T SPOT-TB试剂盒在结核病临床诊断中的应用价值
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诊．１４例依据临床症状和胸部ｘ线片确诊；ＰＰＤ强阳性、无任何结核病临床症状且相关检查结果无异常的志愿者４例，其中ｌ例为２型糖尿病、３例为健康志愿者，此３０例作为结核感染组，其中男１２例，女１８例，年龄１６～７５岁，平均４０．５岁。
１．２主要试剂和仪器ＴＳＰＯＴ．ＴＢ试剂盒由上海复兴医药股份有限公司惠赠；１６４０培养液系美国ＧＩＢＣＯＢＲＬ公司产品；淋巴细胞分离液系上海恒信化学试剂有限公司产品；酶联免疫斑点分析仪由美国ＣＴＬ公司中国销售部提供使用。
１．３方法
１．３．１外周血Ｔ淋巴细胞的分离抽取外周静脉血４ｍＬ至肝素钠抗凝的无菌管中，实验前颠倒混匀，避免血液分层，缓缓加入到含等体积的淋巴细胞分层液的无菌离心管中，使两者形成明显界面．于ｌ６００×ｇ离心３０ｍｉｎ．可见外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ，ＰＢＭＣ）存在于云雾层中，用无菌滴管吸取淋巴细胞层至一干净的离心管中；用１６４０培养液洗涤、离心２次：于显微镜下计数细胞数，将细胞用完全细胞培养液调至２．５×ｌ＆／ｍＬ。
１．３．２ＴＳＰＯＴ—ＴＢ检测每个测试样本需要微孔板４孔：在阴性对照孔内加入细胞培养液５０此；在阳性对照孔内加入阳性对照ＰＨＡ５０ＩｘＬ：在２个测试孔内分别加入结核杆菌混合多肽Ａ即ＥＳＡＴ．６抗原和混合多肽Ｂ即ＣＦＰ．１０抗原各５０“Ｌ。分别
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在上述孔内，加入１００ＩｘＬ２．５×ｌ＆／ｍＬ的ＰＢＭＣ。将微孔板放人（３７±１）ｏＣ含５％Ｃ０２培养箱中孵育１８ｈ。洗板４次后，加入新鲜配制的１：２００的标记抗体工作液５０斗Ｌ，于４℃孵育６０ｒａｉｎ。再次洗板４次，加入底物溶液５０斗Ｌ，于室温中显色反应７ｍｉｎ，用双蒸水洗涤各孑Ｌ终止反应。在孔内可见有深紫色的斑点。将微孔板避光放在通风环境下或３７℃烘箱中干燥。应用ＣＴＬ公司酶联斑点分析仪计数着色的斑点。
１．４结果判断标准根据ＴＳＰＯＴ—ＴＢ试剂盒使用说明书，如果阴性对照孔斑点形成细胞（ＳＦＣ）＜６，检测孔ＳＦＣ减去阴性对照孔ＳＦＣＩ＞６．可判断所测标本为阳性：如果阴性对照孔ＳＦＣ≥６，检测孑ＬＳＦＣ为阴性对照孔２倍，可判断所测标本为阳性。
１．５统计学方法检测结果以均数±标准差表示，用ＳＰＳＳｌｌ．０软件计算，计量资料的比较采用成组ｔ检验。Ｐ＜０．０５表示差异有显著性，Ｐ＜０．０１表示差异有非常显著性。
２结果
３０例结核感染组（包括临床已确诊结核病患者和ＰＰＤ强阳性者）中，９３．３％（２８／３０）ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测阳性，６．７％（２／３０）检测阴性。其中４例ＰＰＤ强阳性者检测均为阳性。３０例非结核感染组（包括非结核疾病患者和健康志愿者）中，９６．６％（２９／３０）ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测阴性，仅１例阳性，阳性率为３．４％。代表性结果见图１。
注：Ａ，非结核感染组，ＥＳＡＴ．６抗原和ＣＦＰ．１０抗原刺激均为阴性；Ｂ，结核感染组，ＥＳＡＴ．６抗原和ＣＦＰ．１０抗原刺激均为阳性图１ＥＬＩＳＰＯＴ法检测人外周血中分泌ＩＦＮ．＾ｙ的淋巴细胞的代表性结果
ＴＳＰＯＴ－ＴＢ阳性组与ＴＳＰＯＴ．ＴＢ阴性组的阴性对照孔ＳＦＣ比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）；两组阳性对照孔的ＳＦＣ比较差异有非常显著性（Ｐ＜０．０１）；两组检测孔Ａ和检测孔Ｂ的ＳＦＣ比较差异均有非常显著性（Ｐ＜０．０１）。见表１。
在２９例ＴＳＰＯＴ—ＴＢ阳性者中，９例（３１．０％）为检测孔Ａ和检测孔Ｂ均阳性，１３例（４４．８％）为检测孔Ａ阳性、检测孑ＬＢ阴性，７例（２４．２％）为检测孔Ａ阴性、检测孔Ｂ阳性。
３讨论
近年来的研究发现。培养滤液蛋白ｌｏ（ｃＦＰ．１０）和６ｋＤａ早期分泌性抗原靶（ＥＳＡＴ－６）是从结核
表１ＥＬＩＳＰＯＴ法检测人外周血中分泌ＩＦＮ．＇的
淋巴细胞的斑点数面±ｓ
分枝杆菌短期培养滤液中分离的两种低分子量蛋白，由ＲＤＩ区编码，该区只存在于结核分枝杆菌复合群和少数致病性分枝杆菌基因组中，所有卡介苗
（ｓｃＧ）菌株及非致病性分支杆菌基因组中均缺乏
T SPOT-TB试剂盒在结核病临床诊断中的应用价值
作者：李峤珂， 吴雪琼， 阳幼荣， 张俊仙， 梁建琴， 王安生， 张广宇， 张涛， 王兰， LI Qiao-ke， WU Xue-qiong， YANG You-rong， ZHANG Jun-xian， LIANG Jian-qin， WANG
An-sheng， ZHANG Guang-yu， ZHANG Tao， WANG Lan
作者单位：李峤珂,LI Qiao-ke(武警四川省总队医院内一科,四川省乐山市,614000)， 吴雪琼,阳幼荣,张俊仙,梁建琴,王安生,张广宇,张涛,王兰,WU Xue-qiong,YANG You-rong,ZHANG Jun-
xian,LIANG Jian-qin,WANG An-sheng,ZHANG Guang-yu,ZHANG Tao,WANG Lan(解放军第
309医院全军结核病研究所,北京市,100091)
刊名：
实用医学杂志
英文刊名：THE JOURNAL OF PRACTICAL MEDICINE
年，卷(期)：2010,26(17)
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本文链接：https://www.360docs.net/doc/f216298674.html,/Periodical_syyxzz201017018.aspx