质粒构建全过程

质粒构建全过程：
1 选择合适的模板进行PCR（一般50ul体系），P出目的基因
2 PCR产物进行回收（5ul用于跑胶鉴定（110V，25-30min），45ul用PCR产物回收试剂盒进行回收）
3 对回收后的PCR产物进行浓度测定（nanodrop）
4 同时对目的基因和载体进行酶切（37℃，3h，一般酶切1ug）
5 对载体进行去磷酸化（CIP，37℃，30min）。若为双酶切，则无需去磷酸化过程
6 对载体进行切胶（110V，25-30min）回收后测浓度（nanodrop）
7 目的基因与载体的连接（一般20ul体系），16℃，1h（于PCR上保持）
8 对连接产物进行转化涂板（260rpm，转化42℃必须精准，全部涂板）
9 次日晚挑克隆，小试管摇过夜
10 对克隆出的菌液进行小抽
11 对小抽出的质粒进行酶切鉴定（一般酶切1ug质粒）
12 如有阳性结果，则送测序
13 测序正确后，可进行中抽扩增保存备用