比较动植物细胞培养条件

比较动植物细胞培养条件
比较动植物细胞培养条件

动植物细胞培养条件的比

动植物细胞培养条件的比较

动植物细胞的培养是细胞工程中非常重要的环节,在培养动植物细胞的过程中,培养条件有相似之处,但也有各自特殊的地方。下面,先就培养条件的不同之处进行比较:

一、培养基

植物细胞培养基一般为合成培养基,多为固体培养基,成分主要有无机营养、碳源、维生素、植物生长物质和有机附加物等。

表1 植物培养基成分及作用

动物细胞培养基包括天然培养基和合成培养基,可为固态,也可为液态,成分主要是水、葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等,此外,动物细胞培养还需要各种培养液。

表2 动物细胞培养基基本营养成分

二、营养要求

根据动植物细胞培养基的不同,我们可以看出,动植物细胞对培养基的营养要求有所不同。

植物细胞培养基根据无机盐成分可分为:

(1)富盐平衡培养基(MS、LS、BL、BM):无机盐浓度高,离子平衡性好,具较强缓冲性;营养丰富,无需额外添加复杂有机成分;微量元素种类多,浓度高。

(2)高硝态氮培养基(B5、N6):硝酸钾含量高;铵态氮含量低;含有较高的VB1。

(3)中盐培养基(H、Nitsch):大量元素为MS的一半;微量元素种类减少而含量增高;维生素种类比MS多(生物素、叶酸等)。

(4)低盐培养基(White、WS):无机盐含量低;有机成分含量低。

对植物细胞的营养要求:生长代谢需要大量无机盐,需多种维生素、氨基酸和激素,要求的N源一般为无机N源,一般以蔗糖为C 源,细胞培养基要有缓冲性、等渗性。

动物细胞培养基可分为:基本培养基、通用培养基(能满足多种类型细胞生存)、完全培养基、生长培养基(基本培养基加入血清)、无血清培养基(基本培养基加入取代血清的成分)。

并且动物细胞培养基中都要加入血清或可代替血清的物质来提

供必须生长因子,以保证动物细胞的正常生长。

三、特殊条件

在所有的细胞离体培养中,最困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。

(1)血清:动物细胞离体培养常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子,如激素、微量元素、矿物质和脂肪,血清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。

(2)支持物:大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃,高速冷冻离心机塑料等作为支持物。

(3)气体交换:二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节,不断维持所需要的气体条件,每一次开箱操作后的快速恢复

对设备的要求很高,由此决定了动物细胞离体培养设备要求高、投资大。

植物细胞由于其特殊性,其培养过程需要一定的特殊条件:

(1)光照:离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格,因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关,而且与细胞分化有关,例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用,所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中,光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质,如药物的过程,植物细胞大多是在反应器中悬浮培养。

(2)激素:植物细胞的分裂和生长特别需要植物激素的调节,促进生长的生长素和促进细胞分裂的分裂素是最基本的激素。植物细胞的分裂,生长,分化和个体生长周期都有相应的激素参与调节。和动物细胞相比,植物细胞离体培养对激素要求的原理已经了解,其应用技术也已相当成熟,已经有一套广泛作为商品使用的培养液。同时解决了植物细胞对水、营养物、激素、渗透压、酸碱度、微量元素等的需求。

四、环境条件

动植物细胞的差异决定了其培养的环境条件存在差异。动物细胞对温度、气体环境、PH、渗透压有特殊要求,而植物细胞则除对温度、气体环境、PH有特殊要求外,还对光照、湿度有一定要求。

表3 动植物细胞培养条件比较

正因为动植物细胞的培养条件存在许多的不同之处,所以正确区分动植物细胞培养条件(营养条件、环境条件)的不同,是成功培养细胞的关键。针对不同的细胞,使用不同的培养基、培养方法及培养条件,以达到最好的培养效果,是我们在细胞培养工作中所追求的。

细胞传代培养的原理及操作步骤,细胞冻存,细胞复苏

细胞传代培养的原理及操作步骤 (一)原理:细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,须进行传代再培养。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 (二)细胞传代培养具体操作 1、细胞:贴壁细胞株 2、操作步骤 1)将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 2)加入0.5-1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。 3)瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10ml培养液终止消化。 观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1-3分钟。 4)用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培养液塞好橡皮塞,置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。 细胞冻存 1. 实验前准备:细胞室及工作台紫外线照射15min;培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水 浴箱37℃预热备用;收集对数生长期细胞,在冻存前一天最好换液 2.用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液,PBS清洗2遍吸出冲洗液,加入适量胰蛋白酶消化。 3. 适时去掉胰蛋白酶,加入少量新培养液。吸管吸取培养液吹打瓶壁上的细胞,使其成为均匀分散的 细胞悬液。 4. 用吸管将培养液加入冻存管中,离心(1000r/min,10分钟)。 5. 去上清液,加入与细胞悬液等量的冻存液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀 6. 冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16~18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期储 存。-20℃不可超过1h,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 7.记录每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。 细胞复苏 1.室内紫外消毒;培养基、PBS于37℃恒温水浴预热备用。 2.自液氮罐中取出冷冻管,立即放入37℃水槽中快速解冻,离心。 3.去上清,加入培养基,吹打,然后移入培养瓶中,用培养基清洗冻存管,清洗液也移入培养瓶中。 4.于培养瓶中加入适量培养基,放入CO2培养箱中培养 5.记录复苏日期;次日换液。

植物细胞与动物细胞的比较

植物细胞与动物细胞的比较 构成动物体或植物体的细胞有基本相同的结构体系与功能体系。很多重要的细胞器与细胞结构,如细胞膜、核膜、染色质、核仁、线粒体、高尔基体、内质网、核糖体、微管与微丝等,在不同细胞中不仅形态结构和成分相同,功能也一样。近年来在植物细胞内发现了类似动物细胞的中等纤维和溶酶体的结构,植物细胞的圆球体和糊粉粒具有类似溶酶体的功能。 植物细胞也有一些特有的细胞结构与细胞器是动物细胞所没有的,如细胞壁、液泡、叶绿体及其他质体。 细胞壁细胞壁是在植物细胞分裂过程中形成的,先在分裂细胞之间形成胞间层,主要成分是果胶质,再在胞间层之间形成有弹性的初生壁,有些细胞还形成坚硬的次生壁。细胞壁的主要成分是纤维素,还有果胶质、半纤维素与木质素等。细胞壁的某些部位有间隙,原生质可以由此沟通,形成胞间连丝。 液泡液泡是植物细胞的代谢库,起调节细胞内环境的作用。它是由脂蛋白膜包围而形成的,内部是水、无机盐、糖和色素等物质,溶液的浓度可以达到很高的程度。液泡是随着细胞的生长,由小液泡合并与增大而成为大液泡的。液泡还可以使植物细胞保持膨胀的状态。 叶绿体叶绿体是植物细胞内最重要、最普遍的质体,它是进行光合作用的细胞器。叶绿体利用叶绿素将光能转变为化学能,把二氧化碳与水转变为糖。叶绿体是世界上成本最低、创造物质财富最多的“生物工厂”。除叶绿体外,植物细胞中还有白色体、有色体等质体。

模拟制作植物细胞 1.除需准备制作动物模型的物品外,还应准备透明塑料小盒、小塑料食品袋、糖水。 2.在制作植物细胞模型时,先在小塑料袋内注入糖水,并用线扎紧。将小塑料袋放入已装有琼脂和果脯的较大塑料袋中,然后将较大塑料袋放在塑料小盒中盖好。 3.其余制作过程同动物细胞模型的制作。 在制作的植物细胞模型中,透明塑料盒相当于细胞壁,小塑料袋及其内的糖水相当于液泡。还可以增加若干颗绿色果脯(如青梅),表示叶绿体。

细胞传代培养

细胞传代培养(胰蛋白酶消化法) 具体操作: 一. 传代前准备: 1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 3.正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,不仅便于操作而且可减少污染。 4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。 5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。 6.取出预热好的培养用液:取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。 7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。 8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。 二.胰蛋白酶消化; 1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。 2. 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。 3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。 三.吹打分散细胞: 1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。 2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。 3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。 4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 四.分装稀释细胞: 1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。 2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。 五.继续培养: 用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。 传代细胞培养注意事项: 1.严格的无菌操作 2.适度消化:消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响,消化过程中应该注意培养细胞形态的变化,一旦胞质回缩,连接变松散,或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。

八年级生物植物体和动植物细胞的比较

植物体的细胞和动植物细胞的比较 教学目标: 知识性目标: 1.学生能够识别植物细胞的结构和功能,联系动物细胞的结构和功能,说明细胞是生命活动的基本结构; 2.区别动、植物细胞的主要不同点; 技能性目标: 1.通过显微镜观察植物细胞临时装片,尝试绘制植物细胞结构简图; 情感性目标: 1.通过学习显微镜的使用方法和技能,激发学生利用生物科学研究的手段探究生命的兴趣,培养学生实事求是的科学态度,和一定的探索精神,通过实验让学生形成认识来源于实践的观点。 教学重点和难点: 重点:识别植物细胞的结构和功能,区别动植物细胞的主要不同点; 难点:识别亚细胞结构,如书中提到的线粒体和叶绿体,因为在光学显微镜下不能看到亚细胞结构。 教学辅助材料:

1.实验:显微镜(每人一台),植物永久装片(示叶肉细胞的、示维管组织的、藻类)、制作临时装片工具(载玻片、盖玻片、吸水纸、刀片、镊子、解剖针、清水、碘液) 2.讲授:演示文稿(包括演示图片和总结文字)、细胞结构挂图(在多媒体不能工作的情况下使用),实物投影仪 学生准备: 自愿准备感兴趣、可观察的植物材料,如:黄瓜、西瓜、苹果等;3H铅笔、绘图纸、尺。 教学程序设计

教案提纲 一、回顾及导入 实验中,按小组巡视学生实验的情况,及时解决学生在实验中遇到的问题并指导实验,尤其注意纠正学生的不良实验 教师活动:请学生说出植物细胞临时装片的制作要领,同时配以ppt板书。 教师注意在学生回答过程中,强调每一个制作步骤的目的。(这样可以使得学生习惯在今后的实验中有目的的做实验,而不是机械的重复书中的步骤) 出示植物细胞的图片,引入观察植物细胞永久制片的实验,通过设问明确本节课的学习目标 学生活动:回忆上节课的内容,积极回答问题,认真思考老师的设问 二、新课及复习

动植物细胞的结构

专题复习二 细胞的基本结构和功能 (第 2 课时:动植物细胞的结构) 中考提纲:( 1 分钟) 1人体口腔上皮细胞临时装片的制作:擦T滴一刮T涂一盖一染。 2洋葱表皮细胞临时装片的制作:擦—滴—撕—展—盖—染。 3 动植物体细胞结构的比较:植物细胞特有的结构是:细胞壁、液泡、叶绿体复习目标( 1 分钟) 1 动植物细胞各部分结构名称和功能。 2 如何制作人体口腔上皮细胞临时装片。 3 如何制作洋葱表皮细胞临时装片。 4 比较动植物细胞的结构。 复习指导一 看课本的P36-45页,掌握下列知识点。(7分钟) 1 制作口腔上皮细胞临时装片的过程是怎样的? 2 怎样制作洋葱表皮细胞临时装片? 3 在以上试验中,要注意哪些注意事项? 4 动植物细胞之间有哪些主要的区别? 复习检测一(8 分钟) 1.生物体的结构和功能的基本单位是() A. 细胞B .组织C .器官D.系统 2.下列除哪项外其他都是单细胞生物() A .衣藻 B .草履虫 C .变形虫 D .玉米3.当你发现显微镜镜头不清洁时,除去污物的正确方法是() A .用纱布擦 B .用手擦 C .用纸巾擦 D .用擦镜纸擦 4.制作人的口腔上皮细胞装片时,滴加0.9%的生理盐水的目的是(

) A .杀菌观察效果好 B .易盖盖玻片

5. 制作口腔上皮细胞时,漱口的目的是() A .清除口臭 B .冲刷下口腔上皮细胞 C .清除口腔中的食物残渣 D .防止口腔发炎 6. 在低倍镜下看到的人口腔上皮细胞是() A .方形 B .扁平圆形 C .立方形 D .圆柱形 7. 制作洋葱表皮细胞临时装片时,正确的盖盖玻片的方法是() A .将盖玻片的一边先接触载玻片上的水滴,然后轻轻盖上 B .将盖玻片的一边先接触载玻片上的水滴,然后快速盖上 C .将盖玻片放在载玻片上,推向中央 D .将盖玻片迅速盖在载玻片上 8. 在植物细胞中,控制物质出入细胞的结构是() A .细胞膜D .细胞壁C.细胞质D .细胞液 9. 动物细胞同植物细胞明显的区别是() A .呈圆形 B .有细胞间质 C .没有细胞壁D.细胞形态差别很大 10. 下列结构属于植物细胞特有的是() A .细胞膜 B .细胞质 C .细胞核D.叶绿体 11.右图是植物细胞的结构图,请据下图回答: ⑴写出图中各结构的名称: ①:② ; ③;? ⑤;?。 ⑵图中对细胞起保护和支持作用的结构是;含有遗传 物质的是能进行光合作用的是_ 。 (3)盐腌黄瓜丝溢出的黄瓜汁水主要来自细胞结构 中的______________________________________________________ < (4)动物细胞没有图中的______ 。 12. 下图是“制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片”的部分操作示意图,请回答: (1)用字母和箭头写出正确的操作顺序。

原代细胞培养和传代培养的方法及其注意事项

初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器:培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃) 材料:动物组织块 试剂:1640培养基(含20%小牛血清),0.25%胰酶,Hank′s液,碘酒 初代消化培养法 1. 准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2. 布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。 3. 处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 4. 剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。 5. 消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。 6. 分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速 (500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。 7. 计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。 8. 培养:置于36.5℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。 初代组织块培养法 1. 剪切:把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸静Hanks液,用眼科剪反复剪切1mm3块为止。 2. 摆布:用弯头吸管吸取若干小块,置于培养瓶中,用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部,小块相互距离以0.5cm为宜,每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。 3. 轻轻翻转培养瓶,另瓶底向上,注意翻瓶时勿另组织小块流动,塞好瓶塞,置36.5℃温箱培养2小时左右(勿超过4小时),使小块微干涸。 4. 培养:从微箱中取出培养瓶,开塞,46度斜持培养瓶,箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许,然后缓缓再把培养瓶翻转过来,让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。

动物细胞基本结构

动物细胞 编辑 动物细胞立体结构图组成动物体的细胞称为动物细胞,植物细胞和动物细胞大体上相同,都有细胞核、细胞质和细胞膜。但是也有不同的地方:这就是植物细胞在细胞膜外面,有一层厚而坚硬的细胞壁,而动物细胞是没有细胞壁的;植物细胞中有扁球状的叶绿体.而动物细胞里没有这种结构,植物细胞中有囊状的液泡,而动物细胞里的液泡却不明显。 目录 1简介 2结构特征 3培养 4培养液的成分 5培养液的特点 6培养 7基本过程 8动植物组织培养区别 9动物细胞培养的应用 10相关词条 1简介 动物细胞立体结构图组成动物体的细胞称为动物细胞,人体或动物体的各种细胞虽然形态不同,基本结构却是一样的,都有细胞膜、细胞质和细胞核。 2结构特征

中心粒 核糖体 滑面内质网 高尔基小泡 高尔基体 微绒毛 核仁 细胞核 核被 粗面内质网 溶酶体 线粒体 质膜 滑面内质网 动物细胞有细胞核、细胞质和细胞膜,没有细胞壁,液泡不明显,含有溶酶体,动物细胞的结构有细胞膜、细胞质、细胞器、细胞核;它们的主要作用是控制细胞的进出、进行物质转换、生命活动的主要场所、控制细胞的生命活动。细胞内部有细胞器:细胞核,双层膜,包含有由DNA和蛋白质构成的染色体。内质网分为粗面的与滑面的,粗面内质网表面附有核糖体,参与蛋白质的合成和加工;光面内质网,表面没有核糖体,参与脂类合成。

3培养 细胞培养是指细胞在体外条件下的生长,动物细胞在培养的过程中不再形成组织。 概念:从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 4培养液的成分 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。动物细胞培养成功的关键在于培养液中是否含有动物血清,因为由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境,此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。 5培养液的特点 液体培养基、含动物血清。 6培养 .动物细胞培养液的成分:体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同,例如,需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基,称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境,因此在使用合成培养基时,通常需加入血清、血浆等一些天然成分。 2.动物细胞培养液的特点:液体培养基、通常含动物血清。 3.动物细胞培养的条件: ①无菌、无毒的环境:对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。 ②营养物质:无机物(无机盐、微量元素等),有机物(糖、氨基酸、促生长因子等)。 ③血清和血浆(提供细胞生长必须的营养成份) 。 ④温度和pH(36.5±0.5℃,7.2~7.4)。 ⑤气体环境(95%的空气+5%CO 2的混合气体)。 其中5%CO2气体是为保持培养液的pH稳定。

植物细胞悬浮培养技术

植物细胞悬浮培养技术 一、基本原理 利用固体琼脂培养基对植物的离体组织进行培养的方法在某些方面还存在一些缺点,比如在培养过程中,植物的愈伤组织在生长过程中的营养成分、植物组织产生的代谢物质呈现一个梯度分布,而且琼脂本身也有一些不明的物质成分可能对培养物产生影响,从而导致植物组织生长发育过程中代谢的改变而利用液体培养基则可以克服这一缺点,当植物的组织在液体培养基中生长时,我们可以通过薄层震荡培养或向培养基中通气用以改善培养基中氧气的供应。植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养,在培养过程中能够保持良好的分散状态。这些小的细胞聚合体通常来自植物的愈伤组织。 一般的操作过程是把未分化的愈伤组织转移到液体培养基中进行培养。在培养过程中不断进行旋转震荡,一般可用100~12Or/min 的速度进行。由于液体培养基的旋转和震荡,使得愈伤组织上分裂的细胞不断游离下来。在液体培养基中的培养物是混杂的,既有游离的单个细胞,也有较大的细胞团块,还有接种物的死细胞残渣。 在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养,因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬浮培养物来说,细胞在培养到第18~25d 时达到最大的密度,此时应进行第一次继代培养。在继代培养时,应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系,就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作,特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株,即可获得携带有目标基因的个体。 二、器材 超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、磁力搅拌器、恒温空气摇床、镊子、锥形瓶、水稻种子 三、操作步骤 1.配制培养基 按照培养基配方取各种药品,最后用蒸馏水定容到所需体积。所配制的培养基经高压蒸汽灭菌后备用,固体琼脂培养基分装在250mL 的锥形瓶内,每瓶约分装30mL。 2.水稻种子的消毒 (1)将种子置于无菌的培养皿内,以体积分数95%的酒精消毒1~2min。 (2)取出后用无菌水冲洗2~3 遍。 (3)将种子放入25.0g/L 的次氯酸钠溶液中轻轻摇动后,浸泡60min 。 (4)取出后用无菌水冲洗,将次氯酸钠溶液充分洗净。 3. 接种 在超净工作台内,将灭菌后的水稻种子接到诱导愈伤组织的固体培养基上,每个培养瓶接5~10 粒种子。接种完毕后用封口膜将培养瓶封好,放在26℃的恒温培养箱中进行黑暗培养。 4.悬浮培养的开始: 当得到愈伤组织后,将其转人到AA 液体培养基中。注意愈伤组织块应小于3mm . 若组织块较大可用无菌解剖刀将其分割成小块。液体培养基分装在250mL 的锥形瓶内.接种完毕后将瓶口用封口膜封好,把培养瓶放到恒温摇床上进行震荡培养。调整摇床的旋转速度,使之为120r/min。培养温度为26℃,在黑暗中培养。 5.悬浮培养物的保持 进行悬浮培养后要不断进行观察,由于培养物的继代培养与培养瓶内培养物的密度及细胞

动植物细胞培养的主要区别

动植物细胞培养的主要区别 第一篇:《动物细胞培养与植物细胞培养的区别》 动物细胞培养与植物细胞培养的区别动植物细胞培养的主要区别 1.培养基不同:植物细胞(固体培养基),动物细胞(液体培养基)动植物细胞培养的主要区别 2.培养基的成分不同:动物细胞培养必须利用动物血清,植物组织培养则不需要,而需要加入植物生长激素 3.产物不同:植物组织培养最后一般得到新的植物个体,而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性,因此得到的是只含同一种的细胞的一个细胞系(或者叫细胞群)。 4.原理不同:植物组织培养的原理为植物细胞的全能性,动物细胞培养的原理为细胞的增殖。动植物细胞培养的主要区别 5.过程不同:植物组织培养的过程为脱分化和再分化,动物细胞培养的过程为原代培养和传代培养 7.培养目的不同:植物组织培养是为了快速繁殖和获得无病毒植株,

动物细胞培养是获得生物制品。 根据培养方式:贴壁细胞培养,半悬浮细胞培养,悬浮细胞培养 第二篇:《动物细胞培养和植物细胞培养的比较》 动物细胞培养与植物组织培养的对比 第三篇:《全国林业有害生物防治知识竞赛题含答案》 害预测预报工作的通知》要求,一般常灾区每0.5万一1万亩,偶灾区每亩,无灾区每2万一5万亩,应设一名测报员或病虫情调查员。在大片林区,可适当增加测报员或病虫情调查员的调查监测面积。(答案:1万一2万) 39、《关于进一步加强森林病虫害预测预报工作的通知》要求,要以或进行病虫情调查,掌握面上的病虫害发生情况。(答案:林班;小班) 40、《关于加强林业有害生物监测预报和突发疫情信息管理的通知》(造防函81号)要求,为了加强林业有害生物监测预报和突发疫情信息报告的管理,各地要严格按照有关要求,新发生(发现)的危险性和发生严重在50公顷以上的林业有害生物必须在日内上报国家林业局。(答案:7) 二、选择题 1、1999年以来,我国先后建立了个国家级森林病虫鼠害中心测报

实验五 细胞的传代培养

实验5 细胞的传代培养 一、实验目的 熟练掌握动物细胞的传代培养法。 二、实验原理 哺乳动物细胞的传代培养是几乎所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶,细胞才能继续生长,这一过程就叫传代。传代培养可获得大量细胞供实验所需。 三、仪器、材料与试剂 1仪器 CO2培养箱,倒置显微镜,超净台 2材料 培养瓶,试管,移液管,巴斯德吸管,废液缸,75%酒精棉球,酒精灯,细胞。 3试剂 完全培养基(RPMLl640或DMEM),0.25%胰蛋白酶,D-Hanks液。 四、实验步骤 1.入无菌室之前用肥皂洗手,用75%酒精擦拭消毒双手。 2.倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液置37℃下预热。 3.超净台台面应整洁,用75%酒精溶液擦净。 4.打开超净台的紫外灯照射台面20min左右,关闭超净台的紫外灯,打开抽风机清洁空气。 5.点燃酒精灯,取出无菌试管,刻度吸管;安上橡皮头;插在无菌试管内。 6.打开细胞培养瓶,过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。 7.倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2-3mL Hanks液洗去残留的旧培养基,或用少量胰酶涮洗一下。 8.加入胰酶消化液,盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察,当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶,使细胞脱离胰酶,然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液。

9.加入少量的新鲜培养基,反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散,再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7-10mL/大瓶,3-5mL/小瓶)制成细胞悬液,分装到新培养瓶中。盖上瓶盖,适度拧紧后再稍回转,以利于CO2气体的进入,将培养瓶放回CO2培养箱。 10.对悬浮培养细胞,步骤7-9不做。可将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清,加入新鲜培养基,然后分装到各瓶中。 五、注意事项 1.传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。培养用液应严格分开。 2.每天观察细胞形态,掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代。 3.如发现细胞有污染迹象,应立即采取措施,一般应弃置污染的细胞,如果必须挽救,可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗,随后培养基中加入较大量的抗菌素,并经常更换培养基等。 六、实验报告 1.试述传代培养的步骤和注意事项,并指出哪些是关键步骤? 2.细胞传代培养的目的是什么?

细胞传代实验报告

细胞传代培养 一.实验目的 初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程,为生物技术在医学上的 应用打下基础。 二、原理 从生物体中取出某种组织或细胞,模拟体内生理条件,在人工培养条件下使其生存、生 长、繁殖或传代,这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接 观察 活细胞,并在有控制的环境条件下进行实验,避免了体内实验时的许多复杂因素,还可 以与 体内实验互为补充,可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象,耗费少,比较 经济, 因此成为生物学研究的重要手段。 细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养 为 原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞 分散 后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养, 传 代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受 温度、渗透压、ph值、无机盐影响,消毒、配液等均有严格的规范和要求,特别是无菌 操 作是细胞培养成败的关键。 三、材料和试剂 1、细胞:293细胞株 2、试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清) 3、仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、电动枪,培养板,吸液枪,5ml玻璃吸管、酒精 灯等 四、操作步骤 1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。 2、加入1~2ml 0.25%胰酶溶液,使板底细胞都浸入溶液中。 3、马上吸走胰酶液,再次加入2ml左右的胰酶,同样马上吸去,再加入几滴胰酶放入 培养箱中消化几分钟 4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液,再按照观察的生长情况确定的传代比例传代 5.根据确定的比例来取需要的量(剩余的细胞拿来做细胞计数),加入4ml左右的培养液 6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后,将培养板放入培养箱 7.收拾整理超净台 附:消化液配制方法: 称取2.5克胰酶蛋白酶,加入100ml10xpbs+纯水溶解到1l,滤器过滤除菌,4℃保存, 用前可在37℃下回温。 10x pbs配方:na2hpo4(14.2g) kh2po4(2.32g) nacl(80g) kcl(2.02g) (调至ph=7.4) 五、实验结果

细胞传代培养标准操作规程

细胞传代培养(消化法)标准操作规程 一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1. 无菌磷酸生理缓冲液(PBS) 2. 胰酶-EDTA溶液(0.05%胰酶-0.53mM EDTA-4Na): 以10ml分装于15 ml无菌离心管中,保存于–20℃,使用前放在37℃水槽回温。 3. 新鲜培养基 4. 无菌吸管/离心管/培养瓶 三、操作步骤 1. 传代前准备 (1)预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 (2)用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 (3)正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,不仅便于操作而且可减少污染。 (4)点燃酒精灯:注意火焰不能太小。 (5)准备好将要使用的消毒后的空培养瓶。 (6)取出预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。 (7)从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。 (8)打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。 2. 胰蛋白酶消化 (1)加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。

(2)显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。 (3)吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。 3. 吹打分散细胞 (1)吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。 (2)吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。 (3)平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8 分钟。 (4)弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 4. 分装稀释细胞 (1)显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。 (2)分装:将细胞悬液吸出分装至2~3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。(3)继续培养:用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。 5. 悬浮型细胞的传代 (1)吸出细胞培养液,放入离心管中,离心1000 rpm 5 分钟。 (2)吸掉上清液,加入适量之新鲜培养基,混和均匀后,依稀释比例转移至新的培养瓶中,以正常培养条件培养。 注意事项: 1.严格的无菌操作。 2.适度消化:消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响,消化过程中应该注意培养细胞形态的变化,一旦胞质回缩,连接变松散,或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。

常规细胞培养方法(原代培养和传代培养)

原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化 2010-12-02 10:29 来源:PriCells 点击次数:335 关键词:上皮细胞成纤维细胞培养分离纯化 分享到:收藏夹腾讯微博新浪微博开心网 PriCells- 原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化 原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长,既有上皮样细胞又有纤维样细胞,纤维样细胞又包括成纤维细胞、肌细胞、骨细胞、滑膜细胞等。混杂的细胞会直接影响实验结果。 在体外培养原代细胞时,为了保证实验结果的可靠性、一致性、稳定性、和可重复性,要求采用单一种类细胞来进行实验,这样才能对某一细胞的功能、形态等变化进行一系列研究,因而培养细胞的纯化就成为实验研究的重要一步,甚至需要从混杂的细胞群中分离出单个细胞来进行培养和开展实验研究。 一、原代细胞增殖优势纯化方法:

自然纯化是利用某一种类细胞的增殖优势,在长期传代过程中靠自然淘汰法,不断排挤其他生长慢的细胞,靠自然增殖的潜力,最后留下生长优势旺盛的细胞,达到细胞纯化的目的。但这种方法常无法按照需要和实验要求及研究目的来选择细胞。此法花费时间长,留下的往往是成纤维细胞。仅有那些恶变的肿瘤细胞或突变的细胞可以通过此方法而保留下来的,不断纯化而建立细胞系。 二、原代细胞常用纯化方法: 人工纯化是利用人为手段造成对某一细胞生长有利的环境条件,抑制其他细胞的生长从而达到纯化细胞的目的。 1 、细胞时间差酶消化法: 酶消化法是比较常用的纯化方法,不仅对贴壁细胞可行,能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同,是两者分开,达到纯化的目的;另外对贴壁细胞与半贴壁细胞及黏附细胞间的分离纯化也是十分有效的。

七年级生物动植物细胞的比较

动植物细胞的比较 教学目标 1.通过知识回顾,学生能够巩固植物细胞和动物细胞的结构和功能 这些知识。 2.通过讨论,对比动植物细胞的结构,说明动植物细胞有哪些共同 点和不同点。 3.培养讨论、归纳总结的能力。 教学重点和难点 重点:识别植物细胞的结构和功能,区别动植物细胞的主要不同点。难点:识别亚细胞结构,如书中提到的线粒体和叶绿体,因为在光学显微镜下不能看的亚细胞结构。 教学辅助材料: 动植物细胞结构模型、挂图,多媒体演示文稿。 教学程序设计: 一、复习导入(5分钟) 组织学生看上一节课的知识和笔记,逐渐回忆动物细胞和植物细胞简图,说出动物细胞和植物细胞简图上的各个结构和功能。 二、讲授新课:(30分钟) 1.学生以小组为单位,根据动植物细胞简图,比较一下动植物细胞的结构,归纳出动植物细胞有何异同。 2.请学生对着着动植物细胞的结构简图,出来讲授动植物细胞的相同点和不同点。

3.学生以小组为单位,看着书本的动植物细胞亚显微结构图,再讨论一下动植物细胞有何异同。 4.请学生对着课件,出来讲授动植物细胞的相同点和不同点。 5.教师讲授线粒体和叶绿体的功能:线粒体是动物细胞的能量转换器,叶绿体、线粒体是植物细胞的能量转换器。 三、.小结 1.植物细胞的基本结构:细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质(含有液泡、叶绿体、线粒体 2.动物细胞的基本结构:细胞膜、细胞核、细胞质(有线粒体,没有液泡和叶绿体) 3.总结:动植物细胞都有细胞膜、细胞核、细胞质,动物细胞没有细胞壁。 四、课堂练习(15分钟) (一)判断这些是动物细胞还是植物细胞? 变形虫、平滑肌细胞、洋葱表皮细胞。 (二)小试身手 切开西红柿会流出很多汁水,这些汁水是什么?来自细胞的哪个结构? (三)选择题 1、在细胞的结构中能将细胞内部与外部环境隔开,并能控制物质进出的是() A、细胞质 B、细胞核 C、细胞壁 D、细胞膜

动物细胞与植物细胞的区别 导学案

植物细胞与动物细胞的比较 复习总结课 一、知识回顾: 1.制作洋葱鳞叶表皮临时装片的步骤: 擦,滴,撕,展,盖,染,吸 2.制作人口腔上皮细胞临时装片的步骤: 擦,滴,刮,涂,盖,染,吸 3.植物细胞的基本结构是: 细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体、叶绿体、液泡 4.动物细胞的基本结构是 细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体 5.植物细胞与动物细胞的区别: 动物细胞有的结构植物细胞都具有; 植物细胞特有的结构是:细胞壁、叶绿体、液泡 6.制作人的口腔上皮细胞临时装片时,漱口的目的是清除口腔中的食物残渣;用生理盐 水而不用清水的原因是保持细胞的正常形态,避免细胞吸水破裂;滴加碘液的目的是染色,便于寻找和观察细胞。 7.口腔上皮细胞呈椭圆形,染色后,显微镜下看到的细胞呈橘黄色。 二、达标测评: 1.请分析回答细胞临时装片制作、观察等相关问题: (1)制作人口腔上皮细胞临时装片过程中,应先在载玻片中央滴一滴______________; 染色时所用的染剂是____________________。 (2)若显微镜的目镜为5×,物镜为40×,则观察到的物像放大__________倍。

若视野内有污点,移动临时装片和转动目镜后,污点均不动,说明污点在 ____________ 上(3)人口腔上皮细胞结构与上图中的_______(填“甲”或“乙”)相同, 判断依据是______________。 2.黄瓜果肉细胞与人的口腔上皮细胞都有的结构是 ①细胞壁 ②细胞膜 ③细胞质 ④细胞核 ⑤线粒体 ⑥叶绿体 ⑦液泡 A .①⑥⑦ B .②③④⑤ C .②③④⑤⑦ D .①②③④⑤⑥⑦ 3.与植物细胞比较,动物细胞没有的结构是( ) A.细胞膜 B.细胞质 C.细胞核 D.细胞壁 4.制作人的口腔上皮细胞临时装片时,用到的材料和用具有( ) ①镊子 ②生理盐水 ③稀碘液 ④清水 ⑤消毒牙签 ⑥刀片 A.①②③⑤ B.①③④⑥ C.①②④⑤ D.②③⑤⑥ 5.如图甲和图乙“观察人的口腔上皮细胞”实验的部分操作,如图丙所示显微镜的结构,如图镜观察到的人的口腔上皮细胞,据图回答下列问题: (1)图甲中滴加的液体是_______________,目的是____________________________。 (2)图乙中滴加的液体是_______________,目的是_______________________ (3)使用显微镜观察时,先要转动[ ]______________,使镜筒缓缓下降,直到接近拨片标本,此时眼睛一定要注视着[ ]_____________ (4)如果要将图丁中左下方的细胞物象移到视野中央,应该向___________方移动装片. (5)为更好地观察口腔上皮细胞,需要将视野调暗,应当改用___________和平面反光镜. 6.下列能正确表达动物细胞各结构之间位置关系的是( ) A B C D

观察动植物细胞的结构

观察植物细胞详案 PPT展示章节。 开始上课: 师:(视频:丰富多彩的生物)我们学习了生物的特征,大家都知道:除病毒外,生物体都是由细胞构成的。细胞到底是什么样子的,结构又如何,大家想知道吗? 生:想。 师:这一节课我们就一起来观察植物细胞。(PPT展示教学目标) 绝大多数细胞都非常小,我们要用显微镜才能观察到。 现在请同学们用显微镜观察一片树叶,能否看到它的细胞? 生:取镜、安放、对光,观察。(2分钟左右) 师:巡视学生操作是否正确,及时纠正,发问:哪一组同学看到树叶上的细胞了?请举手。(让先做好的学生先回答1至3组)。分组回答 生:没有。 师:要看到植物体上的细胞,必须对生物材料进行处理,使生材料薄而透明,通常要把材料制作成玻片标本。大家知道常见的玻片标本主要有哪些? 生:切片、装片和涂片。 师:(PPT展示介绍三种玻片标本的制作特点)。补充说明有些非常小、结构简单的生物(如单细胞藻类植物)可直接做成装片。本节课主要是制作植物临时装片,观察植物细胞及其结构。师:现在我们一起来熟悉一下我们所要做的实验。 首先,了解实验目的、要求和所需要的器材(PPT展示),介绍如染色使细胞结构显示更清楚);接着我们来学习把洋葱鳞片制作成临时装片的方法和步骤。请各小组阅读课本43页,讨论、交流3分钟。 师:请同学归纳步骤(2-3名) 生:其他同学纠错、补充(2-3名学生)。(注意表扬、鼓励学生,看到学生的亮点) 师:还有谁有什么没同意见?请举手。 生:没有。 师:(PPT展示一个字的制作步骤,请1-2名学生解释其中某些字如:撕和盖) 大家都知道了洋葱鳞片内表皮细胞临时装片的制作方法和步骤, 现在请同学们完成下列任务:( PPT展示任务) ),那组任务完成得快,会有意想不到的奖励,完成得又快又好得双份奖励。 生:实验中(10-15分钟) 师:(巡视,发现问题及时纠正,适时提醒)哪个小组观察到了细胞并把其中一个细胞画下来了,请举手。生:纷纷举手。 师:还有哪组,加油哟!

动植物细胞培养

动植物细胞培养 动植物细胞培养是指动、植物细胞在体外条件下的存活或生长。动植物细胞培养与微生物细胞培养有很大的不同(表14-1)。由于动物细胞无细胞壁,且大多数哺乳动物细胞附着在固体或半固体的表面才能生长;对营养要求严格,除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外,还需有血清。动物细胞对环境敏感,包括pH值、溶氧、C02、温度、剪切应力都比微生物有更严的要求,一般须严格的监测和控制。相比之下,植物细胞对营养要求较动物细胞简单。但植物细胞培养一般要求在高密度下才能得到一定浓度的培养产物,而且植物细胞生长较微生物要缓慢,因此长时间的培养对无菌条件及反应器的设计具有特殊的要求。 在生物技术中,人们已经利用细菌、丝状真菌的大量培养来生产各种酶、抗生素、蛋白质、氨基酸等产物,但是很多有重要价值的生物物质,如毒素、疫苗、干扰素、单克隆抗体、色素、香味物质等,必须借助于动、植物细胞的大规模培养来获得。从20世纪50年代以来,这方面已取得一些进展。但是,目前的技术还远不能满足细胞生物产品应用的要求,随着动植物培养技术研究的深入,显示出广阔的发展前景。 表14-1 动植物、微生物细胞的培养特征 第一节动物细胞大规模培养技术 动物细胞体外培养的历史可追溯到1907年,美国生物学家Harrison在无菌条件下,以淋巴液为培养基成功地在试管中培养了蛙胚神经组织达数周,创立了体外组织培养法。1962年,其规模开始扩大,随着细胞生物学、培养系统及培养方法等领域的不断丰富和完善,动物细胞培养技术得到了很大的发展。发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法,利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等,已成为医药生物高技术产业的重要部分。其发展简史见表14-2。 利用动物细胞培养技术生产的生物制品已占世界生物高技术产品市场份额的50%。大量资料表明,生物技 术药物是当前新药开发的重要领域,生物技术制药工业是下一个10年制药工业的重要新门类,期间将有数百种生物技术新药上市。美国最新预测几种畅销基因工程药物2000年全球销售额EPO大于30亿美元,G2CSF 大于20亿美元,HGH、IFN、UK均大于10亿美元,胰岛素和降钙素大于5亿美元。动物细胞大规模培养技术是 生物技术制药中非常重要的环节。目前,动物细胞大规模培养技术水平的提高主要集中在培养规模的进一 步扩大、优化细胞培养环境、改变细胞特性、提高产品的产率与保证其质量上。 表14-2 动物细胞培养技术的发展

Hela细胞传代培养

Hela细胞传代培养

Hela细胞传代培养 实验目的:掌握动物细胞培养的基本原理和方法。 实验用具:每组用具(移液枪一把,一盒枪头,长吸管一包(4-6根),培养瓶1个【4-8人为一组,看细胞数量来定,传代比例1;2最多1:3】。 实验药品:0.25%胰酶,D-Hanks,1640培养基 实验原理: HeLa 是Henrietta Lacks的简称,Henrietta Lacks 是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字,在她死后,该细胞走被广泛散发到各研究机构,并无限次地繁殖分裂下去。 实验前的准备: RPMI-1640培养粉 1袋 碳酸氢钠 2.0 g 青、链霉素各100单位/毫升加三蒸水至 1000ml, 过滤除菌。调节pH值至7.2临用前加血清(终浓度 10%) 消化液的配置:

胰蛋白酶是一种黄白色粉末,用灭菌的D-hanks配置。配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25%。用滤器过滤除菌 D-hanks配方: 氯化钠 8.0g 氯化钾 0.4g 磷酸氢二钠(Na2 HPO ·7H2 O) 0.06g 磷酸二氢钾0.06g NaHCO3 0.35 g EDTA二钠 0.2 g 酚红 0.02 g 三蒸水定容到1000毫升。PH调整到8.0。 血清的准备与添加 ●优质血清的标准:透明,淡黄色,无沉淀 物,无细菌、支原体、病毒污染。 ●血清的灭活(消除补体活性):56 ℃水 浴,30 分钟 培养用具的准备: 所用器具高压灭菌,D-hanks缓冲液。 酶液,培养液。 实验步骤:

1.打开超净台,把实验中所需用具放到超净台上。 2.从冰箱中取出0.25%胰酶、培养基。可以把胰酶和培养基的瓶盖拧松备用。 3.取待传代的细胞,倒掉旧的培养基,移液枪加入胰酶2ml(加入的量以覆盖整个细胞培养面为宜)。轻轻摇动 4. 1-2分钟后迅速将消化液倒掉。 注意:此步消化时间需要根据每次培养的细胞不同状态灵活掌握,没有固定时间。消化时间长短是实验成败的关键,宁可短消化,不能过消化。否则细胞会变死。在倒置显微镜下观察,当细胞质回缩,胞间间隙加大为消化适宜。 5.取培养基5 ml加入培养瓶终止消化,轻轻摇动,如果瓶壁依然有细胞未脱落,用长吸管反复轻轻吹打培养瓶壁,制备细胞细胞悬液。吹打的部位均匀,从上到小,从左到右,顺序进行吹打,保证各个部位的培养细胞均能吹打到,成片的细胞已经分散成小的细胞团或者单细胞便停止吹打。吹打时用力不要过猛,尽量不要出现气泡,以免损伤细胞。 6.至所有细胞从培养瓶壁脱落下来,轻轻摇匀,

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