羊的胚胎移植.doc
羊的胚胎移植
一、胚胎移植概述
二、胚胎移植原理
三、胚胎移植技术程序
一、胚胎移植概述
1.胚胎移植的发展历史
2.胚胎生物技术的研究意义及其在畜牧生产中的应用
3.胚胎移植目前存在的问题
4.影响胚胎移植的主要因素
5.胚胎移植的经济效益
6.胚胎移植的发展前景
1.1国外胚胎移植发展史
George是世界上第一个提出动物胚胎移植的人。1890年4月，Walter Heape用兔作为实验动物，成功地获得了世界上第一个动物胚胎移植后代。Heape兔胚胎移植的成功，极大的影响着繁殖生物学和畜牧业的发展。1900年，Heape的杰出接班人FHA Marshall和John Hammond总结了他的主要工作内容，提出了哺乳动物性季节的概念，也就是现在所说的发情周期。1911-1913年，奥地利维也纳的Biedl 等进行了兔的胚胎移植实验，但由于战争，直到1922年才报道了其研究结果。虽然他们做了70多个实验，但由于把输卵管的胚胎移植到子宫，结果只有一只受体兔妊娠，这充分证明了胚胎和受体的同步性是非常重要的。1932年和1933年，Warwick,Berry和Horlache第
一次把胚胎移植技术用在绵羊和山羊上，Dr. Berry也因此成为了第一个国际胚胎移植协会先驱奖的获得者。1948年，张明觉用超数排卵技术从2只母兔获得88枚受精卵，给7只受体母兔移植，成功地产出76只小兔，这次试验的成功具有划时代的意义。1950年12月19日，33岁的美国人Elwyn Willed成功地获得了世界上第一头胚胎移植牛犊。60年代初，全部采用的是手术回收胚胎和移植，1964年Mutter 等和1965年Sugie相继报道了非手术移植胚胎获得成功。70年代中期，牛的非手术移植完全取代了手术移植. 1974年，成立了国际胚胎移植协会(IETS )，随后相继成立了美国胚胎移植协会、加拿大胚胎移植协会、欧洲胚胎移植协会
1.2 国内胚胎移植发展史
我国的胚胎移植研究起步较晚，于20世纪70年代初才开始。1973年首先在家兔上获得成功。1974年，中科院遗传所在绵羊胚胎移植上取得成功。1976年郭志勤、谭丽玲等在家兔胚胎和绵羊胚胎低温(100C)保持1天和10天后移植成功。手术法和非手术法牛胚胎移植在1978年和1980年也相继成功。1980年中国农业科学院畜牧所在绵羊胚胎超低温保存后移植产羔。20世纪80年代，胚胎移植进入了实验阶段，掀起了全国的研究高潮，20几个省近30个单位相继开展了胚胎移植研究工作。20世纪90年代初期，我国的胚胎移植工作逐渐进入了生产应用初始阶段。生产应用比较好的地区主要是内蒙古、新疆和黑龙江、北京
1.3 羊的胚胎移植发展历史
羊胚胎移植的商业化应用已有近40年的历史。在国际上，胚胎移植以牛的比例最大，其次为绵羊和山羊，其它家畜和动物胚胎移植(猪、鹿、马等)的研究相对较少，但近些年来也逐渐成为一个比较热的研究方向。在国内，羊的胚胎移植起步较发达国家要晚一些，近十几年来，才逐渐推广开来，前几年由于波尔山羊的大量引进而使山羊的胚胎移植研究也相对多了起来。全国二十多个省进行了波尔山羊的快繁技术项目的实施。2003年我国共生产波尔山羊、良种肉用绵羊胚胎40000枚左右，移植受体30000只以上。
2.胚胎生物技术的研究意义及其在畜牧生产中的应用
（1）超数排卵技术能充分利用优秀种母畜的繁殖潜力，几十倍或成百倍地提高母畜的繁殖效率和后代的增长速度。
（2）克隆技术可实现同卵双生、同卵多生动物或无性繁殖后代，快速增加良种动物的数量，或为育种提供材料。
（3）可使优秀种畜遗传资源得到充分利用，加速育种速度和畜牧良种化进程。
(4）能用胚胎代替活畜运输，可在世界范围内实现品种交流，节约运输费用，减少疫病传播。
（5）用于建立胚胎库或基因库，使畜禽良种、珍稀物种(基因)能长期保存，对利用、保存优良基因或拯救濒危灭绝动物具有重大意义。
（6）可用于治疗动物和人类的不育。如：体外受精技术，特别
是显微受精技术。
3.胚胎移植目前存在的问题
（1）胚胎来源限制了NT的效率和实际应用
（2）缺乏熟练操作技术人员及我国优秀畜种比例低
（3）ET费用高，人力和时间耗费大，条件严格制约了其推广应用
（4）胚胎冷冻保存任存在很多问题
（5）胚胎采集和移植主要采用手术法的畜禽易造成粘连，受体重复使用受限制
（6）超排效果不够稳定、移植成功率低、超排效果不够稳定4.影响胚胎移植的主要因素
（1）超排技术：超数排卵是胚胎移植的关键技术之一，可以为胚胎移植受体提供优质、丰富的胚源，保证优良母羊发挥最大的繁殖潜能。但影响超排的因素也很多，如超排使用的药物种类，来源，生产厂家，使用剂量，操作程序等
（2）移植胚胎的质量：胚胎质量的好坏是胚胎移植能否成功的关键因素。通过胚胎鉴定，要选择具有形态结构完整紧凑、轮廓清楚、呈球形、分裂球大小均匀、色调和透明度适中及无附着的细胞和液泡等特征的一级（A 级）、或二级（B 级）胚胎进行移植。
（3）供体、胚胎与受体的同期化程度：供、受体之间的子宫内膜要与胚胎的发育相同步，这是胚胎从体外培养环境到体内并发生妊娠必须具备的重要条件之一。这就要求供体与受体在发情时间上要同
期，或移植的胚胎日龄与受体发情时间是同步，一般供、受体发情同步差为24h以内最理想。同步差越小，越有利于胚胎的发育，移植成功率越大
（4）移植胚胎的数目：一般认为，妊娠率与移植高质量的胚胎数成正相关，移植1枚、2 枚和3 枚胚胎受体的妊娠率差异不显著，但产羔率却依次增加。也有研究报道，当移植胚胎数超过 6 枚时，妊娠率反而下降。据研究单侧移植: 2-3 枚效果最佳，进行大规模的胚胎移植时，还要考虑受体羊的体况、产羔时繁重的接羔任务及产后受体羊的哺乳能力等。
（5）操作技术：胚胎移植的每个操作环节在实际操作中都十分复杂，都直接影响胚胎移植的成败。尤其手术操作要求熟练、稳重、轻巧、速度适宜。向宫腔内注入移植液和胚胎时速度不能过快，否则胚胎会随移植液进入输卵管而发生异位妊娠；如果速度太慢，子宫、输卵管等暴露于空气时间过长，增加污染率，同时也增加了胚胎的损伤率。术者手、臂、手术器械等对子宫的强烈刺激，对输卵管进行强拉硬拽都会产生不良影响
（6）其它：受体本身的黄体发育与孕酮含量、解冻剂与脱防冻剂的类型、胚胎移植的季节、供体年龄及营养状况等因素都不同程度影响胚胎移植的成功
5.胚胎移植的经济效益
胚胎移植是一个技术过程复杂，各个环节环环相扣，任何一个不能出现失误的系统工程。影响胚胎移植成功率的因素很多，同时，其
运作成本较高。这使其应用中存在经济效益上的高风险。如果不是基于急需扩群、供体高经济价值、育种目的，一般尽量采用自然繁殖。在特殊情况下，如供种初始阶段，少量优秀个体的扩增，胚胎移植可创造较好的经济效益。
6.胚胎移植的发展前景
胚胎移植技术虽然已较成熟，但对不同种属、不同品种和不同个体的动物如何改善超排效果，简化技术操作过程，提高移植妊娠率方面还有很多工作要做。畜牧业的发展和动物胚胎工程技术研究的深入为胚胎移植技术提供了广阔的市场和美好的前景。
绵羊胚胎移植技术的研究已经逐步由试验研究向商业化生产阶段转变。这一技术在生产中的广泛应用，充分发挥了优良绵羊品种的遗传优势，较快地实现在短时间内提高绵羊的良种化程度，不仅促进养羊业的发展，也为当地经济繁荣带来广阔前景。对绵羊胚胎移植产业化进行研究，必将对肉羊新品种的引进和肉羊生产开发产生积极的推动作用。。各种胚胎工程技术的研究和发展都需要胚胎移植技术作为必要的技术手段，所以动物胚胎移植技术的应用前景十分广泛
第二节：胚胎移植的原理
1. 胚胎移植的生理学基础
2. 胚胎移植的基本原则
1. 胚胎移植的生理学基础
1.1 同种动物的供、受体的生殖器官的生理变化是相同的，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。
1.2 早期胚胎在一定时间内处于游离状态，为胚胎的收集提供了可能。
1.3 受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能。
1.4 供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受任何影响
2.胚胎移植的基本原则
2.1. 胚胎移植前后所处环境的一致性：
⑴是供体和受体种属上的一致性。即二者属于同一物种，但这并不排斥种属不同但在进化史上血缘关系较近、生理和解剖特点相似个体之间胚胎移植成功的可能性。
⑵是生理上的一致性。即受体母畜和供体母畜在发情时间上的同期性。一般相差不超过24h，否则移植成功率显著下降。
⑶是胚胎收集和移植部位的一致性。即从供体输卵管内收集到的胚胎应该移植到受体的输卵管内，从供体子宫内收集到的胚胎应该移植到受体的子宫内。
2.2. 胚胎发育的期限：从生理学的角度讲，胚胎收集和移植的期限不能超过周期黄体的寿命，最迟要在周期黄体退化之前数日以及胚胎附植之前进行。因此，胚胎收集多在发情配种后的3～8天内进行，受体在相同的时间内接受胚胎移植。
2.3. 胚胎的质量。在胚胎移植的操作过程中，胚胎不应当受到任何不良因素(物理的、化学的、生物的)的影响，移植的胚胎须经过鉴定
确认是发育正常的.
第三节：胚胎移植技术程序
1. 供体和受体的选择
2. 同期发情和超数排卵处理
3. 供体母畜的配种
4. 胚胎的收集
5. 胚胎的检查
6.胚胎的保存与培养
7.胚胎的移植
8.供体和受体的术后观察
1.供体与受体的选择
供体羊：选择经济价值较高，应以品种优良、生产性能好；遗传性能稳定、谱系清楚；体质健壮、繁殖机能旺盛，无遗传病、生殖道疾病和传染性疾病。年龄在2.5~6岁以内为宜；产羔历史清楚、性周期正常；产羔60天以上，经观察至少有两个以上正常发情周期的母羊。与之交配的种公羊要求：谱系清楚，检疫合格，遗传性稳定，生产性能优良，符合本品种特征，精液品质良好。
受体羊：繁殖性能良好、发情周期正常、无繁殖机能疾病，经检疫无传染疾病，健康、膘情在7成以上；年龄在1.5--6岁之间；经观察有两个正常发情周期的母羊。
2.同期发情和超数排卵处理
绵羊同期发情(synchronization of estrus)是利用某些外源激素人
为地控制并调整一群母羊发情周期的过程。
其药物机理一是对群体母羊同时使用某种激素，抑制卵巢上卵泡的生长发育，经过一定的时间后停药，使卵巢机能恢复正常，引起同期发情。其实质是延长了发情周期，推迟了发情期。二是使用性质完全不同的另一种激素，抑制黄体，加速其消退，缩短黄体期，为卵泡期提前到来创造条件。黄体退化将导致母畜发情。其实质是缩短了发情周期，使发情期提前到来。
主要方法有：PG二次注射法、CIDR+PG法、MAP（甲羟孕酮）法.通常使用氟孕酮阴道海棉栓埋植或埋植CIDR，被认为是控制母羊同期发情最可靠、最准确的方法。
超数排卵（superovulation）：是在母羊发情周期的适当时间，注射外源促性腺激素，使卵巢比在自然状态下有更多的卵泡发育并排卵的技术，简称超排。主要应用于牛、羊，效果明显，对于多胎的猪意义不大，母马则很难产生反应。应用超排技术可使羊每次排卵由1-4个增加到10-20个或者更多。作用：发挥母畜优良繁殖潜力；促进家畜改良速度，加快遗传进展。常用的激素有FSH、LH、PMSG、hcG、PGF2α、PGc和孕激素等。
影响超排效果的因素
造成超排效果(获卵率和可用的胚胎数) 不稳定的因素主要有两大类:一类是动物因素,包括个体和遗传的差异、生理和营养状态、开始超排的日期、季节及其它影响动物的环境因素;另一类是药物因素,包括激素的半衰期、激素制剂中的FSH/ LH 比例、给药途径、剂量
和频率等
常用的超排方案：（1）FSH法：FSH+PG法、CIDR+FSH+PG等（2）PMSG法：PMSG+hcG或PG研究表明，PMSG超排后适时给予APMSG，可显著改善羊卵巢反应，增加可用胚胎数(武浩，1997)。（3）FSH预处理. Rejamahendran等在发情周期的第3d和第4d给予2.5 mg FSH作预处理，结果比正常FSH程序回收到的卵子多4枚(P>0. 05)，每头母牛回收的优质胚胎增加1.6枚。但试验表明排卵数并未提高(Lussier, 1989) 。
目前羊超排多用FSH多次注射法，超排效果稳定，一般不会出现卵巢囊肿和持续发情等现象，但多次注射费人、费力，而且易引起剂量和时间的误差。而PMSG使用方便，仅需注射1次，价格相对低廉，对动物刺激性小。然而超排后残余的PMSG会导致第二次排卵波的出现，使超排个体往往存在较大的卵泡和一部分退化黄体，这些大卵泡的存在会引起体内雌激素水平增高，从而对卵子成熟、受精和胚胎的发育产生不利影响。故一般不采用PMSG对家畜进行超排处理.
由于PMSG的半衰期较长，可以弥补FSH作用时间短的影响，PMSG不仅具有FSH的作用，而且也具有LH(促黄体素)的作用，由此通过FSH和PMSG的综合作用可以互取FSH和PMSG作用的方法以取得更好的试验结果(刘忠华，贺桂馨，李孝娟等，2001)，以对胚胎移植等工作做好良好的铺垫，但是应该注意实际应用中由于其他的超排因素所产生的影响，所以对于FSH和PMSG的半衰期应该认真
掌握，从而得到令人更加满意的试验结果。有人采取PMSG和FSH 相结合的方法，用PMSG代替部分FSH进行超排处理。第1次注射FSH的同时，加注PMSG200IU显著超过了单纯使用FSH处理(岳奎忠，于元松，2000) .Pintado等(1998)用PMSG替代部分FSH，获得了和单纯使用FSH一样数量的可用胚，大大降低了超排的成本(杨梅，王旭光，施巧婷，2003).
应用同一种超排方法，不同的个体之间超排结果差异较大，除了个体本身的因素外，激素的应用也起着很大的作用。激素剂量过大，卵巢上发育的卵泡数和排卵数量过多，会导致卵巢体积的异常增大和卵子接受过程的机械障碍，经输卵管伞接收到的卵子数量却有限。剂量不足，则达不到预期的超排效果。杨梅等(2003)，桑润滋等(2003)等多人对激素的最佳剂量进行了研究，但由于激素的生产厂家、生产批号不同，供体的状况也有差别，因此不能得到统一的标准。Moor 等(1984).提出，激素制剂中FSH/ LH的比例在刺激卵巢反应中起着重要作用。Amstrong等(1984)用FSH / LH比例最低的FSH制剂对绵羊和山羊进行超排，结果超排率和胚胎产量提高。激素注射途径的不同也影响着供体的超排反应。
贵州大学羊超排方案流程
发情周期内任意一天阴道埋CIDR 记为第1d
第10d CIDR
第16d、17d、18d，早晚分别注射FSH（间隔12h），剂量逐步
递减
第19d取CIDR FSH
24-48h记为0d
第4d注射
第6d
3.供体母畜的配种
超数排卵的母羊可以使用自然交配或人工授精配种，人工授精胚胎可用率略低于自然交配，一般建议以自然交配为好，在种公羊不够的条件下，可以采用采集鲜精进行人工授精，配种前最好进行精液品质检查，对于精液活力差、浓度太稀的种公羊不建议使用。。自然交配以试情发情后配2次，每次间隔12h，为保险起见，可以配种至不接受爬跨为止，每次配种完成后要仔细检查是否交配成功。人工授精要严格按照操作规程进行，一般每只羊输0.2ml，无菌操作很关键，每只羊输2次，每次间隔12h，也可以输精至不接受爬跨为止。在配种时注射半支A3有助于卵母细胞集中排出受精，可提高胚胎发育的同期率。
4.胚胎的收集
1.胚胎的收集是指用冲卵液将胚胎从生殖道冲出，收集在器皿中的过程。
2.冲卵液：现在多采用PBS、Brinster‘s medium-3、SOF、Whitten’s medium、Ham‘s F-10及TCM199等，在使用时一般需含1%~ 5% 的犊牛血清或0.3%~1%的牛血清白蛋白。
3.收集时间：以母羊接受爬跨发情的当天作为发情的第0d，在第6d进行胚胎移植在胚胎收集，可获得较多的致密桑葚胚，第7d多为囊胚或扩张囊胚、孵化囊胚。第5d以16-32细胞期、桑葚胚为主，一般第6d胚胎移植受胎率高于其他天。收集时间不应早于排卵后的第一天即最早要发生第一卵裂之后，否则不易辨别是卵子是否受精。一般在配种后3~8天。
4.收集方法：手术法和非手术法
手术法收集：⑴输卵管冲胚：供体羊发情后2-3天，就可采用输卵管冲胚法，分顺向冲胚和逆向冲胚；
⑵子宫角冲胚：供体羊发情后6-7.5天，采用子宫法采卵。非手术法收集：主要用于大家畜在配种后6-8天进行。分二路法和三路法。
手术法采胚：输卵管冲胚：将冲胚管一端由输卵管伞部喇叭口插入约2-3cm 深处（打活结或用钝圆的夹子固定），另一侧接集卵皿。用注射器吸取37℃的冲卵液5-19ml，在子宫角靠近输卵管的部位，将针头朝输卵管方向扎入，一只手的手指在针头后方捏紧子宫角，另
一只手推注射器，冲卵液由宫管结合部流入输卵管，经输卵管流入集卵皿。此法胚胎回收率高，冲卵液用量少，检卵省时间。但容易造成输卵管及伞部粘连。子宫冲胚：将子宫暴露于创口表面后，用套有胶管的肠钳夹在子宫角分叉处，注射器吸入冲卵液20-30ml（一侧用50-60ml），冲卵针头（钝形）从子宫角尖端插入，当确认针头在管腔内，进退通畅时，将硅胶管连接于注射器上，推注冲卵液。当子宫角膨胀时，将回收卵针头从肠钳基部的上迅速扎入，冲卵液经硅胶管收集于集卵皿内，最后用两手拇指和食指将子宫捋一遍。另一侧子宫角用同样的方法冲胚。进针时避免损伤血管，推注冲卵液时力量和速度不宜太快。子宫法对输卵管损伤很小，但回收率较输卵管法低，用液较多，检卵时用的时间较多。
非手术法采胚：常用于大家畜的胚胎收集如牛的非手术法收集胚胎，将冲洗液通过内管注入子宫角内，然后到处冲洗液，外端前段连接气囊，当将冲卵器插入子宫内时，充气使气囊胀大，堵住子宫经内口以免冲洗液经子宫颈流出。只能当胚胎进入子宫角后进行。
5.胚胎的检查
收集到的冲洗液，须静置，带胚胎下沉后，移去上层液，在放解剖镜下，检查胚胎数量和发育情况，开始捡胚。将胚胎移植培养液中。
胚胎鉴定：根据透明带、胚胎细胞、发育阶段及细胞在透明带中的比例确定胚胎级别。主要分：A、B、C、D四级。A、B级胚胎可以冷冻保存。
6.胚胎保存
保存是使胚胎在体外一定条件下（降温）停止发育，延长其在体外生存时间，当需要时，升温后可进行移植
胚胎常规保存：采集到的胚胎，如果不能立即移植给受体羊，可经短期或长期保存。生产上进行鲜胚移植时，一般上午采集的胚胎，下午移植，或将胚胎净化后，在胚胎保存液（国产或进口）中室温条件下短期培养4-5 天对胚胎的存活影响不大。据报导，将绵羊胚胎在0-13℃、保存10 天仍然能移植成功（谭丽玲，1978），在冰箱中4-6℃. 的条件下保存- 天，胚胎存活率也很理想（丁红，1995）。
胚胎的冷冻保存：目前应用胚胎冷冻技术已经能够长期保存绵羊胚胎，并向着实用易行的方向发展。
常用的绵羊胚胎冷冻方法有：
⑴慢速冷冻
⑵快速冷冻法
⑶一步细管法
⑷玻璃化冷冻
⑸三步平衡冷冻法
7.胚胎的移植
移植时间：鲜胚移植供体羊与受体羊要求发情同步，即供体羊和受体羊同一天发情供体羊配种，受体羊发情待移植，鲜胚移植待发情后48—60小时进行手术移植（早则胚胎细胞分裂不明显、卵巢黄体出血多易造成粘连；迟则胚胎进入子宫角），供、受体羊同步率不能超过±12小时，否则影响受胎率。
受体羊的手术部位、方法与取卵时相同。移植分为输卵管移植和子宫移植两种。移植部位：一般把受精卵和桑椹胚移植到输卵管，把致密桑椹胚阶段以后的胚胎移植到子宫角前1/3处。每只受体移植胚胎数鲜胚1-2 枚，解冻胚3-4 枚，观察受体卵，把胚胎移入有黄体一侧的子宫角
（1）手术法移植：在受体腹部作一切口，找到排卵一侧的卵巢并观察黄体发育情况，用注射器或移植管将胚胎注入到同侧子宫角上端或输卵管壶腹部内（以胚胎发育阶段而定）只需吸取少量的冲洗液连同胚胎一起注入
（2）非手术移植：主要对于大家畜如牛的非手术移植，将一只手深入直肠，先检查黄体位于哪一侧和发育情况，后握住子宫颈（与人工受精操作一样），另一只手将移植管插入与黄体同侧的子宫角内，注入胚胎。
8.供受体的护理与观察
（1）术后供受体的抗炎处理
（2）健康状况检查
（3）返情状况的检查
（4）妊娠检查及妊娠确定
术后供、受体羊放人羊舍后，观察24 h。24 h后可随群放牧，细心照料。供体羊待9 d后用PG进行消换处理，每只羊2 mL，发情后配种。受体羊对复情的进行配种，对未复情的确定妊娠后，除了加强饲养管理和护理外，避免应激，做好保胎防流工作。
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[10]孙美玉张国庭陈静波霍飞等，影响农牧区绵羊胚胎移植效果因素分析[J]，草食家畜，2011.6（2）：27-30
不同品种肉羊胚胎移植方法比较
繁 殖 育 种中国畜牧兽医文摘 2012年 28卷 第3期 我国自20世纪70年代开始应用胚胎移植技术至今，胚胎移植技术在各类家畜改良、加速繁殖及保种方面发挥了重大作用。引进国外优良品种对本地品种进行改良，胚胎移植是一种高效，快速的手段。随着国民生活条件的提高，对肉类产品的需求日益加大，为了提高肉羊的品质和生产水平，我国自20世纪80年代开始从国外多次引进优良肉用绵羊，对国内品种进行改良。 内蒙古是国内畜牧业产业大区，近年来为了满足市场对羊肉的需求和农牧民对优秀种畜的需求，不断从国外引进优良品种，采用各类现代生物技术对其进行快速扩繁，以满足各类需求。本实验采用胚胎移植技术对从国外引进的无角道赛特、德国美利奴和白萨福克等羊进行子宫角冲胚，对不同引进优良品种在胚胎移植繁殖方式下的繁殖能力进行比较。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物 供体羊：德国美利奴20只、白萨福克20只、无角道赛特40只；受体羊：蒙古羊。均选自内蒙古鄂尔多斯市万通现代农牧业养殖园区。德国美利奴、白萨福克、无角道赛特均为纯进口品种，蒙古羊购自乌珠穆沁。 1.1.2 药品、器材和仪器 药品：阴道栓、PG、FSH、LH、麻药、PBS缓冲液、保存液、酒精、新洁尔灭、石蜡油、孕马血清促性腺激素。 器材、仪器：白纱布、手术刀、镊子、大头针、三棱针、三通管、缝合线、刮毛刀、注射器、肥皂、培养皿、移液枪、枪头；显微镜、恒温箱、恒温水浴锅、烘干箱、高压灭菌锅、净水仪、数码照相机、恒温台。1.2 方法 对供体羊做胚胎移植前期同期发情和超排处理，并根据发情情况进行配种，对受体做同期发情处理，并做与供体羊相应的标记。 供体羊发情后第6～7 d采卵用子宫角冲胚方法。供体羊仰卧在手术架上，固定四肢。肌注麻药进行麻醉。 按《中华人民共和国农业行业标准》（绵羊胚胎移植技术形成）的中胚胎采集方法进行手术、冲胚和术后处理工作。 冲出的液体拿到显微镜下进行检胚操作。将各个羊的胚胎收集回来以后，仔细检验，以免把胚胎随冲卵液一起倒掉。拣出的胚胎放到保存液当中，置于恒温板上，再根据胚胎大小、形态、透明带折光性、均匀度以及卵裂球大小进行鉴定和分级。对每个羊冲胚数、可用胚数、黄体发育情况等进行详细的记录，以便进行比对。 将鉴定好的胚胎标号，移进与供体羊发情时间相对应的受体羊子宫角处。移植部位与供体羊相一致，移植方法相似。移植后用药物进行处理，缝合伤口。 1.3 数据处理 用SPSS13.0生物统计软件对数据进行分析。采用均数比较当中的单向方差分析（One-way ANOVA）进行分析。 2 结果与分析 2.1 不同品种肉用绵羊冲胚数比较 不同品种肉羊供体冲胚数的结果详见表1。 由表1可看出，德国美利奴冲胚数平均值高于白萨福克和无角道赛特，其冲胚最大值也比白萨福克和道赛特高，高达22枚。通过以上结果，对其进行进一步的差异显著性分析，结果见表2。 不同品种肉羊胚胎移植方法比较 乌力吉1 李春生1 丹 巴1 陶萨茹拉1 黄春花2 萨仁高娃1 （1.内蒙古鄂尔多斯市市家畜改良工作站，东胜 017000； 2.内蒙古天和荷斯坦牧业有限公司，呼和浩特 010010） [摘 要]研究目的：研究不同品种肉羊在胚胎移植方法下的繁殖能力。方法：采用子宫角冲胚方法，对德国美利奴、无 角道赛特和白萨福克进行胚胎移植手术。结果：通过对冲胚情况比较表明，德国美利奴的冲胚数和可用胚数都最高，最高冲 胚数达22枚，最高可用胚数达18枚。结论：通过比较显示，德国美利奴和无角道赛特在冲胚数和可用胚数上都存在显著差异（P<0.05）；德国美利奴与白萨福克羊在冲胚上和可用胚上都无显著差（P>0.05）。 [关键词] 肉用绵羊 胚胎移植 冲胚效果 表1 不同品种肉用绵羊冲胚情况描述性统计量冲胚数 ?49?
奶牛胚胎移植技术
奶牛胚胎移植技术 上海交通大学农业与生物学院 朱淑文 一、概述 牛胚胎移植的商业化应用开始于七十年代初期。当时，必须通过手术方法才能采集胚胎，由于奶牛的乳房影响手术的顺利进行，手术后往往还会影响奶牛以后的繁殖性能，因此，胚胎移植主要在肉牛中应用。1976年，一些研究小组报道了应用导管高效采集胚胎的非手术方法。随后，胚胎移植在奶牛中的应用得到了飞速发展。1974年，第一头胚胎移植登记荷斯坦奶牛在美国出生。七十年代后期，胚胎移植（ET）登记荷斯坦奶牛的数量每年以100%以上的速度增长，1980年达到8298头年。进入80年代后，随着非手术采胚法和移植技术的改进以及胚胎冷冻保存技术的发展，每年（ET）登记奶牛的数量在稳步增长，至1990年达到18727头年。截止1991年，美国登记的胚胎移植荷斯坦奶牛总数量已达到142598头。目前，44%的荷斯坦优秀种公牛是由胚胎移植培育的。九十年代以来，胚胎移植在发达国家中的增长速度有所减缓，但是技术含量越来越高，例如体外受精胚胎生产技术、转基因技术以及克隆技术的应用和研究得到加强。近几年来，胚胎移植在亚洲和南美一些国家中增长速度很快。从整个世界范围来看，牛胚胎移植的增长速度仍然很快。 二、胚胎移植技术 （一）体内受精胚的移植 1 超数排卵 在常规胚胎移植技术中，获得大量可用胚胎的主要途径是超数排卵（简称超排），因此，高效率的超排技术是胚胎移植技术能否在生产中推广应用的关键。应用于奶牛的超排激素主要有PMSG（孕马血清促性腺激素）和FSH（促卵胞素）。PMSG尽管只需一次性注射，省时省力，但是半衰期过长，可以导致卵巢的过度刺激以及对排卵、受精和随后的胚胎发育产生不利的影响，因此现在一般已不采用PMSG对奶牛进行超排处理。目前广泛应用于母牛的超排激素是FSH。用于奶牛超排的商品FSH均是从屠宰家畜的脑垂体中提取的，脑垂体不但能够分泌
全面评价羊的胚胎移植效果
全面评价羊的胚胎移植效果 闫振富，辛英霞，胡月超 (河北省畜牧良种服务中心，050061) 近几年随着羊肉市场前景看好，广大养殖户的养羊热情逐 年高涨，养羊业发展迅速。而我国羊的品种又普遍存在个体小、 生长速度慢、屠宰率低、效益低下等不足。为改变这种局面。增 加养羊业的经济效益，扩大我国良种羊的覆盖面，我国先后从国 外引进波尔山羊和特可塞尔、萨福克、无角陶塞特等绵羊品种， 但是由于从国外引种手续繁杂，费用较高，周期较长，单靠进口 种羊的自然繁殖来改良本地羊，又远远不能满足我国养羊业发 展的需要。因此．羊的胚胎移植技术从试验阶段迅速发展到实 用阶段，并且取得了十分显著的效果。本文就胚胎移植的概念、 目的和意义。特别是影响羊的胚胎移植效果的因素和衡量胚胎 移植效果的指标与广大养羊同仁一同来探讨。 1 胚胎移植在畜牧业生产上的目的和意义 1．1 胚胎移植可充分发挥优秀母畜的繁殖潜力。在畜牧业生 产上实施胚胎移植的目的是使优良品质的供体母畜较快地繁衍 后代。也就是说。供体母畜只生产具有良种遗传物质的胚胎，妊 娠过程则由价值较低的受体母畜来承担。作为供体的优秀母畜 省去较长的妊娠期，缩短繁殖周期。加快繁殖速度。 1．2胚胎移植是家畜育种的重要手段。该项技术可加速品种 改良，扩大良种畜群。胚胎移植利用超数排卵技术(superovulation)，一次可从供体母畜体内获得多枚胚胎，一个情期可产生 比自然条件下更多的后代，比自然繁殖提高好多倍。胚胎移植 突出了优良母畜在育种中的意义。 1．3胚胎移植可代替活畜的引进，减少引种费用。胚胎的体外 保存和超低温冷冻技术的应用可使胚胎移植不受时间和地域的 限制。胚胎的运输可以代替种畜的国际问地区间交流，大大地 节约引种费用。胚胎的收集和保存都是经过特殊的处理。不携 带任何病原微生物，因此胚胎的交流避免了活畜进出口的检疫 工作。通过引进胚胎完全可以得到与活畜同样质量的后代。 1．4胚胎移植技术使优良家畜的“工厂化”生产变为现实。胚 胎移植采用同期发情等技术处理，使优良家畜的批量生产得以 实现，在生产中便于饲养管理、防疫灭病，给生产带来很大方便。2影响羊胚胎移植效果的因素 2．1 供体羊供体羊要选择健康无病、生殖机能正常、体型结 构较好、体型外貌符合品种要求、遗传性能稳定、对超数排卵反 应好的一岁以上、最好是自然繁殖产过一胎、具有较高育种价值 的羊只，与之交配的公羊要求符合品种特征，精液质量要好。切 忌不要为了单纯追求数量和高额的利润．无论种羊好坏都进行 胚胎移植，这样做的结果会生产出许多不合格的种羊。影响种羊 的群体质量。不但会使利润降低，信誉受损，而且这些不合格种 羊的生产和出售不能对我国羊的品种改良起到应有的作用。羊 的胚胎移植就会失去其应有的意义。
胚胎移植操作规程
1 1 范围 本标准规定了绵羊的胚胎生产和移植的供体羊的选择和饲养管理、供体羊的超数排卵及人工授精、手术冲卵技术及胚胎质量鉴定、冻胚的解冻、受体羊的选择及饲养管理、胚胎手术移植技术和妊娠受体羊的饲养管理技术。 本标准适用于秦皇岛地区绵羊的胚胎生产和移植。 2 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 DB 1303/T 098-2000 羊的人工授精技术操作规程 3 3 供体羊的选择和饲养管理 3.1 3.1 供体羊的选择 a）a）体羊品种优良、生产性能好； b）b）传性稳定、谱系清楚； c）c）体质健壮。繁殖机能正常，无遗传和传染性疾病。年龄在2岁至7岁为宜； d）d）具有畜牧部门颁发的种畜禽鉴定合格证书。 3.2 3.2 供体羊的饲养管理 3.2.1 3.2.1 保持饲养环境稳定，饲养环境卫生、干燥、棚舍温度适宜。避免应激反应。 3.2.2 3.2.2 制定合理的供体羊日粮配方，保证正常的营养平衡。 3.2.3 3.2.3 满足供体羊清洁饮水的需要。 4 4 供体羊的超数排卵及人工授精 4.1 4.1 超数排卵 4.1.1 4.1.1 超数排卵的季节和发情周期：绵羊最适超数排卵季节为9月下旬至11月上旬。绵羊的发情周期在15d—17.5d。供体母羊在超数排卵前需观察1—2个完整的发情周期。 4.1.2 4.1.2 用于超数排卵的激素选择 FSH—P（垂体促滤泡素） LH—P（垂体促黄体生成素） ICI80996（氯前列烯醇） 4.1.3 4.1.3 激素剂量（注射总量/只） FSH—P剂量（肌注）：120IU—160IU LH—P剂量：根据FSH的注射剂量，肌注100—120IU。 ICI80996：肌注0.08mg/次，注射两次/d。 4.1.4 4.1.4 超数排卵方法 FSH—P 3天注射法 以母羊发情之日作为发情周期的0d，在母羊发情周期的第13d或13.5d（周期大于17.5d的羊在第13.5d）开始，每天早：（6：00—7：00）和晚（18：00—19：00）各注射1次FSH，连续3天，递减注射。 FSH、LH用生理盐水稀释。 在第5、6次注射FSH—P时，同时肌肉注射ICI80996。 确定供体羊发情后立即注射LH。如果FSH—P未注射完供体羊已发情，停止注射FSH—P，立即注射LH。
羊的胚胎移植.doc
羊的胚胎移植 一、胚胎移植概述 二、胚胎移植原理 三、胚胎移植技术程序 一、胚胎移植概述 1.胚胎移植的发展历史 2.胚胎生物技术的研究意义及其在畜牧生产中的应用 3.胚胎移植目前存在的问题 4.影响胚胎移植的主要因素 5.胚胎移植的经济效益 6.胚胎移植的发展前景 1.1国外胚胎移植发展史 George是世界上第一个提出动物胚胎移植的人。1890年4月，Walter Heape用兔作为实验动物，成功地获得了世界上第一个动物胚胎移植后代。Heape兔胚胎移植的成功，极大的影响着繁殖生物学和畜牧业的发展。1900年，Heape的杰出接班人FHA Marshall和John Hammond总结了他的主要工作内容，提出了哺乳动物性季节的概念，也就是现在所说的发情周期。1911-1913年，奥地利维也纳的Biedl 等进行了兔的胚胎移植实验，但由于战争，直到1922年才报道了其研究结果。虽然他们做了70多个实验，但由于把输卵管的胚胎移植到子宫，结果只有一只受体兔妊娠，这充分证明了胚胎和受体的同步性是非常重要的。1932年和1933年，Warwick,Berry和Horlache第
一次把胚胎移植技术用在绵羊和山羊上，Dr. Berry也因此成为了第一个国际胚胎移植协会先驱奖的获得者。1948年，张明觉用超数排卵技术从2只母兔获得88枚受精卵，给7只受体母兔移植，成功地产出76只小兔，这次试验的成功具有划时代的意义。1950年12月19日，33岁的美国人Elwyn Willed成功地获得了世界上第一头胚胎移植牛犊。60年代初，全部采用的是手术回收胚胎和移植，1964年Mutter 等和1965年Sugie相继报道了非手术移植胚胎获得成功。70年代中期，牛的非手术移植完全取代了手术移植. 1974年，成立了国际胚胎移植协会(IETS )，随后相继成立了美国胚胎移植协会、加拿大胚胎移植协会、欧洲胚胎移植协会 1.2 国内胚胎移植发展史 我国的胚胎移植研究起步较晚，于20世纪70年代初才开始。1973年首先在家兔上获得成功。1974年，中科院遗传所在绵羊胚胎移植上取得成功。1976年郭志勤、谭丽玲等在家兔胚胎和绵羊胚胎低温(100C)保持1天和10天后移植成功。手术法和非手术法牛胚胎移植在1978年和1980年也相继成功。1980年中国农业科学院畜牧所在绵羊胚胎超低温保存后移植产羔。20世纪80年代，胚胎移植进入了实验阶段，掀起了全国的研究高潮，20几个省近30个单位相继开展了胚胎移植研究工作。20世纪90年代初期，我国的胚胎移植工作逐渐进入了生产应用初始阶段。生产应用比较好的地区主要是内蒙古、新疆和黑龙江、北京 1.3 羊的胚胎移植发展历史
胚胎移植技术应用
《动物遗传育种与繁殖专论》 课程作业 胚胎移植技术在畜牧业中的应用 姓名： 学号：
胚胎移植技术在畜牧业中的应用 畜牧业发展水平占农业的比重是衡量一个国家和地区现代化水平的重要标志，近年来，畜牧业已成为我国农业发展的重心．胚胎移植技术也称受精卵移植技术，就是将良种母畜配种后的早期胚胎取出，移植到同种的生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成为新个体，所以该项技术又被称为“借腹怀胎”。胚胎工程技术是胚胎移植技术发展到一定程度而出现的名词, 是由发育工程演变而来的。由于胚胎移植技术可最大限度的发挥优秀母畜在品种改良和育种中的作用，同时它又是体外受精、转基因、体细胞核移植等胚胎工程的基础性环节，因此，胚胎移植技术被誉为家畜繁殖技术的第二次革命。 胚胎工程技术根据其发展现状包括以下9类:胚胎移植技术;胚胎冷冻保存技术;胚胎分割技术;试管动物技术(体外受精技术);性别控制技术,即XY精子分离和胚胎性别鉴定技术;转基因动物技术;动物克隆技术(细胞核移植技术);胚胎干细胞技术;胚胎嵌合技术。目前, 前5种技术已在生产实践中得到不同程度的应用,但应用较多的是前2种技术, 其他几种技术由于设备投入成本较大、成功率较低, 尚处于实验室向生产转化阶段。 胚胎移植技术可使引进的种畜在较短时间内快速纯种繁殖，成为大群体，满足牛羊业迅猛发展的需要。同时，牛、羊业的快速发展和这种市场化发展的需求，使胚胎移植技术受到更多研究者和生产者的
高度重视，进而促进了胚胎移植技术快速发展和商业化。20世纪90年代后期，胚胎移植技术在畜牧生产中得到应用推广，同时胚胎移植技术又解决了畜牧业发展中的一些难点问题。 胚胎移植技术是继人工授精之后发展起来的繁殖高新技术, 目前已成为扩大优秀家畜遗传资源的主要手段, 有的称作MOET技术( 超数排卵与胚胎移植技术)。作为家畜育种的重要手段之一, 自20 世纪50年代初第一头胚胎移植牛在美国诞生以来, 胚胎移植技术飞速发展。据不完全统计, 全世界目前年产胚胎移植牛超过35万头, 美国、法国等发达国家每年参加后裔测定的青年公牛的80%来自胚胎移植所产的后代。20世纪80年代后期, 我国在生产中开始应用牛、羊胚胎移植技术, 近几年该技术在全国得到迅速发展。本实验室1990年奶牛新鲜胚移植妊娠率达62.2%, 达76%。在6省区规模化生产中, 绵羊和山羊的移植妊娠率在60%左右, 达76.8%。根据国际胚胎协会的统计, 20多年来,进行胚胎移植的动物数量和种类每年都在增加, 胚胎移植已经成为畜牧业中最活跃的产业。 胚胎移植技术在畜牧业发展中的作用主要体现在促进家畜的遗传改良，充分发挥优良母畜的繁殖潜力，提高繁殖效率．优良后代的增加，既取决于种公畜，也有赖于优良母畜。尤其是生产性能取决于父母双方，如果说人工授精技术的出现使公畜的繁殖潜力得到最大限度地发挥的话，那么胚移技术的出现可以使母畜的繁殖潜力得以充分发挥，从而有效促进家畜的遗传改良。更为重要的是，如果超数排卵时利用优良公畜冻精配种优良母畜(供体)，然后利用采出的胚胎进行
肉种羊胚胎移植扩繁养殖基地建设项目可行性研究报告
2000只肉用种羊胚胎移植扩繁养殖基地扩建可行性研究报告 此文档word版本下载后可任意编辑修改
目录 第一章总论 (3) 第二章项目建设的意义及必要性 (11) 第三章项目选址及建设条件 (15) 第四章建设方案 (18) 第五章环境保护及节能减排措施 (24) 第六章项目投资估算与资金来源 (26) 第七章效益分析 (28)
第一章总论 1.1 项目单位基本情况 1.1.1 概况 项目实施主体：某某市某某生物工程有限责任公司 项目服务对象：全市及周边旗县的农牧民 发展历程：某某生物工程有限责任公司，始建于2003年，公司占地16亩，建筑面积2000㎡，饲草料基地200亩。公司设董事会、理事会、监事会，下设技术服务部，经营服务部，综合管理部，是某某市第一家畜牧业产业化民营企业。内设人工采精、授精，胚胎移植、兽医防疫等多功能配套设施。公司现有员工50人，高级职称2人，中级职称4人；其中：经济师、会计师各1人。同年申请办理了相关手续证书。是我区仅有的几个手续完备，技术专业，较具规模的良种羊扩繁基地之一。原自治区党委书记储波、原政府主席杨晶，盟市各级领导曾多次到我公司视察、调研、指导工作。对我公司所取得的成绩给予充分的肯定。 公司初创时，聘请国家级胚胎移植专家张立博士为技术总顾问，同内蒙古家畜改良站、内蒙古大学、内蒙古农业大学等院校、研究机构建立了稳定的技术合作关系。引进了“多赛特、特克赛尔、萨福克”种公羊4只，种母羊16只，受体羊100只。利用“胚胎移植技术”实现良种羊的迅速扩繁。目前，公司拥有种公羊120只，种母羊508只，受体羊1000多只。几年来，累计扩繁种公羊800多只。全部投放到某某市各乡镇和周边旗县，开创了农民“以养促种，以
只肉种羊胚胎移植扩繁养殖基地扩建项目建议
2000只肉用种羊胚胎移植扩繁养殖基地扩建项目建议书
目录 第一章总论 (3) 第二章项目建设的意义及必要性 (11) 第三章项目选址及建设条件 (15) 第四章建设方案 (18) 第五章环境保护及节能减排措施 (24) 第六章项目投资估算与资金来源 (26) 第七章效益分析 (28)
第一章总论 1.1 项目单位基本情况 1.1.1 概况 项目实施主体：XX蒙丰生物工程有限责任公司 项目服务对象：全市及周边旗县的农牧民 发展历程：蒙丰生物工程有限责任公司，始建于2003年，公司占地16亩，建筑面积2000㎡，饲草料基地200亩。公司设董事会、理事会、监事会，下设技术服务部，经营服务部，综合管理部，是XX第一家畜牧业产业化民营企业。内设人工采精、授精，胚胎移植、兽医防疫等多功能配套设施。公司现有员工50人，高级职称2人，中级职称4人；其中：经济师、会计师各1人。同年申请办理了相关手续证书。是我区仅有的几个手续完备，技术专业，较具规模的良种羊扩繁基地之一。原自治区党委书记储波、原政府主席杨晶，盟市各级领导曾多次到我公司视察、调研、指导工作。对我公司所取得的成绩给予充分的肯定。 公司初创时，聘请国家级胚胎移植专家张立博士为技术总顾问，同内蒙古家畜改良站、内蒙古大学、内蒙古农业大学等院校、研究机构建立了稳定的技术合作关系。引进了“多赛特、特克赛尔、萨福克”种公羊4只，种母羊16只，受体羊100只。利用“胚胎移植技术”实现良种羊的迅速扩繁。目前，公司拥有种公羊120只，种母羊508只，受体羊1000多只。几年来，累计扩繁种公羊800多只。全部投放到XX各乡镇和周边旗县，开创了农民“以养促种，以种促
一次性使用胚胎移植导管产品技术要求weichuang
一次性使用胚胎移植导管 适用范围：与注射器配合，经阴道向子宫内转移经过体外受精(IVF)的胚胎或受精卵用。 1.1 产品型号 表1一次性使用胚胎移植导管尺寸及公差
1.2 划分说明 XXXXX –d –L XXXXX：表示胚胎移植导管（PTYZ/PTYZ1） d：一次性使用胚胎移植导管外径（F）（1F=0.333mm） L：一次性使用胚胎移植导管长度（cm） 1.3 结构组成 一次性使用胚胎移植导管结构如图1所示。PTYZ型由引导导管、移植管和可塑型的不锈钢内芯组成；PTYZ1型由引导导管、移植管和标记环组成。 引导导管管材：PTYZ-d-L为：医用聚氨酯，针座为ABS；PTYZ1-d-L为：聚醚-聚酰胺共聚物，针座为ABS，标记环：为医用硅胶。 移植管：由304不锈钢管、聚氨酯管和ABS针座组成。 可塑型的不锈钢内芯：由304不锈钢丝和ABS手柄组成。 针座和导管的连接为机械螺旋拧压方法。 PTYZ-3-23/ PTYZ-5-23
PTYZ1-3-23/ PTYZ1-5-23 图1一次性使用胚胎移植导管示意图 2.1 尺寸 一次性使用胚胎移植导管尺寸及公差应符合表1的规定。 2.2 外观 外表面应清洁无杂质，不应有加工缺陷和表面缺陷，末端圆滑、无毛刺。 2.3 物理性能 2.3.1 断裂力 管材的断裂力：直径＜1.15mm的管材最小断裂力为5N，≥1.15mm ~ ＜1.85mm 的管材最小断裂力为10N，≥1.85mm管材最小断裂力为15N。 2.3.2 标记线应清晰可见。 2.3.3 接头 2.3.3.1 移植管的管座头端与引导导管的接头应相匹配，连接后无明显摆动。 2.3.3.2 移植管的接头应符合GB/T 1962.2-2001的要求。 2.3.4 无泄漏 移植管的针座和导管连接部分应无泄漏现象。 2.3.5 耐腐蚀性：一次性使用胚胎移植导管中的不锈钢管和不锈钢内芯不应有腐蚀痕迹。 2.4 化学性能：（除金属部件外）
实习报告：动物胚胎移植技术
动物胚胎移植技术
摘要 胚胎移植又称受精卵移植，是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内冲洗出来，移植到另一头雌性动物的输卵管或是子宫内，使之继续发育成新个体的技术。 动物胚胎移植主要是通过对优良供体母畜作同期排卵处理和体内胚胎生产或体外人工授精（IVF）的方法，以大量获得优良的动物胚胎后再将其移植给普通代孕受体母牛进行快速繁殖优良动物的生物技术。胚胎移植技术主要用于快速扩大优秀种公牛和核心母牛的数量。尽管单个胚胎的生产成本较高，但由于种公牛和种母牛较高的经济价值和社会价值，以及利用胚胎移植在育种方面可以获得同胞或同卵双生牛进行后裔测定等优势，因此，该技术在种公牛的选育和优质核心母牛群的培育以及加快育种步伐方面均具有极大的优越性。 本论文将对动物胚胎技术作比较全面的阐述，使大家对动物胚胎技术有一个比较全面的认识。 关键词：供受体超数排卵同期发情胚胎回收胚胎检查胚胎移植
1.1 发情后生殖器官的孕向发育 家畜在发情后生殖器官会发生一系列变化，如：卵巢中功能性黄体的形成，孕酮的分泌和维持，子宫内膜组织的增生和分泌机能的增强，以及其他生理生化的特异现象。这些变化都为胚胎的生存和发育创造了适宜的条件，为妊娠作准备。 配种受孕后的动物其生殖系统朝着妊娠的方向继续发生变化以适应胚胎发育的需要，如黄体的持续存在以及孕酮的分泌和维持，子宫内膜的继续发育。而未受孕的动物其生殖系统会退回到发情前状态。 发情供体和受体发情周期的同期化程度前后不超过一天，否则移植成功率就会降低，甚至移植失败 因此发情后或交配刺激后雌性动物生殖器官的孕向变化是进行胚胎移植的主要生理学基础。 1.2 早期胚胎的游离状态 胚胎在发育的早期有相当一段时间是游离存在于子宫内的，和子宫黏膜没有建立紧密联系，其发育主要靠自身贮存的养分。这样，早期的胚胎容易从生殖道中取出，而且在离体情况下，可短期培养，易存活。 早期胚胎处于游离状态是能够进行胚胎移植技术的基础 1.3 子宫对早期胚胎的免疫耐受性 1.4 胚胎遗传物质的稳定性 在同一物种之内进行胚胎移植不会产生排斥现象;同时，受体对胚胎不产生遗传上的影响，不会改变新个体的遗传特性，也不会减弱起优良性状在出生后的表现程度。
胚胎移植技术的现状与展望
胚胎移植技术的现状与展望摘要：统计与分析了1991-2000年国际胚胎移植状况，结果表明胚胎移植已成为畜牧产业中最活跃的领域之一。胚移比例最大的依然是牛，其他种类的动物胚胎移植，如：绵羊、山羊、猪、马、鹿、美洲驼、羚羊等，也十分活跃。牛的胚胎移植，有几个重要指标分析结果如下：(1)供体牛的品种分布基本相同，肉牛与奶牛所占比例接近，但不同国家之间差别很大；(2)每头供体牛所得可用胚胎数在5-6枚之间；(3)鲜胚移植与冻胚移植的比例基本持平，但近年来冻胚移植的比例稍大于鲜胚移植；(4)通过IVF体外方式生产胚胎数目有所增长，目前每年大约在3-4万枚；(5)妊娠率：鲜胚移植妊娠率在60%以上，冻胚移植妊娠率在50%以上，IVF体外方式生产胚胎妊娠率在40%左右；(6)胚胎移植技术的发展状况在全世界分布不均衡，北美和欧洲胚移技术最成熟；(7)胚胎贸易有所增长。最后，对该技术存在的问题与发展前景提出了探讨和展望。 关键词：胚胎移植；牛；现状；展望 胚胎移植技术是继20世纪六七十年代人工授精之后发展起来的生物技术，是胚胎工程的重要组成技术。胚胎移植最早是1980年在兔子上实验成功的,但直到1977年才开始应用于生产,至今发达国家已经进入商业化应用阶段。在商业化应用上，牛的胚胎移植技术最成熟、占得比例最大。它是将一头良种母畜配种后形成的早期胚胎取出，移植到另一头或几头同种的、生理状态相同的母畜生殖器官的相应部位，使之继续发育成新的个体，也有入人通俗地称之为“借腹怀胎”。在一个繁殖季节里产生比自然状态下多几倍甚至十几倍的优秀后代，极大的提高了优良母畜的利用率和繁殖率。因此，胚胎移植技术在畜牧业生产中发挥着巨大的作用。 1.胚胎移植的历史回顾 1890年Heape在英国剑桥大学首次报道获得兔子胚胎移植成功[1]。20世纪30年代后开始大量研究，1951年willett首次成功地进行了牛的胚胎移植。1974年第一头胚胎移植的何斯坦奶牛在美国出生。1976年，一些研究小组报道了采用导管高效采集胚胎的非手术方法，随后胚胎移植在奶牛中的应用得到飞速发展。由于牛经济价值高，产仔数量少，用胚胎移植技术进行纯种扩群繁殖的效果好，且供受体牛均可反复使用，因此牛的胚胎移植技术已较多应用于实际生产中[2]。我国对牛胚胎移植研究起步较晚，1978牛手术法胚胎移植犊牛降生，1980年非手术法移植成功，1982年冷冻胚胎移植成功[3]。本世纪韧，我国先后开展了“万枚高产奶牛胚胎移植富民工程”项目，“奶业重大关键技术研究与产业化技术集成示范”项目，使我国的胚胎移植技术得以较快发展与推广，并逐步向产业化阶段迈进[4]。根据IETS(国际胚胎移植协会)的统计，1991年全世界移植牛胚胎总数为240 730枚，到2000年全世界移植牛胚胎总数达528 540枚。从1991-2000年，国际胚胎移植总数增长120％。胚胎移植已经发展成为畜牧业中最活跃的领域之一[5]。 2.1991—2000年世界胚胎移植，移植的牛的胚胎总数的统计与分析 1991年全世界移植牛胚胎总数为240730枚，1995年牛胚移总数首次超过40万枚，2000年创造50多万枚的新记录。以ITES提供的胚移妊娠率为参考(按平均60％计)。 全世界在该年有30多万头胚移牛产生。而且IETS的统计数据还不能包括世界上所有的
小鼠胚胎移植技术方法比较_管彤
第18卷 第1期2001年3月实验动物科学与管理 LABORATORY ANIMAL SCIENCE AND ADMINSTRATION Vol .18 No .1Mar .2001 小鼠胚胎移植技术方法比较 管 彤,王凤山,王 静,王晓军,于国德,杨梦礼 (天津市劳动卫生职业病研究所,天津 300204) 摘要:以近交系小鼠C 57BL 6J 、BDF 1小鼠作为供体胚小鼠,封闭群昆明种小鼠作为代母,对实验小鼠胚胎移植的三种方法,即:对小鼠受精卵(或2个细胞期胚)经由代母输卵管口移植、经由代母输卵管壁移植及对小鼠进行子宫移植(8细胞期胚)的方法了进行实验研究,并对各方法适于使用的动物对象、实验要求、产仔率、优势与不足等做了进一步的探讨,为今后的实验动物与动物实验提供参考依据。关键词:近交系小鼠;输卵管口(壁);移植;子宫移植 中图分类号:S865.13 文献标识码:A 文章编号:1006-6179(2001)01-0029-03 收稿日期:2000-07-07 第一作者简介:管彤(1968-),女,助理研究员,主要从事野生小鼠资源开发及实验小鼠胚胎毒理学研究。 自五十年代以来人类建立了受精卵和早期胚胎的采集技术之后,很快就完成了早期胚向代母体内 输卵管及子宫移植的胚胎移植技术的开发和研究[1] 。小鼠的胚胎移植技术对于实验动物学研究及生命科学研究具有重要价值。人类由小鼠进行发育生物学研究,包括胚胎的发生、发育、突变基因的研究、转基因动物的研究、基因打靶技术及小鼠胚胎冷冻种子库技术等涉及胚胎体外操作的各种研究,均需要进行胚胎移植入代母体内来完成。按照胚胎发 生的阶段不同,移植部位也不同[2] 。1～2个细胞期胚胎进行输卵管口移植,8细胞期至桑椹期胚进行 子宫移植。1992年,日本学者Nakagata [3] 又报道了经由输卵管壁进行输卵管移植的技术,以解决移植中一些代母品系输卵管口较小、较短的问题。 本文主要是将此三种移植方法引入,使之在本实验室成为常规后,将其应用于实验小鼠并进行了方法上的比较,重点比较了方法上的难易程度、产仔率、方法选择的前提因素。 1 材料与方法 1.1 实验动物 实验动物作为参比对照的成年近交系C 57BL 6J 小鼠、B DF 1小鼠(♀C 57BL 6J ×♂DBA 2)和作为代母的昆明种封闭群小鼠。 1.2 试剂 PMSG (pregnant mare serum gonadotropin )、HC G (human chorionic gonadotropin )、胚胎移植用Injection Medium 培养液、M 2培养基等。1.3 假孕代母的准备 1.3.1 昆明种雄性小鼠的结扎 为输卵管移植及子宫移植用代母(昆明种封闭群小鼠)交配用的雄性昆明种小鼠进行输精管结扎手术,以便制备假孕代母。进行输精管结扎手术的雄性昆明种小鼠应提前三周施行手术,术后备用。1.3.2 制备假孕代母 胚胎移植前一日(子宫移植,前三日)将已施行输精管结扎手术术后三周的昆明种雄性小鼠以1∶2与其雌性小鼠进行同笼交配,次日检查阴道栓有无,以阴道栓形成者作为移植用代母。1.4 卵的采集 1.4.1 超排卵 [4] 取出生后8～10周的C 57BL 6J 及B DF 1雌性小鼠进行PMSG 处理(腹腔注射,5IU 只),48h 后进行HC G 超排卵处理,方法、剂量相同,HC G 处理14～17h 后可进行受精卵的采集(子宫移植,为HC G 处理后第三日)。 1.4.2 交配 取已注射PMS 、HCG 后的C 57BL 6J 、B DF 1雌性小鼠与其相应的C 57B L 6J 、BDF 1雌性小鼠进行同笼
肉牛胚胎移植技术
肉牛胚胎移植技术 胚胎移植又称受精卵移植，是将l头良种母畜(供体)配种后的早期胚胎取出，移植到另一头同种的生理状态相同的母畜(受体)的子宫内，使之继续发育成为个体，所以也叫人工授胎或“借腹怀胎”。 (一)胚胎移植的意义 1．充分发挥优良母畜的繁殖潜力，提高繁殖效率由于牛的胚胎移植可以利用非手术法反复从一头供体中收集胚胎，所以繁殖率得以更加提高。据报道国外已能做到从一头供体牛一年获得40～50头犊牛。 2．加速品种改良，扩大良种畜群利用超数排卵、胚胎移植技术能使母畜排出较多卵子，山东永丰牧业同时解除其妊娠胚胎的职能，这样一头良种母牛就可产生多量的后代。使一头优良母畜在育种工作中的意义大为提高。 3．诱发肉牛怀双胎，提高生产效率在肉牛业中，有一种由胚胎移植技术演化出来的所谓“诱发双胎”的方法，即向已配种的母畜(排卵的对侧子宫角)移植一个胚胎，这样配种后未受胎的母畜可能因接受移植的胚胎而妊娠，而已受精的母畜由于增加了一个外来胚胎而可能怀双胎o 4．代替种畜的引进，保存品种资源通过胚胎的运输代替以往的种牛进出Vl山东永丰牧业，大大节约了购买和运输种牛的费用。同时可用保存胚胎的方式解决牛品种资源保存的问题。 (二)胚胎移植的操作原则 1．胚胎移植前后所处环境的一致性即胚胎移植后的生活环境和胚胎的发育阶段相适应山东永丰牧业。包括生理上的一致性(即供体和受体在发情时问上的一致性)和解剖位上的一致性(即移植后的胚胎与移植前所处的空问环境的相似性)以及种属一致性(即供体与受体应属同一物种，https://www.360docs.net/doc/4a18474382.html,但并不排除种间移植成功的可能性)。 2．胚胎收集期限胚胎收集和移植的期限(胚胎的日龄)不能超过周期黄体的寿命，最迟要在周期黄体退化之前数日进行移植。通常是在供体发情配种后3～8日内收集和移植胚胎。 3．在全部操作过程中，胚胎不应受到任何不良因素(物理的、化学的、微生物的)的影响而危及生命力。移植的胚胎必须经鉴定并认为是发育正常者。 (三)胚胎移植技术的基本程序胚胎移植的基本程序包括：供授体母牛的同期发情、供体母牛的超数排卵、供体母牛的配种、胚胎的收集、山东永丰牧业胚胎的检查、胚胎的保存和移植等程序。如图3—4所示。关于超排和同期发情处理在前面已有叙述，下面仅介绍其余部分。 1．供体母牛的配种经超数排卵的供体母牛，为了使排出的卵子有较多的受精机会，一般在发情后输精2～3次，每次间隔8～12 h。 2．胚胎的收集 从供体母牛收集胚胎的方法，可采用手术法和非手术法两种。手术法是按外科剖腹术的要求进行山东永丰牧业，手术部位在右肋部或腹下乳房至脐部之问的白线切开。 https://www.360docs.net/doc/4a18474382.html,伸进手指找到输卵管和子宫角，引出供。母体十畜同期发情处理受体母畜 辛辛辛辛
IVF-in vitro fertilization-体外受精联合胚胎移植技术,又称试管婴儿
IVF-in vitro fertilization-体外受精联合胚胎移植技术，又称试管婴儿 IVF-in vitro fertilization-体外受精联合胚胎移植技术，又称试管婴儿，是指分别将卵子与精子取出后，置于试管内使其受精，再将胚胎移植回母体子宫内发育成胎儿。 学术术语来源--- 新鲜胚胎与冷冻胚胎移植在体外受精周期中疗效比较的Meta分析 文章亮点： 1 对于胚胎移植的方法，临床上一直存在争议，诸多研究以新鲜胚胎移植和冷冻胚胎移植的回顾性分析为主，缺乏两种方法对比的循证医学证据。 2 现有关于新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在IVF周期中疗效的Meta分析，纳入研究文献方法学质量不高，或此类分析较少。此次Meta分析研究，全部纳入国外随机对照实验，方法学质量采用改良Jadad评分标准，全为高质量研究文献。 3 文章特点在于采用Meta分析比较新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在IVF周期的临床疗效差异，发现新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在流产率方面无明显差异，但冷冻胚胎移植在持续妊娠率及临床妊娠率方面较优。 关键词： 器官移植|器官移植循证医学|新鲜胚胎移植|冷冻胚胎移植|体外受精-胚胎移植|临床妊娠率|持续妊娠率|流产率|Meta分析 主题词： 胚胎移植；受精，体外；妊娠率；循证医学 摘要 背景：胚胎移植的方式主要包括新鲜胚胎移植和冷冻胚胎移植，但两种方法各有优缺点，哪种方法更有利于患者的受孕目前仍存在较大争议。 目的：系统评价新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在体外受精-胚胎移植(IVF)周期中的临床疗效。 方法：计算机检索Medline、Cochrane Library、Ovid、EMBASE、中国生物医学、中国期刊全文和万方数据库，以及手工检索国内相关妇产科杂志。检索新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在IVF周期中的疗效对比的随机对照研究文献，评价指标包括临床妊娠率、持续妊娠率、流产率等。由2名评价者按照纳入与排除标准选择试验，提取资料和评价质量，并采用RevMan 5.2软件进行Meta分析。 结果与结论：共纳入随机对照研究3篇，包括633例患者。Meta分析结果显示：冷冻胚胎组在持续妊娠率方面，优于于新鲜胚胎组[OR=0.60，95%CI(0.44，0.84)，P=0.003]；在临床妊娠率方面，冷冻胚胎组优于新鲜胚胎组[OR=0.60，95%CI(0.44，0.83)，P=0.002]；在流产率方面，2组比较差异无显著性意义[OR=1.23，95%CI(0.60，2.49)，P=0.57]。提示在IVF周期中，冷冻胚胎移植在持续妊娠率及临床妊娠率方面优于新鲜胚胎移植。但受纳入研究样本量及方法学质量限制，尚需开展更多大样本、高质量随机对照试验来增加证据的论证强度。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程