大花红景天组织培养试验
大花红景天组织培养试验
西藏自治区农牧科学院中心实验室
发布时间：2008-11-06 来源：中国西藏信息中心作者：白玛玉珍李宝海次仁措姆李顺凯达
娃
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[摘要]：通过对大花红景天[Rhodiola crenulata(Hook．f．et Thoms．)S．H．Fu]不同外植体叶、茎、根进行离体培养，结果表明；采用7O%的乙醇消毒材料30s，再用0．1%的升汞消毒5-10min较适合根、茎、叶外植体的消毒，而采用7O%的乙醇消毒材料30s，再用0．1%的升汞消毒20-25min适合红景天种子的消毒，污染率仅8%；不同外植体愈伤组织诱导与分化能力不同，叶片愈伤组织诱导和分化率最高，分别为70%与14.3%；外植体诱导愈伤组织和分化成苗的能力与植物生长调剂、蔗糖浓度等因素有关，最适愈伤组织诱导培养基为附加6-BA0.5mg／L+2,4-D3.0mg／L或6一BA0.5mg／L+NAA 3.0mg／L的1/2Ms，生根培养基为附加IAA的1/2Ms，蔗糖浓度为3%时，愈伤组织结构松散、红或绿色愈伤组织诱芽容易。
[关键词]：大花红景天外植体愈伤诱导分化激素蔗糖
A Test for Tissue Culture of Rhodiola Crenulata
Baima Yuzhen Li baohai Tsring Tsomo Li sunkai Dawa
（The center of quality and safety supervision, inspection and examination for Agricultural products in Lhasa,Ministry of Agriculture,PR.China. 8500032）
Abstract:
The Different explants(leaf, root and stem) of Rhodiola Crenulata were cultivated and studied in separate culture mediums. The results showed: 70% ethanol 30 seconds with 0.1% HgCl2 5-10 minutes are having a moderate sterilizing effects on root,stem and leaf; 70% ethanol 30 seconds with 0.1% HgCl220-25 minutes present a good sterilizing effects on seeds of Rhodiola Crenulata, which leave only 8% of contamination rate; Different callus of explants demonstrate varying abilities of induction and differentiation, leaf callus shows a high rate of induction and differentiation, they are 70% and 14.3% respectively; It shows that the ability of callus induction and the differentiation ability for a callus successfully turning to shoot have a strong link with the factors of plant’s auxin and sucrose’s concentration etc. The best culture medium for callus induction is 6-BA 0.5mg/L + 2,4-D 3.0mg/L or 6-BA 0.5mg/L + NAA 3.0mg/L, the best one for root is IAA with 3% concentration of sucrose. It is proved red and green callus or callus with
a loose structure present a good ability for turning to sprout.
Keyword:
Callus induction, Rhodiola Crenulata, Hormone, Sucrose, Explant, Differentiation
大花红景天Rhodiola crenulata(Hook．f．et Thoms．)S．H．Fu]属景天科多年生草本植物,又称宽瓣红景天、圆齿红景天,藏语称苏罗马保,为2005年版《中国药典》收载品种。分布在云南西北部、四川西部和西北部、西藏和青海省,多生长在海拔2800~5000米的山坡草地、灌丛及石缝中。经受长期缺氧、干燥及强紫外线等恶劣环境的影响，形成独特的营养成分，含有丰富的红景天甙、黄酮、多种维生素和微量元素，还含有机体所必需的17种氨基酸。具有抗缺氧、抗寒冷、抗疲劳、抗辐射、抗病毒、延缓机体衰老、防止老年疾病、抗微波辐射及兴奋大脑和脊髓等多种功能，是一种适用于特殊地区开发、用以增强人体适应能力的药物。另外，也可以研制成饮料饮用⑴。
近年来，随着人们对大花红景天的不断深入研究与开发利用，自然状态生长的大花红景天资源受到了严重的威胁。因此．加快其人工繁殖，缓解资源开发与保护的矛盾已成为当务之急,采用试管技术繁殖大花红景天种苗并进行人工栽培有助于解决这一问题。
1、材料与方法
1.1 试验材料
本试验材料为大花红景天(Rhodiola crenulata)的茎、叶、叶柄、根，来源于西藏自治区拉萨市墨竹工卡县,工卡镇，日土乡，海拔4800米以上。
1.2 试验方法
1.2.1 外植体的处理
分别选取大花红景天幼嫩的茎、叶、根、种子作为外植体，在超净工作台上，用7O%的乙醇消毒材料30s；用7O%的乙醇消毒材料30s，再用0．1%的升汞消毒5-25min。然后用灭过菌的无菌水冲洗3-5次，再用无菌滤纸将外植体表面的水吸干，将其切成大小相近的小块(约5mm的叶片)，然后接种到培养基上，每个处理30-50瓶，每瓶1-2个外植体。培养1周后调查污染情况，污染率（%）=（污染外植体/接种外植体）×100。
1.2.2 愈伤组织的诱导和分化
外植体MS基本培养基上生长一周后，将试管苗叶切成小块接种到MS基本培养基和附加不同浓度NAA、2，4-D和6-BA的各种培养基上，用于筛选诱导愈伤组织和分化最佳培养基；蔗糖浓度设为2%、3%、4%，每个处理分别接种茎、叶、根三种外植体，比较蔗糖对其离体培养再生的影响；在
1/2MS+6-BA0.5mg/l+2,4-D3.0mg/l+蔗糖3%的培养基上，接种茎、叶、根比较不同外植体离体培养再生效果。
1.2.3 根的诱导和试管苗的移栽
切取高2-3cm或2-4片叶的芽体与带茎节切段，接种于附加IAA的1/2Ms培养基上诱导生根，用珍珠
岩、砂子、腐植土、园土以一定比列混合的基质进行移栽。
上述试验所采用的基本培养基是MS培养基，附加各种激素，每升培养基加琼脂6g，各种培养基的pH 值均为5.8；光照1O-16h／d，光照强度约为1500-2000Lx，结合自然光照8OOLx左右。
2、结果与分析
2.1 不同消毒方法对外植体接种污染的影响
从表1可以看出，仅用70%的乙醇消毒的外植体污染率较高，用7O%的乙醇消毒材料30s，再用0．1%的升汞消毒5-10min或用7O%的乙醇消毒材料30s，再用0．1%的升汞消毒20-25min后接种的外植体污染率较低，说明0.1%升汞消毒对红景天外植体接种污染有一定效果.
四种外植体用第一种消毒方法污染率最高，第三种消毒方法污染率最低，但第三种消毒方法使茎、叶、根三种外植体褐变率达90%以上，因此，第二种消毒方法较适合茎、叶、根三种外植体的消毒，而第三种方法使用于种子的消毒。
2.2 不同外植体愈伤组织诱导和分化比较
试验观察到，大花红景天不同外植体培养过程中愈伤组织诱导与分化十分缓慢。茎、叶、根三种外植
体中,叶片外植体的愈伤组织诱导率和分化率最高，分别为70%与14.3%（表2）
2.3 植物生长调节剂对外植体愈伤组织诱导和分化的影响
激素是植物组织培养器官分化的关键因素，形成器官的类型由培养基中不同激素的相对浓度控制，而不是这些物质的绝对浓度决定(2)。将叶片接种于附加2，4-D、AB、NAA的12种培养基，结果（表3）表明，在6-BA0.5mg／L+2,4-D3.0mg／L或6一BA0.5mg／L+NAA 3.0mg／L的1/2Ms培养基对叶片愈伤组织诱导率最高，分别达到70%与72%。随着BA浓度的升高，外植体愈伤组织诱导能力有所提高，可见，适当的BA浓度与2，4-D、NAA配合有利于叶片外植体的诱导。
2.4 蔗糖浓度对外植体愈伤组织诱导及分化的影响
蔗糖浓度为3%时，三种外植体愈伤组织率和分化率均较高，（表4）。蔗糖浓度为2%、4%时，虽外植体的愈伤组织诱导率高，但分化率很低，其中茎外植体愈伤组织分化成苗率为0，可见诱导愈伤组织培养基适宜的蔗糖浓度为3%。
2.5 根的诱导和试管苗的移栽
切取高2—3cm的芽体，接种于生根培养基上，生根培养基以1／2Ms附加0．5mg／mlIAA效果较好，7—10d即可产生根原基突起。1O～25d后，根长3～5cm，平均每株生根5条，生根率达98％(图E)。待苗高达4cm以上进行移栽，移栽前将具生根苗的三角瓶盖打开，于实验室温度、散射光下炼苗3-4天；用镊子取出小苗后，洗去根部培养基，移栽于珍珠岩、砂子、腐植土、园土以一定比列混合的基质中，并加盖透光塑料膜，1周后去膜。移栽成活率达75％以上，如果瓶苗形成木质化根，移栽成活率达95%。
A B C
ＤＥＦ
A 刚接种的叶片外肢体；
B.8周后基部开始形成愈伤组织；
C.16周后叶片外植体分化出芽；
D.28周后叶片外植体芽的增殖；
E.转入生根培养基2周后生根情况；
F.生根培养6周后可移栽的植株。
3、讨论
在本研究中，以大花红景天叶片、根、茎作为外植体，全面研究其愈伤诱导形成的适宜条件：在愈伤组织诱导方面，以叶片作为外植体诱导组织效果最好，诱导频率可达70%以上，三种类型的愈伤组织中，结构疏松、呈颗粒状的绿色或红色愈伤组织分化能力最强，不同激素种类和浓度的组合对愈伤组织的诱导效果不同。
本实验采用2，4-D、BA与NAA配合对大花红景天诱导成苗效果较好，得到最佳诱导愈伤组织培养基为1/2Ms+6-BA0.5mg／L+2,4-D3.0mg／L或1/2Ms+6一BA0.5mg／L+NAA 3.0mg／L。
本实验还发现在培养基中添加不同浓度的蔗糖对芽的诱导和分化有一定程度的影响，蔗糖浓度为3%时，外植体的愈伤组织诱导率与再分化率较高，较低（2%）或较高（4%）均抑制外植体分化成苗，较低或较高的蔗糖浓度虽然使愈伤组织诱导率较高，但愈伤组织呈透明或淡黄色水泽状，结构疏松，易褐化死亡，不利于分化成苗。
本实验发现，如果控制生根培养温度和光照使瓶苗形成木质化根，可以大大提高移栽成活率。
4、结论
4.1 适合大花红景天愈伤组织诱导的外植体和培养基
最佳外植体是幼叶，诱导愈伤组织培养是1/2Ms培养基附加6-BA0.5mg／L+2,4-D3.0mg／L或6一
BA0.5mg／L+NAA 3.0mg／L。
4.2 适合大花红景天生根的外植体和培养基
最适外植体为无菌茎，诱导生根的培养基为MS++IAA 0．5 mg／L，通过实验发现IAA的浓度对于生根有很大的影响，
4.3 适合大花红景天组织培养条件
最适温度为2l一25℃，pH值为 5.8,琼脂6g/l, 光照1O-16h／d，光照强度约为1500-2000Lx，结合自然光照8OOLx左右。培养基中碳源以30g/l 蔗糖效果最好。
References
（1）尹文兵lI 李伟周燕李颖石印莉萍黄勤妮大花红景天的组织培养和快速繁殖植物生理学通讯第41卷第4期，(1):493
（2）摧澄植物激素与细胞分化及形态发生的关系[J]．细胞生物学杂志，1983，5(2)：1—5．
植物组织培养实验基本步骤。。
植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS大量元素母液的配制 将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 、KH2PO4 、 MgSO4·7H2O 、CaCl2·2H2O ，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS微量元素母液的配制 将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4· 4H2O 、ZnSO4·7H2O 、 H3BO3 、KI 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O ，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS铁盐母液配制 将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称
FeSO4·7H2O 和Na2·EDTA ，把FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇、维生素B1 、烟酸、甘氨酸、维生素B6 、蔗糖，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织
(医疗药品)药用植物组织培养实验指导
甘肃农业大学农学院 药用植物组织培养实验指导 柳福智编 农学院中草药栽培与鉴定教研室 2007年8月 前言 药用植物组织培养实验是根据中草药栽培与鉴定专业的培养要求，为学生开设的一门实验课程。药用植物组织培养实验的任务是使学生加深对药用植物组织培养基本理论的理解，掌握药用植物组织培养实验的基本操作技能，学习药用植物组织培养实验的基本知识，养成严格、认真和实事求是的科学态度，提高观察、分析和解决问题的能力，为将来参加工作打下良好的基础。 编者 2007年8月 学生实验守则 1、实验前认真预习，领会实验原理，明确本次实验的目的和要求，了解实验步骤和注意事项。
2、实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，认真记录有关数据。 3、要认真写好实验报告，实验报告要清楚、简练、整洁。 4、学生进入实验室必须严格遵守实验室规则，服从带教老师的指导。 5、爱护实验室的仪器设备，不准将实验室的仪器设备私自带出室外。 6、严格遵守操作规程及实验时应注意的事项，在使用不熟悉其性能的仪器和药品之前，应查阅有关资料或请教指导教师，不要随意进行实验，以免损坏仪器，浪费试剂，使实验失败，更重要的是预防发生意外事故。 7、实验过程中应注意防火灾、防爆炸、防腐蚀、防污染工作，牢固树立“安全第一”意识。 8、实验结束后，一切仪器试剂应放回原处，玻璃仪器要清洗干净，一些有毒、有腐蚀性的废液应倒入废液缸内。 9、实验台面要擦试干净，由值日生负责安全卫生工作，包括清理实验室，检查水、电的开关，清除垃圾和污物，关好门窗后方可离开实验室。 药用植物组织培养实验报告一般包括以下内容和要求： （1）实验名称、实验日期。 （2）实验目的写明通过本实验要达到的训练目的。
植物组织培养报告
植物组织培养报告内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
大蒜茎尖的组织培养 谢婷婷江宋青万嫣文吕凌宇一、实验目的 掌握植物组织培养的相关理论知识及操作方法； 通过自行设计并完成实验，提高动手能力和思维能力； 利用植物细胞的全能性，使大蒜茎尖经过脱分化作用形成愈伤组织，再分化为有结构的组织和器官，最终增殖培育出大量品质优良的大蒜试管苗。二、实验原理 植物组织培养是利用植物细胞的全能性原理。植物组织培养是在无菌环境下，将离体的植物器官、组织以至单个细胞，在人工配置的培养基上培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化”。已经脱分化的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化”。 三、实验材料、试剂和器材 1 供试材料 以购于府前菜场的大蒜为实验材料，实验在丽水学院生态学院组培实验室进行。 2 仪器与设备 超净工作台、培养事、电子天平、烧杯、容量瓶、玻璃棒、量筒、移液
管。 3 试剂 70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、蔗糖、琼脂条、6-BA（1.5 mg/L；2.0 mg/L）、2,4-D（2.0 mg/L）、NAA（1.0 mg/L；）、IBA（2.0 mg/L）、10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物。 四、实验步骤 1.培养基的配制及灭菌 诱导培养基：MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L 出芽培养基：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L 生根培养基：MS+IBA 2.0 mg/L （1）将MS母液（10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物）按顺序排列、检查是否失效。 （2）在装有3/4蒸馏水的容器中加入0.7%琼脂和3%蔗糖，加热溶化。（3）依次吸取适量各种母液移到容器中。 （4）用蒸馏水定容到相应体积。 （5）调节pH值(用0.1M的NaOH或HCl调节)至5.8-6.0。 （6）向培养基中加入适量激素。 （7）将配制好的培养基进行分装（20-30ml/瓶）。 （8）用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（烧杯、培养皿、灭菌水等），需同时灭菌。 （9）将灭菌后的培养基于常温下放置一星期，观察有无污染。
植物科属分类汇总
植物科属种分类 一．裸子植物门 杉科 北美红杉属：北美红杉 水杉属：水杉 水杉属：池杉 三尖杉科 三尖杉属：三尖杉 红豆杉科 红豆杉属：红豆杉 罗汉松科 长叶竹柏 罗汉松属：罗汉松 柏科 圆柏属：圆柏 扁柏属：日本扁柏 侧柏属：侧柏 刺柏属：刺柏 松科 金钱松属：金钱松 松属：华山松，黑松，油松，火炬松， ，红松，马尾松 雪松属：雪松 云杉属：云杉 银杏科 银杏 二．被子植物门 一．双子叶植物纲 （一）离瓣花亚纲 1.桑科（Moraceae）： 桑属：桑 榕属：小叶榕，薜荔 大麻属：大麻 构属：构树 2.马兜铃科（Aristolochiaceae） 细辛属：细辛 马兜铃属：马兜铃 3.蓼科（Polygonaceae） 大黄属：掌叶大黄，唐古特大黄，药用大黄蓼属：何首乌，虎杖，红蓼，拳参，水蓼
酸模属：羊蹄 荞麦属：荞麦 4.苋科（Amaranthaceae） 牛膝属：牛膝，土牛膝 杯苋属：川牛膝 青藓属：鸡冠花，青葙 5.石竹科（Caryophyllaceae） 石竹属：瞿麦，石竹 繁缕属：银柴胡 麦蓝菜属：麦蓝菜 6.睡莲科（Nymphaeaceae） 莲属：莲 芡属：芡实 7.毛茛科（Ranunculaceae）,如牡丹乌头属：乌头，北乌头，黄花乌头铁线莲属：威灵仙，棉团铁线莲 黄连属：黄连 白头翁属：白头翁 升麻属：升麻 8.芍药科（Paeoniaceae） 芍药属：芍药，川赤芍，草芍药，牡丹 9.小檗科（Berberidaceae） 小檗属：豪猪刺，黄芦木 淫羊藿属：三枝九叶草，淫羊藿，阔叶十大功劳 鬼臼属：六角莲 南天竹属：南天竹 10.木兰科（Magnoliaceae） 木兰属：厚朴，凹叶厚朴，玉兰 五味子属：五味子 南五味子属：南五味子 11.樟科（Lauraceae） 樟属：肉桂樟， 山胡椒属：乌药 木姜子属：山鸡椒 12.罂粟科（Papaveraceae） 罂粟属：罂粟 紫堇属：延胡索 白屈菜属：白屈菜 13.十字花科（Cruciferae） 菘蓝属：菘蓝 白芥属：白芥 芸苔属：芥菜
红景天的临床应用研究进展_陈志强
的特异性决定，特殊体质均有其独特的基因表达谱〔7〕。从基因水平结合中医体质学探讨冠心病的发病机理，而通过基因多态--体质--疾病--证候这一思路走中西医结合的道路揭示冠心病的病因病机，将具有更加深刻的意义，具有某种疾病易感基因型的个体，必然具有特定体质类型的倾向，在外界环境因素和不良生活方式的影响下，携带有此种易感基因的特殊体质个体，必将更易于导致疾病的发生，体质的分子遗传学研究结果将为将来的疾病预防和治疗产生积极的意义，携带某种疾病易感基因的个体，可以在体质调养方面多加注意，从而达到防病和治病的目的。目前从基因角度研究人体体质的特征还刚刚起步，本研究在对冠心病患者进行中医体质分型与ApoE基因相关性分析时，发现痰湿质、瘀血质与E3/E4呈正相关性，而E3/E3基因则呈负相关，均具有统计学意义，提示具有ApoE基因E3/E4型的人群中医辨体属于痰湿质或瘀血质的患者应尽早进行调体以预防冠心病的发生。当然这只是从冠心病一个基因（ApoE基因）的多态性分析与的体质类型作相关分析，体质与冠心病遗传学的研究，还有待于深入的研究。现代研究显示从基因表达差异角度来深入研究体质病理学和治疗学是合适的，也是可行的。这种利用基因芯片技术，在运用中医传统理论和现代分析方法确立了中医体质分型标准，在找到不同的体质类型特异性基因或基因群的基础上，进一步以基因表达为指标，在中医药调整人体体质的过程中，进一步观察不同中医治疗方法或重要在调控、修饰疾病的相关（易感）基因表达及表达产物方面的作用。可以预想，这种中医体质治疗学与现代基因分子生物技术相结合的技术，也许会对中医体质治疗学产生深远的影响，甚至可能会对整个中医治疗学开创新的局面。把人类基因组学与基因芯片技术这种系统、全面、综合地应用于中医体质学的研究，必将使中医体质学的研究更进一个层次，对疾病的认识更加深入。 参考文献 〔1〕王琦.9种基本中医体质类型的分类及其诊断表述依据〔J〕.北京中医药大学学报，2005，28（1）：1-8. 〔2〕王琦.中医体质学〔M〕.北京：中国医药科技出版社，1995，6，11.〔3〕柳漩.《中医体质分类与判定》标准研究现状〔J〕.北京中医药大学·首届国际体质医学论坛--中华中医药学会第十次全国中医体质学术年会论文汇编：127-131. 〔4〕Van Bockxmeer PM，Mamotte CD.Apolioprotein epsllon4homazygosi-ty in young men with coronary heart disease〔J〕.lancet，1992，340：879-880. 〔5〕Nassar BA，Dunn J，Title LM，et al.Ｒelation of genetic polymophisms of apolipoprotein E.Angiotes apolipopretein B-100and glycoprotein I and early onset coronary artery heart disease〔J〕Clin Biochem.1999，32：275.2825. 〔6〕MahleyＲW.Apolipoprotein E：Cholestetal transport protein with ex-panding rode in cell biology〔J〕.Science，1998，240：622-630. 〔7〕王琦.中医体质学2008〔M〕.北京人民卫生出版社，2009，2. 红景天的临床应用研究进展 陈志强（福建医科大学附属龙岩市第一医院药剂科龙岩364000） 摘要：红景天是一种有“高原人参”之称的名贵中药材，具有较高的药用和保健价值。红景天具有多种药理作用，且活性强，药效显著，安全低毒，因而越来越受到人们的重视，值得临床深入研究和应用。 关键词：红景天;临床应用;综述文献 中图分类号：Ｒ282.71；Ｒ969.4文献标识码：B文章编号：1006-3765（2013）-10-0106-02 红景天（Ｒoseroot）是长于青藏高原的景天科多年生植物，主要成分包含红景天苷（Salidroside）、酪醇（P-Tyroso1）、红景天芬（Ｒosavin）、红景天任（Ｒosarin）、红景天素（Ｒosin）、多糖、人体必需的l8种氨基酸、微量元素及丰富的维生素A、维生素D、维生素E等。研究表明其具有抗缺氧，抗辐射，抗肿瘤，抗疲劳，抗氧化衰老，免疫调节，清除自由基，增强记忆，改善睡眠，调节血糖，保护肾功能等多种药理作用。该药的临床应用十分广泛，本文就红景天的临床应用研究进展作一概述。1心血管保护作用 1.1改善冠脉血流，保护缺血的心肌实验研究发现红景天能够抑制机体的氧化应激反应，改善心脏的血流动力学，对缺血的心肌有一定保护作用。王加林〔1〕等研究报道冠心病心绞痛患者在常规治疗的基础上加用大株红景天注射液后，心绞痛症状和心电图缺血改变得到明显改善，血液流变学的各项也指标显著下降，且未见明显不良反应。余德文〔2〕等通过研究发现不稳定型心绞痛患者在常规治疗的基础上加用大株红景天注射液后，心绞痛、心功能及心电图明显改善。王彦斌〔3〕等的研究显示冠心病患者在常规治疗的基础上加用大株红景天注射液，用药15d后，患者的血脂、血液流变学指标改善情况明显优于常规治疗组。甘玉君〔4〕通过临床观察也发现大株红景天注射液在改善心绞痛症状、心电图缺血和血流变方面均有明显效果。提示该药能有效地降低全血黏度，减少纤维蛋白原，抑制血栓形成，改善心肌缺血，同时可改善冠状动脉血流，改善缺血区的供血，从而缓解心绞痛和改善心电图缺血样改变。因此，大株红景天注射液是一种有效的治疗冠心病的中药制剂，且安全性高。 · 601 · 海峡药学2013年第25卷第10期
扬州市植物组织培养实验室建设指导方案
扬州市植物组织培养实验室建设指导方案 （试行） 一、建设目的 植物组织培养是20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。在快速繁育、种苗脱毒、远缘杂交、突变育种、基因工程和生物制品等方面都得到了应用。植物组织培养技术涉及到多项高中生命科学课程中的基础知识，例如：细胞全能性原理、细胞增殖、细胞分化、植物激素及生命的基本元素和物质等。在生物选修一《生物技术》教材中，组织培养已经作为一个专题实验，成为高中升学考试的一个考点。组织培养作为一项生物技术，它对学生的动手能力和科学素养都提出新的要求，使学生能够在知识层面、能力层面和情感层面上达到了全面的拓展。 二、建设要求 组织培养实验室面积一般为96-120平方米，学生实验依据无菌间超净工作台的多少分组进行，原则上6~8人一组。 组织培养实验基于对无菌条件的严格要求，由准备室、缓冲间、无菌室、培养室和炼苗室四部分组成。 1、准备室 功能：进行一切与实验有关的准备工作。完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。 设备：准备室应具备实验边台、药品柜、水池、仪器、药品、天平、纯水机（制作组织培养基用水）、酸度计、烘干箱、高压灭菌锅、超声波清洗器及常用的培养基配制用玻璃仪器等。 2、缓冲间 功能：是进入无菌室前的一个缓冲场地，减少人体从外界带入的尘埃等污染物。 要求：缓冲间需5～8平方米，保持清洁无菌。缓冲间需安装紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。 3、无菌间 功能：也叫接种室，主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序，是植物离体培养研究或生产中最关键的一步。
组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 一、实验目的 1．掌握无菌操作的植物组织培养方法； 2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、 叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通 过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理 解。 二、实验原理（一）植物组织培养 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下， 能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分 化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称 为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统 以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。（二）植物细胞的全能性 植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一 定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。（三）组织的分化与器官建 成 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具 有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组 织而直接诱导出芽、根。 （四）培养基的组成 培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成 功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维 生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。 三、实验器材 高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻 璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。 四、实验材料 豌豆种子 五、实验药品 药品、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、 84消毒液、蔗糖、琼脂 等。 六、实验步骤 （一）培养基母液的配制 表1.ms培养基个成分的含量（单位：mg/l） 表2.ms培养基所需母液以及扩大倍数 名称大量元素微量元素 ca盐 mg盐 fe盐有机肌醇激素 扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100 定容体积(ml) 500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升数/l 20 20 20 20 20 10 10 5 （注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积） 表3.配制母液所需的药品及称取量
大花红景天的功效及食用方法
大花红景天的功效及食用方法 西藏大花景天是红景天属中的一个种，主要生长于西藏高原海拔4500米以上的高寒，缺氧，强日照，无污染地带，天然纯净，质地优良，具有很高的营养价值，大花红景天被称为红景天中的极品，大红花景天中红景天甙、酪醇、酮等成分是其他品种红景天的5-10倍。青藏特有名贵药材，被誉为“雪域人参”，“植物黄金”的美称。 红景天的应用历史悠久，两千多年前，青藏高原的人就以它入药，以强身健体，抵抗不良环境的影响。民间常用来煎水或泡酒，以消除劳累或抵抗山区寒冷。同时还防病健体和滋补益寿，因其扶正固体、补气养血、滋阴益肺的神奇功效，历代藏医将其视为“吉祥三宝”。 相传清朝康熙年间，我国西部边陲地区少数分裂分子举兵叛乱，康熙大帝御驾亲征。岂料将士西出阳关，少人便出现了心慌气短、恶心呕吐、茶饭不思等现象，战斗力也因此大大减弱。康熙正一筹莫展时，恰好当地藏胞献来红景天药酒，士兵及时服用后，高原反应竟神奇般地消失了。于是士气大振，一鼓作气把叛乱分子打得溃不成军。康熙大喜过望，将红景天称为“仙赐草”并把它钦定为御用贡品。驻藏部队以大花红景天为抗高原反应的主要食疗食品。 红景天入药最早是作为藏药而被《四部医典》、《月王药珍》等藏医药著作而收载的。大约在上世纪的六七十年代传入内地，而引起中医药工作者的重视，经过专家们多年的反复调查、考证，直到1996
年成书的《中华本草》才正式收载红景天，并确认景天科红景天属的库页红景天、圣地红景天、唐古特红景天为其用药正品。大花红景天是2010年版《中国药典》一部收载的红景天药材唯一的一个种。 大花红景天的食用方法： 第一种方法:就是大花红景天泡水喝。 直接买取原材料磨成粉末状的{这个可以买个研磨机器，高原大花红景天原材料一次性8克左右就行了}，把磨好的红景天粉末放到杯子里面然后注入沸水180毫升，在把盖子盖好等待15分钟后，打开盖子然后在加入10克的蜜蜂就可以吃了。每天早晚一次，对于年轻的白领来说是很不错的，可以抗辐射、抗疲劳。 第二种方法：大花红景天熬粥 高原大花红景天原物5克左右，粳米50克，材料全部准备好后。先把红景天煎水去渣，然后加上米煮粥{粥成加适量的白糖调味}。这个比较适合的是老年人，有空余的时间去弄，而且可以长期的服用，养生保健。 第三种办法：大花红景天泡沸水 以高原大花红景天为引子。需要准备的材料如下：高原大花红景天13克左右、杞子10克、大枣2～3粒放入沸水中。每天1-2次，
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。 植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件
把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 学院：生命科学技术学院 班级：11生物技术(制品) 学号：2011192017 姓名：李鹏
植物组织培养实验报告 实验一植物组织培养母液的配制 一、实验目的 1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。 2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。 二、实验原理 培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。 无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。 有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。 常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。 培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。 植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。 三、实验材料、试剂、配方和仪器设备 1．试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 ,CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O,H 3 BO 3 ,KI,Na 2 MoO 4 ·2H 2 O CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸， 蒸馏水。 2.仪器设备 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。
大花红景天多糖特征性的结构表征_蒋开年
华西药学杂志 W C J ?P S 2009,24(2)ζ123～125 I R 、1 HNMR 和13 CNMR,中国科学院昆明植物研究所分 析测试中心测定F AB -M S 。 参考文献: [1] 中国科学院植物志编辑委员会.中国植物志[M ].第58卷 (2).北京:科学出版社,1982.33-34. [2] 黄梁绮龄,苏美玲.香港地区红树植物资源研究I :四种常见 红树植物抑制植物病源真菌效能的评价[J ].天然产物研究与开发,1994,6(1):5-9. [3] 何立文,孟正术.空心笕的化学成分研究[J ].中国药科大学 学报,1995,25(6):263-267. [4] 王钢力,侯钦云,张继,等.春根藤化学成分的研究[J ].中国 中药杂志,2002,27(2):125-127. [5] 杨培明,罗思齐,李惠庭.金腰箭化学成分的研究[J ].中国医 药工业杂志,1994,25(6):252-255. [6] 舒任庚,刘玉凤.青钱柳植物中三萜成分的研究[J ].中药材, 2005,28(7):558-559. [7] 张道敬,张思,吴军,等.桐花树五环三萜化学成分的研究(英 文)[J ].天然产物研究与开发,2005,17(3):306-308. [8] 盛习锋,罗琼.湖丹皮化学成分研究[J ].湖南师范大学学报 (医学版),2006,3(3):39-40. [9] 左国营,张志军.藏药黑蕊耳草的化学成分[J ].云南植物研 究,2005,27(6):691-694. [10] 何丽一.平面色谱方法及应用[M ].第二版.北京:化学工业 出版社,2005.210-211. [11] 刘桂艳,郑健,余振喜,等.五叶木通藤茎甾体和三萜成分研 究[J ].中药材,2005,28(12):1060-1062. [12] 张前军,杨小生,朱海燕,等.假木豆脂溶性成分研究[J ].贵 州大学学报(自然科学版),2006,23(8):270-271. [13] 魏友霞,王军宪.二色补血草地下部分化学成分研究[J ].中 药材,2006,29(11):1182-1184. 收稿日期:2008-07 基金项目:西南民族大学青年重点资助项目(05NQZ004);留学回国人员科研启动基金(2004527) 作者简介:蒋开年(1984-),男,瑶族,正攻读天然药物化学专业的硕士学位。Email:jiangkainian@yahoo https://www.360docs.net/doc/3018152698.html, 3通讯作者(Corres pondent author ),Email:yongp inghan@mail .china .com 大花红景天多糖特征性的结构表征 蒋开年,崔志斌,宋学伟,朱 刚,韩泳平 3 (西南民族大学少数民族药物研究所,四川成都610041) 摘要:目的 初步表征分析大花红景天多糖的结构。方法 采用乙醇分级沉淀和葡萄糖凝胶柱层析法分离纯化,得大花红景天多糖的主要成分(RCPS )。GC 法进行一级结构分析的基础上,采用I R 、UV 、C D 、SE M 等手段对多糖的光谱学特性、不对称性以及形貌特征进行综合考察,同时还采用热分析仪分析热特性,结果与结论 RCPS 是一酸性杂多糖,相对重均分子量为 217876×104 ,由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和半乳糖醛酸组成,其摩尔比为1ζ2.96ζ0121ζ0.26ζ0108ζ0.58ζ0.15。RCPS 在溶液中可能以无规则的方式存在,其粒度大约1～2μm,同时晶体间有非常微小的空隙。加热过 程中,多糖出现了3次明显的质量损失。关键词:大花红景天多糖;光谱;形貌;热分析中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2009)02-0123-03 Spectrum,m orpholog i ca l and therma l character isti cs of R hod io la crenu la ta polys acchar i des J I A NG Kai -nian,CU I Zhi -bin,S ONG Xue -wei,ZHU Gang,HAN Yong -p ing 3 (Southw est U niversity For N ationnalitles,Chengdu,S ichuan,610041P .R.China ) Abstract:O BJECT I VE To study the constituents of Rhodiola crenulata polysaccharides (RCPS ).M ETHOD S RCPS,a main con 2stituent of RCP,was obtained by fracti onal p reci p itati on with alcohol and Sephadex G -100colu mn chr omat ography .GC,I R,UV,C D and SE M were app lied t o investigate the s pectru m,mor phol ogical and ther mal characteristics of RCPS in Rhodiola crenulata polysaccha 2rides .RESU L TS and CO NCL US I O N It was found that RCPS was a acid heter opolysaccharide using methods of UV,I R,GC .The results showed that the average molecular weight of RCPS was 27876,and it was composed of Rha,A ra,Xyl,M an,Glu,galand,galactur onic acid with a molar rati o of 1ζ2.96ζ0.21ζ0.26ζ0.08ζ0.58ζ0.15.The results als o showed that RCPS,m ight be etisted in an irregular and the particle size was about 1-2m icr ometer,while there was m inute void bet w een crystals .Ther mal analysis of RCPS indicated that 3mass l osses appeared during the heating p r ocess . Key words:R hodiola crenulata Polysaccharides;Spectru m;Mor phol ogy;Ther mal analysis CLC nu m ber:R284 D ocu m en t code :A Arti cle I D :1006-0103(2009)02-0123-03
红景天苷的提取及含量测定方法概述_王海凤
红景天苷的提取及含量测定方法概述* 王海凤 （天津市宝坻区药品检验所，天津301800） 摘要本文综述国内外有关红景天苷的提取及含量测定方法，其中提取方法包括：大孔吸附树脂法、超声波法、超临界CO2萃取法、微波辅助提取法、酶解法、醇提取法、高压提取法等；含量测定方法包括重氮化比色法、紫外分光光度法、薄层扫描法、荧光光谱法、高效液相色谱法。 关键词红景天苷，提取，含量测定 中图分类号：Ｒ931．5文献标识码：A文章编号：1006-5687（2014）05-0061-03 红景天苷（salidroside）为红景天的主要有效成分。临床研究结果表明，其具有抗缺氧、抗疲劳、抗微波辐射、抗寒冷、抗衰老、抗病毒、抗肿瘤、抗炎、兴奋中枢神经和调节内分泌等药理作用，在军事、航天、运动及保健医学上具有重要应用价值，极具开发前景。通常以其含量的高低作为红景天质量优劣的判断标准。本文综述了国内外有关红景天苷的提取及含量测定方法。1提取方法 1.1大孔吸附树脂法王莹等［1］采用AB－8大孔吸附树脂法对高山红景天提取物进行分离，再用HPLC 法对其进行含量测定。结果认为AB－8型大孔吸附树脂吸附红景天苷的最佳吸附条件为：5mg高山红景天提取物须1g干树脂用量，样品液浓度10mg/ml。解吸速率控制在1．5倍柱体h为最佳，此时既能达到满意效果，又能提高实验速度。 1.2超声波法近年来发展起来的超声波提取技术，因其具有强烈振动和空化效应，可加速有效成分的溶出、缩短提取时间、提高产物得率，具有操作简单、无污染等优点［2］。为探寻红景天苷超声提取的最佳工艺条件，董彦莉［3］通过单因素和正交试验对溶剂浓度、超声提取时间、料液比温度等进行研究，确定红景天苷超声提取的最佳工艺条件为：以60%乙醇水溶液为溶剂、料液比为1?20、提取温度40?、提取时间75min。影响红景天苷收率大小的因素为：提取温度＞料液比＞提取时间＞乙醇浓度，温度对红景天苷收率影响最大。程子毓等［4］首次采用恒温超声的方式，对青海产狭叶和大花红景天进行提取，此方法重现性良好。1.3超临界CO 2 萃取法超临界萃取法，具有成本低、提取率高、溶剂用量少、时间短、无毒副作用等优点，是今后中草药有效成分提取的发展方向之一［5］。王化田等［6］研究表明，将超临界CO2萃取法和乙醇常温浸提法有效地结合，即先把红景天原料用超临界CO 2 萃取其中的苷元酪，然后再用乙醇常温浸提法提取其中的红景天苷，这样既保证了两物质的较高得率，又易于实现两物质的有效分离，推进了红景天有效成分提取的产业化进程。 1.4微波辅助提取法微波处理就是利用微波的能量破坏目的物的细胞壁，使需要的物质渗出胞外，以利于有效成分的提取［7］。微波辅助提取技术在处理目的物作为中药天然活性成分提取的辅助方法已显示出极大的优势。黄韬睿等［8］通过实验研究表明，微波辅助法提取红景天有效成分的最佳条件为药材粒度为过40目筛，用药材量20倍的水浸泡30min后用中低火微波处理40s，然后在70?下提取10min，提取2次，该条件下红景天苷提取量达到4．43mg/g。与常规水煮法比较，用微波法提取红景天有效成分提取时间短，提取率高。 1.5酶解法 1．5．1纤维素酶酶解法纤维素酶是近年广泛应用于食品行业和饲料行业的一种酶类，能够分解β－1，4－糖苷键，对植物细胞有破壁作用，有利于植物细胞内有效成分的析出与释放。为了探寻红景天苷纤维素酶解法提取的最佳工艺条件，董彦莉等［9］对红景天进行了提取研究，确定其最佳工艺条件。结果表明，纤维素酶酶解法的最佳提取条件是以pH5．4的醋酸钠/醋酸缓冲液为溶剂，纤维素酶添加比例2%，提取温度50?，提取时间110min。 1．5．2微生物酶的方法高雪华等［10］采用黑曲霉发酵的方法获得了酪醇合成酶和红景天苷合成酶的粗提物，确定了两种微生物酶的初步性质，使得红景天的有效含量在较短周期分别得到了提高，为提高红景天苷和酪醇含量在酶学研究方向提供了新的途径和理论 16 天津药学Tianjin Pharmacy2014年第26卷第5期*收稿日期：2014-02-24
复方红景天口服液提高运动能力及消除疲劳的实验研究_汪家春
收稿日期:2000-03-05 复方红景天口服液提高运动能力 及消除疲劳的实验研究 汪家春 潘明达 戴寿荣 王兰金 曾宪英 朱 伟 张 慧 (海军医学研究所六室,200433,上海;第一作者32岁,男,助理研究员) 摘 要 采用实验对比的方法,探讨复方红景天口服液对提高运动能力及消除疲劳的影响。结果表明,该口 服液能明显提高实验对象大运动量训练期间及不同负荷量时的Hb,对运动期间的BU N 有显著的降低作用; 能提高实验对象的抗缺氧能力及力竭游泳时间;降低定量负荷时的BLA 。提示,复方红景天口服液具有一定 的提高运动能力及消除疲劳之功效。 关键词 复方红景天;运动能力;疲劳;血红蛋白;血尿素氮;血乳酸 红景天(Rhodial Sachalinensis)是生长于海拔2500m 以上高山地区的中草药,是继人参、刺五加之后发现的新一代适应源类药物。已有研究表明,红景天具有抗缺氧、抗疲劳、抗微波辐射等功能。军事医学科学院有关科研人员,将红景天与党参、刺五加复方,应用于高原医学,以提高进藏战士抗缺氧能力,取得了一定的效果。本研究从抗运动性疲劳、提高运动能力的角度,根据益气补肾健脾的组方原则,采用藏源红景天、肉苁蓉、仙茅、黄芪、首乌等中草药,研制复方红景天口服液,探讨其对提高运动能力及消除疲劳的影响。 1 研究对象与方法 1 1 实验药物 复方红景天口服液(主要成分为红景天、肉苁蓉、仙茅、黄芪、首乌等),海军医学研究所研制,第二军医大学附属长征医院制剂室加工。 1 2 实验对象 实验动物:纯种ICR 系雄性小鼠(体重20 2g)120只,购自中英合资上海西普尔必凯实验动物有限公司。运动员:八一划船队20人(男14,女6),年龄21 1 2岁,健将级运动员13人,一级运动员7人;随机分为实验组和对照组,每组各10人。期间,实验组1人因国家队集训而停止试验。 1 3 动物实验方法 分组:120只小鼠随机分为安静组、小负荷组、大负荷组、定量负荷组、缺氧组,上述5组又各分成对照组、药物组(每组12只)。 灌喂:各组小鼠自由饮食(水和饲料均相同)。每日运动后,药物组按5g /kg 体重灌喂0 2ml 红景天复方制剂(0 5g 生药量/ml),对照组以0 2ml 生理盐水(5%)灌喂。 训练:安静组不进行游泳训练;小负荷组每天进行45min 游泳训练,每周休息1天,共2周;大负荷组第1天进行45min 游泳训练,此后每天游泳时间递增15min 直至150m in,每周休息1天,共2周;定量负荷组在喂养1周后负重6%体重游泳20m in;缺氧组不进行游泳训练。游泳训练均在动物游泳水池进行,水温为31 ~33 ,水深40cm 。 取样:安静组、小负荷组、大负荷组于末次游泳后,眼眶取血,离心管室温放置以形成血凝块,4 保存,使血凝块收缩,2700rpm 离心10min,取血清(-20 保存)。定量负荷组于灌喂第7天,尾部负重6%体重游泳20min,取尾静脉血,测取血乳酸(BLA)值,后继续游泳至力竭,测试力竭游泳时间。缺氧组于灌喂第7天,测取常压 第24卷 第3期 2000年8月上海体育学院学报Journal of Shang hai Physical Education I nstitute Vol.24No.3Aug.2000
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 摘要：以大豆子叶为外植体，在MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。实验结果显示第2组即MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。 关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织 1.材料与方法 1.1实验材料：大豆子叶 1.2实验试剂与仪器 （1）试剂：75%酒精、MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂（NAA、2，4-D、KT、6-BA）、无菌水、升汞、NaOH溶液 （2）仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。 1.3实验方法 1.3.1培养基的配制与灭菌 1.3.1.1 配制培养基的准备阶段 （1）准备80个培养试管及封口膜，2个小培养皿、1个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每个培养试管、润洗一下。带晾干后将试管编号1-80；（2）在称量纸上用百分之一天平分别称取1.5g 琼脂4份，7.5g 蔗糖4份，在烧杯里用千分之一天平上称取1.185g MS干粉4份（烧杯不要清洗）；
（3）剪小圆纸片40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10，均分在两个大培养皿中。然后分别用报纸包好。 （4）把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。 1.3.1.2 配制培养基 （1）在装有MS干粉的烧杯中按下表加入植物生长调节剂 实验所用的所有激素浓度均为0.5mg/mL 激素的加样量(ml) 编号培养基配置 6-BA NAA KT 2,4-D 1 MS+6-BA（1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L) 0.5 0.25 2 MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L) 1.0 0.5 3 MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 0.25 0.5 4 MS+KT（1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L) 0. 5 1.0 （2）用量筒量取250ml（稍多）蒸馏水，取一个不锈钢杯子加入150ml蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾2min，再加入混合好的MS培养基1号和蔗糖，混合沸腾2min，用剩余的蒸馏水定容至250ml； （3）当温度降到60℃左右时，将溶液pH 调至5.8，一般加4滴NaOH溶液即可；（4）取编号1-20的培养试管，用大量注射器以每瓶12.5ml 左右培养基分装在培养试管中，用封口膜封口，4支一捆捆扎好。 （5）用相同的方法配置2-4号培养基，并分装、捆扎。 1.3.1.3高压湿热灭菌 （1）将包好的接种工具，包好的培养皿，以及分装好的试管一起放到高温灭菌