘤动物模型的产生,借以研究人类肿瘤的病因、发生、发展以及治疗和预防。肿瘤动物模型可来自于动物的自发肿瘤、诱发肿瘤和移植性肿瘤。 一前两者由于对动物品系要求严格、实验周期较长或缺少实验一致性而较少使用。移植性肿瘤动物模型具有特性明确、生长一致性好、实验周期短、瘤株分布广泛、可反复复制等优点,在肿瘤研究中占有重要地位。可移植性肿瘤,是把动物或人的肿瘤移植到同系、同种或异种动物,经传代后,组织类型和生长特性已趋稳定,并能在受体动物中继续传代,又称为可移植性肿瘤细胞。二可移植性肿瘤移植于同系或同种动物,称为同种移植,是国内外最常用的肿瘤动物模型复制方法之一。同种移植的优点是,可供选择使用的细胞系或细胞株多,许多细胞系在世界范围分布广泛,并且这些细胞的生物学特性已经比较明确,一般都有明确的背景资料,使一群动物同时接种同样量的瘤细胞,生长速度一致、个体差异较小,成活率高,易于对照观察,这些都是便于科研成果相互比较和交流的有利因素 三在接种过程中，应把握注射深度，否则易造成内脏损伤。接种后三天即开始观察有无肿瘤形成。本实验具有周期短、制作方便、成功率比较高、较好重复性和稳定性的明显优势，是一种较为理想的肿瘤实验动物模型，值得推广。 肝癌肿瘤模型建立： 抗肿瘤药物及制剂的药效学评价，可通过建立小鼠荷瘤数据模型，探索肿瘤生长的本质及其发生发展的规律，探究其抗肿瘤效果。 方法：小鼠右腋下注射H22肿瘤细胞，注射部位发生癌变，小鼠肿瘤生长明显，切片结果证明实验成功，模型构建完成，使小鼠荷瘤，观察肿瘤生长，记录体重数据并建立动物模型。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1动物及分组：取20只昆明鼠随机分成A组（10只），B组（5只），C组对照组（5只），编号饲养。 1.1.2试剂：无菌水，生理盐水，台酚蓝，2%冰醋酸，甲醛，乙醇，二甲苯，石蜡等。 1.1.3仪器：离心机，显微镜，计数板，电子称，超净工作台，温箱，切片机等。 1.2实验方法 1.2.1模型建立：取H22肿瘤细胞，3000转离心分钟，再用无菌生理盐水洗涤肿瘤细胞3次，并做适当稀释，取40微升细胞悬液加入10微升0.4%台酚蓝染色并镜检计数，制成浓 度为3*106个/ml的肿瘤细胞悬液，每只小鼠右腋皮下接种肿瘤细胞悬液0.2毫升。 1.2.2：细胞计数：细胞计数液2%冰醋酸溶液。 取50微升细胞悬液加入450微升的细胞计数液中计数。 1.3记录： 接种完成后,逐日观察接种部位有无感染,肿瘤生长后有无自然消退,用游标卡尺，每周测量肿瘤长径a和短径b ,并计算平均直径,即r = (a + b) /2，每天称量小鼠体重和肿瘤并记录，绘制曲线。 1.4制备组织切片： a处死小鼠，将肿瘤组织切成1*1*0.4cm的小块。 b将切块的组织置于螺口瓶中，加入40%甲醛固定，过夜。
第7章 支气管哮喘
第七章支气管哮喘 支气管哮喘（bronchial asthma，简称哮喘）是由多种细胞（如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等）和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病。这种慢性炎症与气道高反应性相关，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，并引起反复发作性的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和（或）清晨发作、加剧，多数患者可自行缓解或经治疗缓解。支气管哮喘如诊治不及时，随病程的延长可产生气道不可逆性缩窄和气道重塑。而当哮喘得到控制后，多数患者很少出现哮喘发作，严重哮喘发作则更少见。来自全球哮喘负担的数据表明，尽管从患者和社会的角度来看，控制哮喘的花费似乎很高，但不正确的治疗可导致哮喘反复发作，治疗费用将会更高。因此，合理的防治至关重要。为此，世界各国的哮喘防治专家共同起草，并不断更新了全球哮喘防治倡议( Global Initiative for Asthma, GINA）。GINA目前已成为防治哮喘的重要指南。 【流行病学】 全球约有1.6亿患者。各国患病率不等，国际儿童哮喘和变应性疾病研究显示13-14岁儿童的哮喘患病率为0-30%，我国五大城市的资料显示同龄儿童的哮喘患病率为3％-5％。一般认为儿童患病率高于青壮年，老年人群的患病率有增高的趋势。成人男女患病率大致相同，发达国家高于发展中国家，城市高于农村。约4O％的患者有家族史。 【病因和发病机制】 （一）病因 哮喘的病因还不十分清楚，患者个体过敏体质及外界环境的影响是发病的危险因素。哮喘与多基因遗传有关，同时受遗传因素和环境因素的双重影响。 许多调查资料表明，哮喘患者亲属患病率高于群体患病率，并且亲缘关系越近，患病率越高；患者病情越严重，其亲属患病率也越高。目前，哮喘的相关基因尚未完全明确，但有研究表明存在有与气道高反应性、IgE调节和特应性反应相关的基因，这些基因在哮喘的发病中起着重要作用。 环境因素中主要包括某些激发因素，如尘螨、花粉、真菌、动物毛屑、二氧化硫、氨气等各种特异和非特异性吸入物；感染，如细菌、病毒、原虫、寄生虫等；食物，如鱼、虾、蟹、蛋类、牛奶等；药物，如普萘洛尔（心得安）、阿司匹林等；气候变化、运动、妊娠等都可能是哮喘的激发因素。 （二）发病机制 哮喘的发病机制不完全清楚，可概括为免疫-炎症反应、神经机制和气道高反应性及其相互作用。 1．免疫-炎症机制免疫系统在功能上分为体液（抗体）介导的和细胞介导的免疫，均参与哮喘的发病。 (1）抗原通过抗原递呈细胞激活T细胞，活化的辅助性T细胞（主要是Th2 细胞）产生白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-10和IL-13等进一步激活B淋巴细胞，后者合成特异性IgE,并结合于肥大细胞和嗜碱性粒细胞等细胞表面的IgE受体。若变应原再次进入体内，可与结合在细胞的IgE交联，使该细胞合成并释放多种活性介质导致平滑肌收缩、粘液分泌增加、血管通透性增高和炎症细胞浸润等。炎症细胞在介质的作用下又可分泌多种介质，使气道病变加重，炎症浸润增加，产生哮喘的临床症状，这是一个典型的变态反应过程。
支气管哮喘的体内和体外动物模型的研究现状
国际呼吸杂志２００８年第２８卷第６期ＩｎｔＪＲｅｓｐｉｒ，Ｍａｒ．２００８，Ｖ０１．２８，Ｎｏ．６ 支气管哮喘的体内和体外动物模型的研究现状 彭锦覃冬云 【摘要】通过对近年来国内外建立的支气管哮喘体内外动物模型的研究进行总结，从常用动物的选择、模型的分类到模型的应用及仍然存在的问题等方面进行综合分析，强调在实际运用时，不应该拘泥于某一种模型，而应该根据实验目的选择最能敏感地反映出研究指标的动物模型。 【关键词】哮喘；实验动物模型；体内；体外 Ｃｕｒｒｅｎｔｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｏｎａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｏｆ嬲ｔｈｍａｉｎｖｉｖｏａｎｄｖｉｔｒｏＰＥＮＧＪｉ行，ＱｆＮＤｏ咒ｇ一３Ｊ甜咒．匕６０ｒ口￡ｏｒｙＤ－厂Ｐ忍ｎ，‘，ｎｎｃｏＺｏｇｙ，ｌ！孰盘挖ｇｄｏ卵ｇ ＭＰｄｉｆ口ＺＣＤＺＺｅｇＰ，．Ｚ矗口起Ｊｉ盘，２９５２４０２３，Ｇｈｉ行ｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｔｈｒｏｕｇｈｒｅｖｉｅｗｉｎｇｒｅｃｅｎｔａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｉｎｇｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｏｆａｓｔｈｍａｈｏｍｅａｎｄａｂｒｏａｄ，ａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｉｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｆｒｏｍｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｉｍａｌｓｆｏｒａｓｔｈｍａｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｔｏｔｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｕｌｔｉｍａｔｅｌｙｔｏｔｈｅｅｘｉｓｔｉｎｇｑｕｅｓｔｉｏｎｓ。Ｉｔｅｍｐｈａｓｉｚｅｓｔｈａｔａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｓｈｏｕｌｄｂｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｐｕｒｐｏｓｅｓｏｆｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈ，ｔｈｕｓｒｅｆｌｅｃｔｉｎｇｔｈｅｉｎｄｅｘｏｆｒｅｓｅａｒｃｈｍｏｓｔｓｅｎｓｉｔｉｖｅｌｙｉｎｐｒａｃｔｉｃａｌｕｓｅ，ｂｕｔｓｈｏｕｌｄｎｏｔａｄｈｅｒｅｔｏｏｎｅｃｅｒｔａｉｎｍｏｄｅｌ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ａｓｔｈｍａ；Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌ；Ｖｉｖｏ；Ｖｉｔｒｏ 支气管哮喘（简称哮喘）是由多种细胞参与的慢 性气道炎症性疾病，以可逆性气道阻塞、气道高反应 性（ＡＨＲ）和气道炎症为主要特征。近年来国内外 哮喘发病率不断上升，已成为危害人类健康的一类 重要疾病。 由于在哮喘患者中直接进行调查和临床研究存 在着科学和伦理学上的业障，有关其病因的确定、发 病机制的探索、治疗方法的评价和新药的研发在很 大程度上需要通过动物实验进行。就现阶段不同研 究方向中所应用的不同模型而言，动物模型可分为 三类：活体内模型、活体外模型和离体外模型。本文 将离体外模型并人活体外模型一起讨论。 ｌ哮喘的活体内模型 在哮喘动物模型中，活体内模型能模拟疾病发 病全过程，为探讨其它多种体内外因素对疾病的影 响提供了一个平台，因而受到广大研究者的青睐。 １．１哮喘模型动物的选择哮喘在动物界不是一 个天生的疾病，一般需人工建立。表１是人工建立 哮喘模型中使用过的动物种类和它们在应用中的优 缺点比较。 １．２哮喘动物模型的分类近年来，随着对哮喘发 病机制的广泛研究，各种病因所致的哮喘动物模型 日益发展起来。哮喘动物模型制作可归纳为五种： ①过敏性哮喘动物模型；②感染性哮喘动物模型；③ 职业性哮喘动物模型；④运动性哮喘（ＥＩＡ）动物模 型；⑤转基因动物哮喘模型。 作者单位：５２４０２３湛江，广东医学院药理学教研室．综述． １．２．１过敏性哮喘动物模型导致哮喘的变应原多 数为吸人性，故哮喘动物模型的制作多采用变应原致 敏后，再经气道给予变应原诱发哮喘发生。制作过敏 性哮喘动物模型的变应原主要有卵自蛋白（０Ⅵ～）、蛔 虫卵、尘螨、豚草、花粉、乳胶、蟑螂等。 １．２．１．１ＯＶＡ诱发的哮喘模型ＯＶＡ来源容 易，价格低廉，免疫原性强，最常应用于制备哮喘模 型。按抗原的组合，可分为两大类，单纯ＯＶＡ致敏 与激发和复合形式的ＯＶＡ致敏与激发。①单纯的 ＯＶＡ致敏和激发：Ｋｕｍａｒ等ｎ１使ＢＡＬＢ／ｃ小鼠吸 人高浓度ＯＶＡ致敏，然后雾化吸入低浓度ＯＶＡ， 持续８周，制出慢性哮喘动物模型；Ｉｔａｍｉ等［２１对 Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮下植人热凝结鸡卵蛋白碎片使其致 敏，３周后，气管内注射热凝聚卵蛋白一次激发，复 制出哮喘气道嗜酸粒细胞（ＥＯＳ）浸润和发作期 ＡＨＲ模型。②复合形式的ＯＶＡ致敏和激发：是以 ＯＶＡ为过敏原，其它物质为佐剂。姜鲁宁等［３３先用 含有ＯＶＡ、氢氧化铝凝胶及灭活百日咳杆菌的混合 液腹腔注射致敏，再以０ｖＡ一次激发，造出ＳＤ大鼠 哮喘模型。田代印等Ｈ３用硫酸铝钾取代氢氧化铝，并 用氢氧化钠调节ｐＨ值，使蛋白质变性，两者形成混 悬小球后能充分混合，增强了ＯｖＡ的致敏效果。 １．２．１．２尘螨诱发的支气管哮喘模型为使模型 更接近人类哮喘自然发病过程，目前很多研究者倾 向于使用空气源性过敏原。空气源性过敏原以尘螨 （屋尘螨和粉尘螨）最为常用。已知尘螨有两种活性 成分（Ｄｅｒｐ１和Ｄｅｒｐ５）。目前模型的制作多采用 Ｃｌａｒｋｅ等［５３的方法，但国内郝敏麒等口３报道，单纯采 用Ｃ１ａｒｋｅ方法并不能制出满意的哮喘模型，可能因万方数据
医学基础知识：支气管哮喘病因
医学基础知识：支气管哮喘病因 及病理变化 支气管哮喘，简称哮喘，是一种由呼吸道过敏引起的以支气管可逆性发作性痉挛为特征的慢性阻塞性炎性疾病。患者大多具有特异性变态反应体质。 临床表现为反复发作的伴有哮鸣音的呼气性呼吸困难、咳嗽或胸闷等症状。支气管哮喘是我们临床常见病，所以它的发病机制和病理变化也是我们病理学里面的重点。 首先我们先来学习一下哮喘的病因。 1.诱发哮喘的过敏原种类较多，如花粉、尘埃、动物毛屑，真菌(曲菌)、某些食品和药品等。这些物质主要经呼吸道吸人，也可食人或经其他途径进人人体。 2.呼吸道感染和精神因素亦可诱发哮喘发作。 接下来我们再来学习一下哮喘的发病机制。 除过敏原方面的影响和机体本身的状态外、其发作过程主要涉及多种细胞(淋巴细胞、单核细胞、肥大细胞和嗜酸性粒细胞等)表面的受体及它们合成和分泌的多种介质和细胞因子，并经过信息的接收、传递和调控等复杂步骤共同完成全部反应过程。此外，机体的特应性、气道壁的炎性增生和气道的高反应性均导致对过敏原的敏感性增高。以致轻微的刺激即可使气道发生明显的收缩，引起气道阻力显著增高，也是哮喘发病的重要环节。 最后，我们一起来看一下哮喘的病理变化。 肺因过度充气而膨胀，常伴有灶性萎陷。支气管管腔内可见黏液栓，偶尔可见支气管扩张。镜下见黏膜上皮局部脱落，基底膜显著增厚及玻璃样变，黏膜下水肿，黏液腺増生，杯状细胞增多，管壁平滑肌增生肥大。管壁各层均可见嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润。 哮喘发作时，因细支气管痉挛和黏液栓阻塞，引起呼气性呼吸困难并伴有哮鸣音。症状可自行缓解或经治疗后缀解。长期反复的哮喘发作可致胸廓变形及弥漫性肺气肿、有时可合并自发性气胸。 以上就是关于支气管哮喘重点内容的一些分析，希望能给大家带来一些帮助。
支气管哮喘2
支气管哮喘2 17．男性，14岁。受凉后咳嗽，喘息2天，自服红霉素、氨茶碱（剂量不详）症状无缓解。无心脏病史。体检：口唇发绀，全身大汗，双肺可闻哮鸣音，心率120次/分，律齐，未闻及病理性杂音。最可能的诊断是： A．心源性哮喘 B．慢性喘息型支气管炎急性发作 C．急性支气管炎 D．过敏性肺炎 E．重症支气管哮喘 （E）患者年轻，受凉后急性气促，双肺哮鸣音，发绀，全身大汗，要考虑重症支气管哮喘。心源性哮喘可以发绀、气促，但应有心脏病病史，体检可闻及肺底湿啰音；慢性喘息型支气管炎发病年龄一般较大，肺底部可有湿啰音；急性支气管炎可以咳嗽、咳痰，但一般无明显缺氧；过敏性肺炎一般有过敏史，干、湿性啰音局限于患侧肺叶。 18．男性，20岁。支气管哮喘发作2小时。体检：神清，口唇稍发绀，明显呼吸困难，双肺有广泛哮鸣音；WBC 8.0 109/L，N 0.82，此时可能已发生下列哪一种情况? A．代谢性酸中毒 B．呼吸性酸中毒 C．代谢性碱中毒
D．PaO2降低，PaCO2正常或稍低 E．PaO2明显降低，PaCO2明显升高 （D）患者哮喘发作时间短，口唇稍发绀，双肺有广泛哮鸣音，提示气道尚通畅，有缺氧，但二氧化碳无潴留。代谢性酸中毒、呼吸性酸中毒、代谢性碱中毒一般都发生在严重哮喘，持续时间长，患者气道痉挛和被分泌物阻塞，可出现二氧化碳潴留，血气分析示PaO2明显降低，PaCO2明显升高。 19．男性，30岁。哮喘急性发作已2天，自服氨茶碱、吸入倍氯米松气雾剂无效就诊。体检：患者神志恍惚，紫绀，有奇脉，两肺满布哮鸣音，心率120次/分。其紧急处理应当是: A．静脉推注氨茶碱并监测血药浓度 B．静脉注射地塞米松和 2-受体激动剂 C．吸氧、静脉注射琥珀酰氢化可的松、雾化吸入沙丁胺醇溶液D．静脉滴注抗生素和注射支气管舒张剂 E．大量补液，气管插管和机械通气 （C）氢化可的松为速效作用激素制剂，较地塞米松起效快，在哮喘急性重度发作紧急处理时更为适用。因患者未接受有效治疗，故首先应用激素和支气管舒张剂。 20．男性，26岁。哮喘重度发作前来急诊。体检见患者张口、端坐呼吸，大汗淋漓，叙述病史仅能说些单词或短语而不连贯。为评价病情，下列体征中哪一项预示病情严重? A．两肺广泛响亮哮鸣音