生物导学案答案

课题：DNA重组技术的基本工具
【自主预习1】（阅读教材内容，完成下列问题，并在书中相应位置用横线标注）
一、基因工程的概念
基因工程又叫做基因拼接技术或 DNA重组技术，是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外 DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
【课内探究1】(结合已学知识，思考下列问题。将不能完成的问题用红笔画出来，并在小组内讨论交流，将交流结果整理在学案上)
基因工程所遵循的基本生物学原理是什么？
基因重组(碱基互补配对、基因结构相同、共用一套密码子等)
【自主预习2】(阅读教材内容，完成下列问题，并在书中用横线标注)(随机展示)
二、基因工程中的工具
1.限制性核酸内切酶
⑴简称：限制酶。(Pr)
⑵来源：主要是从原核生物中分离纯化而来的一类酶。
⑶种类：约4000种。
⑷功能：识别双链DNA分子某种特定核苷酸序列；使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(专一性)
⑸酶切后的DNA末端：粘性末端、平末端。
2.DNA连接酶
⑴作用：将两个DNA分子片段“ 缝合 ”起来，恢复被限制酶切开了的
两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
⑵种类： E.coli DNA连接酶和 T4 DNA连接酶。
3.基因进入受体细胞的载体
⑴必备条件：①能够在受体细胞中进行自我复制，或整合到染色体DNA 上，
随染色体DNA 进行同步复制。
②多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入；
③具有标记基因，便于鉴定和选择。
⑵载体的种类：①质粒：是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA 之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA 分子。
② 入噬菌体的衍生物。
③ 动植物病毒。
⑶真正被用作载体的质粒是在天然质粒的基础上进行人工改造的。

【课内探究2】（结合已学知识，思考下列问题。将不能完成的问题用红笔画出来，并在小组内讨论交流，将交流结果整理在学案上）
1. 限制酶主要存在于什么生物中？作用是什么？为什么不剪切自身的DNA？
答：原核；将外源入侵的DNA降解掉（“免疫”）；生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，限制酶不能将其切开。
2. DNA连接酶和DNA聚合酶有哪些异同？
答：同：都连接双链DNA的缺口，而不能连接单链DNA；都是形成磷酸二酯键；都是由蛋白质构成的酶
异：①DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上，而DNA

连接酶是在
两个DNA片段之间形成磷酸二酯键
②DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，DNA连接酶不需要模板
3. 作为载体还需具有哪些条件？为什么只有具备这些条件才能充当载体？天然质粒为什么不可以直接用做基因工程载体呢？
答：①载体DNA必须是安全的，不会对受体细胞有害 ②载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作（其余见上）

天然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，需要进行人工改造

【课堂反馈】
1．下列四条DNA分子，彼此间具有粘性末端的一组是 ( D )

A．①② B．②③ C．③④ D．②④
【归纳总结】

课题：基因工程的基本操作程序（第1课时）
【自主预习1】（阅读教材第8页内容，完成下列问题.）
基因工程的基本操作程序：
1. 目的基因的获取。 2. 基因表达载体的构建。
3.目的基因导入受体细胞，得到转基因生物。 4.目的基因的检测与鉴定。

【自主预习2】 (阅读教材第8-11页，完成下列问题，并将其背会。)
一、目的基因的获取
1.目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因。
2.获得目的基因的方法：
⑴从基因文库中获取目的基因
①基因文库的含义将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。

③目的基因的获取依据: 基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA ，以及基因的表达产物蛋白质。
⑵利用PCR技术扩增目的基因
①PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。
②前提条件：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据该序列合成引物。
③过程：目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下进行延伸。
④扩增方式：指数扩增，数量约为 2n （n代表扩增循环的次数）
⑶人工合成法：若基因比较小，核苷酸序列又已知，可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。
【课内探究2】（根据教材第9页第三段内容，分析并用准确的语言回答下列问题。）
1、尝试用一句通俗的语言来描述基因文库。
答：把生物的全部或部分基因切割分离开，逐个分别保存在细菌细胞中，这样的细胞群体即为基因文库。
2、为什么要构建基因文库？直接从含目的基因的生物体内提取不行吗？
答：当不知DNA碱基序列时，或只知道目的基因序列的一段，或要得到这种生物的全部基因，或是想从某种生物中获得多个基因，或

是想了解某种生物在不同发育阶段表达的基因有什么不同，就要构建基因文库；不行。一是限制酶进入生物体可能会失活，二是限制酶可能会影响正常生命，三是不知道目的基因在哪里，四是不容易操作。
3、cDNA是反转录DNA，为什么不能包括全部基因？
答：生物的不同发育阶段，基因并不是都能表达，而是选择性表达，即只表达部分基因，所以只能得到部分基因的mRNA，只能反转录成部分基因。
4、用图解(文字和箭头)表示PCR过程。
答：模板DNA(目的基因) 2个DNA单链

2个子代DNA(目的基因) 单链与引物互补结合

【自主预习3】（阅读教材第11页，回答下列问题。）
二、基因表达载体的构建
1.表达载体的组成：启动子、目的基因、终止子、标记基因
2.表达载体的功能:
⑴ 使目的基因在受体细胞存在，并且可以遗传给下一代。
⑵ 使目的基因能够表达和发挥作用。

【课内探究3】（根据教材第11页第三段内容，分析并用准确的语言回答下列问题。）
1.构建基因表达载体需要哪些工具？
答：限制酶、DNA连接酶、运载体。（其中有两种工具酶）

2.为什么要构建基因表达载体？为什么不能将目的基因直接导入受体细胞？
答：①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。②使目的基因能够表达和发挥作用。目的基因一定是经过限制酶切割过的基因，那么其结构已经不完整，缺少启动子等调控序列，不可能在受体细胞中表达和发挥作用，会作为异物被分解或派出。

3.作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？
答：不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。

4.两种不同生物的DNA能拼接的遗传学理论基础是什么？
答：①都以DNA为遗传物质；②都有四种脱氧核苷酸；③都具有规则的双螺旋结构；④都遵循碱基互补配对原则；⑤共用一套密码子。

【课堂反馈】
下列获取目的基因的方法中，需要模板链的是（ D ）
①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因
③反转录法 ④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成法
A.①②③④ B.①②③ C.②③④ D.②③
【归纳总结】

课题：基因工程的基本操作程序（第2课时）
【自主预习1】（认真研读教材，对照教材填写下列空白，并在填写过程中尽量记忆，不明白之处用双色笔在书中标注）
三、目的基因导入受体细胞
将目的基因导入受体细胞是实施基因工

程的第三步。目的基因进入受体细胞，
并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。
1.将目的基因导入植物细胞
⑴方法：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法。
⑵农杆菌转化法机理：农杆菌易感染双子叶植物和裸子植物，对多数单子叶
植物没有感染力。当植物体受损伤时，伤口处的细胞会分泌大量酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞。这时农杆菌中的Ti质粒上的 T-DNA 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞染色体的 DNA上。
2.将目的基因导入动物细胞
⑴常用方法：显微注射技术。
3.将目的基因导入微生物细胞
⑴由于原核生物繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等，因此，早期的基因工程操作都用原核生物作为受体细胞。
⑵感受态法：首先用 Ca2+ 处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子
的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液与感受态细胞混合，在一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子。

【课内探究1】（交流讨论自主学习时生成的问题及以下问题，将交流的成果及时整理到学案上，注意书写规范）
1.为什么要有“目的基因导入受体细胞”这一步？将目的基因导入受体细胞的原理？
答：含有目的基因的表达载体只有进入受体细胞，并且维持稳定和表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。原理是：借鉴病毒或细菌侵染细胞的途径。
2.简述“基因枪法”和“花粉管通道法”。
答：基因枪法：又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。这是单子叶植物中常用的一种基因转化方法。
花粉管通道法：就是在植物授粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。
3.根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理，你能分析出农杆菌不能将目的基因导入单子叶植物的原因吗？若想将一个抗病基因导入单子叶植物（如小麦），从理论上说，你认为应该怎么做？
答：根瘤农杆菌具有趋化性，即植物的受伤组织会产生一些糖类和酚类物质(如乙酰丁香酮等)吸引根瘤农杆菌向受伤组织集中。这些物质主要在双子叶植物细胞壁中合成，通常不存在于单子叶植物中，这也是单子叶植物不易被根瘤农杆菌侵染的原因。
（需要注意的是农杆菌中不同的菌株侵染能力有差别，在基因工程中需要加以选择使用。利用农杆菌侵染单子叶植物进行遗传转化时

，是需要加上述酚类物质的，同时单子叶植物种类不同，农杆菌侵染进行遗传转化的效果也有很大差异。）
如果想将一个抗病毒基因转入小麦，也可以用农杆菌，但要注意两点：①要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子叶植物；②要加趋化和诱导的物质，一般为乙酰丁香酮等，目的是使农杆菌向植物组织的受伤部位靠拢（趋化性）和激活农杆菌的Vir区（诱导）的基因，使T-DNA转移并插入到染色体DNA上。
4.显微注射技术的基本操作程序是？
答：首先将含有目的基因的表达载体提纯，并使DNA浓度保持在1-3μg/ml,然后，雌性动物体内取出卵（卵可以在体内受精，也可以在体外受精），采用显微注射仪进行显微注射，再将注射了目的基因的受精卵，经胚胎早期培养一段时间后，使其发育成为具有新性状的动物。

【自主预习2】（认真研读教材，对照教材填写下列空白，并在填写过程中尽量记忆，不明白之处用双色笔在书中标注）
四、目的基因的检测与鉴定
1.检测及方法
⑴检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，这是目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键。检测方法是采用 DNA分子杂交技术。
⑵检测目的基因是否转录出 mRNA ，这是检测目的基因是否发挥功能作用的第
一步。采用分子杂交技术。
⑶检测目的基因是否翻译成蛋白质，使用抗原-抗体杂交。
2.鉴定：除了上述的分子检测外，有时还需要进行个体生物学水平的鉴定。如抗虫，抗病鉴定等。

【课内探究2】（交流讨论自主学习时生成的问题及以下问题，将交流的成果及时整理到学案上，注意书写规范）
1.目的基因的检测要从哪几方面进行？
答：检测目的基因是否插入受体细胞、是否转录出mRNA、是否翻译出Pr。
2.B-珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症。假如让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的B-珠蛋白，想一想，应如何进行设计？
答：⑴从小鼠中克隆出B-珠蛋白基因的编码序列（cDNA）
⑵将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。
⑶将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含抗四环素基因而死掉，如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。
⑷培养导入了β-珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取β-珠蛋白。

课题：基因工程的应用
【

自主预习1】(阅读教材，将空白处内容填写上，并在书中的相应位置用横线标注。)
植物基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力，以及改良农作物的_品质_和利用植物生产药物等方面。
一、植物基因工程硕果累累
1、抗虫转基因植物
⑴杀虫基因种类：Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、
植物凝集素基因等。
⑵成果：抗虫棉、抗虫水稻、抗虫马铃薯等。
2、抗病转基因植物
⑴植物的病原微生物：病毒、真菌和细菌等。
⑵抗病基因种类
①抗病毒基因：病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因。
②抗真菌基因：几丁质酶基因和抗毒素合成基因。
⑶成果：抗烟草花叶病毒的烟草和抗病毒的转基因小麦、甜椒、番茄等。
3、抗逆转基因植物
⑴抗逆基因：调节细胞渗透压基因使作物抗碱、抗旱；鱼的抗冻使作物耐寒；
抗除草剂基因，使作物抗除草剂。
⑵成果：具有抗寒能力的烟草、番茄。
4、利用转基因改良植物的品质
⑴优良基因：必需氨基酸的蛋白质编码基因、控制番茄成熟的基因等。
⑵成果：转基因玉米、转基因的延熟番茄和转基因矮牵牛。

【课内探究1】（结合已学知识，思考以下问题。将不能完成的问题用红笔画出来，并在小组内讨论交流，将交流的结果整理在学案上。）
1、植物基因工程主要应用于那些方面？并举例说明取得的相应成果。
答：培育抗虫、抗病、抗逆转基因植物，转基因改良植物品质；举例：抗虫的棉花、马铃薯；抗病的甜椒、番茄；抗寒的烟草番茄；转基因的优良玉米等。

2、利用基因工程培育抗盐碱、抗干旱作物，这些抗性基因实际上是什么基因？
答：调节细胞渗透压的基因

【自主预习2】(阅读教材，将空白处内容填写上，并在书中相应的位置用横线标注。)
二、动物基因工程前景广阔
1、用于提高动物的生长速度
⑴基因：外源生长激素基因。
⑵成果：转基因绵羊、转基因鲤鱼。
2、用于改善畜产品的品质
⑴优良基因：肠乳糖酶基因。
⑵成果：转基因牛分泌的乳汁中乳糖含量少。

3、用转基因动物生产药物
⑴基因来源：药用蛋白基因+ 乳腺蛋白基因+启动子。
⑵成果：乳房生物反应器。
4、用转基因动物作器官移植的供体
⑴器官供体：抑制或去除抗原决定基因。
⑵成果（预期）：利用克隆技术培育没有免疫排斥反应的猪器官。

【课内探究2】（结合已学知识，思考以下问题。将不能完成的问题用红笔画出来，并在小组内讨论交流，将交流的结果整理在学案上。）
1、用动物乳腺作为反应器

，生产高价值的蛋白质比工厂化生产的优越之处有哪些？
答：产量高、质量好、成本低、易提取。

2、用基于工程技术实现动物乳腺生物反应器的操作过程是怎样的？
答：获取目的基因构建基因表达载体显微注射导入哺乳动物受精卵中形成胚胎将胚胎送入母体动物发育成转基因动物。

【自主预习3】(阅读教材，将空白处内容填写上，并在书中相应的位置用横线标注。)
三、基因工程药物异军突起
1、来源：转基因工程菌。
2、工程菌：用基因工程的方法，使外源基因得到高效率表达的菌类细胞株系。
3、成果：细胞因子、人胰岛素、抗体、疫苗等。可用来预防和治疗肿瘤、心血
管疾病、遗传病、传染病、糖尿病、类风湿等，如红细胞生成素、生长
激素、胰岛素、干扰素等。

【课内探究3】（结合已学知识，思考以下问题。将不能完成的问题用红笔画出来，并在小组内讨论交流，将交流的结果整理在学案上。）
请列举至少三种常见的基因工程药物、来源及其治疗的疾病。
答：胰岛素——工程菌——糖尿病；干扰素——大肠杆菌或酵母菌——抗病毒、抗
肿瘤；生长激素——工程菌——（侏儒症）促进生长。

【自主预习4】 (阅读教材，将空白处内容填写上，并在书中相应的位置用横线标注。)
四、基因治疗曙光初照
1、概念：把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。这是治疗遗传病的最有效手段。
2、成果：将腺苷酸脱氨酶基因成功导入患者的淋巴细胞。
3、基因治疗的途径：体外基因治疗和体内基因治疗。

【课内探究4】（结合已学知识，思考以下问题。将不能完成的问题用红笔画出来，并在小组内讨论交流，将交流的结果整理在学案上。）
基因治疗的途径有哪几条？一般治疗过程是怎样的？

答：体外基因治疗和体内基因治疗。
⑴体外基因治疗的治疗过程：从病人体内获得淋巴细胞进行培养在体外将正常的基因转移到培养的淋巴细胞中筛选成功转移的细胞扩增培养重新移入患者体内。
⑵体内基因治疗的治疗过程：直接向人体组织细胞中转移基因。

【拓展提升】
1、利用微生物生产药物的优越性何在？
答：⑴利用微生物的活细胞作为表达系统，表达效率高，不需厂房和大型设备就可以生产出大量的药品。
⑵可以解决传统制药中原料来源的不足。
⑶减少生产人员和管理人员，从而降低生产成本。

2、本节教材有哪几个突出特点？
⑴分四个部分，并分别用了一个成语；
⑵从植物、动物、微生

物、人四方面阐述基因工程的应用；
⑶每部分都从目的基因、成果两方面来把握基础知识。

【课堂反馈】
1、切取某动物合成生长激素的基因，用某种方法将此基因转移到鲇鱼的受精卵中，从而鲇鱼比同类个体大3～4倍，此项研究遵循的原理是 ( D )
A.基因突变，DNA→RNA→蛋白质 B.基因工程，DNA→tRNA→蛋白质
C.细胞工程，DNA→RNA→蛋白质 D.基因重组，DNA→RNA→蛋白质
2、要彻底治疗白化病必须采用 ( A )
A.基因治疗 B.医学手术 C.射线照射 D.一般药物
3、下列各项不属于基因工程在实际中的应用的是 ( D )
A.转基因抗虫棉的培育成功 B.利用DNA探针检测饮用水中有无病毒
C.培育工程菌使之能产生胰岛素 D.将C4植物细胞内的叶绿体移入C3植物细胞内
【归纳总结】

课题：蛋白质工程的崛起
【自主预习1】(阅读教材，将空白处内容填写上，并在书中的相应位置用横线标注。)一、蛋白质工程崛起的缘由
1、基因工程的实质：将一种生物的基因转移到另一种生物的体内，后者可以产生
它本不能产生的蛋白质，进而表现出新性状。
2、蛋白质工程的目的:生产符合人们生活所需要的并非自然界已存在的蛋白质。

【课内探究1】（结合已学知识，思考以下问题。将不能完成的问题用红笔画出来，并在小组内讨论交流，将交流的结果整理在学案上。）
蛋白质工程与基因工程在制造的蛋白质种类上的区别？
答：蛋白质工程制造的蛋白质的符合人们生产需要的并不是自然界已存在的。
基因工程制造的蛋白质只能是自然界存在的种类。

【自主预习2】(阅读教材，将空白处内容填写上，并在书中相应的位置用横线标注。)二、蛋白质工程的基本原理
1.目标：根据人们对蛋白质功能的特定需求，对蛋白质的结构进行分子设计。
2.原理：中心法则的逆推。
3.过程：预期蛋白质功能设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列(基因) 合成DNA（基因）表达蛋白质。
4.蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过
基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或者制造一种新的蛋白质，
以满足人类的生产和生活需求。

【课内探究2】（结合已学知识，思考以下问题。将不能完成的问题用红笔画出来，并在小组内讨论交流，将交流的结果整理在学案上。）
1、蛋白质工程的实质及本质上的改造对象分别是什么？
实质：通过改

造基因结构或生产新基因，定向改造或生产人类所需蛋白质；
本质上的改造对象：基因结构。

2、蛋白质工程的基本操作思路与基因工程有何不同？
基因工程遵循的是中心法则，从DNA mRNA 蛋白质，基本上是制造
自然界已有的蛋白质；蛋白质工程按以下思路进行的：确定蛋白质的功能
设计蛋白质的结构改造基因中的碱基序列合成DNA 表达出
蛋白质，可以创造出自然界不存在的蛋白质。

3、蛋白质工程的基本操作步骤？（下左图）

4、某多肽链的一段氨基酸序列是：…—甲硫氨酸—色氨酸—苯丙氨酸—色氨酸—…(氨基酸及对应的密码子为：甲硫氨酸AUG，色氨酸UGG，苯丙氨酸UUU、UUC)。

怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列？请把相应的碱基序列写出来（上图）。
答：根据该肽链的氨基酸序列，推测出指导该肽链合成的mRNA的碱基序列，再根据mRNA的碱基序列推测出决定该mRNA的基因的脱氧核苷酸（碱基）序列。

【自主预习3】 (阅读教材，将空白处内容填写上，并在书中相应的位置用横线标注。)三、蛋白质工程的进展和前景
1.进展：例如科学家通过对胰岛素的改造，已使其成为速效性药品；用蛋白质工程方法制成的电子元件具有体积小、耗电少和效率高的特点，因此具有极为广阔的发展前景。
2.前景：蛋白质工程是一项难度很大的工程，目前成功的例子不多，主要因为蛋白质发挥功能必需依赖于正确的高级结构，而这种高级结构十分复杂，而目前科学家对大多数蛋白质的高级结构了解还不够。

【课内探究3】（结合已学知识，思考以下问题。将不能完成的问题用红笔画出来，并在小组内讨论交流，将交流的结果整理在学案上。）
绝大多数酶都是蛋白质，酶工程是蛋白质工程吗？
答：酶工程的重点在于对已存在的酶的充分合理利用，而蛋白质工程的重点在于对蛋白质分子的改造，所以酶工程仅属于蛋白质工程的一部分。

【课堂反馈】
1、蛋白质工程的实质是 ( D )
A.改变氨基酸结构 B.改造蛋白质结构 C.改变肽链结构 D.改造基因结构
2、干扰素经过改造可长期储存，从蛋白质水平上应改变的是 ( D )
A.光氨酸 B.精氨酸 C.谷氨酸 D.半光氨酸
3、蛋白质工程制造的蛋白质是 ( C )
A.天然蛋白质 B.稀有蛋白质 C.自然界中不存在的蛋白质 D.血红蛋白质
4、蛋白质工程的基础是 ( A )
A.基因工程 B.细胞工程 C.酶工程 D.

发酵工程
【归纳总结】