石斛兰的组织培养

作者：杨恩富专业：设施农业技术

班级：设农08-1班学号：33号指导教师：陈霞

[摘要]：运用组织培养相关知识，对石斛兰做了简单的组织培养阐述。大致方向为：（一）培养目的——通过石斛兰的组织培养，加强我对石斛兰的了解以及石斛兰在组织培养中所注意的事项，同时为学习组织培养这门课程打下坚实的基础；（二）培养方法——选择石斛兰的叶片、茎段腋芽、根系在营养基中进行组织培养；（三）简单介绍石斛兰生根培养和炼苗技术。

通过本篇论文，加强自身对石斛兰的了解，并对其生理特性有一定的认知。组织培养技术，用组织培养法繁殖植物，这是组织培养应用于生产的主要的和成效最大的实例。所以，石斛兰的组织培养，更加肯定了组培价值所向。关键词：石斛兰组织培养炼苗

一、石斛兰(Dendrobium) 的概述

石斛兰(Dendrobium)属兰科多年生附生落叶或常绿草本植物，原产中国、日本及澳大利亚等国家，是一种观赏价值很高的花卉，其花姿态优美，花色艳丽多彩，花多而且花期长，深受人们喜爱。石斛兰有600种原生种，连混合交配种在内约有7000种。从形态上可分节生种和蝴蝶兰花形种两大类。在繁殖上，因为几乎所有的观赏类石斛都是杂种，通过种子播种不能得到大量与亲代形状一致的植株。目前石斛兰主要采用分株繁殖，繁殖速度缓慢。我国从20世纪70年代中期开始，对石斛的组织培养进行了大量研究，进展很快。但目前石斛兰的组织培养采用的外植体基本上都是茎尖、新生芽，由于每株植株体上这些材料有限，所以茎尖、新生芽作为外植体材料的组织快繁在生产上应用难度较大。虽然通过叶片诱导能够诱导出类原球茎，如Sagwa等采用幼茎的侧芽和顶尖的分生组织分化出类原球茎。但由于石斛兰类原球茎的诱导机理没有研究清楚，通过类原球茎分化完整植株的途径还有很大的难度。

二、外植体的选择

无菌外植体的获得:从无病虫害的母株上选择健壮、叶片未展开的幼芽，用已消毒的刀片切取4～12cm，并将外围叶片剥除,仅留顶端 O – 3cm叶鞘，放入锥形瓶中，用纱布封闭瓶口，自来水流水冲洗 3 0 min，然后用 7 0 ％酒精消毒1min，1‰ HgCl，处理 8min,最后用无菌水洗 4～5次,将外植体置入无菌烧杯,切取的芽体直径约 1.2cm、高 2.0 ～ 5.0c m，呈锥螺状，具顶芽 1个、腋芽 3 ～ 4个( 每层各有 1个) 。将芽体用 0.1 ％升汞溶液浸泡10min、无菌水冲洗 3～5次后、切除叶鞘。然后将顶芽与腋芽分开，取从下往上数第 2～3个腋芽作外植体( 第 1 个腋芽较难消毒，

第 4个芽易成苗、较难诱导出原球茎),备用。

三、石斛兰各组织诱导

石斛兰叶片愈伤组织的诱导、石斛兰茎段腋芽的诱导、石斛兰根系的诱导。

（一）石斛兰叶片愈伤组织的诱导

1.叶片愈伤组织诱导培养基

叶片愈伤组织诱导培养基以MS为基本培养基，根据生长调节剂的组成、浓度设5个处理。

处理 A：MS+2，4-D5.0mg/L;

处理B: MS+2, 4-D5.0mg/L+ 6-BA1.0mg/L;

处理C:MS+ 2,4-D5.0mg/L+6-BA3.0mg\L;

处理 D,MS+2,4-D 3.0m g/L+6 - B A1.0mg/L；

处理 E，MS+2，4-D3.0m g／L 。5种叶片愈伤组织诱导培养基中均附加琼脂 6dE，蔗糖 2 OL，活性炭 3L，p H值为 5.4～ 5.8 。

2.叶片愈伤组织切块大小

将无菌的幼嫩叶片,用解剖刀切成 1c m×1c m的小块,接种在诱导培养基上。

3.培养条件

温度为25℃，日光照12h，光照强度2 0 0 0LX 。

（二）石斛兰茎段腋芽的诱导

诱芽培养基以 MS为基本培养基，根据生长调节剂的种类和浓度设 3个处理：

1. MS+6-BA 4 .0 mg / L+N A A1.0 mg /L ；

2. MS+ 6 - B A 4. 0mg/L+N A A/1.0mg/ L+K T 1.0m g/ L ；

3. MS+6-B A 0.5m g/L+N A A 0. 5mg/ L+C H 1. 0 m g/ L 。

取无菌茎段，将两端用无菌解剖刀轻轻削去 2～3n l/ n ，将其接种到诱芽培养基上。

（三）石斛兰根系的诱导

设 3个不同的改良的 1/ 2 MS培养基处理。处理 1 : 1/2 M S+I B A 2. 0 m g/ L ；处理 2:1 / 2 MS+I B A2.0 m g/ L+肌醇 2. 0mg/ L ；处理 3: 1/ 2 MS+I B A 2 ． 0 m g ／ L+香蕉汁 1 0 ％。培养基中内含物同“ 1.2.2 ”。选取生长健壮、高 2 c m' 4上的单个芽体分别接人培养基中进行石斛兰根系的诱导。

四、石斛兰生根培养

将诱导出的丛生芽单个分开，可采用以下 2种方法将其接种于生根培养基中：

一步法：于 5 0 0 mL兰花瓶中注入 MS +花宝 1号 3g/ L+ 1.7 ％苹果+ 1.7 ％香蕉+ 1. 7 ％马铃薯的培养基150mL ,接人 2 0株根茎叶分化较完全、株型整齐的健壮小苗。接种后将瓶苗置于

温度 f 2 7 ± 2 ) ℃、光照强度 10 0 O ～ 20 0 0 l x ( 每天连续光照 1 0h) 、加设水帘

风机系统的环境下培养。一步到位定植可避免因个体差异大而导致瓶苗商品价值的下降，培养

3 ～ 4个月后即可出瓶。

二步法

于 5 0 0mL兰花瓶注入 MS + 花宝 1号 2g,L + 1.7 ％苹果+ 107 ％香蕉+ 107 ％马铃薯的

培养基 l 0 0 m L。接人 4 0 — 4 4株“一步法”筛选后剩下的无根、细弱小苗。培养 1 个

月后，按 2 0株／瓶再转接于 MS + 花宝 l号 3g /L + 1.7 ％苹果+ 1.7 ％香蕉+ 1.7 ％马铃

薯或 MS + 花宝 2号 3L + 1.7 ％苹果+ 1.7 ％香蕉+ 1.7 ％马铃薯的培养基中，每 5 o 0 mL

兰花瓶注人培养基 1 5 0 m L 。接种后将瓶苗置于温度( 2 7 ± 2 ) ℃、光照强度 10 O O ～ 2 0 0 0 l x ( 每天连续光照 1 0 h ) 、加设水帘风机系统的环境下培养。

3个月后即可出瓶。“二步法”对初期植入小苗的要求较低。淘汰出变异株后，有根苗

和无根苗均可植入，第 2次转接时调整同瓶整齐度即可。相比较而言，以“二步法”的生根效

果较好，但该方法步骤多且较繁琐，生产成本高。2种方法瓶苗出瓶后大棚恢复的差异不显著，因此在大规模生产中多选择“一步法”，在材料充足的情况下往往将小苗、弱苗淘汰。由于石

斛兰原球茎细胞全能性很强，不添加激素也可分化发育出正常的根、茎、叶，因此生根培养基可不

添加激素。

五、石斛兰（移栽）炼苗

生根培养 3个月后的石斛兰，大多已长出 1 O条根、5片叶和 1 个分蘖，叶片表面的角

质层也已形成，可有效抵抗低强度的光线照射及减少水分散失。出瓶前不需开盖放置，小苗根部

也不需浸泡消毒液，将培养基除干净即可直接出瓶种植。新购的水苔、穴盘和培养杯用清水冲

洗浸泡甩干即可，重复利用的材料必须消毒后方可再用。出瓶后 l 周内，温室光照强度应控制在

l0 0 O l x以内。必要时可于植株上方 l ～ 2 m处加盖 1 层遮荫网：相对湿度控制在 8 5 ％以上。每天喷雾 3 — 4 次可保证湿度。将组培所得的石斛兰苗移人温室，练苗 3d后移栽。移栽前

先洗净组培苗根部培养基，用 5 O﹪的多菌灵可湿性粉剂100 0 倍液浸泡 1 5min,然后移人苔藓基

质中。其移栽成活率为 7 2﹪。在石斛兰的组织培养过程中，会产生褐化。原因是由于植物离体组

织或细胞中的多酚氧化酶被激活，和酚类物质氧化产生棕黄色的醌类物质，并抑制其他酶的活性，

这些酚类物质慢慢扩散到培养基中去，毒害外植体，严重影响离体培养植物组织的生长分化和再生，造成生长不良至死亡。因此，在石斛兰的组织培养过程中，要防止褐化现象的产生，该试验通过在

培养基中加入0.5的活性碳，很好的解决了褐化问题，且发现加活性碳的培养基幼苗生长显著，根

系发达，叶色浓绿。石斛兰组培苗移栽后，成活率偏低，主要原因可能是缺乏共生菌。潘超美等“从

野生建兰和墨兰根中分离、纯化培养收获 4种菌株，发现其真菌对诱导石斛组织培养物( 愈伤组

织、拟原球茎以及不定芽) 的生长均有不同程度的促进作用。郭顺星等从野生铁皮石斛和金钗石斛根中分离获得内生真菌 2 5种，其中 5种真菌可促进石斛种子萌发； 7种真菌可与石斛幼苗形成共生关系 ] 。因此，分离和筛选促进石斛兰生长发育的菌根真菌，可能是提高试管苗移栽成活率，解决北方石斛兰生产的关键所在。石斛兰为世界四大热带兰之一，不同种或品种之间，其观赏价值可能有很大区别。离体扩繁技术为石斛种质资源有效的保存和持续利用提供了可能。

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升高，但到达一定的胚龄后，差异并不明显。 1.2 基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。罗吉凤等比较了MS 、l / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA 对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L 为最佳。 1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不

新鲜石斛的种植土壤技术一、清洁田园：园内出现的少数病叶应予剪除，收集冬季发病期的落叶予以烧毁。二、温室环境管理：夏季高温期温室内温度常高达40℃，应予通气降温避免造成植株生长不良，冬季低温期浇水宜选择晴朗有日照午时，并掀开部份塑料布增加通气性以降低室内相对湿度。三、加强肥水管理：培养健壮的植株，提高抗病能力。及时疏松土壤，注意各个生长时期的水肥匹配供应，并喷施新高脂膜，保墒保肥效防水分耗散，确保植体有一个良好的生长环境和条件。四、加强植株抗病能力：在植株生长期要及时喷施壮茎灵，使植物杆茎粗壮、植株茂盛。同时可提升抗灾害能力，减少农药化肥用量，降低残毒。结合生产季节和天气变化，及时用药，并加施新高脂膜增提药效，防病虫侵袭和有效灭杀病虫。在越冬前，要对土壤作灭杀病虫处理，并喷施新高脂膜，防寒保温防病虫迁徙。最佳繁殖时间：石斛最佳繁殖时间多在春季或夏季，以夏季为主。最佳生长土壤：由于石斛是附生植物，不要用普通的土壤栽培，用椰丝、椰糠、枯树枝、水苔等材料栽培较好。生长湿度要求：养殖石斛空气湿度要大，最好在空气湿度控制在80%以上，而且要求有良好通风。最佳生长温度：石斛喜温暖，最佳生长温度是白天20～25℃、夜间15℃。最佳生长光照：种植场所必须光照充足，对石斛的生长、开花更加有利。一、施撒肥料：石斛生长需要较为严格的环境和营养条件，施肥是其中一个重要的环节，因为施肥得当石斛植株才会生长旺盛，石

斛品质才会更高。施肥要合理，要少量、勤施肥，施肥时最好是使用有机肥或者专用肥，还要根据植株生长阶段调整施肥方案，保证植株的正常生长。二、浇水要点：石斛栽植后期空气湿度过小要经常浇水保湿，可用喷雾器以喷雾的形式浇水。三、修剪要领：每年春季石斛发芽前，采收石斛时，应剪去部分老枝、枯枝和过密的茎，以促进萌发健壮的新茎。种于树上的，还要剪去过密的树枝，使透光适度。四、盆土更换：将植株倒出后，先剔除旧的植料，剪去腐烂的老根，如果植株较大，可用一个较大的花盆，将木炭在盆地填一层，然后放入大植株，填实新植料后置于半阴处即可。换盆的时间应在开花后进行。五、繁殖要点：石斛主要采用分株繁殖法。石斛种植一般在春季进行，因春季湿度大、降雨量渐大，种植易成活。选择健壮、无病虫害的石斛，剪去3年以上的老茎作药用，二年生新茎作繁殖用。繁殖时减去过长老根，留2~3厘米，将种蔸分开，每克含2~3个茎，然后栽植，可采取贴石栽植和贴树栽植法。 (1)贴石栽植：在选好的石块上，按30厘米的株距凿出凹穴，用牛粪拌稀泥除一薄层于种蔸处塞人石穴或石槽，力求稳固不使脱落即可，可塞小石块固定。 (2)贴树栽植：在选好的树上，按30~40厘米在树上砍去一部分树皮将种蔸涂一薄层牛粪与泥浆混合物，然后塞入破皮处或树纵裂沟处贴紧树皮，再覆一层稻草，用竹蔑捆好。六、病虫防治： 1、石斛黑斑病：为害叶片使叶片枯萎，3~5月发生。防治方法：可用50%的多菌灵1000倍液喷雾1~2次。 2、石斛炭疽病：为害叶片及茎枝，受害叶片出现褐色或黑色病斑，1~5月均有发生。防治方法：用50%多菌灵1000倍液或50%甲基托布津1000倍液喷雾2~3次。

铁皮石斛组织培养研究进展 1、1 种子萌发1.2 基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。 1.4 天然添加物

在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。 1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。曾宋君等在改良N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。张治国等研究了6 种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响，结果表明，l /2 MS 是原球茎增殖的适宜培养基。 2.2 激素适宜的NAA 、KT 、6 一BA 浓度对原球茎的增殖起促进作用。唐桂香等以1 / 2 MS 为基本培养基，发现BA 1.0mg/L和NAAO.lmg/L有利于原球茎诱导增殖。蒋林等叫研究表明，l / 2Ms + NAA1.0mg/L+ KTO.2mg/L比较适合嗓球茎的增殖。蒋波等以1 / 2MS 为基本培养基.添加BA 2.0mg/L + NAA0.5mg/L或6 一BA3.0mg/L + NAAO.5 mg/L的激素，原球茎

铁皮石斛的组织培养研究专业班级：姓名：学号：课程：植物组织培养

目录摘要 (3) Abstract (4) 前言 (5) 1.培养基 (6) 1.1配方 (6) 1.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例） (6) 1.3灭菌 (8) 2.转接 (9) 2.1转接前准备 (9) 2.2转接 (9) 2.3培养 (9) 3.炼苗 (10) 3.1炼苗目的 (10) 3.2炼苗方法 (10) 4.移栽 (11) 4.1基质选择 (11) 4.2移栽技术要求 (11) 5.结论与分析 (12) 参考文献 (13)

摘要铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw．)多年生草本植物。铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。关键词：铁皮石斛组织培养移栽培养基转接快速繁殖

Abstract Dendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,named for its ferric green epidermis.As a rare traditional Chinese herbal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ，clear away heat ,and so on.The main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune modulators.When mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and have a low rate of natural reproduction.In order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique . key words:Dendrobium orchid Dendrobium tissue culture culture medium adapter rapid propagation

石斛组织培养研究进展张明夏鸿西朱利泉张玉进［摘要］目的：综述国内外对石斛组织培养进行的深入研究。方法：系统查阅国内外近10年来的有关文献20余篇。结果与结论：介绍了石斛组培的多种方法，对培养基、激素及多种条件对组培的影响作了论述，并提出了存在的问题及对策。［关键词］石斛；组织培养［中图分类号］S567.035.3 ［文献标识码］A ［文章编号］1001-5302(2000)06-0323-04 石斛属Dendrobium为兰科第2大属，多年生草本植物，全球计有1 500种。多生于树皮或岩石上，开花多，结果少，每果可含100万粒种子。种子细如粉尘［1］，每粒重约0.3～0.4 μg。种胚不超过球形阶段，即存在后熟现象。由于缺乏胚乳组织，需与真菌共生(symbiotical)才能萌发，自然条件下发芽率一般不及5%。石斛为合轴生长(sympodial)，分株是其繁殖的主要方式，对生长条件的要求较为苛刻。石斛属植物中有不少是名贵中药，在《本草纲目》中石斛被列为上品。我国76种石斛属植物中有近40种作药用［2］，著名的有D.nobile(金钗石斛)、 D.candium(铁皮石斛)、D.huosanness(霍山石斛)等。具有强阴益精、补肾益力、轻生延年等作用，其应用范围正迅速扩大。石斛属植物约有四分之一可供观赏［3］，称为石斛兰D.orchids，以花艳丽而著称，近年作为观赏植物发展迅速，已形成独立产业。集药用和观赏于一体的价值，加之过度的采伐利用和繁殖率低，造成了石斛供需之间的紧张状况，我国已将其列为濒于绝灭的受保护的中药品种之一。自1960年法国人Gmorel利用石斛基尖组织培养无病毒植株的无性繁殖技术创立以来，石斛组织培养逐步走向深入化。近年来，石斛组织培养的最佳条件，包括光照、温度、pH以及如何选用外植体，选用激素等取得长足进展，并利用组培技术研究种子萌发过程中的生理生化变化等，还获得了转基因石斛植株。我国石斛组织培养研究起步较晚，直到1984年，徐云鹏等才首次报道获得霍山石

由于石斛自然繁殖力极弱，生长缓慢，加之人们掠夺性采挖，资源已严重枯竭。而石斛栽培一直未解决其存活率低、进入盛产期年限长等问题，故石斛药源一直处于紧张状态。因此，组织培养、遗传转化、菌根技术、悬浮培养等生物技术在石斛的应用意义重大，甚为迫切。石斛的组织培养，可用种子、根、茎尖、茎节及叶等为外植体，但以种子进行组培快繁的为多。原球茎的增殖分化是石斛试管苗繁殖的关键，因此，研究原球茎增殖分化的适宜培养条件非常重要。特别是应用组织培养技术快速大量繁殖石斛试管苗，是解决其种苗与发展生产的有效途径。铁皮石斛的组织培养铁皮石斛，又名铁皮兰、节草、耳环石斛等。野生铁皮石斛为国家珍稀濒危保护植物（三级）。由于其生长环境要求特殊，野生资源已濒临灭绝。现云南晨安生物科技开发有限公司对铁皮石斛的组培快繁已获成功，月出苗量50万瓶以上，为铁皮石斛工厂化育苗和大面积栽培闯出了一条新路。 1 胚培养（种子培养）：取人工授粉的铁皮石斛果实，用75％的乙醇表面消毒，30s后再用0.1％升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗4~5次。在无菌操作下，把果实切成0.1mm见方的小块，接种到培养基上，每瓶3~5块。研究结果表明，N6培养基对种子萌发和生长最好，蔗糖浓度2％最佳，NAA浓度0.2~0.5mg/L最适合胚的萌发和生长；种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用；而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用，生根和壮苗培养中不加入NAA，只用N6+10％香蕉汁，苗长得更粗壮。培养温度25~28℃，光照强度1600~2000lx，每日10~12h。种子萌发后，转管3~4次，当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2cm长的根时，可将试管苗进行炼苗后移栽。在实验中尚发现，石斛原球茎的增殖与胚龄相关，不同胚龄培养，其萌发率不同：胚龄45

铁皮石斛组织培养方案报告一、实验目的了解铁皮石斛培养的方法和步骤，熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养的操作过程。二、实验器材超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。三、实验步骤配方：根据不同阶段，培养基配方有所差异。如表1 表1 各种培养基配方配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例） 10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA 1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾； 2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解； 3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛

有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀； 4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA（0.1mg/ml），混合均匀； 5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解； 6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。注意事项： ①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解； ②各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序； ③煮沸时，小心溶液溢出； ④分装时不要污染培养瓶瓶口。灭菌： 1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生； 2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝； 3）打开电源和排气阀，调节电压至220V； 4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀； 5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min； 6）关闭电源，使之自动降温至0℃。10min后，打开排气阀和锅盖； 7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。

在铁皮石斛组织培养研究进展组织培养摘要：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。神农本草经》《列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 1 种子萌发 1.1 胚龄不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛 2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。2 个月种龄的种子接入改良 N6 培养基中，萌发率仅为 6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养 2 周后开始萌发，萌发率为 87 % ; 4 一 6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为 95 ％。曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良 N6 培养基中进行组织培养，亦得到相似的结论，幼胚胚龄在 60d 以下时，萌发率极低，随着胚龄的增长，其萌发期逐渐缩短，萌发率逐渐升高，成苗率也逐渐升高，但到达一定的胚龄后，差异并不明显。 1.2 基本培养基铁皮石斛种子在 N6，改良 N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、 KundsonC , 1 / 2N6，White 等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、 MS 等 14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以 N6 最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在 SH 、改良 N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良 N6 或自制 PT 培养基。罗吉凤等比较了 MS 、l / 2MS 、 1 / 2 N6 和 White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到 95 % ，但 1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素在培养基中添加一定浓度的 NAA 可促进种子的萌发，浓度以 0.2 一 0.5mg/L 最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D 对胚的萌发起抑制作用。6 一 BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA 对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过 1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现 ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以 0.5mg/L 为最佳。 1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。 1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人 2 ％蔗糖。曾宋君等在改良 N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以 1/2 MS，MS 等作为基本培养基。张治国等研究了 6 种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响，结果表明， /2 l MS 是原球茎增殖的适宜培养基。 2.2 激素适宜的 NAA 、KT 、6 一 BA 浓度对原球茎的增殖起促进作用。唐桂香等以 1 / 2 MS 为基本培养基，发现 BA 1.0mg/L 和NAAO.lmg/L 有利于原球茎诱导增殖。蒋林等叫研究表明，l / 2Ms + NAA1.0mg/L+ KTO.2mg/L 比较适合嗓球茎的增殖。蒋波等以 1 / 2MS 为基本培养基.添加 BA 2.0mg/L + NAA0.5mg/L 或 6 一 BA3.0mg/L + NAAO.5 mg/L 的激素，原球茎的增殖系数较大。陈兆贵等认为原球茎增殖以 MS + NAA1.0mg/L + 6 一 BA1.0mg/L + KT1.0mg/L 为最佳，35d 增殖倍数达到 5 倍。

石斛组织培养研究进展张明1,夏鸿西2,朱利泉2,张玉进2 (1.重庆市中药研究院,重庆400065; 2.西南农业大学,重庆400716) [摘要]目的:综述国内外对石斛组织培养进行的深入研究。方法:系统查阅国内外近10年来的有关文献20余篇。结果与结论:介绍了石斛组培的多种方法,对培养基、激素及多种条件对组培的影响作了论述,并提出了存在的问题及对策。石斛属Dendrobium为兰科第2大属,多年生草本植物,全球计有1 500种。多生于树皮或岩石上,开花多,结果少,每果可含100万粒种子。种子细如粉尘[1],每粒重约0.3～0.4μg。种胚不超过球形阶段,即存在后熟现象。由于缺乏胚乳组织,需与真菌共生(symbiotical)才能萌发,自然条件下发芽率一般不及5%。石斛为合轴生长(sympodial),分株是其繁殖的主要方式,对生长条件的要求较为苛刻。石斛属植物中有不少是名贵中药,在《本草纲目》中石斛被列为上品。我国76种石斛属植物中有近40种作药用[2],著名的有 D.nobile(金钗石斛)、D.candium(铁皮石斛)、D.huosanness(霍山石斛)等。具有强阴益精、补肾益力、轻生延年等作用,其应用范围正迅速扩大。石斛属植物约有四分之一可供观赏[3],称为石斛兰 D.orchids,以花艳丽而著称,近年作为观赏植物发展迅速,已形成独立产业。集药用和观赏于一体的价值,加之过度的采伐利用和繁殖率低,造成了石斛供需之间的紧张状况,

我国已将其列为濒于绝灭的受保护的中药品种之一。自1960年法国人Gmorel利用石斛基尖组织培养无病毒植株的无性繁殖技术创立以来,石斛组织培养逐步走向深入化。近年来,石斛组织培养的最佳条件,包括光照、温度、pH以及如何选用外植体,选用激素等取得长足进展,并利用组培技术研究种子萌发过程中的生理生化变化等,还获得了转基因石斛植株。我国石斛组织培养研究起步较晚,直到1984年,徐云鹏等才首次报道获得霍山石斛试管苗[4]。此后又利用铁皮石斛、束花石斛、兜唇石斛的茎尖、叶尖或种胚获得了再生植株。 1石斛组织培养再生植株的获得组织培养获得石斛再生植物株的途径有器官发生型和原球茎发生型两种。器官发生型通过外植体组织培养,使预先存在的分生组织形成芽(如腋芽)或不定分生组织(如子叶、茎段、愈伤组织等)形成不定芽。此途径又可分为3种类型:无菌短枝型(又称节培法),芽增殖型,器官发生型;原球茎发生途径通过石斛适宜外植体诱导产生胚性愈伤组织并增殖,随后形成类胚组织原球茎进而发育成完整的再生植株。通常由种子离体培养产生的胚性组织称原球茎(protocorm),而上外植体叶尖、基尖等诱导形成的胚性组织称为拟原球茎(protocorm like bodies)即PLBs。原球茎或拟原球茎转入不含任何激素或生长素的培养基(如MS)便可再生出完整小植株。 1.1原球茎发生影响原球茎发生的主要有外植体的大小、来源、生理状态、培养基类型、激素浓度,种类、处理时间及一些其它因素。

铁皮石斛组织培养研究进展组织培养摘要：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 1 种子萌发 1.1 胚龄:不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。2 个月种龄的种子接入改良N6培养基中，萌发率仅为6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养2 周后开始萌发，萌发率为87 % ; 4 一6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为9 5 ％。 1.2 基本培养基:铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。 1.3 激素:在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。 1.4 天然添加物:在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发， 1.5 炭源:在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基:铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。 2.2 激素:适宜的NAA 、KT 、6 一BA 浓度对原球茎的增殖起促

鲜切花的养护方法当进行完鲜切花的预处理后就可以着手插花了，但一定要注意：容器中的水质要清洁，水深要浸没切口以上，水面与空气要有最大的接触面。盘类容器的水深，应以浸过花插高度为宜，以保证花材切口能及时吸水；瓶类容器的水深，应在瓶身的最宽处，因为此处的水面与空气接触面最大，有利于通气，有利于花材呼吸通畅，减少细菌的感染，相对延长水材的寿命。下面介绍一下鲜切花的养护要点： 1．合理用水插花时应选用清洁的河水、井水、池塘。水质混浊时须澄清后再用。如用自来水，应先放入缸（桶）内存放一昼夜后使用。 2．经常换水夏季每1－2天，秋冬季每2－3天换水一次（为防止瓶水变质，可放少量食盐等防腐剂），换水时要清除残花败叶，并适当剪短花枝，重新更替切口，并在花材上喷水。使插花经常保护鲜艳。 3．插花摆放在位置要合理夏季应避免强烈的阳光直射，冬季要近量离暖气或火炉远一点，否则将加速花枝的呼吸作用和水分的蒸发，易造成花朵凋萎早谢。另外，一定要注意不能将插花放在成熟的水果附近，因为水果会释放出乙烯，乙烯是一种对切花有特殊作用的有害气体，会引起切花早谢。石竹、水仙、满天星、百合花等均对乙烯气体特别敏感。 4．花器的清洁经常保持插花容器的清洁，有利增添插花的美感。各种花卉适用和方法： 1、水切法剪枝时可将花枝放入水中，在切口的稍上方斜剪，使断面增大，以提高吸水效果。如剑兰、牵牛花、牡丹、孤挺花、康乃馨、水仙、石斛兰等均可用此法。 2、逆水法。

花枝向下浸入水中，在水中剪切，利用重力将水强行灌入输水管道，并让它从叶面气孔吸水。如桔梗、芍药、蔷薇等。 3、水折法。和水中剪切法相同，在水中将茎折断。适用于绣球花、菊花、珍珠花等。 4、敲碎法。敲扁茎的根部，使吸水面积增大，适用于绣球花、菊花、大丽花、麻叶菊、百合等。 5、多次剪切法。切中处会附有杂质或沉淀物，因此每天剪2-3CM的枝条，可延长花期。 6、火炙法。下部放于火上，炙2-3分钟，到枝端为棕黄色，然后浸入水中。适用芍药、菊花、牡丹、枸骨、绣球花、草珊瑚。 7、水烫法。花枝用报纸裹好浸入热水中，2-3分钟即可，浸入时花枝要斜放，以免热气熏蒸花叶。波斯菊、紫丁香、太阳花等适用。 8、化学保鲜法。（1）阿斯匹林，基本花卉适用。（2）食盐，在切中处涂上食盐，再放回水中，适用于风铃草、桔梗、鸡冠花、波斯菊、仙客来等。（3）薄荷油，将切口捣碎，擦上薄荷油，再放入水中，适用天竺葵、紫宛等。（4）醋酸，玫瑰花、虞美人等除敲碎法外，宜浸入水中3-4秒钟，再插入容器中。（5）蜂蜜和维生素，每日换水时可加入2%R蜂蜜和1%的维生素。（6）糖水，百合花用火炙切口后，插于2%糖水中，可延长开花期。

石斛组织培养及快繁技术石斛兰是近几年在我国插花市场上流行的花卉，种类繁多，花形花姿优美，色彩艳丽，花期较长，具有较高的观赏价值。由于其分株能力弱，繁殖系数低，繁殖速度慢，远远不能满足商品化生产的要求。因此，组织培养和快繁技术是石斛商品化生产中重要的一个环节。石斛属于兰科植物，通过不同的途径都可以形成完整的组培苗，以实现石斛的快速繁殖。野生石斛的茎尖、茎段、叶片、种胚、鳞叶期原球茎、幼根以及根段等均可作为外植体，在适当条件和适当培养基中，就可诱导产生全能性的再生小植株。但以嫩枝的茎尖、腋芽或茎节、花梗诱导成功的可能性较大，而正在生长的芽是最理想的外植体。休眠芽也可用作外植体，但由于体积比较小，剥离较困难，生长也较慢。一、无菌播种石斛兰的种子极为细小，胚胎发育不完全，所谓的胚实际上就是一团未分化的胚细胞，且无胚乳组织，在自然状态下发芽率极低，只有与兰菌共生才能少量发芽，成苗更难，因此不能像其他植物一样在大田或苗床上播种，只有在无菌的补充营养的人工培养基上，促进其萌发成苗。 1、种子的采收与播种应用于无菌播种的石斛兰的种子的果实以刚成熟但尚未开裂时效果较好，未成熟时能发芽，但发芽率略低，而如果果实成熟开裂，种子难以收集与消毒，且种子发芽力降低。 2、培养基的选择石斛兰的播种培养基多种多样，不同的品种的最适培养基不同，比较常用的基本培养基有MS、改良MS、Nistch、N6、RE等。 3、培养基的消毒由于培养基内有丰富营养物质，极适合细菌和真菌的繁殖，造成污染，影响组培的成功，因此培养基消毒是必不可少的一个环节。消毒的方法一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。二、组织培养 1、外植体的采集与灭菌采用花梗为外植体时，由于花梗较光滑，消毒相对容易，污染率较低。采用花芽作外植体时，在花梗再长出、花朵未长成时效果最好。 2、培养基的选择和培养以石斛的播种培养为基本培养基再加入适量激素进行茎尖、节、花梗的组织培养均有成功的报道。 3、试管苗的移植一般来说，当石斛兰试管苗长出3～4片叶，与3～4条根，高约5cm～10cm后，才可

铁皮石斛的养殖方法铁皮石斛的生长习性铁皮石斛适宜在凉爽、湿润、空气畅通的环境生长。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。铁皮石斛的养殖方法 1、盆栽石斛的种料，盆底三分之一处用粒径2-3厘米石子，上部三分之二细碎树皮、碎粒石子盖面。 2、石斛分盆移栽繁殖最佳季节是春分至清明，这段时间是发芽季节，栽下去马上长新芽。注意深浅，太深将发芽点埋到植料下面，会影响发芽率，太浅根部难以保湿，影响生长，要讲究季节和栽培技术 3、养护管理：家养石斛各种环境不同，方法也不同。在雨水不能直接淋到的阳台，或窗架上种植的，在春季这段时间，因石斛草本植物喜爱阳光，适宜阳光直照;露天阳台种植应注意大雨或雨量过多，容易烂根倒苗，上面棚盖为防。具体根据实际情况，浇水一般5-7天一次，但不能太湿或太燥。 4、夏秋季节：没有雨水打到的阳台或窗架每天上午6时喷水一次，露天阳台为防雨水或强烈阳光直照，上盖阴棚，加强通风。 5、冬季阳台或窗架上7-10天喷水一次，适宜阳光直照，5℃以下不能喷水，施肥，将桂圆壳、荔枝壳等砸碎放盆面上即可，

同时要注意防蜗牛。采收：每年春末萌芽采收，采收时剪下三年生以上的茎枝，留下嫩芽，让其能继续生长。铁皮石斛的养殖方法：繁殖方式组织快繁组培苗栽培前应先进行14~21天的炼苗，具体措施是将组培苗移至炼苗房，使其在开放变化的环境中逐渐适应自然环境，待组培苗叶色浓绿时即可出瓶种植。出瓶前先将瓶盖打开，让瓶苗在室外空气中放置2~3天，让其适应自然温湿度。然后进行洗苗，洗苗时将带有培养基的幼苗轻轻取出，置于盆中清洗，污染苗和裸根苗或少根苗应分开放置。组培苗先用自来水清洗，主要是应洗掉琼脂，以免琼脂发霉引起烂根，而后再用清水漂洗一下。洗苗时最好根据苗的大小和优劣同步进行分级，以便栽培、管理，提高组培苗的成活率并使其生长整齐。分株扦插繁殖分株时选择1年生或2年生、色泽嫩绿、健壮、萌发多、根系发达及无病虫害的植株作种株，剪去枯枝、断枝、老枝及过长的须根，将株丛切开，分成小丛，每丛带有叶的茎株5~7根，即可种植。铁皮石斛的养殖方法：栽培技术移栽时间铁皮石斛的栽培时间一般是每年的春秋两季，且春季优于秋季。在浙江地区，铁皮石斛栽培的最佳时间为每年4月中旬至6

石斛组织培养与繁殖 0. 引言石斛( Dendrobium) 为多年生附生性草本植物，常附生于密林树干或岩石上，并常与苔藓植物伴生，是我国最常用传统药材与中成药的原料药。本实验选取铁皮石斛茎段进行组织培养，提出了一套快速繁殖程序。利用组织培养技术，对药用铁皮石斛进行快速繁殖，是目前解决生产种苗问题的有效方法。 1.材料及方法 1.1实验材料铁皮石斛为采自山区野生原种。2009 年移栽至室内。 1.2试验方法 1.2.1外植体的选取及预处理取2009 年的新生枝条作为外植体。剪取新生枝条长约3 cm，修剪枝叶，清洗附带泥土，然后用洗洁精沾海绵轻轻擦洗枝条外表，再用自来水冲洗干净。在无菌条件下用70%酒精浸泡数秒，之后浸泡在0. 1% Hgcl 溶液消毒处理10 min ，取出后用无菌水冲洗干净备用。 1.2.2接种在培养基中保持无菌条件，去掉处理好的枝条顶芽，茎段保留 1 cm长。并且每一小段必须保存有一茎节(芽) ，处理完后接种在不同激素浓度的培养基中。其中诱导分化培养基包括以下几种(1)MS + 6BA

0. 5 ?1. 0 mg/L +NAA 0. 25 mg/L; (2)MS + 6BA 0. 5 ?1. 0 mg/L +2, 4 - D 0. 2 mg/L; ( 3)MS + 6BA 2 mg/L +NAA0. 4mg/L。诱导生根培养基: 1 /2MS +NAA 0. 2 ?0. 5 mg/L 。 1.2.3组织培养室的条件接种后在全光照条件下培养，每天光照时间保持在10 h ，光照强度为1200 LX温度20 ± 2 Co 1.2.4诱导生根枝条经过继代培养，小苗长到约2 cm 高时，基部会生出不定根，这时可把生根切割移栽，没有生根诱导生根，具体做法是枝条经修剪后接种到1/2MS+NAA 0. 2?0. 5mg/L 培养基中，生根苗28 d 左右即可移栽到混合基质( 珍珠岩、树皮、泥碳等) 中炼苗。 2.结果与分析 2.1不同基础培养基对铁皮石斛生长的影响对于试管移栽苗来说，苗长势的好坏、强壮与否，直接关系到移苗的存活率。因此，设计了MS 1/2MS, KC 1 /2KC四种基础培养基考查铁皮石斛壮苗生长的影响。 2.2不同添加物对铁皮石斛壮苗生根的影响设置不同处理诱导生根培养基，用MS加NAA2 mg/L，pH为5. 6。将大小达3?4 cm的无根苗切割成单苗，接种于5种不同处理生根培养基上，每种培养基接种20 株，培养28 do 后统计结果。 2.3不同激素浓度对外植体的诱导

石斛兰的家庭养殖技巧石斛兰与卡特兰、蝴蝶兰、万带兰并列为四大热带观赏兰类，是兰科中最大的属之一，有1500～1600个原生种，其中约有60种产于我国。石斛根据其生物学特征及对生态要求的不同，分为落叶类石斛与常绿石斛两大类。落叶类石斛每年从假鳞茎上部抽出花序，花后从基部长出新芽，并生长成新的假鳞茎，在生长期结束时叶片脱落或于翌年春季脱落。常绿石斛的叶片可维持数年不凋，花序常于假鳞茎的顶部或上端的节处抽牛。石斛兰品种较多，目前常见观赏栽培的有密花石斛、球花石斛、蝴蝶石斛、金钗石斛、报春石斛、美花石斛、香石斛等。石斛花形、花姿优美，艳丽多姿，许多种类气味芳香，是重要的切花种类，也可盆栽。要想养好石斛应根据不同种类石斛的生物学特性，做到以下几点：遮光石斛兰在原产地常附生在热带雨林中的树干或岩石上，因而喜半阴的环境，在春、夏生长旺盛期，应进行遮光，可遮光60％～70％，但在冬季休眠期需要较多的阳光，一般可遮光20％～30％，或不遮

光。保温石斛兰喜高温高湿，落叶种类越冬的温度夜间可低至10℃左右或更低，常绿种类则不可低于15℃，同时要注意保持较大的昼夜温差(10～15℃)，温差过小时会严重影响石斛兰的生长和开花。适当浇水石斛兰既喜欢有充足的水分，又忌过于潮湿，过湿时会引起烂根而生长不良，甚至死亡。落叶种类在冬季可适当干燥，少浇水，但盆栽材料不应过分干燥，空气湿度不应太低。常绿种类冬季只要温室温度高，仍需保持充足水分。经常喷雾天晴干热的生长季节，应经常向盆株的周围喷水，以提高空气湿度。雨季湿度较大，可停止喷雾，并注意盆中不要积水。合理施肥

石斛兰喜薄肥勤施，生长期间每隔7～10天可施一次腐熟的饼肥水，或根外追施0.1％的全元素复合肥。落叶种类在休眠期间及常绿种类在由于低温而强迫休眠时，应停止施肥。

铁皮石斛种子的组织培养考虑了好久，在网上买了一粒种子，不是不舍得，就是不知道是不是真的铁皮石斛，终于下手了，管他呢，至少是石斛吧，O(∩_∩)O~ 种子是买回来了，又犯懒了，本人最大的毛病就是思想很勤快，要是干实事，很懒，我是没见过我这么懒的人。懒也得做啊，种子再开口了怎么办？狠狠心开始干! 准备：首先是配制培养基，查了下资料，种子的无菌萌发培养基为1/2ms培养基，蔗糖20g，我稍微做了下调整，培养基1/2ms，蔗糖由20g变成25，琼脂为5g。无菌萌发培养基：1/2ms培养基+蔗糖25g+琼脂5g（灭完菌接种的时候才发现，有点硬了！）首先，我没有蒸馏水，用的就是大桶水，（态度不严谨啊O(∩_∩)O哈哈~)把琼脂5g，1/2ms培养基 2.14g，蔗糖25g一股脑的倒入800ml的冷水里（注：个人认为，琼脂在开水的时候倒入容易结块，不容易溶解，当然用温水是好的，但何必呢，所以先倒入冷水，然后再加热，大家以为对不对啊），轻轻的搅拌，让培养基和蔗糖完全溶解，然后定容，注意，定容的时候要定容到1100ml，因为我们在加热的时候还有高压灭菌的时候，会有大量的水蒸气出现，多出的100ml是减少这部分的损失。

然后测量一下ph值，大概在3.4（当时记录了，但后来不知道弄哪里去了，也可能是4.2），先不管他，加热溶解！把烧杯放到液化气灶上开最小火，把烧杯放上，然后开始加热边搅拌............................ 好漫长啊！大概10分钟的样子，终于好了，拿下来，开始测量ph值，然后慢慢的一滴一滴的加入氢氧化钠溶液边搅拌边测量，5.8！

石斛组织培养方案 1、植物介绍：石斛（Dendrobium）属兰科多年生草本气生植物，全世界兰科植物约700属，近2000种，世界各地均有分布。我国兰科有170余属，约有1200余种，而石斛属有74种和2个变种。石斛属为兰科第二大属，石斛属植物中有近40 种具有药用价值。 1）供试材料来源：选取长势旺盛的枝条，去除多余的叶片，切取除顶芽剩余的作为外植体。提供的材料去十堰花鸟市场购买。 2）技术路线：外植体处理→接种→增殖培养→生根培养→移栽 2方法步骤： 1）外植体的剪取与消毒程序的筛选：切取除顶芽外的石斛作为外植体段去叶片留叶柄→流水冲洗30min→75%酒精浸泡30s→0.1%升汞溶液消毒3~7min→无菌水冲洗4~5次→用滤纸吸去水分→将茎段切成带有1~2个腋芽的小

段 2)初代培养基的筛选：选用MS为最基本的培养基，根据需要的不同，添加激素6-BA、NAA、ZT。 3)增殖培养基的筛选：以MS为基本培养基，按激素6-BA、NAA、ZT含量的不同，诱导增殖培养基设4系列处理（培养基1~4号），生根培养基设2系列处理（培养基5~6号），培养基配方表如下：表中培养基蔗糖含量：分化和继代培养基为30g/L，pH值5.6~5.8，在115MPa气压下灭菌20min。

4)生根培养基的筛选不同的培养基进行生根的优势也不一样，根据大量的材料表明1/4 MS中的小苗生根均明显优于全量的MS培养基，所以用激素以IBA 0.5mg/L效果最好，生根情况好且所需天数也最短。最适培养基应该为1/4 MS+IBA 0.5mg/L 5)试管苗移栽试验：当苗根长到1~1.5cm时，打开瓶盖，取出小苗，洗净培养基。用多灵菌500~800倍浸泡30min左右，然后栽入0.1%高锰酸钾消毒过的苗床上。苗床基质分5个处理，分别为沙：草炭土=1:1、沙：蛭石=1：1、纯沙、纯蛭石、腐苔藓。（根据资料查找以腐苔藓为基质最好，成活率达80%以上，草炭土和沙半量也可达50%的成活率。）

铁皮石斛茎段组织培养与栽培摘要: 为试验铁皮石斛茎段组织培养与栽培，以铁皮石斛茎段为外植体，结合铁皮石斛的生物学特性，综述铁皮石斛组织培养与栽培的过程技术。观察研究基本培养基、天然附加物和植物生长调节剂对铁皮石斛生长的影响。验证和探究铁皮石斛茎段组织培养技术并对铁皮石斛的组织培养与栽培管理技术进行了思考与展望。关键词: 铁皮石斛; 组织培养; 茎段; 移栽; 驯化 0.引言铁皮石斛( Dendrobium officinale Kimura et Migo) 是兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw．)多年生草本植物，又名黑节草，俗称铁皮枫斗，分布于云南、安徽、贵州、浙江、江西、广东和广西等地，是我国传统名贵珍稀中药材，其有效成分主要为石斛多糖、石斛碱、氨基酸等，其中石斛多糖的含量高达21.7%，能显著提高机体免疫功能，具有养胃出津、补肾益力、滋阴清热、耐缺氧、抗疲劳、抗肿瘤等功效。现代药理学研究发现，石斛还具有抗衰老和扩张血管的作用。铁皮石斛喜荫凉、湿润的环境，常附在高海拔悬崖峭壁或林内树干和岩石缝隙中。由于其药用价值高、生长条件特殊和分布受局限，且经长期人为采挖，野生资源濒临灭绝。铁皮石斛是2005版《中华人民共和国药典》收载的3种石斛属植物之一，为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低，是一种珍稀的药用植物和和名贵的室内观赏植物.。

铁皮石斛自然繁殖力极低, 常规繁殖又较困难, 且多年来对铁皮石斛的采集量远大于其生长量, 野生铁皮石斛自然繁殖已濒临绝迹。由于药用价值高，人为的过度开采与生态破坏，野生铁皮石斛已濒临灭绝，1987年国务院将其列为国家重点保护植物。 1 材料与方法 1. 1 试验材料野生云南铁皮石斛，取材于浙江农林大学组培实验室，取其茎段作为外植体进行组织培养。 1. 2 试验方法 1. 2. 1 外植体消毒取铁皮石斛的茎，去除多余叶片后用解剖刀将茎切成含 3 ～ 4 个节点的茎段，保留节点。依次用中性洗涤剂清洗，自来水冲洗20min，用70% 的乙醇浸泡10 ～60 s，再转入0. 1% 的氯化汞中，灭菌 5 ～11 min 后倒去氯化汞溶液，用无菌水反复漂洗材料3-5 次。用无菌纸吸去茎段上多余水分，将其切成1 ～2 cm 带一个芽点的茎段，接种到培养瓶中培养。 1. 2. 2 培养基制备铁皮石斛培养基均添加3% 蔗糖，0. 7% 琼脂，pH 值为5. 8。按不同目的在基本培养基中加入6-BA、NAA、IBA，每个培养瓶分装50 m 培养基，密封。经过121 ℃高温灭菌25 min。不定芽的诱导培养基是在基本培养基MS 中加入细胞分裂素和生长素，采用不用浓度水平的NAA 和6-BA。组培苗的壮苗与生根，将生长状态稳