玉米胚性愈伤组织的诱导及其植株再生的研究
粉蕉愈伤组织的诱导
粉蕉愈伤组织的诱导1 朱军，黄惠琴，方哲，鲍时翔 中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海南海口 (571101) E-mail：bsxhhq@https://www.360docs.net/doc/3514501174.html, 摘要：香蕉是一种重要的热带水果。本文就影响粉蕉愈伤组织诱导的因素（外植体来源、生长调节剂种类、浓度等）进行了研究。其诱导的最佳条件是：以未成熟雄花花序或球茎为外植体，MS＋2,4-D 4 mg/L＋IAA 1 mg/L＋NAA 1 mg/L，28℃下暗培养。以球茎所诱导的愈伤组织诱导率可达89.1%。 关键词：香蕉，愈伤组织，诱导 中图分类号：S668 1. 引言 近年来，利用植物生产人类疫苗和其他药用蛋白越来越受到人们的重视。作为世界上重要的热带水果和粮食作物的香蕉（Musa spp.），因其果实营养丰富、生产周期短、可鲜食等特点而成为理想的植物生物反应器，因此香蕉转基因技术研究尤其显得重要。由于利用愈伤组织作为转化受体并诱导胚状体而再生的转基因香蕉可降低嵌合体发生[1]，且胚性愈伤组织可大量增殖、保存时间长，因此愈伤组织作为香蕉转基因受体受到越来越多研究者的重视。但香蕉是一种愈伤诱导率极低的作物，且品种间差异极大[1～5]。这极大的限制了香蕉转基因技术的研究。本文就粉蕉愈伤组织诱导进行了探讨，希望为我国香蕉转基因技术的研究提供参考。 2. 材料与方法 2.1 材料 选取香蕉品种粉蕉(Musa spp., ABB)为试验材料。 2.2 方法 2.2.1 外植体表面消毒 剥去未成熟雄花花序的苞叶，直至4 cm左右；在70%(体积分数)的酒精中浸泡1 min；再用1 g/L升汞(HgCl)浸泡10 min；取出，用无菌水彻底冲洗汞。假茎、球茎、幼叶取自试管苗，故无须消毒。 2.2.2 不同外植体的处理 选取粉蕉未成熟雄花花序、假茎、球茎、幼叶为外植体。分别将香蕉未成熟雄花花序剥去苞叶直至1.5 cm左右，沿轴线纵切成4块，再横切成厚约1 mm的薄片；假茎切成厚约1 mm左右的薄片；球茎切成小块；幼叶切成10 mm×10 mm方块接入愈伤组织诱导培养基中培养。 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金资助课题(No.20050565004) 的资助。
愈伤组织诱导及观察
实验二愈伤组织诱导及观察 一.实验目的 通过愈伤组织诱导的操作，使同学们了解进行植物组织培养时的一些关键操作技术和方法，如外植体的选择、培养基母液配制、使用液配制、分装灭菌、外植体表面消毒、接种、培养、愈伤组织诱导原理和方法以及接种后污染率，愈伤组织诱导率的统计与观察。使同学们能够亲身体会、了解激素对外植体的作用，还使同学们了解无菌培养的无菌操作，清楚植物体的带菌部位等。 二.实验内容 （一）、实验原理 植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技术。组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。愈伤组织就是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。 愈伤组织的形成 从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。 起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照
再生性牙周手术
再生性牙周手术 发表时间：2012-08-10T11:01:31.903Z 来源：《中外健康文摘》2012年第19期供稿作者：冯军[导读] 自体骨：可取自口腔内的拔牙创、上颌结节、磨牙后区及颏部等处的骨质，也可取自口腔外的髂骨。 冯军（大兴安岭加格达奇地区第二人民医院 165000）【中图分类号】R782.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）19-0192-02 【关键词】再生性牙周手术 牙周组织再生(regeneration)指的是因牙周疾病而破坏了的牙周组织附着装置重新形成，即在原牙周袋内的根面上有新的牙骨质形成，并且有新的牙周膜纤维埋入其中，也就是形成了新附着。这与再附着的概念不同，再附着是指在因手术或机械作用将牙周膜分离的根面上牙周膜纤维重新附着，实际在此时的牙根面上仍有牙周膜纤维残存。再生性牙周手术是通过特殊设计的方法，在原已丧失支持组织的根面上重新形成新的牙骨质、牙周膜和牙槽骨，包括它们彼此间正常附着关系的形成。 1 植骨术 牙周植骨术是一种重建性牙周手术，是采用翻瓣术与骨移植或骨代用品植入相结合，达到刺激牙周组织再生，促使骨病变处新骨的形成，修复骨缺损，以达到理想的愈合。 1.材料 (1)自体骨：可取自口腔内的拔牙创、上颌结节、磨牙后区及颏部等处的骨质，也可取自口腔外的髂骨。但因从髂骨取骨痛苦较大，现已较少采用。 (2)异体骨或异种骨：有健康捐献者的新鲜冷冻骨、冻干骨、脱钙冻干骨、经特殊处理后只留下骨的框架结构的异种骨Bioss等。 (3)骨代用品：β磷酸三钙、羟基磷灰石、多孔羟基磷灰石、生物玻璃等。 2.适应证 二壁及三壁骨袋、Ⅱ度根分叉病变。 3.手术方法 (1)常规消毒，麻醉。 (2)受骨区的切口设计要保证黏骨膜瓣对受骨区的良好覆盖。 (3)翻瓣暴露骨袋，刮净骨袋内的病理性组织及结合上皮。除净龈下牙石，平整根面，明确袋的形态及骨壁数目。可行根面处理，然后将手术野冲洗干净。 (4)将准备好的植入材料送入骨袋内，使植入物与骨下袋口平齐。 (5)将瓣复位缝合，一定要使龈瓣将植入材料严密覆盖。 4.术后护理 术后护理极为重要，基本与翻瓣术相同，只是术后伤口的稳定性更为重要，可根据具体情况适当延长拆线时间，如术后10天拆线。 二引导性组织再生术 引导性组织再生术(guided tissue regeneration，GTR)的目的，是使由于牙周炎造成的已丧失的牙周支持组织再生，形成新附着性愈合。在牙周手术中利用膜性材料作为屏障，阻挡牙龈上皮在愈合过程中沿根面生长，阻挡牙龈结缔组织与根面的接触，引导具有形成新附着能力的牙周膜细胞优先占领根面，从而在原已暴露于牙周袋内的根面上形成新的牙骨质，并有牙周膜纤维埋入，形成再生组织的新附着。 1.适应证 (1)骨袋：窄而深的骨袋为GTR的适应证，骨袋过宽则效果差。有研究报道3壁、2壁骨袋疗效好，但近来也有研究显示骨壁的数目与疗效不相关，窄而深的1壁骨袋也能获得良好疗效。 (2)根分叉病变：下颌牙的Ⅱ度根分叉病变为适应证，但需有足够的牙龈高度。对于这类病变，GTR的疗效优于常规翻瓣术。上颌磨牙的Ⅱ度根分叉病变用GTR治疗，病变可有改善，但疗效结果不能肯定。对于Ⅲ度根分叉病变，有学者报告，用GTR治疗下颌磨牙Ⅲ度根分又病变，33％达到了完全闭合，33％达到部分关闭，另33％无改善。可见用GTR治疗此类病变可获得一定疗效，但结果不确定。 (3)龈退缩致根面暴露：Miller于1985年将牙龈退缩牙根暴露病变进行了分类： I类：龈缘退缩末达到膜龈联合处，邻面无牙槽骨或软组织的丧失。 Ⅱ类：龈缘退缩达到或超过膜龈联合，但邻面无牙槽骨或软组织的丧失。 Ⅲ类：龈缘退缩达到或超过膜龈联合，邻面牙槽骨或软组织有丧失，位于釉牙骨质界的根方，但仍位于唇侧退缩龈缘的冠方。 Ⅳ类：龈缘退缩超过膜龈联合，邻面骨丧失已达到唇侧龈退缩的水平。 对I类和Ⅱ类龈退缩，GTR治疗可获得根面的完全覆盖；对Ⅲ类龈退缩，根面可获得部分覆盖；Ⅳ类龈退缩则不是适应证。 2.膜性材料 用于GTR的膜性材料应具有下列特征：①生物相容性；②阻止上皮细胞移动生长；③在根面与膜之间能保存一定的间隙；④能与组织结合保证愈合过程中在组织中位置的稳定；⑤具有临床可操作性。 膜性材料分为两类：不可吸收性膜和可吸收性膜。不可吸收性膜：手术后愈合过程中，放置的膜不能降解吸收，需要第二次手术将膜取出。这类膜有乙酸纤维素滤膜、膨胀聚四氟乙烯膜等。乙酸纤维素膜是最早在GTR中使用的膜，因其具有一定的细胞毒性，所以在临床应用不理想。膨胀聚四氟乙烯的分子结构稳定，不引起任何组织反应，e—PTFE已成功地用于临床研究。是目前临床应用最多的膜材料。 可吸收性膜：在手术愈合中可降解吸收，不需要第二次手术取出。这类膜有胶原膜、聚乳酸膜、聚乳酸与聚乙交脂聚合物膜等。胶原膜已成功用于临床治疗，但有些胶原膜过早降解，有些在愈合时上皮会沿膜材料向根方生长，并可能具有引起机体免疫反应的危险等，这些是胶原膜目前存在的缺陷。聚乳酸材料具有良好的生物相容性，通过水解而降解，但在降解过程中可能有些组织反应。这种材料的降解期较长，可达到与不可吸收性膜相同的满意度。
第三节组织修复
第三节组织修复 损伤造成机体部分组织、细胞丧失后，机体对形成缺损进行修补恢复的过程，称为修复。修复过程可概括为两种形式，再生和纤维性修复。再生是由损伤周围同种细胞修复，如果完全恢复组织的结构和功能，则称为完全再生；纤维性修复由纤维结缔组织修复，以后形成瘢痕。 （一）再生 再生可分为生理性再生和病理性再生。 1.细胞周期和不同类型细胞的再生潜能 细胞增殖周期由G1期(DNA合成前期)、S期(DNA合成期)、G2期(分裂前期)、M期(分裂期)构成。生理状态下，大多数细胞处于G0期（静止期）。按再生能力的强弱可将人体细胞分为三类： 1）不稳定细胞 2）稳定细胞 3）永久性细胞 2.各种组织的再生过程 (1)上皮组织的再生： 1）被覆上皮再生：鳞状上皮缺损时，由创缘与底部的基底层细胞分裂增生，向缺损中心迁移，先形成单层上皮，以后增生分化为鳞状上皮。粘膜如胃肠粘膜缺损后由邻近的基底部细胞分裂增生加以修补。 2）腺上皮再生：如果仅有腺上皮的缺损而腺体的基底膜未被破坏，则由残存细胞分裂再生，可完全恢复原来腺体结构。如果基底膜破坏，则难以再生。 3）肝细胞分裂增生活跃，肝再生有3种情况。 (2)纤维组织的再生：损伤刺激下，受损处的成纤维细胞进行分裂、增生。成纤维细胞可由静止状态的纤维细胞转变而来，或由未分化的间叶细胞分化而来。成纤维细胞停止分裂后，开始合成分泌前胶原蛋白，在细胞周围形成胶原纤维，细胞逐渐成熟，变为长梭形，胞浆越来越少，核越来越深染，成为纤维细胞。 (3)软骨组织和骨组织的再生：软骨再生起源于软骨膜的增生，软骨再生力弱，软骨组织缺损较大时，纤维组织参与修补。骨组织再生能力强，骨折后可完全修复。 (4)血管的再生： 毛细血管的再生：毛细血管再生又称血管形成，是以出芽方式来完成的。 (5)肌组织的再生：肌组织的再生能力很弱。 横纹肌的再生和肌膜是否存在、肌纤维是否完全断裂而有很大关系。 平滑肌也有一定的再生能力，但是断开的肠管或是较大血管手术吻合处，断裂的平滑肌主要通过纤维瘢痕连接。 心肌的再生能力较弱，破坏后一般都是瘢痕修复。
愈伤组织的诱导和培养
班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：0901080223 愈伤组织的诱导和培养 一、实验目的及意义 植物愈伤组织的诱导和培养在植物科学的基础研究和应用研究中都有重要的意义。通过本次实验，可以初步掌握植物外植体材料消毒、接种的无菌操作技术，愈伤组织的诱导方法和愈伤组织继代培养的方法。 二、实验原理 植物组织与细胞培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官、组织或细胞的过程。如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择适当的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得植物组织培养，成功的基本前提和重要保证。由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团——愈伤组织（callus）。植物生长调节剂如2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）等是诱导外植体形成遇上组织的重要因素。 三、实验仪器与药品 超净工作台，酒精灯，镊子，剪刀，解剖刀，75%乙醇，酒精消毒棉 材料：烟草无菌苗，甘薯无菌苗 四、实验步骤 1.按下表分别配制培养基
将配置的四种培养基分别分装入20个培养瓶，高温灭菌后水平放置凝固 2.接种前，将实验所需器具放入超净工作台，打开紫外灯灭菌20~30min，关闭紫外灯，开启通风开关。洗手后用酒精喷洒消毒手、手臂、实验材料及培养基外部等进入超净工作台的部分。进入超净工作台，用酒精棉擦拭台面（手勿伸出工作台），台面完全风干后点燃酒精灯。 3.接种开始时，将镊子及手术刀在酒精中浸泡，并在酒精灯外焰上烧炽片刻，充分冷却。取幼嫩的烟草（甘薯）叶片，用手术刀切割成小片，再用镊子将其接种至相应的培养基上，每瓶接种3~5片，封口后取出超净工作台，标注姓名、日期、培养基和接种材料。 4.将上述培养材料常温暗培养，每隔7天观察一次，并记录培养情况 五、实验结果
引导组织再生膜的开发
各位老师、同学，下午好，，欢迎参加我的毕业答辩。 我的汇报分为以下5个方面，首先是研究背景和立题依据。 肿瘤、感染、外伤、手术等均可导致骨缺损。如果缺损小于临界骨缺损，则其可以自行愈合，而当缺损大于临界值，则需要一定的治疗手段辅助其愈合。自体骨移植是骨缺损修复的金标准，但是由于供骨量有限，且会对患者造成二次损伤，使其在应用中受到极大制约。随着骨组织工程的发展，骨组织工程支架和引导组织再生膜将逐渐取代传统的治疗方法。 GTR膜覆盖于缺损区域，主要是作为物理屏障阻止生长速度较快的纤维结缔组织长入，为骨组织的生长提供空间，从而使骨生成细胞从邻近的骨缺损边缘或骨髓组织迁移入缺损区域，在无干扰的情况下完成骨再生 以种植体周围骨量不足为例，如果牙槽脊萎缩等情况造成种植体周围骨量不足，直接缝合皮瓣，会造成纤维样修复，导致种植体松动从而失败。如果在缺损处覆盖GTR膜，则可以形成物理屏障，阻止软组织侵入，为骨组织生长提供空间，最终缺损形成新骨。GTR膜可以和骨组织工程支架一起使用，在阻止软组织长入的同时，防止骨粉的外溢。 鉴于GTR膜的使用目的，要求----良好地生物相容性, 合适的支撑强度, 在体内保持一定时间。目前，市场上的GTR膜分为可吸收和非可吸收，每种膜片都有其优缺点。 非可吸收膜以聚四氟乙烯膜为代表，其具有良好的稳定性和生物相容性，机械性能良好，能较好地维持空间形态，且可以根据需要调整其在体内的滞留时间。但是给其不能降解，所以需要二次手术取出。可吸收膜以盖氏公司的胶原膜为代表，其为双层不对称膜片，上层致密可阻止软组织的长入，下层疏松，可为骨组织的生长提供支架。可吸收膜往往降解过快，机械强度较差，易发生塌陷。 所以理想的GTR膜片应当具备良好地生物相容性、适当的降解速度、降解产物无毒性，可阻止上皮细胞的长入，具有一定的机械强度和良好地可操作性 壳聚糖及其衍生物因具有良好地生物相容性、抗菌、可降解等优点，所以广泛应用于医用生物材料领域。本研究欲筛选出一种壳聚糖衍生物，调控其降解速度，探究合适的方法来构建一种组织引导再生膜。 第一部分实验，进行了材料的筛选和膜片的制备 实验中选择了对骨修复有促进作用的四种材料----。首先提取了大鼠骨髓间充质干细胞，用MTT法检测了四种材料在不同浓度下对细胞增殖的影响。结果显示在糖的浓度为200μg/ml 时对细胞的影响最为明显。由图片可知，除了磺酸化壳聚糖对细胞的影响表现出先促进后抑制，其他三种糖均对细胞表现出不同程度的促进作用。所以，最后我们选择了促进作用最为明显的羧甲基壳聚糖和硫酸软骨素构建膜片。 但是以羧甲基壳聚糖和硫酸软骨素为原材料构建的膜片机械性能较差,且呈现弱酸性，这可能会导致膜片支撑强度不足，引起炎症反应，所以我们在膜片中添加一定的纳米羟基磷灰石。，羟基磷灰石是天然骨的主要的无机成分，具有极好的生物相容性和骨诱导能力，且呈弱碱性，可以提高膜片机械强度中和膜片中酸性物质。将含有不同比例纳米羟基磷灰石的膜片制出浸提液，通过细胞毒性实验来选择合适的比例。结果显示含有--- 综合膜片的细胞毒性和机械强度，最终选择添加10%纳米羟基磷灰石。 确定了原材料后，进行了膜片的制备工作，过程如下。先将羧甲基壳聚糖、硫酸软骨素、纳米羟基磷灰石、Nacl、DMSO配制成溶液，流延法铺膜，表面加入DMSO后放入-80度中冷冻，然后用CaCl2和1,4-丁二醇双缩水甘油醚进行交联，交联完成后清洗记得到我们需要的膜片。经测量，膜片的厚度为0.03mm，机械性能良好，左图为膜片的纵截面，上表面较为致密，下表面疏松多孔，下表面的横截面如右图所示，孔径约为50-200μm。 第一部分实验所得出结论如下， 羧甲基壳聚糖和硫酸软骨素可以促进BMSCs的增殖，以羧甲基壳聚糖、硫酸软骨素和纳米羟基磷灰石为原料，所构建的膜片为双面不对称膜片，膜片具有良好地机械性能 然后，在第二部分实验对膜片的生物安全性和降解性能进行了验证
小麦愈伤组织的诱导
小麦愈伤组织诱导与其再生培养体系的建立 前言：小麦属于禾本科植物，麦粒在植物学上称为颖果，在种子学上则称为种子，通常称为小麦。麦粒皮色有红白之分，红皮的叫红麦，白皮的叫白麦。由于品种和受环境影响不同，红皮小麦又有深红色和红褐色；白皮小麦又有白色、乳白色或黄白色之分。 一：目的及意义 我国小麦目前的状况有以下几点：1 我国是农业大国，小麦面积4亿亩、产量9000万吨左右，分别占世界总量的 12%和18%，均居世界第一位。2 我国春小麦主要分布在东北、西北及华北北部。据中国粮油信息中心的数据显示，预计中国 03/04市场年度（7月至次年6月）春小麦播种面积仅为190万公顷，较上年度减少5％，这是多年来中国春小麦种植面积首次低于200万公顷；预计03/04年度春小麦产量为580万吨，较02/03年度下降7.48%。我国的小麦种植面积不断的减小，总产量也在不断减少。由于我国目前存在的状况，农业大国，主产小麦，但小麦的产量的质量都不是很好，种植面积又在减少，本研究主要是提高小麦的产量和质量。 二：综述国内外对小麦的研究状况 2.1 小麦愈伤组织诱导及原生质体的分离与纯化张小红，闵东红，邵景侠（西北农林科技大学，陕西杨凌712100） 试验方法：以普通小麦的幼穗和幼胚为外植体进行了愈伤组织诱导，及由幼胚愈伤组织进行了原生质体分离和纯化试验，研究了幼穗和幼胚外植体及低温预处理等因素对愈伤组织诱导的影响，在原生质体分离中研究了酶浓度和配比、酶解时间及蔗糖浓度等因素对幼胚愈伤组织原生质体游离和纯化的影响。结果表明：小麦幼穗离体培养时，以1.0~1.5 cm长度的幼穗有利于愈伤组织的诱导；小麦幼穗和幼胚外植体采后低温储藏时不易超过3 天，时间太长会影响愈伤组织诱导；2.0%纤维素酶＋0.5%果胶酶+0.6 M甘露醇分离原生质体较好，最佳酶解时间为 4~6 h，原生质体产量和活力较高。 2.2 小麦愈伤组织诱导及其植株再生研究进展王廷璞，陈荃，崔爱明，刘瑞媛，马伟超 （天水师范学院生命科学与化学学院，甘肃天水741001） 试验方法：小麦组织培养体系的建立与完善是应用植物基因工程改良小麦品质的重要基础和保证，综述了近年来小麦愈伤组织诱导及植株再生的研究情况。研究资料表明：小麦组织培养中，不同来源和不同生理状态的小麦外植体（幼胚、幼穗、花药、成熟胚、叶、根等），在愈伤组织诱导和获得再生植株的能力方面均显示了优点和不足。不足之处是在生产过程中，不断受到生物、非生物等因素的胁迫，严重影响其产量及品质。 2.3小麦愈伤组织诱导及其再生能力影响因素的研究贾海燕, 王洪刚 ( 山东 农业大学农学院, 山东泰安 271018) 试验方法：以农艺性状较好的24 份小麦品种( 系) 为材料, 筛选出了愈伤组织诱导率高且植株再生能力强的基因型材料山农995604 和F281- 10, 在此基础上对影响愈伤组织的分化能力以及较长时间保持分化能力的因素进行了研究。结果表明, 在愈伤组织的继代过程中, 保持较高浓度的2, 4- D, 或对愈伤组织进行交替继代培养有利于较长时间保持其再生能力。最佳取材时间在开花后15d 左右,
再生与修复
当组织细胞出现损伤后造成的缺损，以实质细胞再生和（或）纤维结缔组织增生的方式加以修补恢复的过程，称为修复（repair）。 如果损伤的实质细胞有再生能力和适宜条件，则通过邻近存留的同种实质细胞再生进行修补恢复，因为此种修复可完全恢复原有细胞、组织的结构和功能，故称此为再生性修复或完全性修复；在病理状态下，如果实质细胞不能再生或仅有部分能再生，组织缺损则全部或部分由新生的富于小血管的纤维结缔组织（肉芽组织）来修补充填缺损，并形成瘢痕，因为它只能恢复组织的完整性，不能完全恢复原有的结构和功能，故称此为瘢痕性修复或不完全性修复。 再生（regeneration）是指为修复缺损而发生的同种细胞的增生。说明：①再生是一种细胞的增生；②这种增生本质上是为了修复缺损，而不是为了吸收坏死物质或消除致炎因子（如局部增生的巨噬细胞等）；③再生的细胞应是与缺损的实质细胞完全相同，再生分生理性再生和病理性再生。 一、再生的种类 （一）生理性再生 在生理情况下，有些细胞和组织不断老化、凋亡，由新生的同种细胞和组织不断补充，始终保持着原有的结构和功能，维持组织、器官的完整和稳定，称生理性再生。如表皮的复层扁平细胞不断地角化脱落，通过基底细胞不断增生、分化，予以补充；月经期子宫内膜脱落后，又有新生的内膜再生；消化道粘膜上皮细胞每1～2天再生更新一次等。 （二）病理性再生 在病理状态下，细胞和组织坏死或缺损后，如果损伤程度较轻，损伤的细胞又有较强的再生能力，则可由损伤周围的同种细胞增生、分化，完全恢复原有的结构与功能，称为病理性再生。如表皮的Ⅱ度烫伤常出现水泡，基底细胞以上各层细胞坏死，此时基底细胞增生、分化，完全恢复表皮的原有结构与功能。在病理情况下，不能进行再生修复的组织，可经肉芽组织、瘢痕进行修复。 按再生能力的强弱，可将人体细胞分为三类： 不稳定性细胞（labile cells）是指一大类再生能力很强的细胞。在生理情况下，这类细胞就像新陈代谢一样周期性更换。病理性损伤时，常常表现为再生性修复。属于此类细胞的有表皮细胞、呼吸道和消化道粘膜被覆细胞等。 稳定性细胞（stable cell）这类细胞有较强的潜在再生能力。在生理情况下是处在细胞周期的静止期（G0），不增殖。但是当受到损伤或刺激时，即进人合成前期（G1），开始分裂增生，参与再生修复。 属于此类细胞的有各种腺体及腺样器官的实质细胞，如消化道、泌尿道和生殖道等粘膜腺体，肝、胰、涎腺、内分泌腺、汗腺、皮脂腺实质细胞及肾小管上皮细胞等。
水稻愈伤组织的诱导实验报告
水稻愈伤组织的诱导实验 报告 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
水稻愈伤组织的诱导 一、实验目的 1、掌握外植体的消毒方法和接种技术； 2、了解愈伤组织诱导的过程。 二、实验原理 以植物器官、组织、细胞等作外植体进行离体培养时，在一定的诱导培养条件下都能诱导形成愈伤组织。愈伤再经分化培养，通过器官发生途径或体细胞胚胎发生途径可再生成植株。 外植体源自自然环境均为带菌状态，在接种前都必须进行消毒。对于难消毒的材料，有时要几种消毒剂配合使用；对于多茸毛表面粗糙不平的材料，要加展着剂（吐温20）以增强消毒效果。 三、实验材料与用具 1、材料：水稻成熟种子（用于诱导愈伤组织）； 2、试剂：75%酒精，2% NaCLO，无菌水(每组1瓶400mL)； 3、培养基：诱导培养基：NB+2,4-D 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L（）； 4、仪器设备：培养室、超净工作台、培养皿（￠9cm）2个、枪形镊、量筒（100mL）2个、三角瓶（50mL、无菌）2个、废液缸、保鲜膜、标签纸。 四、实验步骤
1、接种室、培养基及用具表面消毒 用75%酒精棉球试擦超净工作台、镊子，将培养基及用具放工作台，打开紫外灯，照射20分钟以表面消毒。之后关紫外灯，打开工作台风机，通风30分钟后可进行无菌操作。 2、种子去壳 选取饱满、无霉变、成熟的水稻种子，手工脱去谷壳（注意保持胚完整），每人准备30粒去壳种子，并按照分组放到三角瓶中。 3、操作者双手的清洗与消毒 在进入无菌室之前，各操作者先用自来水清洗干净双手并晾干，然后进入无菌室，坐在超净台前位子上后，用含75%酒精的酒精喷壶喷洒双手对双手进行消毒，在超净台风口待双手酒精风干后进入超净工作台。（注意：酒精喷壶喷洒双手时切记不要把酒精喷到超净台的有机玻璃板上！） 4、超净台面的表面消毒（以下工作在超净工作台内进行） 用枪形镊子从含75%酒精棉球的容器中取一团棉球，仔细把整个超净台面擦试一遍，尽量降低超净台面的带菌量，并将废棉球丢到废液缸中，然后点亮超净台里面放置的酒精灯。 5、外植体消毒（分组操作，每组由一位代表操作完成外植体的消毒工作） 将脱谷壳米粒转到一50mL无菌三角瓶→加适量无菌水洗一次（以没过种子为准，下同）→弃水，倒入75%酒精适量，摇动搅拌，放置30秒（过程中适当轻摇动混匀）→弃酒精→加适量无菌水洗一次→弃水→倒入适量2% NaCLO，不时摇动搅拌，共处理30分
引导骨再生膜技术
引导骨再生膜技术 第十六章引导骨再生膜技术 膜技术的原理及技术 膜的分类及用途 骨缺损GBR膜植入术(以不可吸收Gore-Tex膜为例) 膜技术的原理及作用 引导骨再生的生物膜技术(Guided Bone Regeneration，GBR technique)最早始于牙周病学领域，称为引导组织再生技术(guided tissue regeneration，GTR technique)。根据各类不同组织细胞迁移速度不同，即上皮细胞、纤维组织细胞比形成牙骨质、牙周韧带及骨组织的细胞快，采用生物材料人工制成一种带微孔的生物膜，起屏障作用，以阻止软组织中成纤维细胞及上皮细胞长入骨缺损区，避免这些细胞与有骨生成能力的细胞产生竞争抑制，保护血块的稳定，维持血块充填的间隙，使有骨生成能力的细胞缓慢进入骨缺损区，修复骨缺损。 ________________________________________ 返回页首 膜的分类及用途 GBR膜有不可吸收（生物不降解）及可吸收（生物降解）两类。不可吸收
膜以聚四氟乙烯膜（expended polytetrafuorethylene-ePTFE,又称 Gore-Tex膜）临床应用最多，它又分两种类型：一种为中间硬，边缘柔软，微孔为0.45um，孔大允许结缔组织长入；另一种为膜中加钛网支架或聚丙烯网架，以保持骨缺损间隙。可吸收膜目前尚不成熟，有聚乳酸膜、聚乙烯酯膜、共聚物膜及胶原膜等，但因其降解速度与成骨速度的控制尚不理想，临床应用受到限制。GBR膜技术应用于种植外科始于80年代末 90年代初，已取得了满意的效果，有很好的应用前景。 ________________________________________ 返回页首 骨缺损GBR膜植入术（以不可吸收Gore-Tex膜为例） 【适应证】 ⑴术前增加种植区因失牙后或外伤缺损之骨量； ⑵拔牙后即刻种植种植体颈部骨缺损； ⑶种植手术中造成的骨裂开或骨旁穿； ⑷由种植体周围炎造成的骨吸收。 【术前准备】 ⑴全身情况、口腔检查及Ｘ检查，同一般种植手术。 ⑵准备生物膜：根据骨缺损准备好适当大小的生物膜（ePTFE，Gore-Tex 膜）及固定钛螺钉； ⑶备好植骨材料：如取自体骨，应先选定取骨部位及骨科手术器械。 【麻醉及体位】 同拔牙麻醉。患者取平卧位，手术者在头顶或右侧。
实验1 愈伤组织的诱导
实验1 愈伤组织的诱导 1、实验目的 （1）学习植物材料表面灭菌的常规方法； （2）了解接种的无菌操作技术； （3）学习诱导植物器官形成愈伤组织的方法。 2、实验原理 植物组织培养是应用无菌操作的方法，培养离体的植物器官、组织或细胞的过程。如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物外植体进行消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得组织培养成功的前提和重要保证。 由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上，可以通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团——愈伤组织。 3、实验仪器和试剂 仪器：超净工作台、光照培养箱、酒精灯、打火机、记号笔、脱脂棉、75%酒精及棉球。 无菌器材：无菌吸水纸（定性滤纸）、灭菌培养皿、无菌水、镊子、解剖刀。 植物材料：直根胡萝卜、烟草叶片。 试剂：95%乙醇、0.1%氯化汞。 培养基：MS+1mg/L 2,4-D+30g/L蔗糖+10g/L琼脂,pH5.8 4、实验步骤 （1）接种前，用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，将培养基及接种用具放入超净工作台台面，打开超净工作台紫外灯及接种间紫外灯，照射约30 min，然后关闭紫外灯，通风20 min后，打开日光灯即可进行无菌操作。 （2）外植体预处理：将胡萝卜根用流动的自来水冲洗干净，用小刀削去其表皮1-2mm，切成大约15-20mm厚的块段。 （3）以75%乙醇棉将手擦试一遍。以下操作全部在无菌条件下进行。
（4）外植体消毒：用0.1%的升汞消毒1min-3min（烟草叶片消毒10秒钟左右）,然后用无菌水中漂洗3次，每次2分钟。 （5）将胡萝卜片放入垫有无菌滤纸的培养皿中，一手用消毒好的镊子固定胡萝卜，一手用灭菌后的解剖刀切除胡萝卜块段截面的表面部分，余下部分切成包含形成层的长、宽约5mm，厚约5mm的小块。在完成切割后，将解剖刀和镊子放入95%乙醇中浸蘸一下，在酒精灯焰上灼烧灭菌之后，放回原处，待冷却后即可使用。注意：在每一次使用镊子、解剖刀后，都要对其消毒一次。 （6）接种：在酒精灯焰附近处，用无菌镊子夹取胡萝卜薄片并迅速半插入琼脂培养基上，每皿放4-5片，注意将近根尖的一面接触培养基。将培养皿口在酒精灯焰上小心地轻转灼燎数秒，立即用封口膜封好瓶口。 （7）培养：将接种后的三角瓶放到光照培养箱中，在25℃下的黑暗中培养3-4周。 5、结果记录与分析 （1）接种1周-10天后，调查、计算污染率： 污染率(%)=污染的材料数/接种材料数×100% （2）每周观察并记录胡萝卜外植体产生愈伤组织的情况，包括出现愈伤组织前培养物的形态，愈伤组织出现的时间以及愈伤组织的形态特征（愈伤组织的颜色、质地等），4周后调查、计算愈伤组织诱导率： 诱导率（%）=形成愈伤组织的材料数/接种材料数×100% 6、思考题 （1）分析影响愈伤组织诱导的主要因素。 （2）以胡萝卜为材料为什么要强调要切取含有形成层部分，胡萝卜其它部分（如茎、叶、花）能否诱导出愈伤组织？ 实验二真菌菌丝DNA提取 1实验目的 学习利用CTAB法少量提取真菌菌丝体DNA，同时掌握在DNA提取中各
严重创伤重要组织器官修复再生的细胞与分子机制研究
一、关键科学问题及研究内容 (一)拟解决的关键科学问题根据严重创伤后损伤组织修复与再生发生的病理生理过程，结合现代细胞与分子生物学的研究进展，本项目拟解决的关键科学问题是“严重创伤后全身与局部内环境改变对重要组织和器官修复与再生的影响及其相关机制”，主要包括以下四个方面（图1）： 1、严重创伤全身性损害对局部组织修复与再生影响的细胞与分子机制。主要从整体了解严重创伤缺血缺氧导致全身内环境改变与平衡失调对局部组织修复与再生影响的细胞与分子机制等； 2、严重创伤局部微环境改变对重要组织器官损伤修复与再生的影响与调控机制。主要阐明严重创伤后局部微环境改变的特征与相关机制，以及这种改变对组织修复细胞（多种成体干细胞）的诱导分化与重编程作用，明确这些作用对修复速度与质量的影响； 3、几种代表性组织器官严重创伤后修复与再生关键的细胞与分子机制。主要从严重创伤后全身与局部改变的共性机制影响个性机制入手，研究皮肤、肺、骨、软骨与外周神经等代表性组织器官修复与再生的“始动”与调控机制； 4、重要组织器官完美修复与再生的关键性制约因素。解决和突破促进组织修复与再生关键技术的瓶颈，为建立创新的治疗技术和方法打下基础。 (二)主要研究内容根据需要解决的关键科学问题，本项目主要研究内容如下（图1）： 1、严重创伤缺血缺氧对组织修复与再生的影响与关键机制。重点解决缺血缺氧的始动因素以及缺血缺氧导致机体内环境改变影响重要组织器官修复与再生的机制；
2、严重创伤免疫紊乱和全身炎症对重要器官修复与再生的影响。重点解决严重创伤免疫失调和全身炎症导致的内环境紊乱对重要器官修复与再生影响的机制； 3、严重创伤局部微环境改变对成体干细胞分化的影响及其与组织器官修复和再生的关系。重点研究创伤局部微环境改变对主要修复细胞分化的调控作用及其与不同修复结局的关系； 4、严重创伤后肺损伤修复与再生机制。肺是严重创伤时最易受累的靶器官之一。重点研究急性肺损伤时肺组织的自身修复与再生规律，局部微环境的促修复作用与调控机制，建立促进肺组织内源性修复与再生的关键技术与措施； 5、严重创伤后皮肤及其附件完美修复与再生。从细胞、分子与基因水平以及局部创面微环境改变模式，研究减少皮肤过度纤维化修复和促进皮肤附件，特别是汗腺再生的相关机制，建立关键的促修复与再生措施； 6、严重创伤后骨、软骨和周围神经损伤修复与再生机制。重点从细胞、分子与基因水平研究骨、软骨和周围神经损伤修复与再生的机制，了解制约修复与再生的相关因素，建立促进修复与再生的创新技术和方法。
愈伤组织诱导及观察
一.实验目的 通过愈伤组织诱导的操作，使同学们了解进行植物组织培养时的一些关键操作技术和方法，如外植体的选择、培养基母液配制、使用液配制、分装灭菌、外植体表面消毒、接种、培养、愈伤组织诱导原理和方法以及接种后污染率，愈伤组织诱导率的统计与观察。使同学们能够亲身体会、了解激素对外植体的作用，还使同学们了解无菌培养的无菌操作，清楚植物体的带菌部位等。 二.实验内容 （一）、实验原理 植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技术。组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。愈伤组织就是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。 愈伤组织的形成 从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。 起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照强度、增加氧等)和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出
植物愈伤组织诱导培养基的配制
中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告 姓名： 马宁 专业年级： 生命基地班2009级 学号： 040212009020 课程： 植物生理学实验 题目： 植物愈伤组织诱导培养基的配制 一 .实验目的 1、掌握植物组织培养基母液配制的原则。 2、掌握植物MS 培养基的配制方法。 3、学会使用高压灭菌锅。学会植物组织含水量、自由水和束缚水含量的测定 二 .实验原理 概念： 1.植物组织培养： 将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。 2.愈伤组织及脱分化、再分化： 植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。 培养基配置见下表 化合物 含量 mg/L 母 液 吸取母 液量 ml/L 编号 浓度 mg/ml 称量 mg 配制量 ml NH 4NO 3 1650 1 33 16500 500 25 KNO 3 1900 38 19000 KH 2PO 4 170 3.4 1700 MgSO 4.7H 2O 370 7.4 3700 CaCl 2.2H 2O 440 2 8.8 4400 500 25
三 .主要仪器试剂 三蒸水、蔗糖、琼脂、用分析纯试剂：NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4?7H2O 、CaCl2?2H2O 、 ZnSO4?7H2O 、MnSO4?4H2O 、H3BO3预先配制好的不同组分的培养基母液、2-4D 溶液、烧杯、移液管、铁缸子、玻璃棒、手套、加热器等。 四.实验操作步骤 1、母液的配制（教师配好） 1）配制母液的好处和原则 （1）好处 a.可减少每次配制称量药品的麻烦. b.减少极微量药品在每次称量时造成的误差。 母液配成10~100倍，2－4℃冰箱中保存，用时按比例稀释。 （2）原则：按照药品的种类和性质（相似）分别配制，避免形成沉淀。 2）实验中用到的各母液 ZnSO 4.7H 2O 8.6 3 0.86 430 500 5 MnSO 4.4H 2O 22.3 2.23 1115 H 3BO 3 6.2 0.62 310 NaMoO 4.2H 2O 0.25 4 0.25 125 500 0.5 CuSO 4.5H 2O 0.025 0.025 12.5 CoCl 2.6H 2O 0.025 0.025 12.5 KI 0.83 5 0.083 41.5 500 5 Na-EDTA 37.3 6 7.46 3730 500 2.5 FeSO 4.7H 2O 27.8 5.56 2780 盐酸硫胺素 0.1 7 1 25 25 0.05 盐酸吡多醇 0.5 8 1 25 25 0.25 肌醇 100 9 20 1000 50 2.5 甘氨酸 2 10 1 50 50 1 烟酸 0.5 11 1 25 25 0.25
水稻愈伤组织培养
水稻愈伤组织的诱导 李希 北京科技大学化学与生物工程学院生物科学与技术系，北京，100083 摘要：以水稻种子为外植体，研究了外植体的消毒方法和接种技术，了解了水稻愈伤组织诱导的过 程。结果表明水稻种子接种在诱导培养基上两天已产生愈伤组织发芽2mm，四天愈伤组织呈现浅黄色发芽5-10mm，6天愈伤组织颜色加深发芽1-2cm，8天愈伤组织为橙黄色发芽2-3cm，无杂菌污染。 关键词：水稻种子外植体诱导愈伤组织 引言 自Niizeki和Oono1968年首次获得水稻花粉植株以来，水稻组织培养取得了很大的进展，如各种水稻品种愈伤组织的诱导、继代、植株再生培养基的筛选，遗传特性，基因工程转化体系的建立等等。水稻种子愈伤组织的诱导是这些研究的基础，因此掌握外植体的消毒方法和接种技术，了解了水稻愈伤组织诱导的过程至关重要。以植物器官、组织、细胞等作外植体进行离体培养时，在一定的诱导培养条件下都能诱导形成愈伤组织。外植体源自自然环境均为带菌状态，在接种前都必须进行消毒。对于难消毒的材料，有时要几种消毒剂配合使用。本次试验使用的诱导剂为2,4-D，诱导率为100%。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1实验材料 水稻成熟种子（用于诱导愈伤组织）； 1.1.2仪器设备及用具 超净工作台培养室、培养皿：￠9cm×2 枪形镊量筒：100mL×2 三角瓶：50mL×2(无菌)；废液缸；保鲜膜；标签纸 1.1.3试剂及培养基 试剂：75%酒精，2% NaCLO，无菌水(每组1瓶400mL) 培养基：诱导培养基：MS+2,4-D 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L（pH5.8） 1.2 实验方法 1.2.1 MS固体培养基配制： 由于实验室中的MS培养基已含有蔗糖和琼脂，所以直接按照41.5g/L的浓度配置。实验中配置50ml培养基，需依次加入2.075gMS，0.1mg2,4-D； 用NaOH或HCl调节PH=5.8； 高压蒸汽锅121℃灭菌20min。 1.2.2接种室、培养基及用具表面消毒 用75%酒精棉球试擦超净工作、镊子，将培养基及用具放工作台，打开紫外灯，20分钟以表面消毒。之后关紫外灯，打开工作台风机，通风30分钟后可进行无菌操作。 1.2.3种子去壳 选取饱满、无霉变成熟水稻种子，用手工脱去谷壳（注意保持胚完整），准备20粒去壳种子，
诱导愈伤组织的生长素最常用的是IAA
诱导愈伤组织的生长素最常用的是IAA、NAA和2, 4-D，大多数材料选用2, 4-D，它对愈伤组织的诱导作用优于其它生长素，缺乏2, 4-D是导致直接出芽的原因。 最常用的细胞分裂素是KT和6-BA。KT 的主要作用是促进细胞分裂，在分化培养基中，通常是添加KT、6-BA来促进愈伤组织分化。KT对愈伤组织诱导率不大，但在诱导培养基中添加KT 可以改善愈伤组织的质量，在一定程度上能延缓愈伤组织的衰老，延缓其器官分化能力的丧失，从而提高植株再生频率。 诱导的MS培养基激素:1mL2,4-D 200ul6BA 分化的MS培养基激素:400ul NAA 200ul6BA 建立山茱萸的组织培养及植株再生体系。方法：分别以山茱萸的叶片、花柄和花托为材料,进行山茱萸不同外植体的离体培养研究,筛选最佳培养基组成。 结果：适宜山茱萸叶片愈伤组织诱导的培养基组合为1／2MS,附加BA2．0mg／、IBA 0．5-1．0mg／L；适宜山茱萸花柄、花托愈伤组织诱导的培养基组合为1／2MS,附加BA1．0mg／L、2,4-D 0．5mg／L；在1／2MS附加BA 2．0mg／L、IBA0．05mg／L的培养基上,可诱导不定芽的产生；1／2MS 附加IBA 2．0mg／L的培养基有利于山茱萸试管苗生根。讨论：山茱萸的花托是进行组织培养的最适外植体,白色或翠绿色、结构致密的愈伤组织较易分化产生不定芽。 目的:研究山茱萸茎段组织培养技术,为山茱萸优良株系的快繁建立最佳条件. 方法:选 择山茱萸优良母株的茎段为外植体,分别在不同的培养基中培养,形成大量丛芽, 再诱导单株苗生根成为完整植株.结果与结论:茎段在WPM+6-BA 2.0 mg*L-1 +ZT 0.1 mg*L- 1+NAA 0.1 mg*L-1培养基上,能形成大量丛芽;在WPM+6-BA 1.0 mg*L -1 +ZT 0.1 mg*L-1+GA3 0.5 mg*L-1+NAA 0.1 mg*L-1中继代培养,可获大量壮苗;切取单株苗在1/2 MS+ 6-BA 0.1 mg*L -1 +IBA 1.0 mg*L-1培养基中能生根,移栽并成活. 红瑞木(Cornus alba L.)山茱萸科(Cornaceae)木来木属(Cornus L.),落叶灌木。叶对生,椭圆形,聚伞花序,顶生。具有较高观赏价值和园林绿化价值。选取红瑞木当年生的嫩枝段为外植体,用自来水冲洗30分钟,在无菌条件下先用70%乙醇表面消毒20秒,再用0.1%HgCl2溶液(加2-3滴吐温)处理8分钟,然后用无菌水冲洗6-8次。消毒后的外植体接种于添加不同生长调节剂的培养基上进行光照培养。接着进行继代培养和生根培养。培养基pH6.2,培养温度为(24±2)°C,光照为14小时/天,光照强度2.52×10-5-4.86×10-5mol.m-2.s-1。结果表明,红瑞木在启动培养阶段出现了严重的褐化现象,取其下部茎段作为外植体,有效地克服了褐化现象,褐化率仅为4.3%。MS+0.50mg·L-16-BA+0.10mg·L-1IBA培养基最有利于外植体芽的萌发。继代培养以MS为基本培养基,植株长势良好,但是丛生芽分化少。以M(MS培养基中的CaCl2·2H2O的浓度为1200mg·L-1)为基本培养基,植株生长健壮,丛生芽生长好且分化多。......(本文共计 峨眉四照花(Dendrobenthamia capitata var. emeinsis Fang et Hu.),隶属山茱萸科(Cornaceae)。被列入国家级濒危植物名录药用植物种群中。峨眉四照花也是峨眉山特有的观赏树种,集观叶、观花、观果于一身,具有较高的推广和应用价值。为了保护现有种质资源,减轻资源压力,本试验对峨眉四照花进行了离体快繁研究,为扩大种源,产业化生产峨眉四照花提供了理论基础和技术支持。也为开展四照花类其他植物的组织培养提供了经验。本试验以峨眉四照花为材料,对其组织培养技术进行了研究,初步获得了峨眉四照花的试管苗及其愈伤组织。研究的主要结果如下: 野外采集的外植体,以饱和漂白精溶液+吐温-80法处理10min,污染率较低,且植株褐化现象较轻。对于已污染的材料,进行了青霉素灭菌试验,400万单位/L的青霉素无菌水溶液处理峨眉四照花组培细菌污染苗40min效果最好。在培养基中添加抗氧化剂、抑制剂、吸附剂能有效的抑制峨眉四照花褐变的发生,本试验中以添加活性炭(AC)4g/L效果最好。以茎尖、茎段为外植体,对组织培养及其植株再生进行了研究,结果显示:峨眉四照花采取当年生半木质化嫩茎或茎尖为材料较好,有利于启动。初代最适培养基筛选中,以MS+6-BA1.0mg/L +GA1.5mg/L培养基为最适。茎尖的增殖培养试验中培养基MS+6-BA1.0mg/L+ZT0.5mg/L效果较好。峨眉四照花不同部位外植体,愈伤组织的诱导率也不同。愈伤组织诱导能力:茎尖〉茎段〉叶片。以MS+NAA0.5mg/L +6-BA1.0mg/L诱导愈伤组织成功率最高。愈伤组织转接继代培养,最佳愈伤组织继代培养基为:MS+KT0.1mg/L+NAA1.0mg/L。但愈伤组织诱导芽较困难。 以桃叶珊瑚带芽茎段为材料,研究不同消毒处理及浓度的激素浓度配比对外植体污染率和侧芽诱导的影响。结果表明:75%酒精处理60s+0.1%HgC2处l 理6min条件下,污染率最低为17.3%;最佳侧芽诱导激素浓度组合为6-BA2mg/L+NAA0.3mg/L,侧芽启动率可达49.4%,且对外植体侧芽的高生长也有较好的促进作用,