实验四、园艺植物的有性杂交技术

实验四园艺植物的有性杂交技术

一、实验目的

通过实验掌握有性杂交技术。练习实际操作方法，提高实际动手能力。

二、实验原理

杂交是基因重组的过程。通过杂交可以把亲本双方控制不同性状的有利基因综合到杂种个体上，使杂种个体不仅双亲的优良性状，而且在生长势、抗逆性、生产力等方面超越其亲本，从而获得某些性状都更符合要求的新品种。

三、实验材料与用品

（一）材料：已经开花的不同品种园艺植物（月季、菊花、桃花、番茄、黄瓜等）植株。

（二）仪器设备和药品：镊子、放大镜、铅笔、纸牌、脱脂棉、各种规格的羊皮纸袋、70%的酒精、隔离网。

四、时间安排

2学时。

五、方法与步骤

1.亲本选配：根据育种目标和亲本选配的原则选配亲本；

2.杂交母株的选择：选择具有母本品种典型性状的、生长健壮、开花结实正常的优良单株作为母株。在母株数量较多时，一般不要在路旁或人流来往较多的地方选择，以确保杂交工作的安全。去雄的花朵以选择植株中上部和向阳的花为好。每株（或每株）保留3～3朵花较好，种子和果实小的可适当地多留一些，在选定了花序或花之后，把多余的花序、已开的花、结的果实及小蕾除去，以保证杂种种子的营养。

3.花期调整：杂交育种时，有时选择的两个杂交亲本开花时间不一致，使得难于进行杂交，在这种情况下，就需对开花期进行调整或收集父本花粉贮藏等。植物开花与温度、光照等因素有关。掌握了植物生长发育规律，就可通过采取适当的栽培措施，调节温度、光照或采用植物生长调节剂等手段对植物进行处理，使开花时期能满足杂交要求。在调整花期前，首先应弄清楚影响植物花期的主要因子是什么，然后再采用相应的措施调整开花期。

4．母本花的去雄和隔离两性花的品种为防止自交，杂交前需将花蕾中未成熟的花药除去。去雄时可用手或镊子，同时注意尽量不要碰伤雌蕊。去雄时如果工具被花粉污染，须用70%以上的酒粉消毒，去雄后立即套袋以免其他花粉干扰。风媒花可用纸袋，虫媒花可用细纱布袋。袋子应两端开口，套上后上端向下卷折，用回形针夹住，下端扎在枝上，在扎口周围最好垫上棉花，防止昆虫钻入或夹伤花枝。对雌雄异花的在雌花开放前适当整枝后套袋隔离。在去雄前应把已经开的花、果和小蕾去掉，只留用于去雄的大蕾，去雄的时间一般在授粉前的1~2天进行，去雄后套上纸袋隔离，套袋上挂上纸牌或塑料牌，用铅笔注明日期。

5．父本花的隔离和采粉无论异花授粉植物还是自花授粉植物，为了防止非目的杂交，都应对父本进行隔离。花粉的收集与贮藏在前面的实验中已经讲述。

6．授粉授粉的工作程序是将母本的隔离纸袋解开，用授粉器（授粉工具可为毛笔、棉球等。对于风媒花，由于花粉多而且干燥，可用喷粉器授粉）蘸花粉抹于母本柱头上，或直接用父本的花药在母本的柱头上摩擦授粉，然后将纸袋重新套上，授粉工具授完一种花粉后，必须用酒精消毒，才能授另一种花粉。为确保授粉成功，最后两三天内重复授粉2～3次，在完成授粉工作后，一定要挂上标签，标明父本、母本、授粉日期和授粉者。待数日后柱头萎蔫即可将套袋除去，以免妨碍果实生长。

7．杂交授粉后的管理在授粉工作完成以后，要特别注意标签，如发丢失应按记录及时重新补挂，如发现字迹不清楚，要重新写清楚，严防标记错乱。在授粉工作完成以后，要经常注意检查，尤其是遇到暴风雨之后，更要注意检查，及时更换被风雨破坏的纸袋，对固定不好的要重新固定。为了保证授粉植株养分供应，增加杂交种子的饱满度，应将后抽出的花枝及时除掉，加强肥水管理和防治病虫害。

8.杂种种子的采收：

由于不同植物、不同品种种子成熟期有一定差异，须注意适时采种。对于种子细小而又易飞落的植物，或幼果易为鸟兽危害的植物，在种子成熟前应用纱布袋套袋隔离。杂种成熟后，采收时连同挂牌放入牛皮纸袋中，注明收获时期，分别脱粒、贮藏。

9.杂种后代分析。

六、实验结果分析

1．填写杂交结果记录

杂交结果记录表

组合名称去雄日期授粉日期授粉花数果实成熟期结果数结果率备注

2．分析影响杂交结果的因素

3．根据你的实验经验总结，你认为月季或茴香在杂交时何时进行去雄、何时采集花粉、何时授粉最为合适？为什么？

实验二园艺植物有性杂交技术

实验二园艺植物有性杂交技术一、实验目的通过实验掌握有性杂交技术。二、实验材料油菜、甘蓝、桃花、油菜花三、实验用具毛笔、镊子、标签、纸袋。四、实验原理杂交是基因重组的过程。通过杂交可以把亲本双方控制不同性状的有利基因综合到杂种个体上，使杂种个体不仅具有双亲的优良性状，而且在生长势、抗逆性、生产力等方面超越其亲本，从而获得某些性状都更符合要求的新品种。五、步骤 1.亲本选配：根据育种目标和亲本选配的原则选配亲本； 2.杂交母株的选择：选择生长健壮、开花结实正常的优良单株作为母株。在母株数量较多时，一般不要在路旁或人流来往较多的地方选择，以确保杂交工作的安全。去雄的花朵以选择植株中上部和向阳的花为好。每株保留2～3朵花较好，种子和果实小的可适当多留一些，多余的摘去，以保证杂种种子的营养。 3.花期调整：杂交育种时，有时选择的两个杂交亲本开花时间不一致，使得难于进行杂交，在这种情况下，就需对开花期进行调整或收集父本花粉贮藏等。植物开花与温度、光照等因素有关。掌握了植物生长发育规律，就可通过适当的栽培措施，调节温度、光照或采用植物生长调节剂等手段对植物进行处理，使开花期满足杂交要求。在调整花期前，首先应弄清楚影响植物花期的主要因子是什么，然后再采用相应的措施调整开花期。 4.隔离：两性花的品种为防止自交，杂交前需将花蕾中未成熟的花药除去。去雄时注意尽量不要碰伤雌蕊。去雄时如果工具被花粉污染，须用70%酒精消毒，去雄后立即套袋以免其他花粉干扰。风媒花可用纸袋，虫媒花可用细纱布袋。袋子应两端开口，套上后上端向下卷折，用回形针夹住，下端扎在枝上，在扎口周围最好垫上棉花，防止昆虫钻入或夹伤花枝。对于不需要去雄的母本花朵，也必须套袋，以防止外来花粉影响。对于同一朵花的花药开裂时间较长的花卉，如山茶，它的父本花朵也应在开花前套上袋子隔离。套袋上挂上纸牌或塑料牌，用铅笔注明去雄日期。 5.花粉采集：（1）花粉收集：为了保证父本花粉的纯度，在授粉前对将要开放的发育好的花朵或花序必须应先套袋隔离，以免掺杂其他花粉，待花粉成熟散粉时，可直接采摘父本花朵，对母体进行授粉。也可以把花朵或花序剪下，在室

园艺植物栽培学总论期末复习题

园艺植物栽培学总论一、请根据描述选择相应的名词术语。园艺学：研究园艺植物的种质资源、生长发育规律、繁殖、栽培、育种、贮藏、加工、病虫以及造园等的科学。园艺：是指种植蔬菜、果树、花卉等植物的生产技艺。园艺植物：包括果树、蔬菜和观赏植物。园艺植物栽培：是园艺学的一部分，主要研究园艺植物的栽培管理技术以及原理，是园艺生产的主要理论基础。年生长周期：植物在一年随着气候变化呈现出有一定规律性的生命活动过程称为年生长周期，也称为季节周期性。物候期：在生长期植物生长发育有规律的形态变化与季节性气候变化相适应的时期称为物候期。童期：实生繁殖的植物从种子播种后萌发开始到实生苗具有分化花芽潜力和开花结实能力为止所需要经历的这段时期。萌芽期：是指从芽开始膨大至第1片幼叶形成为止。主根：种子萌发时，胚根最先突破种皮向下生长而形成的根称为主根。不定根：植物的茎、叶或芽在一定条件下生长出根，这种根的发生部位不固定称为不定根。顶端优势：活跃的顶端分生组织（顶芽或顶端的腋芽）抑制下部侧芽的发育。生命周期：植物从生到死的生长发育全过程叫做生命周期。生长期：是指植物各部分器官表现出显着的形态特征和生理功能的时期。叶面积指数：指园艺植物叶面积总和与其所占土地面积的比值，即单位土地面积上的叶面积。花诱导：茎端分生组织部发生成花所必须的一系列的生理生化变化，也称为生理分化。花芽分化：从叶芽的生理与组织形态转变为花芽的生理和组织形态的过程。果实的生长曲线：是用来描述果实生长发育过程的两维平面图，有果实累加生长曲线和生长速度曲线等。受精：指雌、雄性细胞即精子与卵细胞相互融合的过程。两性花：同一朵花中同时存在雌雄两性发育完全的性器官。开花期：植物从第一朵花开放到最后一朵花开毕所经历的时间称为开花期。果实：是植物的花经传粉、受精后由子房或子房与花的其他部分参加而形成的具有果皮和种子的器官。授粉：是指成熟的花粉从花药开裂散出花粉传到柱头上的过程，是开花植物有性生殖的一个必要过程。单性结实：未经过受精而形成果实的现象，叫做单性结实。单性花：一朵花中只有一种发育完全的性器官，如黄瓜、核桃、板栗生理落果：从开花到果实生长发育过程中很容易产生落果，除了机械外力、病虫害、风害、高温、冷害等环境因素引起的落花落果外，由树体部养水分失衡或其它生理因素引起的落果称为生理落果。有效积温：在一年中能保证园艺植物生物学有效温度的持续时期为生长期（或生长季），生长期中生物学有效温度的累积值即为（生物学）有效积温。土壤化学性质：是指通过进行化学反应才会显示的土壤性质，以及对植物提供营养物质的能力，如土壤有机质和土壤酸碱度等。春化作用：低温对植物开花的诱导作用称为春化作用。需水临界期：是指植物对水分供应不足最为敏感、最易受到伤害的时期，大多数园艺植物开花结果和叶面积增长最迅速时期，一般是最需要供水的时期。适宜温度：植物体能维持正常生长发育的一定的温度围。需冷量：果树通过或解除自然休眠所需的低温（≤℃）的总和即为需冷量，多以低于℃的小时数为标准。千粒重：一千粒种子的重量（g/千粒）。无性繁殖：又称营养器官繁殖，即利用植物营养体的再生能力，以植物的根、茎，叶等器官，培育成独立的新个体的繁殖方式。种子含水量：是指种子中所含水分的重量(即在100℃～105℃下所能消除的水分含量)与种子重量的百分比。层积处理：是部分园艺植物在适宜的环境条件下完成后熟，解除休眠的一种方法。芽接：凡是用一个芽作接穗的嫁接方法称芽接。有性繁殖：又称种子繁殖或实生繁殖，是利用植物种子培育幼苗的一种繁殖方式。繁殖：指植物以（一种或多种）自然的或人工的方法产生更多个体的现象。园艺植物繁殖方式包括有性繁殖和无性繁殖。种子生活力：是指种子发芽的潜在能力，一般用发芽试验法来测定。发芽势：指在规定时间供试样本种子中发芽种子的百分数。反映种子发芽速度和发芽整齐度的指标。种子净度：又称种子纯度，指纯净种子的重量占供检种子总量的百分比。亲和力：砧木和接穗经嫁接能够愈合、生长、发育的能力嫩枝扦插：采用当年生的嫩枝或半木质化的枝条做插穗，常用此法繁殖园艺植物茶花、杜鹃、柑橘、虎刺梅等。植物组织培养：是指在无菌条件下，将离体的植物器官(根、茎、叶、花、果实等)、组织(如花药组织、形成层、胚珠、胚乳、皮层等)、细胞(体细胞和生殖细胞、花粉等)以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件(含有营养物质和植物生长调节物质等)，使其长成完整的植株，统称为植物组织培养。扦插繁殖：利用植物营养器官(茎、叶、根)的再生能力或分生机能，将其从母体上切取，在适宜条件下，促使其发生不定芽和不定根，成为新植株的繁殖方法。分株繁殖：就是把某些植物的蘖芽、球茎、块根、匍匐茎等生根后，或者植物营养器官的一部分（变态茎等），将其与母体切离成为独立新植株的繁殖方法。栽培制度：是指在一定时间、在一定土地面积上所采用的作物种植结构、配置、熟制和种植方式的综合体系。轮作：即在同一块土地上按照一定时间轮流种植不同种类的作物，轮作是克服连作弊端的最好方法。复种指数：复种指数即一年中种植园整个面积上各种作物种植和收获的次数。套作：又称套种，是指在前季作物生长后期的株、行或畦间或架下栽植后季作物的一种种植方式。间作：指在一块土地上有次序地种植两种或几种作物，其中以一种作物为主，其它为间作物。带状定植：又称宽窄行定植。两行或三四行密植，为一带，带行距、株距小，带与带之间的带距较大，大于带行距，大于株距的定植方式。计划定值：又称变化定植。为了充分利用土地面积，一些多年生果树，幼树时树冠还不大，栽植密度大，待树长大，果园出现郁闭情况时，有计划地疏除一些株（或行）。正方形定值：行距、株距相等的定植方式。

基因工程实验技术介绍

一、大肠杆菌质粒DNA的提取质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，以下介绍一种最常用的方法：碱裂解法。此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下： 1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。 2、37℃振荡培养过夜。 3、取1.5ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3 min，弃上清液。 4、加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-H Cl pH8.0)充分混合。 5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH，1％ SDS)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。 6、加入0.15m1预冷溶液III(5 mol/L KAc，p H4.8)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。 7、以10，000rpm离心20min，取上清液于另一新Ep管 8、加入等体积的异戊醇，混匀后于?0℃静置1 0min。 9、再以10，000rpm离心20min，弃上清。 10、用70％乙醇0．5ml洗涤一次，抽干所有液体。 11、待沉淀干燥后，溶于0．05mlTE缓冲液中二、质粒DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物，应选用电泳纯的，琼脂糖此级产品筛除了抑制物和核酸酶，而且用溴化乙锭染色后荧光背景最小。 (1)琼脂糖凝胶电泳装置

由于琼脂糖凝胶电泳既要求不高，而适应性又强，在过去15年里已成功地设计了形形色色及大大小小的电泳槽。对这些装置的选择主要是依据个人的喜恶。使用最普遍的装置是Walt er Schaffner发明的水平板凝胶。水平板凝胶通常在一块可安放于电泳槽平台的玻璃板或塑料盘上灌制。在有些装置中，则可将凝胶直接铺在平台上。凝胶恰好浸在缓冲液液面下进行电泳。凝胶的电阻几乎与缓冲液的电阻相同，所以有相当一部分的电流将通过凝胶的全长。（2）琼脂糖凝胶的制备琼脂糖凝胶的制备是将琼脂糖在所需缓冲液中熔化成清澈、透明的溶液。然后将熔化液倒入胶模中，令其固化。凝固后，琼脂糖形成一种固体基质，其密度取决于琼脂糖的浓度。通贯凝胶的电场接通后，在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移。（3）琼脂糖凝胶的染色电泳完毕，将琼脂糖凝胶转移入含EB的染液中，染色10分钟，取出紫外灯下观察。三、质粒DNA热激法转化大肠杆菌感受态的细胞可以摄入外部溶液中的DNA，而常态的细胞却不能，所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌必须首先制备感受态的大肠杆菌细胞。 1、取1%大肠杆菌E.coli接种于含2ml LB培养基的试管中，37℃振荡培养过夜 2、取0.1ml过夜培养物转种于含10ml LB培养基的三角瓶中，37℃振荡培养3h至OD600=0. 3 3、然后把培养物倒入1.5ml离心管中，冰浴1 0min。 4、在4℃下以4000rpm离心5min，去上清液 5、把菌体悬浮于15m1冰冷的0.1M CaCl2溶液中，置冰上30min 6、然后再在4℃下以4000rpm离心10min，去上清液

园艺植物栽培学整理

园艺植物栽培学笔记绪论一、园艺：是指种植蔬菜、果树、观赏植物和茶等的生成记忆，是农业生产和城乡绿化的重要组成部分。二、园艺学：是研究园艺植物的种植资源、生长发展规律、繁殖、栽培、育种、储藏、加工、病虫一级造园等科学。三、园艺植物栽培学：是园艺学的一部分，运用现代生命科学理论和技术研究园艺植物的种类、生长发育、环境条件和栽培管理技术的应用科学。四、园艺的意义： 1.促进农村经济发展和农民增收 2.平衡膳食结构，增加人体营养 3.美化环境，改善生态 4.出口创汇，增强我国农产品的国际竞争力 5.促进城乡居民就业，维护社会稳定五、我国是蔬菜生产第一大国第一章园艺植物的起源、分布和分类一、园艺植物的起源和演化：是指园艺植物各种类类群原产地或次生地以及传播、演化和进化的过程。二、原生起源中学：植物显性性状和最大遗传多样性的聚集地区。特点是有野生祖先；有原始特有类型；有明显遗传多样性；有大量显性基因。三、次生起源中心：原生起源中心植物向外扩散到一定围时，在边缘地又会因作物本身的自交和自然隔离而形成新的隐性基因控制的多样化地区。特点是无野生祖先；有新的特有类型；有大量的变异；有大量隐性基因。四、瓦维洛夫栽培植物起源中心学说：8个起源中心，3个亚中心五、同源平行变异律：在一定的生态环境中，在相近植物的遗传变异性中出现平行现象。六、植物学分类和园艺学分类 A、果树分类（根据农业生物学） 1落叶果树：指叶片在秋季或冬季全部脱落，第二年春季重新萌发长叶，具有明显生长期和休眠期的果树。 1)仁果类果树：这类果树包括苹果、梨、沙果、木瓜、山楂等。果实主要由子房及花托膨大形成，食用部分是肉质的花托，果心中有多粒种子，果实为假果。 2)核果类果树：包括桃、杏、、梅、樱桃等。果实由子房发育而来，有明显的外、中、3 层果皮；外果皮薄，中果皮肉质，是食用部分，果皮木质化成坚硬核。这类果实属于真果。 3)坚果类果树：核桃、银杏、榛子、阿月浑子 4)浆果类果树：葡萄、草莓、猕猴桃 5)柿枣类果树：柿子、枣 2、常绿果树：叶片全年常绿，春季新叶长出后老叶逐渐脱落。在年周期活动中无明显休眠期。 1)柑果类果树：柑、橘、柠檬 2)浆果类果树：桃、莲雾、番石榴

园艺植物有性杂交技术

园艺植物有性杂交技术一、实验目的通过实验，学习并掌握去雄、套袋、授粉等有性杂交技术，为开展园艺植物杂交育种工作打下初步基础。二、实验材料 xx，黄花xx，葱兰等植物中的一种。三、实验用具镊子、标牌、放大镜、隔离纸袋、回形针、铅笔、记录本等。四、实验原理有性杂交是基因重组的过程。通过杂交可以把亲本双方控制不同性状的有利基因综合到杂种个体中，使杂种个体不仅具有双亲的优良性状，而且在生长势、抗逆性、生产力等方面甚至超越其亲本，从而获得某些性状更符合人类需要和育种目标的新品种。五、实验方法与步骤 1．亲本的选择与选配根据育种目标和亲本选择、选配的原则选择和选配亲本。 2．亲本植株和花朵的选择选择发育正常、生长健壮、无病虫害且具有本品种典型特征的植株作为杂交亲本植株。杂交母株应选开花结实正常的优良单株，在母株数量较多时，一般不要在路旁或人流来往较多的地方选择，以确保杂交工作的安全。杂交的花朵以选择健壮花枝中上部即将开放的花蕾为好，每株（或每枝）保留3～5朵花，种子和果实小的可适当多留一些，多余的花蕾、已开放的花朵、果实全部摘去，以保证杂交果实的顺利生长与成熟。 3．花期调整

杂交时，如果选择的两个亲本存在花期不遇现象，则需对其开花期进行调整或收集父本花粉贮藏。在调整花期前，首先应弄清楚影响植物花期的主导因子，然后再采用相应的措施进行调整。如可通过采取适当的栽培措施，调节温度、光照或采用植物生长调节剂等手段对植物进行处理，使开花时期能满足杂交要求。 4．去雄、套袋两性花的品种为防止自交，杂交前需将花蕾中未成熟的花药除去。去雄时，剥开花瓣用镊子夹住花丝，将雄蕊全部除去，同时注意尽量不要碰伤雌蕊。去雄过程中，如果工具被花粉污染，须用70%以上的酒精消毒，去雄后立即套袋隔离以免其他花粉干扰。风媒花用纸袋，虫媒花可用细纱布袋。袋子一般两端开口，套上后上端向下卷折，用回形针夹住，下端扎在花枝上，扎口周围最好垫上棉花，防止夹伤花枝。对于不需要去雄的母本花朵，也必须套袋，以防外来花粉影响。套袋后挂上标牌，注明母本名称和去雄日期。 5．花粉采集贮藏为了保证父本花粉的纯度，在授粉前应对将要开放的发育良好的花蕾或花序先行套袋隔离（已开放的花朵摘除），以免掺杂其他花粉。待花药成熟散粉时，可直接采摘父本花朵，对母体进行授粉；也可把花朵或花序剪下，于室内阴干后，收集花粉备用。对于双亲花期不能相遇或亲本相距较远的植物种类，如果父本先于母本开花，可将父木花粉收集后妥善贮藏或运输，待母本开花时再进行授粉，从而打破杂交育种中双亲时间上和空间上的隔离，扩大杂交育种范围。 6．授粉待母本柱头分泌粘液或发亮时，即可授粉。授粉工具可用毛笔、棉球等，或者用镊子夹住父本已开裂花药的花丝轻轻碰触母本柱头；对于风媒花，由于花粉多而且干燥，可用喷粉器授粉。为确保授粉成功，可重复授粉2～3次。授粉工具授完一种花粉后，必须用酒精消毒，才能授另一种花粉。授粉完成后立即封好套袋，并在挂牌上标明父本名称、授粉日期、授粉次数等。数日后如发

园艺植物栽培学复习题

园艺植物栽培学复习题一、全部的名词术语 1 园艺学：研究园艺植物种质资源、生长发育规律和栽培管理技术、贮运加工或造型造景的科学 2 蔬菜：凡是一、二年生及多年生的草本植物，有多汁的产品器官作为食品的，均可列为蔬菜植物的围。 3 观赏植物具有观赏作用或可提供观赏价值的所有木本、草本植物（草坪植物）。 4 生物种根据不连续的繁育单位，即通过繁育上的障碍与其它的种区别开来，同种个体彼此间杂交能育或具有能育潜力 6 品种按人类需要选育出的具有一定经济价值，并且在被繁殖后仍能保持其特征的人工生物群体。是劳动的产物。 7 主根种子萌发时，胚根最先突破种皮，向下生长形成的根叫主根 8 根颈根与茎的交界处，上下通道，活跃敏感。 9 根际与根系紧密结合的基质表面，是以毫米计的微域环境，含根系分泌物、土壤微生物和脱落的根细胞。 10 菌根同真菌共生的根为菌根。菌丝不侵入细胞，只在皮层细胞间隙中为外生菌根，菌丝侵入细胞部为生菌根。介于二者之间为外兼生菌根，如草莓。 11 根瘤细菌入侵根部组织形成的共生体，该类细菌称为根瘤菌，刺激细胞分裂形成根瘤。 12 再生能力断根后长出新根的能力。 13 芽的异质性不同部位、不同时期、不同环境条件、不同营养状况下形成的芽，其质量有很大差异，称为芽的异质性 14 成枝力芽萌发后，长成长枝的能力，以萌芽中抽生长枝的比例表示。 15 芽的潜伏力潜伏芽的寿命长短及其萌芽力和成枝力的强弱。 16 花序几朵甚至数百朵花按一定顺序排列在花枝上，这样的花枝叫花序无限花序，从基部向顶端依次开放或从边缘向中央依次开放。有限花序，花序顶端或中心花先开，然后由顶向基或由向外开放。 17 异花授粉一个品种的花粉传到另一个品种的柱头上。异花授粉时供给花粉的品种与植株称为授粉品种与授粉树。 18 单性结实子房未受精而能形成果实。 19 无融合生殖不经过受精能形成种子，如柑桔珠心胚。 20 种子成熟是指种胚发育完全和后熟充足（生理成熟）的已具有良好发芽能力的种子状态。 21 植物的生长发育随着季节和昼夜的变化而发生着节奏性和周期性的变化，并表现出一定的间歇性，这就是生长发育的周期性。 22 物候期生物的器官与季节性气候变化相适应的动态变化时期称为生物气候学时期，简称物候期 23 休眠期植物芽、种子或其他器官生命活动微弱、生长发育表现停滞的时期。 24年平均温度 25 生长期积温：在生长期里日平均温度的累积只和。 26 冬季极端低温：

园艺植物栽培学问答与答案

园艺植物栽培学课后答案一、绪论 1、如何理解园艺生产在我国经济和社会发展中的重要地位和作用？答：园艺生产在我国经济和社会发展中的重要地位和作用：（1）食品、营养品（增加产量园艺植物栽培为人们提供色香味俱佳、营养丰富的干鲜食品和营养品）；（2）工业园料（许多工业都离不开园艺产品作为原料），（3）医疗、保健（除了药用植物外，众多园艺植物具有特殊的医疗保健功效），（4）美化环境、改善生态，（5）园艺文化（有花卉节、果树节等、有以文学、诗歌等艺术形式表现出来），（6）园艺植物生产为生物科学研究提供重要试材。2、新中国成立以来，我国园艺生产取得了哪些成就？答：新中国成立以来，我国园艺生产取得的成就：（1）生产规模日益扩大、（2）品种结构明显优化、（3）集约栽培推广加快、（4）栽培技术不断完善、（5）设施栽培发展迅速、（6）基地建设效益显著、（7）市场供给明显改善。 3、为什说中国历史上园艺业在世界园艺发展史上有极光辉的一页？答：中国历史上园艺业在世界园艺发展史上有极光辉：生产水平，新中国成立后，特别是改革开放以来，我国现代园艺生产发展迅速。近年来，我国已稳居世界果树和蔬菜生产第一大国地位，花卉业也呈现出了快速发展的态势。 4、与发达国家相比，我国园艺生产当前存在的问题和面临的发展机遇有哪些？答：与发达国家相比，我国园艺生产当前存在的问题和面临的发展机遇有：（1）问题：一、园艺生产区域发展缺乏科学合理的规划; 二是生产管理粗放；三是整体上产品质量差；四是品种构成不合理；五是从业人员科技素质不高；六是种苗质量差；七是市场体系不够健全；八是贮运加工能力不足；九是生产机械化、生产社会化、生产专业化、生产产业化程度低；（2）机遇:一是劳动力资源十分充足；二是植物资源非常丰富；三是特色园艺植物较多；四是生产成本和市场价格相对较低；五是生产区域十分广阔；六是出口市场潜力较大；七是国内市场潜力巨大。 5、我国园艺生产当前发展的热点和趋势有哪些？答：我国园艺生产当前发展的热点和趋势：（一）热点：（1）观光园艺、都市园艺、旅游园艺、市场园艺；（2）社区园艺、家庭园艺、微型园艺；（3）绿色食品、有机园艺、生态园艺、自然园艺；（4）设施园艺、运输园艺；（5）基因育种、分子园艺；（6）可持续发展园艺；（二）趋势：（1）园艺生产区域化、栽植规模化、栽培集约化、技术集成化；（2）园艺植物品种多样化、良种化、优质化、高档化；（3）园艺产品品质标准化、有机化、无公害化；（4）

小麦的有性杂交技术

小麦的有性杂交技术实验一、目的：了解小麦的花器结构和开花习性，掌握小麦的有性杂交技术. 二、实验原理小麦是自花授粉作物，通常自然异交率极低，为了提高育种效率，促进品种间的基因重组，进行小麦的人工有性杂交是小麦育种中最常用的方法。㈠小麦的花器构造小麦属复穗状花序，由许多互生的小穗组成，小穗基部着生两个护颖和3-9 朵小花，但正常发育的都是基部的2-5 朵小花，小穗上部的小花往往退化。每朵小花自外向里有外颖、内颖各1 片；鳞片2 个；雄蕊（花丝、花药）3 个；雌蕊（子房、柱头、花柱）1 个，呈羽毛状分裂。外颖顶端有芒或无芒㈡开花习性小麦多数品种为开颖授粉，也有少数闭颖授粉。通常小麦抽穗2-4 天开花（有的当天就开花，也有的抽穗10 天才开花），小麦的开花昼夜进行，其开花的高峰期随地区、品种、当时温、湿度有所差异。通常一天有两个高峰，上午8-11 时，下午约2-6时开花最盛，小麦开花的最适温度18-23E，最适相对湿度70-80%, 小麦花粉在田间条件下的生活力约20分钟。小麦的开花顺序，就全株而言先主穗后分蘖穗；同一穗上，先中部的小穗，然后依次向上、向下两端开放；就一个小穗而言，先基部第一朵小花，然后依次向上，全穗开花约3-5 天。小麦开花时，鳞片吸水膨胀，迫使外颖张开，同时花丝迅速伸长并伸出颖片外，花粉囊破裂而散粉，一朵小花开花时间很短，大约15-20分钟，开花后花粉落在柱头上1-2 小时开始萌发三、所需用品 1.用品试验地种植的小麦品种，镊子、剪刀、75%的酒精、透明纸袋、纸牌回形针、小杯。四、操作方法 1. 普通法（1 ）选穗整穗根据确定的杂交组合，在母本群体内选择典型、健壮植株的主茎穗（刚抽出叶鞘、花药呈绿色）用镊子去掉穗基部和顶部发育不良的小花每穗留中部10个发育较一致的小穗. 用镊子将小穗的上部小花去掉，只留基部外侧两朵发育好的小花. 全穗约留20 朵左右小花 2.去雄套袋去雄时用左手大拇指和中指夹住麦穗，用食指轻压外颖的顶部使内外颖分开，右手用镊子插入内外颖的合缝里，轻轻镊出三个雄蕊（注意：不要夹破花药和碰伤柱头）. 去雄工作应从穗的一侧由下而上顺序进行，去完一侧再进行另一侧，不能遗漏. 去雄时如发生花药破裂（或花药呈黄色）这朵花应剪去，应用酒精擦净镊子，以免发生串粉现象. 去雄完毕，即刻套袋隔离. 挂号标牌 3.授粉：在去雄后1-3天内进行授粉，结实率较高。授粉以上午8时以后（8-11时）4 时以前开花较盛时为宜，授粉前先检查柱头有无损伤。如柱头已呈羽毛状分叉、有光泽，表明正是授粉适期。采集成熟的父本花粉（花药金黄色，有花粉散出）于小杯（或纸上）中，然后立即用授粉器（将花粉）依次放入每朵去雄的花内，全穗授粉后将纸袋套好，牌上写上父本名称，授粉日期，10 天后将纸袋去掉。㈡“小麦捻调穗”杂交法

植物基因工程实验技术

植物基因工程实验技术
编者: 赵燕
主审: 张学文
湖南农业大学植物科学实验教学中心
2007 年 4 月

前
言
基因工程是现代生物技术的核心, 也是现代分子生物学研究的重要手段. 掌握基因工程技术对于生物技术专业及其它生物学相关专业学生都很重要. 基因工程本身是由一系列分子生物学操作技术组成的系统性技术体系,本实验指导侧重于 DNA 重组操作,将基因工程操作的常用和核心技术组织起来, 以为我校生物技术本科生及有关专业研究生基因工程实验提供简单而明确的指导. 为适应基因工程的飞速发展,一些生物技术公司匠心独运,开发出专门的试剂盒,使一些复杂的实验操作简单化了.这对于实验者来说自然是好事,但也使实验者动手胜于用脑.对于实验人员来说,一定应知其然并知其所以然, 才会在实验中运用自己的知识予以创新性的发展.期望本实验指导不成为实验中的教条.
编
者
2007 年 4 月
1

目
实验一实验二实验三实验四实验五实验六实验七实验八实验九实验十附录:
录
大肠杆菌的对照培养,单菌落的分离及菌种保存 ...............3 强碱法小量制备质粒 DNA.....................................................5 琼脂糖凝胶电泳......................................................................7 植物总 DNA 的提取,纯化和检测 ........................................9 DNA 的 PCR 扩增................................................................. 11 植物总 RNA 的分离 .............................................................15 RT-PCR..................................................................................17 体外重组分子的构建,筛选及检测.....................................21 植物表达载体的构建,筛选及检测.....................................22 植物遗传转化技术 ................................................................23 实验中常用的仪器与器皿 .....................................................24
2

园艺植物栽培学知识点

一、几种种植方式及其优缺点（1）连作------是指一年内或连续几年内,在同一田地上种植同一种作物的种植方式。优点：充分利用同一地块自然资源管理上简单。缺点：病虫害严重土壤理化性状与肥力均劣变连作障碍（作物机体生理机能失调、出现许多影响产量和品质的异常现象）（2）轮作：是指同一田地里顺序地在季节间或年度间轮换种植不同类型作物的种植。优点：有利于防治病虫害有利于均衡利用土壤养分改善土壤理化性状调节土壤肥力是开发土壤资源的生物学措施。（3）间作：指同一田地按一定次序同时种植两种或几种作物，一种为主,另外一种或几种为间作物的种植制度。优点：充分利用空间互相提供良好的生态条件促进主栽与间作作物的生长发育缺点：管理上复杂、用工多，应用机械作业困难（4）套作(relay intercropping)：是指在前季作物生长后期的株、行或畦间或架下栽植后季作物的一种种植方式。优点：充分利用生长季节，提高复种指数。混作(mixed intercropping)：是指两种或多种生育季节相近的作物按一定比例混合种植于同一田地上的种植方式。优点：提高光能和土地利用率 2、种植园规划设计的七个大方面水土保持的规划设计园区的土地规划树种、品种选择和授粉树配置园区防护林设计园区排灌系统的规划设计道路系统规划建筑物及其它规划一、水土保持工程水土保持工程的重点山地-----修筑拦水坝、梯田平原或滩涂地------营造防风林山地的水土工程应实施“小流域治”的原则

提倡生态效益好又省工、省力的植被坡营造梯田是山地实施种植的主要途径工程措施：修筑梯田拦蓄降水、减少冲刷，便于耕作、易于排灌提高地力、促进增产，改善环境、减轻灾害生物措施：植被覆盖二、园地的土地规划主作面积防护林道路绿肥基地其他附属设施 80-85% 5-10% 4% 3% 4% 种植园小区规划设计要求：小区是种植作业的基本单位小区内气候和土壤条件、管理基本一致利于水土保持、防止风害、运输和机械化作业面积：条件一致的园区：8-12hm2 山地地形复杂、气候、土壤条件差异大：1-2hm2 形状：长方形，长短边的比例为2:1-5:1 现代化的规模经营、专业化程度高的种植园，基本上一个小区种植较单一的园艺作物三、作物种类、品种的选择与配置选择树种和品种应注意： 1、优良品种、有独特的经济性状优良品种生长强健、抗逆性强、丰产、优质独特的经济性状美观的花形、果形，颜色熟期的早晚种子有无或多少风味或肉质的特色适于鲜食、加工， 2、适应当地气候和土壤条件，优质丰产 3、适应市场需要，经济效益高大、中城市为市场周年供应鲜产品为主要目标距离城市较远或运输条件较差的地区耐运输、贮藏的树种和品种外向型商品种植园与国外市场的消费习惯和水平接轨生产加工原料适宜加工的优良品种择适宜酿酒的红色葡萄品种产品不同成熟期、不同用途的种类、品种配置：大面积种植，早、中、晚熟品种各占一定比例方便上市，也方便管理授粉树的配置：自花不实的现象必须配置授粉品种杨梅、猕猴桃、银杏、香榧等类雌雄异株果树柚子、桃等果树，异花授粉，显著提高产量授粉品种具备的条件

园艺植物栽培学试题

● ●问答题 1. 2.果实成熟时，果皮颜色和色素的变化有哪些？答：果皮色泽变艳，果皮中叶绿素酶含量逐渐增多，叶绿素逐渐被破坏丧失绿色，而由于叶绿素中原有的类胡萝卜素呈现黄色或由于形成花色苷而呈现红色。 2. 3.影响嫁接成活的因素有哪些？答： 1）砧木和接穗的亲和力 2）嫁接的时期、温度、接口湿度、氧气、光线 3）砧穗质量 4）嫁接技术 4. 5.打破块茎休眠的方法有以下几种答：1）温光处理 2）层积催芽 3）激素处理 6. 7.园艺植物定植方式？答：1）正方形定植 2）长方形定植 3）三角形定植

8. 9.定植后管理：答：1）定植水 2）缓苗水 3）中耕 4）间苗 5）补苗 6）防风 7）防寒 8）防病虫害 10. 11.决定定植密度的因素：答：1）植物种类，品种 2）气候和土壤条件 3）栽培方式 4）栽培技术水平 5） ● ●论述题 1. 2.根用类园艺作物肉质根在生产上发生异常的原因及控制措施。【1】肉质根分叉与弯曲的原因：1）种子陈秕，生活力弱，胚根发育不良 2）土壤质地的影响，如土壤耕层浅，底土硬实，或土中有石块、瓦片等杂物，阻碍肉质根膨大，产生分叉与弯曲，在土壤中水分过多、排水不良而损伤主根，导致侧根膨大， 3）养分过剩，导致侧根生长 4）移栽引起根损伤， 5）施用未腐熟的肥料，或土壤过酸、过碱损伤主根，形成分叉根； 6）土壤害虫咬伤幼根先端，引起侧根膨大，成为分叉及畸形。控制设施：1）挑选好的，生活力\强的种子， 2）播种前整地施肥， 3）合理施肥，养分供施要均衡， 4）作好防虫害措施。

【2】肉质根开裂的原因：1）品种（遗传导致）， 2）水分不均匀。控制措施：1）挑选优良品种， 2）均匀供水，合理追肥。【3】肉质根空心的原因：1）养分过多， 2)开花（生长中心发生转移）控制措施：1）合理施肥，控制后期施肥， 2）严格控制昼夜温差及日照长度 3）及时采收。 4）100mg/L NAA处理可降低空心率。 3. 4.叶球异常原因与克服方法答：【1】不结球，原因有：与不结球的种类或品种杂交，播种期过早或过迟，肥水供应不足，病虫危害，反常的气候条件等。克服方法：选择纯正优良种子，适期播种，施足基肥，分次追肥，轻施提苗肥，重施结球肥，肥水要充足，注意防虫害。【2】叶球开裂，原因有：叶球形成过程中，遇到高温及水分过多的环境，致使外部球叶已充分成熟，内部叶球仍在生长，外侧叶不能相应生长，导致裂球；采收不及时也会导致裂球。克服方法：结球过程中肥水均衡供应和及时采收。【3】空球，原因有：营养不良引起，特别是缺钾肥和氮肥。克服方法：施足基肥，分期增施氮、钾肥。【4】干烧心，如大白菜、甘蓝等，原因有：缺钙。克服方法：精细整地，施足有机肥，增强土壤保水保肥能力；均匀浇水，及时排水；合理施肥，忌偏施氮肥；结球初期进行叶面补钙。

农杆菌介导的植物转基因技术实验指导

农杆菌介导的植物转基因技术一、实验目的 1 了解低温离心机、恒温振荡培养箱、超净工作台等仪器的使用。 2 学习真核生物的转基因技术及农杆菌介导的转化原理；掌握农杆菌介导转化植物的实验方法，了解转基因技术的操作流程。二、实验原理农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤。农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将 T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。实验一培养基配制一、仪器和试剂 1、仪器：高压灭菌锅，超净工作台 2、药品：Beef extract （牛肉浸膏） 5g/L ，Yeast extract （酵母提取物） 1g/L ，Peptone （蛋白胨） 5g/L ，Sucrose （蔗糖） 5g/L ，MgSO4.7H2O 0.4g/100ml ，Agar （琼脂）1.5g/100ml，MS粉，有机溶液，肌醇，Fe盐，NAA（萘乙酸），6-BA （6-苄氨基腺嘌呤），卡那霉素（kan），利福平（rif ），链霉素（str ）。二、实验方法第一组配制YEB固体培养基 1、配制250mlYEB固体培养基：先称取1.25g Beef extract （牛肉浸膏）； 1.25g Peptone （蛋白胨）；0.25g Yeast extract （酵母提取物）；1.25g Sucrose

（蔗糖）;1g MgS04.7H2O琼脂粉3.75g ;将上述药品置于250ml三角瓶中，用量筒称取 200ml蒸馏水将其溶解混匀，然后再定容至250ml,用NaOH调pH=7.4。 2、灭菌：将盛有250ml 培养基的三角瓶封口，在三角瓶表面写清培养基名称，用高压灭菌锅进行灭菌。 3、抗生素的加入：高压灭菌后，待培养基温度降到50-60 C时（手可触摸）加入已经过滤好的抗生素（100用/ml kan+50⑷/ml Str+ 50旧/ml rif ）,以免温度过高导致抗生素失效。 4 、倒板：将抗生素与培养基混匀，每个平皿倒15ml 培养基，可以倒16个平皿，倒完后打开平皿盖，在紫外灯下照10min,等待培养基凝固，盖上平皿盖，封口备用。第二组配制YEB液体培养基 1、配制500mlYEB液体培养基：先称取2.5g Beef extract （牛肉浸膏）;2.5g Peptone （蛋白胨）; 0.5g Yeast extract （酵母提取物）; 2.5g Sucrose （蔗糖）; 2g MgSO4.7H2O将上述药品置于500ml三角瓶中，用量筒称取450ml蒸馏水将其溶解混匀，然后再定容至500ml，用NaOH调pH=7.4。 2、灭菌：将盛有500ml 培养基的三角瓶封口，在三角瓶表面写清培养基名称，用高压灭菌锅进行灭菌。 3、抗生素的加入：高压灭菌后，待培养基温度降到50-60 C时（手可触摸）加入已经过滤好的抗生素（100用/ml kan+50⑷/ml Str+ 50旧/ml rif ），以免温度过高导致抗生素失效。 4 、分装：将培养基分别分装到试管和三角瓶中，每个试管中分装5ml，分装12个试管。每个三角瓶中倒入35ml，共12个三角瓶。 5、分装好后，封口备用。第三组配制MS液体培养基 1、配制500mlMS液体培养基：先在500ml三角瓶中加入400ml蒸馏水，称取2.15gMS 粉置于蒸馏水中，搅拌均匀；再向其中加入5ml 100倍Fe盐浓缩液；5ml100倍肌醇浓缩液；5ml有机溶液的混合液，然后混匀定容至500ml,用NaOH 调pH=5.8。

园艺

《园艺植物栽培学》模拟试题一一、名词解释（每个2分，共20分）叶幕疏剪顶端优势层积处理有效积温果树混合芽芽的异质性单性结实嫁接苗二、填空（每空0.5分，共15分） 1、按食用部分分类蔬菜可分为——、——、——、——； 2、蔬菜和花卉的生命周期分为——、——、——； 3、园艺植物种子播种方式有——、——、——； 4、园艺植物根系分为——和——两大类； 5、影响园艺植物种子休眠的原因主要有——和——的因素，树体休眠时期分——、——、——； 6、苹果等落叶果树一年内营养分配中心，按物候期可分为四个，即——、——、——、——； 7、海拔高度的变化，引起——和——有规律的变化； 8、以仁果类为例，花芽分化的一般过程分为——、——、——、——等几个阶段； 9、果树枝条按性质分为——和——； 10、从温度的角度看，“南树北移”的主要限制因子是——，而“北树南移”除了考虑——，还应考虑——。三、判断（正确的打√，错误的打×，每题1分，共10分） 1、蔬菜除了单子叶、双子叶植物外，还包括真菌门的植物。 2、仁果类的果树包括苹果、梨树、桃树等。 3、甘薯、豆薯、马玲薯、菊芋等都是食用地下块根。 4、剑兰、贝母兰、蝴蝶兰都属西洋兰花。 5、石榴、苹果、梨等都是落叶果树。 6、蚕豆、四季豆、豇豆都是豆科植物。 7、长日照植物多分布在热带和亚热带，短日照植物多分布在温带。8、先花后叶的梅花，其开花需要的温度比叶芽萌发的温度高。9、多年生宿根草花包括一串红、菊花、月季等。10、在栽培和生产葱黄、豆芽菜时必须进行遮光，主要是由于它们都属于短日性植物。四、简答（每题5分，共40分） 1、蔬菜按农业生物学分类，可以分为哪十一类？试分别列举各代表种至少2种。 2、了解植物根系分布范围与活动高峰对施肥技术有何意义？试举例说明。 3、自根繁殖的特点。 4、影响园艺植物光合率的因素有哪些？它们是如何影响？ 5、影响园艺植物嫁接成活的内、外因子。 6、引起种子休眠的原因是什么？ 7、园艺植物壮苗条件及量度指标有哪些？ 8、影响果实品质的因素。五·论述（15分）1、果树的生命周期可分为几个阶段？各阶段特点及控制途径是什么？2、制定园艺植物扦插繁殖的技术方案。（从整地到出圃）园艺植物栽培学摸拟题二一、词解释（每个2分，共20分）定芽垂直优势芽的早熟性茎源根系苗圃蔬菜树冠层性无土栽培春化作用实生苗二、填空（每空0.5分，共15分） 1、瓠瓜类的蔬菜包括——、——、——。2 、蔷薇科的果树包括——、——、——。3、园艺植物地上茎的变态有——、——、——。4、园艺植物常见的芽接方法有——、——、——。5、园艺植物无性繁殖常见的方法有——、——、——。 6、以仁果类为例，花芽分化的一般过程分为——、——等几个阶段。 7、直根系分为——、——和——三大类。 8、多年生宿根草花有——、——、——。9、球根类花卉有——、——、——。10、依茎的生长习性可分为——、——。 11、按果实结构可分为——、——。三、判断（正确的打√，错误的打×，每题1分，共10分） 1、果树植物除了被子、裸子植物外，还包括真菌门的植物。 2、核果类的果树包括苹果、杏树、桃树等。 3、马玲薯、菊芋等都是食用地下块茎。 4、瓜叶菊、一串红、月季、杜鹃为木本花卉。 5、柑桔、柠檬在植物学分类中为芸香科植物。 6、龟背竹、文竹、康乃馨、月季、荷花都为切花花卉。 7、水仙、郁金香、唐草蒲都为鳞茎类草花。 8、南瓜、冬瓜、丝瓜、番茄都为茄果类蔬菜。 9、园艺植物无性繁殖的方式有组织培养、扦插、嫁接等。10常见的短日性植物一品红、菊花，在栽培中都需要遮光。四简答（每题5分，共40分）1、果树栽培学分类，可以分为哪两大类，哪十三小类？试分别列举各代表种至少2种。2、影响园艺植物扦插成活的因子。3、比较实生根系与茎源根系的特点。4、何为光周期现象？它在园艺植物栽培上有何意义？

植物基因工程真题资料

植物基因工程真题(2011-2013) 一、名词解释 1. Southern blotting：是指通过吸附或电泳方法将经凝胶电泳分离的大分子物质从胶上转移到固相载体上，再与特定的探针反应从而达到检测或鉴定这些大分子物质的过程。 2. cis-acting elemen t顺式作用元件，存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列，包括启动子、增强子、调控序列和可诱导元件等。它们的作用是参与基因表达的调控，本身不编码任何蛋白质，仅仅提供一个作用位点，要与反式作用因子相互作用而起作用。 3. subcloing: 4. Gene libray 5. Yeast Two-Hybrid Assays: 6. qRT-PCR 7. Shuttle plasmid vector 8. insert in activati on 9. cDNA library 10. RNAi 11. Gene kn ockout 12. Tran sducti on and tran sfect ion 13. DNA probe 14. En zyme-li nked immuno sorbe nt assay 15. Tran spositi onal recomb in ati on 16. EST

17. Fluoresce nee in situ hybridizati on 18. q-per 19. SNP 1. Per 反应原理和步骤；基本反应过程有哪些；反应体系与反应条件？简要介绍温度和时间设臵间的关系? PCR 反应原理：DNA 的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链 DNA 在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在 DNA 聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现， DNA 在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制 DNA 的变性和复性，加入设计引物， DNA 聚合酶、dNTP 就可以完成特定基因的体外复制。步骤：由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ①模板DNA 的变性：模板DNA 经加热至（90-96C ）左右一定时间后，使模板DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链 DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA 与引物的退火（复性）：模板DNA 经加热变性成单链后，温度降至（ 25-65C ）左右，引物与模板 DNA 单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA 模板--引物结合物在（70-75C ）、DNA 聚合酶（如TaqDNA 聚合酶）的作用下，以 dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板 DNA 链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的？半保留复制链？，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2?4分钟，2?3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。标准的反应体系： 10 X 扩增缓冲液 4种dNTP 混合物引物模板DNA Taq DNA 聚合酶 Mg2+ 加双或三烝水至 5ul 各 200mol/L 各 10?100pmol 0.1 ?2 ig 1?2 U 1.5?2.0mmol/L 50 il 反应条件：为温度、时间和循环次数。温度和时间设臵间的关系：基于PCR 原理三步骤而设臵变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链 DNA 在90?95 C 变性，再迅速冷却至 40?60 C,引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至 70?75 C,在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因（长度为100?300bp 时）可采用二温度点法，除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94 C 变性，65 C 左右退火与延伸（此温度Taq DNA 酶仍有较高的催化活性）。 ① 变性温度与时间：变性温度低，解链不完全是导致 PCR 失败的最主要原因。一般情况下，93 C ?94 C lmi 足以使模板DNA 变性，若低于93 C 则需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。此步若不能使靶基因模板或致PCR 失败。 ② 退火(复性)温度与时间：退火温度是影响PCR 特异性的较重要因素。变性后温度快速简单题 PCR 产物完全变性，就会导