下呼吸道感染细菌培养及药敏分析
下呼吸道感染细菌培养及药敏分析
【摘要】目的分析下呼吸道感染的痰培养病原菌谱以及其对常用抗菌药的敏感情况，为临床合理用药提供参考依据。方法对我院360例下呼吸道感染患儿的痰培养获得的菌株及药物敏感性情况进行分析。结果360例痰培养呈阳性结果者共196例，阳性率为54.44%。其中位居前三位的是大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌，流感嗜血杆菌。绝大多数阳性菌对万古霉素仍然敏感。绝大部分细菌均对青霉素类和头孢唑啉耐药。讨论下呼吸道感染以革兰阴性菌为主，且对常用抗生素有较高的耐药率，所以治疗时要根据药敏试验结果，选用敏感抗菌药物治疗，避免滥用抗生素。
【关键词】下呼吸道；细菌培养；药敏分析
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，耐药菌株明显增多，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。本文选取我院360例下呼吸道感染患儿的痰培养获得的196例菌株及药物敏感性情况进行了分析。旨在探讨病原菌谱以及其对常用抗菌药的敏感情况，为临床合理用药提供参考依据。
1资料与方法
1.1一般资料
选取我院的下呼吸道感染患儿360例，男性220例，女性140例，年龄3月一14岁。支气管炎（212例）、支气管肺炎（101例）、哮喘伴感染（57例）。
1.2方法
采用法国ATB半自动细菌生化鉴定仪，在患儿未使用任何抗生素前，晨起用无菌生理盐水漱口3次后，咳痰于无菌器皿内立即送检，作细菌培养，阳性者进一步用纸片法，做药敏检测。所有的判定结果均按CLSI／NCCLS(临床实验室标准研究所Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)2005版的规定。用
WHONET5软件进行统计分析。
2结果
2.1感染细菌培养结果
360例痰培养呈阳性结果者共196例，阳性率为54.44%。其中位居前三位的是大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌，流感嗜血杆菌。革兰阳性球菌主要为：金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等；革兰阴性杆菌主要为：大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌等。与有关文献报道相似，革兰阴性杆菌显著高于革兰阳性球菌[1]，真菌类感染，以白假丝酵母菌为主。
细菌分离培养及药敏试验方法及步骤
细菌分离培养方法及操作步骤无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基,37℃恒温培养24 h,观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法与实验动物分离法。 平板划线接种法 这就是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落(有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌),以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作: 1、右手持接种环,在酒精灯上火焰灭菌; 图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后,挑取被检料少许,左手持琼脂平板,以食指为
支点,用拇指与无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时,迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。 3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。(注意:划线时,以腕力使接种环在琼脂平板表面划动,尽量不要划破培养基,划的线条要密,但不能重复旧线,以免培养物形成菌 苔。) 图3 平板划线接种法 4、划线完毕,合上平皿盖,将琼脂平板倒置,放入37℃温箱内培养
18－24小时。 注意:分离培养用的平板培养基应表面干燥,可于临用前置37℃孵育箱内30分钟,这样表面即干燥有利于分离培养,又使培养基预温,对培养某些较娇弱的细菌有利。 细菌药敏试验方法操作步骤药敏试验就是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节,一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药,减少抗菌素使用的盲目性,从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中,用经(酒精灯)火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式; 用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌,以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二点划线至平皿的1/2,依次划线,直至细菌均匀密布于平皿。 图4 接种环划线
下呼吸道感染细菌培养及药敏分析
下呼吸道感染细菌培养及药敏分析 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】目的分析下呼吸道感染病原菌的分布及耐药情况，以及对常用抗菌药的敏感情况。方法选取我院呼吸内科患者580份痰液标本，对感染细菌进行鉴定、分类，同时进行药敏实验。结果580例痰培养革兰阴性杆菌为主占56.03%，呈阳性结果的占43.97%。其中位居革兰阴性杆菌前三位的是大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌。革兰阴性菌对第三代头孢类药物敏感率高。讨论下呼吸道感染以革兰阴性菌为主，对常用抗生素有较高的耐药率，临床用药时要选用敏感抗菌药物治疗，避免滥用抗生素。 【关键词】下呼吸道细菌培养革兰阴性菌药敏分析 下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，随着抗生素的广泛使用，各种病原菌对抗生素均产生了不同程度的耐药性，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素，是降低下呼吸道感染发病率和病死率的关键[1]。本文选取我院580例下呼吸道感染患者的痰培养并对其药物敏感性情况进行了分析。 1资料与方法
1.1一般资料 选取在我院诊治的2009年10月至2010年10月的下呼吸道感染患者580例，男性287例（49.48%），女性293例（50.52%），年龄在35～71岁,平均年龄为48.8岁。支气管炎（308例）、哮喘伴感染（192例）、支气管肺炎（80例）。 1.2操作方法 采用法国ATB半自动细菌生化鉴定仪，在患者未使用任何抗生素前，晨起用无菌生理盐水漱口3次后，咳痰于无菌器皿内立即送检。 采用KB纸片扩散法对临床标本分离的铜绿假单胞菌，进行抗生素敏感性测定，阿米卡星等17种抗生素纸片均购自北京天坛药品生物技术开发公司，部分药敏纸片来自英国OXOID。 2结果 2.1感染细菌的种类和分布 580例痰培养呈革兰阴性杆菌结果者共325例占56.03%，呈阳性结果者共255例，阳性率为43.97%。其中位居革兰阴性杆菌前三位的是大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌。革兰阳性球菌主要为：金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等；革兰阴性杆菌主要为：大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌等。革兰阴性杆菌显著高于革兰阳性球菌，真菌类感染，以白假丝酵母菌为主。详见表1。 表1：患者下呼吸道感染病原菌分布表 病原菌例数百分率 大肠埃希菌12922.24
下呼吸道感染细菌学检验操作规范
下呼吸道感染细菌学检验操作规范 临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌。下呼吸道感染包括急性气管-支气管炎、慢性支气管炎急性发作、支气管扩张继发感染及肺实质感染（肺炎、肺脓肿）等。病原体有细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体和原虫等。 社区获得性肺炎常见的病原菌有肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、卡他莫拉菌、肺炎克雷伯菌、军团菌、肺炎支原体和肺炎衣原体等。医院获得性肺炎常见的病原有铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌和假丝酵母菌等。 下呼吸道感染患者可有发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性，可伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音、白细胞总数及嗜中性粒细胞比例明显增高，X线检查提示肺部有炎症性浸润或胸腔积液等体症，严重时可导致感染性休克和呼吸衰竭，因此临床诊断一般不难；细菌学检验能明确感染病原及药敏结果，有助于疾病治疗、流行病学调查和医院感染的监测。临床呼吸道标本中常见的分离细菌见表1。 表1呼吸道标本中常见分离菌 革兰阳性菌革兰阴性菌 草绿色链球菌、肺炎链球菌、韦荣球菌 化脓性链球菌脑膜炎奈瑟菌、其他奈瑟菌 表皮葡萄球菌、金黄色葡萄卡他莫拉菌 球菌、其他葡萄球菌肺炎克雷伯菌及其他克雷伯菌 微球菌、消化链球菌、消化沙雷菌、变形杆菌 球菌、肠球菌大肠埃希菌及其他肠杆菌科细菌 真杆菌、丙酸杆菌、乳酸杆菌百日咳鲍特菌、不动杆菌 放线菌、奴卡菌、结核分枝杆菌铜绿假单胞菌及其他假单胞菌属 白喉棒状杆菌、类白喉棒状杆菌细菌、嗜肺军团菌、气单胞菌、流 假丝酵母菌感嗜血杆菌、付流杆嗜血杆菌、梭杆菌 一、送检指征 痰液标本是临床微生物学检验最常见的的标本，但不是下呼吸道感染的最佳标本。 1.咳嗽咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常见的症状，咳嗽的性质与痰的性状如脓或铁锈样痰具有鉴别诊断意义。 2.咯血喉以下的呼吸道出血为咯血，包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等。 3.呼吸困难呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。 4.发热伴白细胞增高尤其是中性粒细胞或CRP明显增高。 5.胸部影像学检查提示有感染可能。 二、标本采集与验收 对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。 （一）标本采集方法 1.自然咳痰法以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开岁漱口或用牙刷清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。尽可能在用抗菌药物之前采集标本。用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应≥1ml。咳痰困难者可用雾化吸入加温至45°C的100g/L NaCl水溶液，使痰液易于排出。对难于自然咳
肺泡灌洗液细菌培养及药敏结果分析
肺泡灌洗液细菌培养及药敏结果分析 发表时间：2018-02-02T15:22:23.477Z 来源：《临床医学教育》2017年12月作者：邹单东韦柳华程红革[导读] 下呼吸道感染是临床较为常见的感染，病原菌种类多、耐药性强。 广西医科大学第四附属医院广西柳州545005 [摘要] 目的：了解肺泡灌洗液中细菌种类及耐药情况，为临床合理用药提供依据。方法：美国Microscan Autoscan-4微生物分析仪对细菌作鉴定及药敏试验。结果：灌洗液细菌培养阳性率56.2%；195例细菌中革兰阴性菌占90.8%，革兰阳性菌占9.2%；主要细菌依次是铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌。主要革兰阴性菌对亚胺培南耐药率为0～15.1%，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰 胺酶 (ESBLs)阳性率为62.5%、64.1%，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为60.0%，细菌多药耐药现象严重。结论：不同细菌对抗菌药物的耐药性不同，灌洗液细菌培养及药敏试验可为临床合理用药提供依据。 [关键词] 肺泡灌洗液；细菌分布；耐药性 [Abstract] Objection: in order to understand the type of bacteria and susceptibility test results in irrigating solution, and provide an according to rational use of drug for clinical.Methods: the instrument of identification and susceptibility test is Microscan Autoscan-4, USA.Result: the positive rate of irrigating solution is 56.2%; the Gram-negative bacteria has 90.8% in these 195 bacterias, and Gram-positive bacteria has 9.2%; the main type of these bacteria are Pseudomonas aeruginosa, Pneumonia crayresearch bacteria and baumanii . the tate of the bacterias, which resist to imipenem, is 0~15.1% in these Gram-negative bacterias; the rate of Pneumonia crayresearch bacteria and baumanii, which product ESBLs, is 62.5%、64.1%,respectively; and the rate of MRSA is 60.0%. and the phenomenon of multidrug resistant is Very serious.Conclusion: the drug resistance of bacteria is differrent, the bacterial culture and susceptibility test results of irrigating solution can provide basis of rational drug use for clinical. [Key words] irrigating solution; Bacteria distribution; drug resistanc 下呼吸道感染是临床较为常见的感染，病原菌种类多、耐药性强。目前病原诊断普遍采用痰培养，但因其易污染，痰液质量难以保障，临床价值有限。肺泡灌洗液与痰液相比，对下呼吸道感染诊断具有更高特异性和敏感性，同时细菌药敏结果对临床抗感染治疗更具价值【l】。因此，我们对2010年从肺泡灌洗液中分离到的195例细菌的药敏结果进行回顾性分析，以期为临床抗感染治疗提供依据，现将结果报道如下。 1 材料和方法 1.1 标本来源 251例灌洗液为2010年我院住院患者予以纤支镜支气管肺泡灌洗治疗后采集所得。同一患者多次分离到的细菌不重复计入。 1.2 细菌鉴定和药敏试验采用Microscan Autoscan-4微生物分析仪对细菌作鉴定和药敏试验。药敏试验判断标准、结果解释、MRSA、ESBLs检测参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准【2】。定期用标准菌株做药敏质量控制。 1.3 数据处理数据均由WHONET 5.4软件分析处理所得。 2 结果 2.1 细菌分布 251例灌洗液细菌培养阳性率为56.2%(141/251)。共分离细菌195例，革兰阴性菌占90.8%，革兰阳性菌占9.2%，细菌构成比见表1。 2.2药敏结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ESBLs株为10例、25例，阳性率为62.5%、64.1%，MRSA 6例，检出率为60.0%。主要细菌对抗菌药物的耐药率，见表2。
特殊细菌药敏试验规范化操作系列
特殊细菌药敏试验的规范化操作 一、目前我国细菌药敏试验现状 20年以来，我国在卫生部和各地临床检验中心和检验学会的共同努力下引进CLSI药敏系列标准，使全国微生物实验室能在同一标准下进行质量控制活动。当前，微生物实验室对常见临床分离细菌的药物敏感试验的水平已有了显著的提高，但对特殊细菌的药敏试验的各个环节的规范操作还不能得到普及，对目前还无折点的细菌能否做药敏试验，以及如何判断细菌的药物敏感和耐药，仍然概念模糊，有待进一步规范和普及。 目前常见错误做法： （一）铜绿假单孢菌的药敏判断标准用于其他非发酵细菌；嗜血杆菌的标准用于卡他莫拉菌等的错误做法时有发生。 （二）借用同属细菌敏感标准 （三）借用同类抗生素的敏感标准 二、各菌属的药物敏感性报告及试验方法的CLSI药敏标准 （一）“嗜麦芽”菌属药敏报告标准 1.CLSI对“嗜麦芽”纸片药敏判断标准 药物名称纸片含量ug/片耐药 R 中介I 敏感S 米诺环素30 ≤1415-18 ≥19 左氧氟沙星 5 ≤1314-16 ≥17 复方新诺明 1.25/23.75 ≤1011-15 ≥16 2.CLSI对“嗜麦芽”稀释法判断标准 药物名称S I R 替卡西林/棒酸≤16/232/2-64/2 128/2 头孢他定≤816 ≥32 米诺环素≤48 ≥16 左氟沙星 2 4 ≥8 复方新诺明≤2/38- 4/76 氯霉素≤816 ≥32（二）无折点细菌的药物敏感试验报告 1. 其他药物的敏感性报告: CLSI推荐的药物可以报告MIC值和敏感度（S、I、R），临床需要的其他药物的药敏试验报告可以直接报告MIC值但不报告S、I、R。 2. 不要用认为相近细菌的折点代替报告S、I、R，这会误导医生用药。
药敏试验实验报告
药敏试验： 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。 简介： 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参
考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 实验步骤： 实验材料 普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 药敏试纸：购买或自制（详见实验准备） 细菌：待做药敏试验的细菌 仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
细菌分离培养及药敏试验方法及步骤
细菌分离培养方法及操作步骤 无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。 平板划线接种法 这是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作： 1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌； 图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时，迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。
3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。） 图3 平板划线接种法 4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。 注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱的细菌有利。
细菌药敏试验方法操作步骤 药敏试验是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节，一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药，减少抗菌素使用的盲目性，从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。 图4 接种环划线 2、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。
细菌药敏试验
实训细菌的药物敏感性试验 教学目标 使学生掌握细菌药物敏感性试验的操作方法，能够利用本试验方法选择敏感药物治疗兽医临床常见的细菌性传染病。 材料准备 1．器材：温箱、天平、打孔机、滤纸、无菌试管及吸管、镊子、接种环、酒精灯等。 2．试剂：蒸馏水。 3．培养基：普通琼脂平板。 4．菌种：金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的固体培养物。 5．药品：链霉素、金霉素、新霉素、红霉素等抗菌药物。 6．硫酸钡标准管：取1%~1.5%氯化钡0.5ml加1%硫酸溶液99.5ml，充分混匀即成，用前充分振荡。 方法步骤 将抗菌药物置于接种待检菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，由此可根据抑菌环的大小，判定细菌对药物的敏感度。 （一）含药纸片的制备 1．滤纸片最好选用新华1号定性滤纸，用打孔机打成直径6mm的滤纸片，放在小瓶中或平皿中，在121.3℃灭菌15min，再置100℃干燥箱内烘干备用。 2．药液的配制用无菌蒸馏水将各药稀释成以下浓度：磺胺100mg/ml、青霉素100IU/ml、链霉素、金霉素、新霉素、红霉素、多粘菌素1000μg/ml。 3．含药纸片的制备将灭菌的滤纸片用无菌的镊子摊布于灭菌平皿中，按每张滤纸片饱和吸水量为0.01ml计算，50张滤纸片加入药液0.5ml。要不时翻动，使纸片充分吸收药液，浸泡1~2h后于37℃温箱中烘干备用。对青霉素、金霉素纸片的干燥宜采用低温真空干燥法，干燥后立即放入瓶中加塞，放干燥器内或置-20℃冰箱中保存。纸片的有效期一般为4~6个月。 （二）测验方法 1．钩取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌落各4~5个，分别接种于肉汤培养基中，37℃培养4~6h。 2．用灭菌生理盐水稀释培养菌液，使其浊度相当于硫酸钡标准管。装有以上两种成分的试管须相同，硫酸钡应用前需充分振动。 3．用无菌棉拭子蘸取上述肉汤培养液，在试管壁上挤压除去多余的液体，在琼脂培养基表面均匀涂抹。每种细菌分别接种1~2个琼脂平板。
常见细菌药物敏感性试验报告规范
常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识 微生物学检验为感染性疾病的诊断、治疗和控制提供了必不可少的证据。因此微生物学检验报告是临床和实验室等多方共同关注的焦点。国内临床微生物学检验发展较为薄弱，报告存在着种种不足。同时，临床与实验室的沟通存在一定不足，密切协作非常必要。基于实际存在的问题，为规范国内临床微生物学检验药物敏感性试验报告，加强临床与实验室合作，发挥检验医师作用，特制订本共识，以期指导相关报告的规范化，减少错误，增加专业信息，提高服务质量，为临床医学诊、治、控提供坚实的科学依据。本共识限于常见细菌的药物敏感性报告。 一、药物敏感性试验的意义和基本原则 (一)意义 药物敏感性试验可以检测细菌对于抗细菌药物的敏感性，为临床用药、新药研究、监测耐药变迁、发现耐药机制等提供客观证据[1]。对于经验治疗，依据一方面来自医生自身的经验，一方面是实验室长期不断提供的数据积累。临床需要考虑不同感染的病原谱和常见病原对不同药物的敏感性；对于靶向治疗，特定分离株的具体药敏试验结果可以用于判断经验治疗选药合理性、经验治疗效果分析、调整治疗选药依据等。 (二)基本原则 1．药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药[2]。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献[3,4]。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2．药敏试验测试的前提条件[5]： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3．测试结果应准确： 实验室应遵照C L S I文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 二、具体的专业要求 (一)标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。
最新下呼吸道感染细菌学检验操作规范
下呼吸道感染细菌学检验操作规范 一、相关临床知识 临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌。下呼吸道感染包括急性气管-支气管炎、慢性支气管炎急性发作、支气管扩张继发感染及肺实质感染(肺炎、肺脓肿)等。病原体有细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体和原虫等。 下呼吸道感染患者可有发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性，可伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音、白细胞总数及嗜中性粒细胞比例明显增高，x线检查提示肺部有炎症性浸润或胸腔积液等体症，严重时可导致感染性休克和呼吸衰竭，因此临床诊断一般不难；细菌学检验能明确感染病原，并提供有关抗菌药物对分离菌的抗菌活性等信息，有助于疾病治疗、流行病学调查研究和医院感染的监测。临床呼吸道标本中常见分离细菌见表1 二、标本采集 本室必须注意生物安全防护。 (一)采集方法 1．自然咳痰法以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或牙刷清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。尽可能在用抗菌药物之前采集标本。用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应≥lml。标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存≤2h。 2．支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。 3．小儿取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。 (二)标本验收 遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。下呼吸道标本验收与拒收见表2。
细菌药物敏感试验实验报告
细菌药物敏感试验实验报告 药物敏感性试验的基本原则 1药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2药敏试验测试的前提条件： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。 错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3测试结果应准确： 实验室应遵照CLSI文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理
体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 具体的专业要求 1标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。在规范临床送检的前提下，实验室进行药敏试验和报告药敏结果时，应首先考虑标本的特殊性。实际工作中需重点考虑的标本如下。 1．脑脊髓液： 正常和疾病状态不能穿透血脑屏障的药物，常规不应报告。报告审核时，对于分离自脑脊髓液的菌，下列药物不能报告：仅有口服剂型的抗菌药物、一、二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、头霉素类、克林霉素、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类。
下呼吸道感染细菌培养操作规范
Standard for Bacterial Culture Procedures 标本 European Manual Microbiology.1罗斯菌属（Rothia spp.) ` 脑膜炎奈瑟菌 草绿色链球菌、奈瑟菌属嗜血杆菌属、莫拉菌属 常见引起细菌性社区感染典型肺炎病原菌：?肺炎链球菌?流感嗜血杆菌上呼吸道正常菌群?金黄色葡萄球?卡他莫拉菌 细胞内病原引起非典型肺炎：?肺炎支原体 ?肺炎/鹦鹉热衣原体?嗜肺军团菌 ?柯克斯体（Q 热）痰的来源？ 是否被上呼吸道污染？
hospitalization.Clin.Infec.Dis.31:869-874. 9Gleckman,R.,J.DeVita,D.Hibert,C.Pelletier,and R.Martin.1988.Sputum gram stain assessment in community-acquired bacteremic pneumonia.J.Clin.Microbiol.26:846-849. 内容 特异性82%～91%，诊断价值远高于痰标本； 附录B:“适合诊断的病原及检验项目”5.下呼吸道感染细菌培养的局限性 培养结果假阴性、假阳性的原因 球菌、流感嗜血杆菌（具侵袭性）定植数量会增加； `基础条件变化：使用免疫抑制剂、慢性肺病、广谱抗菌药物治疗或住院患者等人群中，革兰阴性杆菌的优势明显增加。 1）肺部感染的最常见机制：肺泡内吸入了口咽部定植菌； ?吸入性肺炎患者咽部菌群种类：多侵袭性细菌或耐药细菌，如肺炎链球菌或革兰 阴性杆菌。 ?清除机制：健康宿主吸入口腔定植菌后常无临床症状，细菌 通常被粘液柱状纤维清除。 ?吸入能否引起肺部感染取决于：吸入菌的致病性及数量； 患者免疫系统； 呼吸道功能等诸方面的因素。 2）吸入气溶胶肺部感染占第二位：主因：使用了不清洁的呼吸机。 3）血液播散性肺炎占第三位：感染通常造成双肺下叶肺炎。由呼吸道感染引发 的菌血症占12%，因此对肺部感染的高热患者送
临床细菌培养结果与药敏试验敏感性和耐药分析
临床细菌培养结果与药敏试验敏感性和耐药分析 发表时间：2016-07-09T12:43:14.773Z 来源：《医师在线》2016年5月第9期作者：夏芳 [导读] 通过对药材水分、灰分及浸出物的考察，制定了土五加的检查成分，有效地控制药材质量，从源头进行监控，保证药材的来源。夏芳 河南省南阳油田总医院河南南阳 473132 摘要：目的了解我院临床所送标本分离菌株的特征及耐药情况，为临床提供“经验”用药的依据。方法收集2015年1月—2015年10月我院临床各科送检的1782份标本所分离出的病原菌鉴定结果与药敏实验作分析。结果 1782份标本由21个科室所送标本组成，共检出阳性标本555例，检出率为31.1%。革兰氏阴性菌439株，占分离菌的79.1%；革兰氏阳性菌检出116株，占分离菌的20%。革兰氏阴性杆菌中以大肠埃希菌分离率最高，为25.4%，依次为铜绿假单胞菌11.5 % ，阴沟杆菌9.1% 肺炎克雷伯菌8.6% ，鲍曼不动杆菌5.2%； 革兰式阳性球菌以表皮葡萄菌为主，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌阳性率为23.8%，耐甲氧西林凝固酶阴性球菌为44.1%，大肠埃希菌产ESBLS为66%，肺炎克雷伯菌产ESBLS为39.6%，奇异变形杆菌产ESBLS为50%，革兰氏阴性菌耐药相当严重，大部分耐药在50%以上。结论定期对临床所选标本的细菌培养和药敏鉴定结果进行分析，有助于临床合理用药，减少耐药菌的发生，降低医疗费用和改善医患关系有重要意义。 关键词：细菌培养药敏试验 抗生素的合理使用已是人们关注的焦点，而合理使用抗生素的前提对于临床医生来说，基于两点出发：一是经验性用药；二是在细菌培养后，在药敏的指导下用药。而我们所说的“经验”性用药，是建立在细菌培养和药敏的回顾性总结的基础上而言的，所以检验科的微生物室应及时的总结临床所送标本分离菌构成特征及耐药情况，为临床提供“经验”用药的依据，为减少耐药菌的产生，降低医疗费用和改善医患关系有重要意义。基于这一目的，我们收集了2015年1月至2015年10月我院临床各科送检的1782份标本所分离出的病原菌鉴定结果及药敏试验结果，报告如下： 材料与方法 一、标本来源：住院与门诊共计21个科室，所送检的标本包括：血、尿、便、痰、分泌物、引流物、穿刺液、胸腹水等共计1782份。 二、材料与试剂：BACTEC9120全自动血培养仪、DL-96细菌鉴定系统、使用配套鉴定及药敏分析卡。 三、方法：各种标本以无菌方法接种于相应的培养基中，至于全自动培养箱孵育，如有细菌生长则进行鉴定和药敏试验，细菌的分离、鉴定严格按全国临床检验操作规程进行，药敏试验采用纸片法和MIC法。 四、统计学处理：用WHONET5.4统计软件进行处理和分析。 结果 一、1782份标本细菌的检出率 1782份标本由21个科室送检标本组成，共检出阳性标本555例，检出率为31.1%。临床各科送检标本数与检出率 本次分离出的555株细菌，革兰氏阴性菌439株，占分离菌的79.1%；革兰氏阳性菌116株，占分离菌的20.9%。
下呼吸道感染细菌培养操作规范_3
2014/5/9 3 3.2 标本运送 注1：若送检标本超过2h ，将导致有临床意义的致病菌数量减少，非苛养的口咽部定植 菌过度生长。为防止口咽部正常菌群的过度生长，可将标本放置2℃～8℃环境，但 培养分离到肺炎链球菌等苛养菌的机会和数量会减少。 注2：若标本延迟送检超过2h 后未冷藏（超过2h ～24h ，2℃～8℃），应在报告中说明因 延误送检标本，可能对培养结果造成的影响。 3.3 筛选并拒收下呼吸道细菌培养标本 ?拒收24h 内重复采集的痰细菌培养标本 ? 唾液 ?鼻冲洗液和分泌物、鼻孔拭子 ?咽部标本 ?未经保护套管收集的支气管刷培养标本 ?痰的厌氧菌培养标本 注：除支气管穿刺吸出物、PSB 、活检标本、胸水或其他未经污染以外的标本做厌氧菌培养均不合格。 ?诱导痰 注：诱导痰标本只适用于检测卡氏肺孢子菌和结核分枝杆菌，对其他病原菌检出效果差。 4.1 痰及气管吸出物标本处理 4.1.1 标本处理要求 ?接种标本及涂片操作必须在Ⅱ级生物安全柜中进行； ? 应尽快处理所有标本，特别是来自急诊、新入院患者和有创方法采集的标本（如：BAL 和肺活检标本），以保证致病菌的活性，避免造成重复采集标本； ? 使用全自动接种前处理系统的实验室按厂家说明书处理标本，洗痰、液化后自动接种和涂片革兰染色。 4.1.2 接种标本 4.1.3 培养 4.1.4 标本涂片及革兰染色 注1：革兰染色脱色时间因选用不同的脱色剂而异。1）95%乙醇脱色时间为30s ；2）丙酮- 乙醇（体积比为3:7,棕色瓶室温保存，有效期1年）脱色时间1s ～5s ，脱色效果一致性 好；3）丙酮（试剂纯）脱色时间最短，当标本中含大量宿主细胞时脱色效果好。 注2：使用革兰染色仪染色的实验室按照厂家操作说明书进行，注意条件优化，使涂片染色结果达到满意效果。 4.1.5显微镜观察革兰染色结果 注：低倍镜下细胞计数、油镜下细菌计数半定量指标； ? 4.2 气管镜标本处理 4.2.1 支气管肺泡灌洗液定量培养 4.2.2 保护毛刷定量培养 4.2.3 接种其他培养基并培养 4.2.4 革兰染色标本处理 4.2.5 剩余BAL 标本可用于其他病原检测（标本珍贵） 对剩余BAL 标本离心后，可根据需要进行病毒、分枝杆菌、军团菌和真菌培养；或做病毒、卡氏肺孢子菌、抗酸染色和真菌涂片染色（见参考文献4的第六篇相关章节）（修改解释）。 4.3 连续培养并观察慢生长菌 4.4 分离并鉴定下呼吸道重要致病菌（参见附录C ） “常见可疑菌落形态及经典快速鉴定方法(16种)”（修改解释） 4.4.1链球菌属 4.4.2苛养革兰阴性杆菌（在麦康凯平板上难生长） 4.4.3革兰阴性双球菌 4.4.4革兰阴性杆菌（在麦康凯平板上生长良好） 4.4.5葡萄球菌属 4.4.6肠球菌属 4.4.7革兰阳性杆菌 4.4.8鉴定丝状真菌 4.4.9涂片时可见但培养不生长的细菌 4.5质量控制 4.5.1革兰染色 4.5.2抗酸染色 4.5.3培养基 4.5.4试剂 4.5.4.1每批号、每周需做质控的试剂 4.5.4.2每批号、每次试验需做质控的试剂
细菌药敏试验实验报告解读
细菌药敏试验实验报告解读 “医院有的药物不做药敏实验，医院没有的药物做什么药敏实验？”在临床上经常能听到临床医生们抱怨。“药敏报告显示敏感的药物，而临床治疗无效？”有时也让大夫们感到不解。这些问题使得临床医师不知道如何选择抗菌药物，那么如何正确解读药敏报告，合理选择抗菌药物报告呢。 我们先来了解几个概念： 最低抑菌浓度（MIC）：测量抗菌药物的抗菌活性大小的一个指标，指在体外培养细菌18至24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度。 最小杀菌浓度（MBC）：抗菌药物能能使受试菌最初的活菌总数减少99.9%以上所需要的最低抗菌药物浓度。 折点：是最低抑菌浓度或者抑菌圈直径，用于区分离株为敏感、剂量依赖性敏感、中介、非敏感还是耐药 敏感（S）：通过折点来定义，指当对感染部位采用推荐剂量时，具有MIC值等于或低于敏感折点（或抑菌圈等于或高于敏感折点）的菌株通常可被抗菌药物所达到的浓度水平所抑制，产生可能的临床疗效。 中介（I）：通过折点来定义，包括这些MlC或者抑菌圈直径在中介范围内的菌株，其抗菌药物MIC接近于血液和组织中通常可达到的水平，而抗菌药物治疗的疗效可能低于敏感株。耐药（R）：通过折点来定义，指按常规用药方案，在药物通常可达到的浓度水平时，菌株不能被抑制，表明MIC值或抑菌圈直径可能在一个产生了某种特殊的耐药机制(如β-内酰胺酶）的范围内，而且治疗研究显示该药的临床疗效不可靠。 多重耐药（MDR）：是指有多重耐药性的病原菌。其定义为一种微生物对三类（比如氨基糖苷类、大环内酯类、β－内酰胺类、喹诺酮类等）或三类以上抗菌药物同时耐药，而不是同一类的三种。 泛耐药(XDR)：广泛耐药细菌指细菌对常用抗菌药物几乎全部耐药，革兰氏阴性杆菌仅对黏菌素和替加环素敏感，革兰氏阳性球菌仅对糖肽类和利奈唑胺敏感。 全耐药（PDR）：泛耐药细菌指对所有分类的抗菌药物全部耐药，革兰氏阴性杆菌对包括黏菌素和替加环素在内的全部抗菌药物耐药，革兰氏阳性球菌对包括糖肽类和利奈唑胺在内的全部抗菌药物耐药。 药敏试验目的 使用体外试验的方法检测细菌的耐药性，预测抗菌药物临床治疗效果并为临床医生针对某一特定感染问题选用药物提供依据。 判断标准
第5章 呼吸道传播的细菌
第5章呼吸道感染细菌 学习要点 一、结核分枝杆菌 1.生物学性状 （1）形态与染色：细长微弯，常聚集成团，或分枝状排列。抗酸染色阳性。有荚膜。 （2）培养特性：营养要求高。专性需氧，生长缓慢。菌落表面干燥呈颗粒状，似菜花。 （3）变异性：可发生形态、菌落、毒力、免疫原性和耐药性变异。 （4）抵抗力：对乙醇、湿热、紫外线等敏感。对酸、碱和干燥有较强抵抗力。 2.致病性与免疫性 （1）致病性 1）传染源：主要是病人，可通过呼吸道、消化道及损伤的皮肤粘膜等传播 2）致病因素：不产生内、外毒素，其致病性可能与细菌在细胞内大量繁殖引起的炎症、菌体成分和代谢产物引起的免疫损伤有关。 3）临床上肺结核最常见，如肺门淋巴结核、粟粒性肺结核等。其次是肺外感染，如胸膜、肾、肠、膀恍结核等。 （2）免疫性：抗感染免疫以细胞免疫为主，属于传染免疫，即有菌免疫，当结核分枝杆菌在体内存在时才有免疫力。 结核菌素试验 是用结核菌素进行皮肤试验，来检测受试者是否感染过结核分枝杆菌及细胞免疫功能是否正常。原理:结核分枝杆菌感染后，细胞免疫和IV型超敏反应同时并存，注射一定量结核菌素诱导致敏T DTH细胞释放细胞因子，形成以单核巨噬细胞浸润为主的局部炎症反应。方法及结果分析见教材。 3.微生物学检查 （1）标本：根据感染部位的不同，采用不同标本。可先浓缩集菌，以提高检出率。 （2）直接涂片镜检：取标本直接厚膜涂片或集菌后涂片用抗酸染色、镜检。 （3）分离培养与鉴定：将经集菌处理的沉淀物，接种于固体培养基上，37℃培养，
通常3～4w可长出粗糙的菌落。也可将标本接种于液体培养基中，5～7d取沉淀物涂片染色镜检，获结果较快，有助于治疗。 （4）快速诊断：目前聚合酶链反应（PCR）技术已用于结核分枝杆菌的鉴定，每毫升标本中几个细菌即可获阳性结果。但应注意排除假阳性和假阴性结果。 （5）血清学试验：用ElISA测定待检标本（脑脊液、血液或胸腹水）中的抗体，明显增高者有助于活动性结核病的诊断。 4.防治原则 （1）预防：主要通过及时发现和治疗痰菌阳性患者和应用卡介苗接种。接种对象为新生儿和结核菌素试验阴性的儿童。接种方法为皮内注射0.1ml（内含0.5～0.75mg）的卡介苗。另外，卡介苗为活菌制剂，应注意低温保存。 （2）治疗：目前，我国采用WHO建议推广的“直接督导下的短程化疗”（DOTS）方案，即病人每次均由“督导员”（医务人员、社区志愿者或家属）在场目睹其服用规定药物。疗程可缩短至6个月。国内外均推行三药联合方案。在耐药病例发生率较高地区，头2个月强化期需加第4种药。 二、脑膜炎奈瑟菌 1.生物学性状 （1）形态与染色：脑膜炎奈瑟菌呈肾形或豆形，成双排列，凹面相对，直径0.6~0.8μm。革兰阴性，新分离的菌株有荚膜和菌毛。 （2）培养特性：营养要求高，最常用的是巧克力色培养基。最适温度35~37℃，pH7.4~7.6，专性需氧。菌落1.0~1.5mm、圆形、无色透明、光滑似露滴状。因产生自溶酶，培养超过48h即死亡。 （3）抵抗力：本菌抵抗力弱，对冷、热、干燥、紫外线及一般消毒剂均敏感。 2.致病性 （1）传染源：主要是带菌者和病人，经飞沫传播为主要途径，密切接触（如同睡、喂乳、亲吻）对两岁以下的婴幼儿的传播有重要意义。 （2）致病因素：主要有内毒素、荚膜及菌毛。内毒素在发病中起主要作用 （3）流脑潜伏期1~10d。临床表现有普通型、暴发型、轻型和慢性败血症型。临床特
呼吸道标本的培养与鉴定
呼吸道标本的培养与鉴定 人体的上呼吸道有常居的细菌群，下呼吸道是无菌的。上呼吸道常居菌主要有：草绿色链球菌、α、β链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、拟杆菌、梭杆菌、口腔厌氧球菌、奈瑟菌（致病菌除外）等。 1. 下呼吸道感染的病原菌种类因感染部位而有所差异。（1）.咽炎最常见的病原菌是A群链球菌； （2）.喉炎的病原菌以流感嗜血杆菌为主； （3）.中耳炎常见病原菌为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌及口腔厌氧菌； （4）.社区获得性下呼吸道感染的常见病原菌包括肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎衣原体、肺炎支原体、卡他莫拉菌、化脓性链球菌、结核分枝杆菌、嗜肺军团菌、诺卡菌等，金黄色葡萄球菌可引起社区获得性、进行性、坏死性肺部病变; (5)长期使用广谱抗菌药物及激素、粒细胞减少的患者容易受到侵袭性真菌的感染。 2.检验方法与程序 通常用鼻咽拭子采集标本。痰和支气管灌洗液用无菌痰杯留取。应由临床医生指导留取。痰标本及上呼吸道拭子标本应在2小时内送到实验室。 3.涂片检查 直接涂片、革兰染色、镜检。痰液标本每低倍视野上皮细胞应
小于10个，白细胞应大于25个。还可以初步判定是否有病原菌存在及病原菌的种类。比如，念珠菌可直接在高倍镜下检查孢子及菌丝。 4.细菌培养通常采用分区划线接种的方法进行标本的初次接种。①血平板适用于分离各类细菌，特别是β溶血性链球菌 ②巧克力平板于5%co2环境下分离嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌或淋病奈瑟菌 ③中国蓝/麦康凯平板用于分离革兰氏阴性杆菌 ④沙氏平板用于分离念珠菌及其他酵母菌或真菌 ⑤厌氧血平板放厌氧环境，分离厌氧菌 ⑥罗-琴培养基或米氏7H10培养基，用于结核分枝杆菌的培养。 35℃培养18-24小时，观察细菌菌落形态及特点，呼吸道标本中的常居菌群不用鉴定，培养后生长于平板第二区或第三区的中等或大量细菌，或仅在第一区生长的纯种细菌，都是需要鉴定的细菌。若无致病菌或呼吸道正常菌群生长，可能提示正常菌受抗菌药物的抑制。标本运送和处理的延迟会使培养结果为假阴性。对痰液中检出的呼吸道常居菌虽不做鉴定，但在报告时给予说明，当其为生长优势菌时（均占90%以上）可做鉴定和报告。经过鉴定确认为呼吸道重要病原菌时，应作出培养阳性的结果报告。