体液免疫球蛋白测定

第一节血清IgG、IgA、IgM测定

血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM定量测定方法一般有单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、ELlSA、免疫比浊法、放射免疫分析法等。临床常用单向环状免疫扩散法和免疫比浊法来测定血清免疫球蛋白含量。

一、血清IgG、IgA、lgM测定

（一）单向环状免疫扩散法

该法的原理是将抗血清均匀地分散于琼脂或琼脂糖凝胶内，胶板上打孔，孔内注入抗原或待测血清，抗原在含有抗血清的胶内呈放射状（环状）扩散，在抗原抗体达到一定比例时形成可见的沉淀环。在一定条件下，抗原含量越高，沉淀环越大。

（二）免疫比浊法

该法具有检测范围宽、测定结果准确、精密度高、检测时间短（一般在几分钟内即可完成测试）、敏感度高、稳定性好等优点。

二、血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义

（一）年龄

新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG，故血液中含量较高，接近成人水平。

（二）免疫球蛋白IgG、IgA、IgM均升高

慢性肝脏疾病如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化患者血清中可见3种Ig均升高。慢性细菌感染如慢性支气管炎、肺结核，血IgG可升高。宫内感染时脐血或出生后的新生儿血清中IgM含量可增高。SLE患者以IgG、IgA升高较多见。类风湿关节炎患者以IgM增高为主。

（三）单一免疫球蛋白升高

主要是指患者血清中某一类免疫球蛋白含量显著增多，大多在30g／L以上，这种异常增多的免疫球蛋白其理化性质十分一致，称为单克隆蛋白（MP）即M蛋白。此类异常增多的免疫球蛋白多无免疫活性，故又称副蛋白。由它所致的疾病称为免疫增殖病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等。

（四）免疫球蛋白降低

先天性低Ig血症，主要见于体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。IgA缺乏患者，易发生反复呼吸道感染。IgG缺乏患者，易发生化脓性感染。IgM缺乏患者，易发生革兰阴性细菌败血症。

第二节血清IgD和IgE测定

正常人血清中IgD含量很低，仅占血清免疫球蛋白总量的0.2%。膜结合型IgD（mIgD）构成BCR，是B 细胞分化发育成熟的标志。未成熟的B细胞仅表达mIgM，成熟B细胞可同时表达mIgM和mIgD。活化的B

细胞或记忆B细胞其表面的mIgD逐渐消失。

IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌。其重要特征为糖含量高达12%。IgE为亲细胞抗体，可引起Ⅰ型超敏反应。IgE可能与机体抗寄生虫免疫有关。

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体液免疫球蛋白测定

体液免疫球蛋白测定第一节血清IgG、IgA、IgM测定血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM定量测定方法一般有单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、ELlSA、免疫比浊法、放射免疫分析法等。临床常用单向环状免疫扩散法和免疫比浊法来测定血清免疫球蛋白含量。一、血清IgG、IgA、lgM测定（一）单向环状免疫扩散法该法的原理是将抗血清均匀地分散于琼脂或琼脂糖凝胶内，胶板上打孔，孔内注入抗原或待测血清，抗原在含有抗血清的胶内呈放射状（环状）扩散，在抗原抗体达到一定比例时形成可见的沉淀环。在一定条件下，抗原含量越高，沉淀环越大。（二）免疫比浊法该法具有检测范围宽、测定结果准确、精密度高、检测时间短（一般在几分钟内即可完成测试）、敏感度高、稳定性好等优点。二、血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义（一）年龄新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG，故血液中含量较高，接近成人水平。（二）免疫球蛋白IgG、IgA、IgM均升高慢性肝脏疾病如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化患者血清中可见3种Ig均升高。慢性细菌感染如慢性支气管炎、肺结核，血IgG可升高。宫内感染时脐血或出生后的新生儿血清中IgM含量可增高。SLE患者以IgG、IgA升高较多见。类风湿关节炎患者以IgM增高为主。（三）单一免疫球蛋白升高主要是指患者血清中某一类免疫球蛋白含量显著增多，大多在30g／L以上，这种异常增多的免疫球蛋白其理化性质十分一致，称为单克隆蛋白（MP）即M蛋白。此类异常增多的免疫球蛋白多无免疫活性，故又称副蛋白。由它所致的疾病称为免疫增殖病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等。（四）免疫球蛋白降低先天性低Ig血症，主要见于体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。IgA缺乏患者，易发生反复呼吸道感染。IgG缺乏患者，易发生化脓性感染。IgM缺乏患者，易发生革兰阴性细菌败血症。第二节血清IgD和IgE测定正常人血清中IgD含量很低，仅占血清免疫球蛋白总量的0.2%。膜结合型IgD（mIgD）构成BCR，是B 细胞分化发育成熟的标志。未成熟的B细胞仅表达mIgM，成熟B细胞可同时表达mIgM和mIgD。活化的B 细胞或记忆B细胞其表面的mIgD逐渐消失。 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌。其重要特征为糖含量高达12%。IgE为亲细胞抗体，可引起Ⅰ型超敏反应。IgE可能与机体抗寄生虫免疫有关。第1页

免疫比浊法检测免疫球蛋白

免疫比浊法检测免疫球蛋白一、实验目的利用免疫比浊法绘制标准曲线，并检测样品中免疫球蛋白的浓度。（本小组检测的为IgG样品）二、实验原理 1.抗原抗体反应(Antigen-antibody reaction)：抗原与其刺激机体产生的相应抗体在体内或体外发生特异性结合的反应。反应特点有：特异性、比例性、可逆性、敏感性。影响因素有：电解质、温度、酸碱度。 2.免疫比浊法：合适比例的抗原抗体形成的免疫复合物，在PEG作用下形成微粒，使样品浊度发生变化。当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱，根据光的强度改变可测得微粒浓度。分类：①透射比浊法（Transmission tubidimetry）当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时，由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。当抗体浓度固定（过量），样品的浊度与其中所含抗原量成正比。（特点）透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计，几乎所有的实验室均能开展。不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的时间较长。②散射比浊法（Nephelometry）光线通过检测溶液时，被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光，其强度与复合物的数量和散射夹角成正比，与光的波长成反比。（特点）优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。本实验采用透射法。 3.聚乙二醇PEG的作用：在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，3~4％的聚乙二醇，可破坏抗原抗体的水化层，促进抗原抗体靠近反应，但如浓度不适合，会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。三、实验材料免疫球蛋白A,G(IgA,IgG)测定试剂(试剂1[PEG]，试剂2[羊抗人IgA, IgG]）（1管/每组）免疫球蛋白A, G(IgA,IgG)校准品，蒸馏水，血清样本（1管）微量加样枪、ep管（1.5mL离心管）酶标仪、水浴箱四、实验步骤 1.在7个EP管中各加250μL IgG试剂1（PEG）。 2.7管分别加入蒸馏水、校准品原液、1：2校准品、1：4校准品、1：8校准品、1：16校准品、样本各2μL。 3.混匀后37℃水浴5min。 4.7管各加入85μL IgG试剂2（羊抗人IgG）。 5.混匀后37℃水浴10min。 6.分别吸取200μL至96孔酶标板中，用酶标仪在700nm处读取OD值。五、实验结果与数据处理 2.标准曲线

体液免疫球蛋白测定题库2-2-10

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]多发性骨髓瘤患者血清中有（） A.游离的轻链和重链 B.异常Ig轻链升高 C.无免疫功能的Ig重链 D.单克隆IgM增高 E.大量的M蛋白多发性骨髓瘤患者血清中有大量的M蛋白；巨琼蛋白血症患者血清中单克隆IgM增高；重链病患者血清和尿中存在着无免疫功能的Ig重链；轻链病患者血清中异常Ig轻链升高；良性单克隆丙种球蛋白白血病患者血清和尿中无游离的轻链和重链。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]男，45岁，因骨盆骨折住院。X线检查发现多部位溶骨性病变。实验室检查：骨髓浆细胞占25%，血沉50mmh，血红蛋白为80gL，尿本周蛋白阳性，血清蛋白电泳呈现M蛋白，血清免疫球蛋白含量IgG8gL、IgA12gL、IgM0.2gL。如进一步对该患者进行分型，则应为（）A.A.IgG型 B.IgA型 C.IgD型 D.IgE型 E.非分泌型

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]男，45岁，因骨盆骨折住院。X线检查发现多部位溶骨性病变。实验室检查：骨髓浆细胞占25%，血沉50mmh，血红蛋白为80gL，尿本周蛋白阳性，血清蛋白电泳呈现M蛋白，血清免疫球蛋白含量IgG8gL、IgA12gL、IgM0.2gL。目前最常用的鉴定M蛋白类型的方法为（）A.A.免疫固定电泳 B.免疫扩散 C.ELISA D.比浊法 E.对流电泳 https://www.360docs.net/doc/1b5320571.html,/ 打屁股小游戏

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]男，45岁，因骨盆骨折住院。X线检查发现多部位溶骨性病变。实验室检查：骨髓浆细胞占25%，血沉50mmh，血红蛋白为80gL，尿本周蛋白阳性，血清蛋白电泳呈现M蛋白，血清免疫球蛋白含量IgG8gL、IgA12gL、IgM0.2gL。该患者最可能的临床诊断是（） A.A.一过性单克隆丙种球蛋白病 B.持续性多克隆丙种球蛋白病 C.多发性骨髓瘤 D.冷球蛋白血症 E.原发性巨球蛋白血症

免疫球蛋白的结构

第一节免疫球蛋白的结构（The Structure of Immunoglobulin) B淋巴细胞在抗原刺激下增殖分化为浆细胞，产生能与相应抗原发生特异性结合的免疫蛋白，这类免疫球蛋白被称为抗体（antibody, Ab）。 1937年，Tiselius用电泳方法将血清蛋白分为白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等组分，其后又证明抗体的活性部分是在γ球蛋白部分。因此，相当长一段时间内，抗体又被称为γ球蛋白（丙种球蛋白）。实际上，抗体的活性除γ球蛋白外，还存在于α和β球蛋白处。1968年和1972年的两次国际会议上，将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统一命名为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。 Ig是化学结构的概念，它包括正常的抗体球蛋白和一些未证实抗体活性的免疫球蛋白，如骨髓瘤病人血清中的M蛋白及尿中的本周氏（Bence Jones, BJ）蛋白等。免疫球蛋白可分为分泌型（secreted Ig,SIg）和膜型（membrane Ig, mIg）。前者主要存在于血清及其他体液或外分泌液中，具有抗体的各种功能；后者是B细胞表面的抗原识别受体。 ☆☆相关素材☆☆ 图片正常人血清电泳分离图一免疫球蛋白的基本结构 The basical structure of immunoglobulin 免疫球蛋白分子是由两条相同的重链（heavy chain，H链）和两条相同的轻链（light chain，L链）通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。 X射线晶体结构分析发现，IgG分子由3个相同大小的节段组成，位于上端的两个臂由易弯曲的铰链区（hinge region）连接到主干上形成一个"Y"形分子，称为Ig分子的单体，是构成免疫球蛋白分子的基本单位。

血清免疫球蛋白测定.docx

血清免疫球蛋白测定 B-淋巴细胞受抗原刺激后，引起一系列细胞形态与生化特性变化，转化为淋巴母细胞并增生繁殖，最后演化为浆细胞，合成免疫球蛋白。免疫球蛋白普遍存在于生物体的血液、体液、外分泌液及某些细胞（如淋巴细胞）的细胞膜上。免疫球蛋白是一组具有抗体特性的球蛋白，其分子量很大，含有1000个以上的氨基酸分子，均由其共同抗原的两个相同的轻链（L链）和具有特异性抗原的两个不同的重链（H链）组成。 1分类根据重链的氨基酸组成不同，免疫球蛋白可分为分五类：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。 1.1IgG IgG是人体的主要免疫球蛋白，也是唯一能通达胎盘的免疫球蛋白。根据IgG的重链氨基酸顺序的差别，可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4各亚类。IgG是主要抗感染抗体，对各种细菌、病DU有抗体活性，并有激活补体的作用。 1.2IgA IgA是分泌液中主要抗体，可分为IgA1和IgA2两个亚类。存在于血清中的称血清型IgA，存在于泪液、乳汁、胃肠道、呼吸道和泌尿生殖道分泌液中的称分泌型IgA，对局部粘膜有抗菌和抗病DU作用。

1.3IgM IgM可分为IgM1和IgM2两个亚类。是抗原刺激最先产生的免疫球蛋白，有较强的固定补体、溶解细菌及细胞的能力。IgM是抗革兰氏阴性菌和异体红细胞的主要抗体，也是存在于B淋巴细胞表面的主要免疫球蛋白。 1.4IgD 其作用与过敏反应有关。据报道，IgD可对某些抗原起反应，如青霉素、胰岛素、核抗原、甲状腺抗原等。它存在于B淋巴细胞表面，构成早期的膜受体，具有识别抗原，制动B淋巴细胞的分化作用。 1.5IgE 与I型变态反应有关，具有亲细胞特性。IgE通过Fc段与肥大细胞、嗜碱粒细胞上的Fc受体结合，故属亲同种细胞性抗体。当机体再次接触同种抗原后，过敏原即与结合在细胞表面的IgE作用，使细胞释放介质，引起平滑肌痉挛，血管通透性增加等过敏反应，还具有抗寄生虫感染作用。 2正常参考值 IgG：8～16g/L，IgA：1～4g/L，IgM：0.5～1.9g/L，IgD：0.01～0.4g/L，IgE：0.001～0.009g/L。 3临床意义 3.1血清免疫球蛋白降低血清免疫球蛋白水平取决于免疫球蛋白合成和分解代谢的速率以及由体内丢失的程度。血清免疫球蛋白降低可由于合成不足，丢失

免疫球蛋白IgA测定

免疫球蛋白IgA测定 1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2原理免疫透射比浊法抗免疫球蛋白A抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。 3标本要求 3.1使用新鲜血清,不使用血浆. 3.2在采集血液后2h分离血清. 3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次. 3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.

4试剂 4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgA试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014） 4.1.1 试剂组成 R1:TRIS 缓冲液：20 mmol/l，pH 8.0；氯化钠：200 mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。 R2:抗人免疫球蛋白A抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20 mmol/l；氯化钠：150 mmol/L；防腐剂。 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：90天。 4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。 4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgA校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。 5 仪器

AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤 6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。 7 质量控制在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

血清免疫球蛋白及补体检测应用于肾病综合征诊断和治疗的临床价值研究

血清免疫球蛋白及补体检测应用于肾病综合征诊断和治疗的临床价值研究发表时间：2017-06-23T10:24:27.927Z 来源：《航空军医》2017年第8期作者：王一鸣 [导读] 肾病综合征的临床症状有大量的蛋白尿出现和水肿情况等，在目前的临床医学中，尚未明确具体的肾病综合征发病机制。（长沙市中心医院检验科湖南长沙 410000）摘要：目的研究血清免疫球蛋白及补体检测应用于肾病综合征诊断和治疗的临床价值。方法随机选择我院收治的肾病综合征患者，共90例，收治时间在2016年1月~2016年8月期间，以此作为研究对象，称为研究组，并同期选择90例健康体检人群为对照对象，称为对照组，对所有实验者予以血清免疫球蛋白及补体检测，比较2组实验者的血清免疫球蛋白及补体检测的结果。结果与对照组相比，研究组患者的血清免疫球蛋白的IgG、IgA数据均明显更低，且IgM数据明显更高，有统计学意义，p＜0.05；与对照组相比，研究组患者的补体检测结果中C3数据明显更低，有统计学意义，p＜0.05，但对照组与研究组之间的C4数据差异没有统计学意义，p＞0.05。结论血清免疫球蛋白及补体检测应用于肾病综合征中的临床价值显著，可以有效指导患者进行临床治疗，应大力推广在临床检验中应用。关键词：血清免疫球蛋白；补体检测；肾病综合征；诊断；临床价值肾病综合征的临床症状有大量的蛋白尿出现和水肿情况等，在目前的临床医学中，尚未明确具体的肾病综合征发病机制，但是有临床研究者表示，该病的发生与机体细胞的免疫功能发生紊乱有密切的相关性[1-2]。本文主要为了研究血清免疫球蛋白及补体检测应用于肾病综合征诊断和治疗的临床价值，特选择了部分的肾病综合征患者为研究对象，现报告如下： 1.一般资料和方法 1.1一般资料随机选择我院收治的肾病综合征患者，共90例，收治时间在2016年1月~2016年8月期间，以此作为研究对象，称为研究组，并同期选择90例健康体检人群为对照对象，称为对照组。研究组：患者有90例，男性患者有46例，女性患者有44例，年龄范围在30~40岁之间，平均年龄为（35.55±4.44）岁；对照组：体检者有90例，男性体检者有47例，女性体检者有43例，年龄范围在30~40岁之间，平均年龄为（35.51±4.41）岁；本次所有实验对象均明白研究目的，自愿参与到研究之中，签署了知情同意书，对比2组实验对象的一般资料，没有统计学意义，p＞ 0.05，可以进行组间对比。 1.2方 3讨论综合肾病综合征是一种综合症，主要以肾小球病变为主要的特征。在正常情况下，人体内最高含量的免疫球蛋白是IgG，但是由于疾病的发生，会造成蛋白丢失，进而通过肾脏的滤过膜，让患者机体不能在肾组织存在链球菌。由此可得，IgG的含量会在肾病综合征患者中急剧减少；IgA在免疫中起到了巨大的临床价值，肾病综合征患者的IgA升高与机体发生炎性反应有关[4-5]。补体是球蛋白，具有酶活性，主要在机体中参与免疫反应，会与免疫复合物发生沉积，并激活补体，但是不管是通过哪一种途径进行补体激活，都会激活机体C3，因此，C3 会耗费较大，而若是患者持续性的C3水平降低，则有可能表明患者处于活动病变期。根据数据显示，研究组患者的IgG、IgA和IgM分别为（5.31±2.52）g/L、（1.85±0.82）g/L、（2.06±0.32）g/L，且研究组患者的C3为（0.81±0.42）g/L，与对照组相比，有统计学意义，p＜0.05；但研究组患者的C4（0.35±0.03）g/L与对照组之间数据没有差异，p＞0.05；这也由此说明了，血清免疫球蛋白及补体检测在诊断和治疗肾病综合征中有积极的指导价值，能对患者的疾病病情进行预示，其实施优势性明显。综上所述，血清免疫球蛋白及补体检测应用于肾病综合征中的临床价值显著，可以有效指导患者进行临床治疗，应大力推广在临床检验中应用。参考文献 [1]于慧，于小汇，高歌.血清同型半胱氨酸、胱抑素C及尿微量白蛋白联合检测对糖尿病肾病的临床价值[J].中国现代药物应用，2015，9（6）：44-45. [2]朱勤.参芪地黄汤对阿霉素肾病大鼠足细胞Nephrin蛋白和mRNA表达的影响[J].中华中医药学刊，2015，33（2）：296-299. [3]甘钦，黄欣，王涛.糖尿病肾病大量蛋白尿患者的降蛋白用药分析[J].中国临床药理学杂志，2016，32（24）：2300-2302.

血清免疫球蛋白测定(一)

血清免疫球蛋白测定(一) B-淋巴细胞受抗原刺激后，引起一系列细胞形态与生化特性变化，转化为淋巴母细胞并增生繁殖，最后演化为浆细胞，合成免疫球蛋白。免疫球蛋白普遍存在于生物体的血液、体液、外分泌液及某些细胞（如淋巴细胞）的细胞膜上。免疫球蛋白是一组具有抗体特性的球蛋白，其分子量很大，含有1000个以上的氨基酸分子，均由其共同抗原的两个相同的轻链（L链）和具有特异性抗原的两个不同的重链（H链）组成。 1分类根据重链的氨基酸组成不同，免疫球蛋白可分为分五类：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。 1.1IgG IgG是人体的主要免疫球蛋白，也是唯一能通达胎盘的免疫球蛋白。根据IgG的重链氨基酸顺序的差别，可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4各亚类。IgG是主要抗感染抗体，对各种细菌、病毒有抗体活性，并有激活补体的作用。 1.2IgA IgA是分泌液中主要抗体，可分为IgA1和IgA2两个亚类。存在于血清中的称血清型IgA，存在于泪液、乳汁、胃肠道、呼吸道和泌尿生殖道分泌液中的称分泌型IgA，对局部粘膜有抗菌和抗病毒作用。 1.3IgM IgM可分为IgM1和IgM2两个亚类。是抗原刺激最先产生的免疫球蛋白，有较强的固定补体、溶解细菌及细胞的能力。IgM是抗革兰氏阴性菌和异体红细胞的主要抗体，也是存在于B淋巴细胞表面的主要免疫球蛋白。 1.4IgD 其作用与过敏反应有关。据报道，IgD可对某些抗原起反应，如青霉素、胰岛素、核抗原、甲状腺抗原等。它存在于B淋巴细胞表面，构成早期的膜受体，具有识别抗原，制动B淋巴细胞的分化作用。 1.5IgE 与I型变态反应有关，具有亲细胞特性。IgE通过Fc段与肥大细胞、嗜碱粒细胞上的Fc受体结合，故属亲同种细胞性抗体。当机体再次接触同种抗原后，过敏原即与结合在细胞表面的IgE作用，使细胞释放介质，引起平滑肌痉挛，血管通透性增加等过敏反应，还具有抗寄生虫感染作用。 2正常参考值 IgG：8～16g/L，IgA：1～4g/L，IgM：0.5～1.9g/L，IgD：0.01～0.4g/L，IgE：0.001～0.009g/L。3临床意义 3.1血清免疫球蛋白降低血清免疫球蛋白水平取决于免疫球蛋白合成和分解代谢的速率以及由体内丢失的程度。血清免疫球蛋白降低可由于合成不足，丢失增多和分解加快引起。合成不足：血清免疫球蛋白降低可由于原发性或继发性合成缺陷所致。原发性免疫缺陷病有性联先天性丙种球蛋白缺乏症、婴儿暂时性丙种球蛋白低下症、伴IgM升高的性联低丙种球蛋白血症、选择性IgA缺乏症、选择性IgM缺乏症、选择性IgG亚类缺乏症等。继发性免疫缺陷病有慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症和恶性肿瘤等。丢失增多：从胃肠道丢失的见于溃疡性结肠炎、消化道癌肿、吸收不良综合征、淋巴瘤、肠淋巴管扩张症。从皮肤丢失的有急性灼伤、特异反应性皮炎。从浆膜腔丢失的有胸膜炎、腹膜炎、反复抽胸腹水。从肾脏丢失的有肾小球肾炎（微小病变型、膜性、增殖性）、肾静脉血栓形成、SLE和淋巴瘤。主要是由于蛋白从尿中丢失或毒素抑制免疫球蛋白合成，后者首先影响IgM，其次影响IgA，然后再影响IgG。分

蛋白检测抗体的检测及应用

蛋白检测抗体的检测及应用在免疫应答中，细胞免疫和体液免疫是两个密切相关、互为调节的生理过程，对这两种免疫反应都有许多检测方法，但迄今为止，在临床检验工作中，以体液免疫反应中的特异性抗体的检测应用最广泛。现在抗体检测的方法众多，除传统的沉淀反应，凝集试验，补体结合试验外，标记免疫测定(如酶联免疫测定、放射免疫测定、荧光免疫测定、发光免疫测定等)已成为主要的免疫测定技术，免疫印迹法也发挥了明显的作用，一些快速测定法(如快速斑点免疫结合试验)也被广泛使用。蛋白质测定是指通过物理或化学方法对蛋白质含量进行测定。蛋白质是构成人体细胞和组织的重要成分，蛋白质测定是生物化学和分子生物学研究中最常用、最基本的分析方法之一。人体正常值一般是60～80 g/L。抗体（antibody）是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。抗体是免疫学实验的实用工具，例如蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）、免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）、免疫荧光（Immunofluorescence，IF）及流式检测（Flow Cytometry, FCM）。 Abbkine蛋白检测抗体包括：内参抗体、标签抗体、一抗、二抗，另外还有封闭血清。蛋白检测抗体大致分为以下五类： 1.封闭血清 Abbkine封闭血清，液体形式产品（原液），无需溶解，用PBS直接稀释即可使用，低防腐剂含量，对细胞和蛋白的毒性/影响更小。 2.一抗 Abbkine一抗，涵盖信号转导、细胞凋亡、免疫学、神经科学、细胞骨架、表观遗传、细胞周期等领域,可满足WB、IHC、IF、FC等应用。 MBP标签小鼠单克隆抗体(9Y5)，#A02070

免疫球蛋白IgG测定

免疫球蛋白IgG测定 1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 原理免疫透射比浊法抗免疫球蛋白G抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。 3 标本要求 3.1使用新鲜血清,不使用血浆. 3.2在采集血液后2h分离血清. 3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次. 3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.

4 试剂 4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgG试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014） 4.1.1 试剂组成 R1:TRIS 缓冲液：20 mmol/l，pH 8.0；氯化钠：200 mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。 R2:抗人免疫球蛋白G抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20 mmol/l；氯化钠：150 mmol/L；防腐剂。 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：4周。 4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。 4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgG校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。 5 仪器

血清免疫球蛋白G的分离纯化及鉴定

实验八血清免疫球蛋白G的分离纯化及鉴定为了初步掌握蛋白质的分离纯化技术，选择了从家畜血清中分离纯化免疫球蛋白G （Immunoglobulin G，简称IgG）的实验。血清中的蛋白质有数十种之多，IgG是球蛋白的一种。分离纯化蛋白质的方法是利用不同蛋白质的某些物理、化学性质（如在一定条件下带电的情况、分子量、溶解度等）的不同而建立起来的，其中有盐析、离子交换、凝胶过滤、亲和层析、制备电泳和超速离心等。在分离纯化时，要根据情况选用几种方法互相配合才能达到分离纯化一种蛋白质的目的。本实验采用硫酸铵盐析、DEAE-纤维素离子交换及凝胶过滤等方法，提取家畜血清中IgG。其原理及操作如下：㈠硫酸铵盐析 1.试剂饱和硫酸铵溶液pH7.0：称取（NH4）2SO4760g,加蒸馏水至1000ml，加热至5℃，使绝大部分硫酸铵溶解，置室温过夜，取上清液，用氢氧化铵调pH至7.0。（内含0.15mol/L NaCl，简称PBS）：取0.2mol/L Na2HPO4磷酸缓冲溶液（0.01mol/L，pH7.0）溶液30.5ml，0.2mol/L NaH2PO4溶液19.4ml，加NaCl8.5g，加蒸馏水至1000ml。磷酸缓冲溶液（0.0175mol/L，pH6.7）（不含NaCl，简称PB）：取0.2mol/L Na2HPO4溶液43.5ml，0.2mol/L NaH2PO4溶液56.6ml混合，用蒸馏水稀释至1000ml。 2.操作①取家畜血清5ml，加磷酸缓冲溶液（0.1mol/L，pH7.0）5ml，混匀，滴加（边摇边搅拌）饱和硫酸铵4ml（此时溶液硫酸铵饱和度约为20%）。静置20min，以3000r/min 离心15min，沉淀为纤维蛋白（弃去），上清液中含清蛋白、球蛋白。②取上清液，再加饱和硫酸铵溶液6ml（方法同前），此时溶液硫酸铵饱和度为50%，静置20min，以3000r/min 离心15min，上清液中含清蛋白，沉淀为球蛋白。③倾去上清液，将沉淀溶于5ml磷酸缓冲液（0.01mol/L pH7.0），再加饱和硫酸铵 3.2ml，此时溶液硫酸铵的饱和度约为33%，静置20min，以3000r/min离心15min，除去上清液，沉淀即为γ-球蛋白。㈡凝胶过滤脱盐 1.试剂①Sephadex G-25：用前以蒸馏水浸泡5h或在沸水浴中溶胀2h；②磷酸盐缓冲液（pH6.7，0.0175mol/L）：见前；③磷酸盐缓冲液（pH7.0，0.01mil/L）见前；④奈氏试剂； ⑤20%磺酰水杨酸。 2.操作①取层析柱一根（1.5cm×20cm），垂直于固定架上，夹住流出口。加10ml磷酸缓冲液（0.0175mol/L, pH6.7）于柱中。将已溶胀好的Sephadex G-25倾倒去水，加入磷酸盐缓冲液并搅拌成悬浮液，慢慢装入柱中，打开流出口，继续加入Sephadex G-25使自然沉降至15cm高，关闭出口。②打开出口，使柱中多余的磷酸缓冲液流出凝胶柱床面（切勿低于柱床面）。用吸管吸取盐析所得的蛋白质溶液2ml，沿管壁加入凝胶面上，打开流出口，让样品进入凝胶柱，再用滴管小心加入磷酸盐缓冲液至离凝胶面2～3cm高，编号，按顺序放在试管架上。③在收集的同时，检查蛋白质是否流出。于每管中取出1滴放在黑色比色板孔中（按编号顺序），再分别加入1滴20%磺酰水杨酸，如出现白色沉淀即表示蛋白质已流出凝胶柱，如此直检查到蛋白质全流出为止。与此同时，再从含蛋白质的管中取出1滴于白色比色板中，加入奈氏试剂1滴，如蛋白管中不出现棕色，即表示蛋白质中的硫酸铵已除去，合并无硫酸铵的蛋白质管，待用。㈢DEAE-纤维素纯化免疫球蛋白G 1.试剂①DEAE-纤维素：DE-11、DE-22、DE-32、DE-52均可；②0.5mol/L HCl溶液；③0.5mol/L NaOH溶液；④pH6.7，0.0175mol/L磷酸盐缓冲液。 2.操作

免疫球蛋白IgM测定

免疫球蛋白IgM测定 1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2原理免疫透射比浊法抗免疫球蛋白M抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。 3标本要求 3.1使用新鲜血清,不使用血浆. 3.2在采集血液后2h分离血清. 3.3 8h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置―150C――200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次. 3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.

4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgM试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014） 4.1.1 试剂组成 R1:TRIS 缓冲液：20 mmol/l，pH 8.0；氯化钠：200 mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。 R2:抗人免疫球蛋白M抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20 mmol/l；氯化钠：150 mmol/L；防腐剂 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：90天。 4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。 4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgM校准品对自动分析仪进行校准 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。

抗原抗体反应及其应用

抗原抗体反应及其应用摘要抗原抗体反应指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。免疫印迹，又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。双转印法、天然电泳及western blot 分析等是最近几年出现的新型蛋白印迹技术。单克隆抗体技术是20世纪后20年内最为重要的生物高技术之一。单克隆抗体药物在肿瘤治疗、抗感染等方面具有重要的作用。关键词抗原抗体反应、Western blotting、单克隆抗体技术一、抗原抗体反应抗原抗体反应指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。这种反应既可在机体内进行，也可以在机体外进行。抗原抗体反应的过程是经过一系列的化学和物理变化，包括抗原抗体特异性结合和非特异性促凝聚两个阶段，以及由亲水胶体转为疏水胶体的变化[1]。抗原是能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。抗原表位是抗原上与抗体结合的区域。蛋白质抗原的表位是由相邻的连续的或非连续的氨基酸序列形成的局部表面结构[2]，如图1所示。抗体是指宿主对体内存在的外来分子、微生物或其他因子的应答而产生的蛋白质。抗体主要由B淋巴细胞系的终末分化细胞-浆细胞产生，并且循环在血液和淋巴液中，在那里与抗原结合。抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。整个抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。抗体上与抗原表位结合的位点由重链和轻链的可变区构成[3]，如图2所示。抗原抗体复合物通过大量非共价键连接。某些免疫复合物中抗体或抗原的结构未发生改变，而另一些则出现巨大的构像改变。研究抗原抗体复合物最有说服力的的方法是抗体-抗原共结晶的X射线衍射技术。

第十八章体液免疫球蛋白的测定

第十八章体液免疫球蛋白的测定 Assay for humoral Ig 第一部分目的要求和教学内容一、目的要求：掌握免疫球蛋白定量测定的方法参考值及应用评价。了解免疫球蛋白定量的医学意义。二、教学内容： 1．免疫球蛋白定量的常用检测方法和参考值 2. 免疫球蛋白定量检测方法评价及应用。 3. 免疫球蛋白定量临床意义 1）血清Ig定量临床意义。 2）尿微量Ig定量临床意义。 3）脑脊液Ig定量临床意义。第二部分测试题一、选择题： (一)单项选择题(A型题) 1．CSF中一般以IgG指数反映中枢NS鞘内合成IgG能力（） A．IgG指数=CSF中IgG/血清中IgG B．IgG指数=CSF中IgG/CSF中ALb C．IgG指数=CSF中IgG/血清中IgG÷CSF中白蛋白/血清中白蛋白 D．I gG指数=血清中IgG/CSF中IgG÷血清中白蛋白/CSF中白蛋白 2. 单项琼脂扩散试验可用于免疫球蛋白的测定，有关叙述错误的是： A．应选择特异性强、效价高、亲和力高的抗体Ｂ．制板时温度控制在50℃~60℃ Ｃ．待测样品抗原如果含量高，应稀释后再检测Ｄ．不同批次抗血清都可以使用相同的标准曲线Ｅ．同一批次抗血清可以使用相同的标准曲线 3. 免疫球蛋白的测定可用于哪些疾病的检测： A．Ig全缺乏疾病 B．选择性Ig缺乏症 C．单克隆Ig血症 D．多克隆Ig血症

E．以上所有疾病 4．人类免疫球蛋白占血浆蛋白总量的： A．5％ B．10％ C．15％ D．20％ E．50％ 5．免疫浊度测定法出现测量误差的最大因素是：A．抗体过量 B．钩状效应 C．环境温度影响 D．加入抗原、抗体的时间 E．光源的强弱和波长的影响 6．血清中缺乏IgG患者，易患下列哪种疾病：A．革兰阴性细菌败血症 B．化脓性感染 C．反复呼吸道感染 D．巨球蛋白血症 E．重链病 7．类风湿性关节炎患者，Ig以哪型增高为主：A．IgA B．IgD C．IgE D．IgG E．IgM 8．脑脊液中Ig 浓度依次是： A．IgG＞IgM＞IgA B．IgG＞IgA＞IgM C．IgM＞IgA＞IgG D．IgM＞IgG＞IgA E．IgA＞IgM＞IgG 9．血清中IgE 含量升高，常见于下列哪种情况：A．大量吸烟 B．妊娠末期 C．SLE D．中毒性骨髓疾病 E．肾病综合症 10．免疫电泳常采用的抗血清是： A．IgG、IgM、IgA、IgD、IgC B．IgG、IgM、IgA、k、λ C．IgG、IgA、IgD、k、λ D．IgG、IgM、IgD、k、λ E．IgG、IgM、IgA、sIgA、IgC 11．M 蛋白于相应抗体反应形成沉淀弧有何特点：

临床免疫学免疫球蛋白检测及应用

第十七章免疫球蛋白检测及应用本章考点 1.免疫球蛋白（Ig）的概述 2.Ig测定及临床意义 3.M蛋白的检测及意义 4.冷球蛋白测定第一节免疫球蛋白的概述一、概念 1.免疫球蛋白（Ig）：是一组具有抗体活性和（或）抗体样结构的球蛋白。Ig由浆细胞产生，存在于血液和体液（包括组织液和外分泌液）中，也可作为抗原受体表达于B细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白。多数Ig具有抗体活性，可以特异性识别和结合抗原，并引发一系列生物学效应。 2.抗体：是机体在抗原刺激下，由浆细胞合成分泌产生的具有与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，即具有免疫功能的球蛋白。抗体是生物学功能上的概念，免疫球蛋白是化学结构上的概念。所有的抗体均是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗体。二、免疫球蛋白的化学结构 1.Ig的基本结构：Ig分子由4条肽链借链间二硫键连接组成，即2条相同的重链（H）和2条相同的轻链（L）和几对二硫键连接成一个基本单位。称为单体。IgG、IgE、IgD及多数血清型IgA皆为单体，分泌型IgA为双体，IgM为五聚体。免疫球蛋白分子H链的N端1／4处氨基酸的种类和顺序随抗体特异性不同而各不相同，称为可变区（VH 区）；H链C端其余部分的氨基酸，在种类和顺序上彼此间差别不大，称为稳定区或恒定区（CH区）。L链N端的一半为可变区（VL区），其余一半为恒定区（CL区）。 2.功能区：Ig分子的H链与L链各区段可通过链内二硫键折叠成彼此相似球状结构，担负特定免疫学功能，称为功能区。L链有两个功能区，称为VL、CL。IgG、IgA的重链有一个VH和三个CH（CH1、CH2、CH4）功能区。IgM、IgD、IgE的重链有一个VH和四个CH（CH1、CH2、CH3、CH3）功能区。各功能区的功能各异，

血清免疫球蛋白在乙型肝炎患者中的检验意义分析

血清免疫球蛋白在乙型肝炎患者中的检验意义分析发表时间：2018-07-13T15:34:15.670Z 来源：《健康世界》2018年10期作者：吴仲锋[导读] 分析探讨血清免疫球蛋白在乙型肝炎患者中的检验意义。阜阳市人民医院安徽阜阳 236000 摘要：目的分析探讨血清免疫球蛋白在乙型肝炎患者中的检验意义。方法本次选取我院在2016年2月—2017年2月收治的60例乙型肝炎患者作为研究的对象，以病情严重程度分为：轻型慢性乙型肝炎32例（A组）、重型慢性乙型肝炎28例（B组），取同期健康体检者60名作为对照组对象，通过临床检验比较三组相关血清免疫球蛋白指标水平（IgA、IgG、IgM）情况。结果在IgA、IgG、IgM三项血清免疫球蛋白指标水平上，A组、B组与对照组比较，均明显更高，组间数据差异具备统计学意义（P＜0.05）。此外，B组和A组比较，在在IgA、IgG、IgM三项血清免疫球蛋白指标水平上均明显更高，组间数据差异具备统计学意义（P＜0.05）。结论乙型肝炎患者的血清免疫球蛋白水平和健康人群比较明显更高，且重型慢性乙型肝炎患者的血清免疫球蛋白水平高于轻型慢性乙型肝炎；加强血清免疫球蛋白指标水平检测，能够为乙型肝炎患者的进一步诊疗工作提供必要的科学依据；因此，值得采纳及应用。关键词：血清免疫球蛋白；乙型肝炎；检验意义 [Abstract] objective to explore the significance of serum immunoglobulin in patients with hepatitis b. methods The select our hospital in February 2016 - February 2017，60 patients with hepatitis B were treated as the research object，using disease severity was divided into：light 32 cases of chronic hepatitis B（group A），28 cases severe chronic hepatitis B（group B），take the same physical examination 60 as A control object，through clinical trial compared three groups of related index of serum immunoglobulin levels（IgA，IgG，IgM）. Results in IgA，IgG and IgM serum immunoglobulin index levels，the comparison between group A，group B and control group was significantly higher，with statistically significant difference between groups（P < 0.05）. In addition，group B and group A were significantly higher in IgA，IgG and IgM serum immunoglobulin index levels，with statistically significant differences between groups（P < 0.05）. Conclusion serum immunoglobulin levels in patients with hepatitis b and healthy population is significantly higher，and severe chronic hepatitis b patients serum immunoglobulin levels higher than light chronic hepatitis b；The enhancement of serum immunoglobulin index level detection can provide the necessary scientific basis for the further diagnosis and treatment of hepatitis b patients. Therefore，it is worth adopting and applying. [Key words] serum immunoglobulin；Hepatitis b；Inspection significance 乙型肝炎，是感染科较为常见的一种疾病，主要由乙型肝炎病毒诱发，该类患者主要的临床表现为乏力疲劳、食欲不振、恶心、厌油以及右上腹痛等。为了提高乙型肝炎患者的生存质量，需加强临床诊疗工作的开展[1]。本次将我院在2016年2月—2017年2月收治的60例乙型肝炎患者作为研究的对象，其目的是分析探讨血清免疫球蛋白在乙型肝炎患者中的检验意义，现将研究成果作如下报道： 1.资料及方法 1.1一般资料本次选取我院在2016年2月—2017年2月收治的60例乙型肝炎患者作为研究的对象，以病情严重程度分为：轻型慢性乙型肝炎32例（A 组）、重型慢性乙型肝炎28例（B组），均符合《慢性乙型肝炎防治指南》[2]中的诊断标准，且均经医学伦理委员会审批通过，将合并其他严重脏器疾病及严重精神障碍者排除在外。其中，A组32例中，男性20例、女性12例；年龄分布在18-76岁，年龄均值为（44.8±1.3）岁。B组28例中，男性18例、女性10例；年龄分布在19-75岁，年龄均值为（44.5±1.4）岁。取同期健康体检者60名作为对照组对象，男性38例、女性22例；年龄分布在19-73岁，年龄均值为（44.3±1.6）岁。结合上述数据可知，60例乙型肝炎和60名健康体检者的一般资料比较无明显差异（P＞0.05），有可比价值。 1.2检测方法（1）首先，进行样本的采集，对所有受检者基于晨间、空腹以及无菌条件下，进行静脉血的采集，约采集5ml；其次，进行离心处理，离心速度为每分钟3000转，将离心时间控制在10分钟，得到上层血清，基于抗凝管当中放置，进一步在-20℃的冰箱当中保持，予备用。（2）本次选取我院使用的全自动生化分析仪，并配套相关检验试剂。通过免疫比浊法的使用，进一步对血清免疫球蛋白指标水平进行测定，包括：IgA、IgG、IgM。 1.3判定标准比较A组、B组、对照组的血清免疫球蛋白指标水平（IgA、IgG、IgM）情况。 1.4统计学分析本次在数据处理方法使用的统计学软件型号为SPSS21.0，计量资料选用（）表示，组间涉及的数据比较用t检验；P＜0.05表示2组数据有明显差异，有统计学意义。 2.结果在IgA、IgG、IgM三项血清免疫球蛋白指标水平上，A组、B组与对照组比较，均明显更高，组间数据差异具备统计学意义（P＜0.05）。此外，B组和A组比较，在在IgA、IgG、IgM三项血清免疫球蛋白指标水平上均明显更高（P＜0.05）。详细数据见下表1：表1 三组血清免疫球蛋白指标水平情况比较（，g/L）